荧光免疫层析法检测2019-nCoV特异性抗体用于新冠病毒感染筛查价值探讨

目的探讨荧光免疫层析法检测2019-nCoV特异性抗体IgM和IgG用于一般人群新冠病毒感染筛查价值。方法选取2019年2月至2020年10月某医院共2322例诊疗患者,采用免疫荧光层析法对血清中2019-nCoV特异性抗体IgM和特异性抗体IgG分别进行检测。记录光免疫层析法2019-nCoV抗体检测结果,包括阳性率、疑似阳性率。观察2019-nCov特异性抗体IgG检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄分布情况。结果在2322例2019-nCoV特异性抗体检测中,荧光免疫层析法检测总阳性病例28例,即阳性检测率为1.21%;特异性抗体IgG检测阳性率为0.78%;特异性抗体IgM中,阳性率为1.18%。2019-nCov特异性抗体IgG检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄>45岁的比例为61.54%(1429/2322);2019-nCov特异性抗体IgM检测结果为阳性和疑似阳性的样本中年龄>45岁的比例为72.00%(1672/2322)。结论荧光免疫层析法检测2019-nCoV血清抗体用于一般人群筛查假阳性率低,可作为核酸检测的补充手段,用于疑似人群初筛,节省医疗资源。     

化学发光法检测SARS-CoV-2抗体试剂诊断效能比较及抗体筛查策略探讨

目的研究新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者特异性抗体免疫球蛋白（Ig） M、免疫球蛋白（Ig） G及总抗体动态变化规律,评价应用化学发光在COVID-19诊断中的可靠性及诊断效能,并通过抗体血清学转化探讨普通人群筛查策略,为科学地防治COVID-19提供理论依据。方法收集我院2020年1月25日至3月17日就诊患者89例,共计142份血清,其中16例确诊COVID-19患者的不同采血时间点共69份血清作为病例组,73例核酸阴性的排除患者共73份血清作为对照组。采用全自动化学发光免疫分析技术对收集血清进行新型冠状病毒（SARS-CoV-2） IgM、IgG和总抗体检测。结果 IgM检测的敏感度为40.58%（28/69）,特异度为98.63%（72/73）,符合率为70.42%（100/142）; IgG检测的敏感度为89.86%（62/69）,特异度为98.63%（72/73）,符合率为94.37%（134/142）;总抗体检测的敏感度为95.65%（66/69）;特异度为98.63%（72/73）;符合率为97.18%（138/142）。所有抗体在发病1周内检测阳性率较低,从第2周开始,抗体阳性率逐步升高。IgM抗体在第5周阳性率达70%的峰值,从第6周开始逐渐降低; IgG从第3周开始阳性率持续维持在100%,总抗体从第2周开始阳性率持续维持在100%。结论化学发光法检测SARS-CoV-2抗体可作为COVID-19感染的有效筛查和诊断指标,相比较而言总抗体检测效能优于单独检测IgM或IgG。作为普通人群筛查时,抗体检测结果应进行动态监测及跟踪随访。     

真实世界中新型冠状病毒抗体检测结果的探究

背景　新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情早期,胶体金法检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）抗体首先获国家药品监督管理局批准用于临床,但SARS-CoV-2抗体检测结果假阳性的干扰因素尚不明确。目的　探讨临床如何分析解读SARS-CoV-2抗体检测阳性结果。方法　收集2020年3-6月北京大学国际医院同时送检SARS-CoV-2 IgM/IgG抗体和核酸的8 678例受检者的临床资料进行回顾性分析,收集受检者流行病学史、临床表现及实验室指标（包括SARS-CoV-2抗体和核酸检测结果、类风湿因子、补体、免疫球蛋白）。采用胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM/IgG抗体,抗体阳性复核采用磁微粒化学发光法。SARS-CoV-2核酸检测采用RT-PCR方法。使用嗜异性抗体阻断试管（HBT）处理胶体金法检测阳性的标本,然后再次进行检测。结果　（1）8 678例受检者标本中,8 677例SARS-CoV-2核酸检测阴性,胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM抗体阳性者25例（0.288%）,SARS-CoV-2 IgG抗体阳性者5例（0.058%）,SARS-CoV-2 IgM和SARS-CoV-2 IgG抗体同时阳性者0例。使用化学发光法复核后,仅3例受检者SARS-CoV-2抗体阳性,27例抗体均为阴性。1例受检者SARS-CoV-2核酸检测阳性,同时抗体IgM和IgG均为阴性。（2）30例胶体金法检测SARS-CoV-2抗体阳性者均无流行病学史,且同时SARS-CoV-2核酸检测结果均为阴性,排除感染SARS-CoV-2或既往感染SARS-CoV-2的可能,其中有10例SARS-CoV-2 IgM抗体阳性者进行2次以上动态监测结果仍为阳性,其余20例受检者未进行动态监测。（3）胶体金法检测SARS-CoV-2 IgM抗体假阳性率为0.288%,SARS-CoV-2 IgG抗体假阳性率为0.058%。采用HBT对胶体金法检测SARS-CoV-2抗体阳性的标本进行处理后,25例SARS-CoV-2 IgM抗体阳性的标本中,除1例结果仍为阳性外,其余结果均转为阴性;而5例SARS-CoV-2 IgG抗体阳性的标本结果依然为阳性。（4）30例SARS-CoV-2抗体阳性者的类风湿因子、补体、免疫球蛋白水平均在参考范围内。结论　SARS-CoV-2抗体检测结果可出现假阳性,SARS-CoV-2 IgM抗体阳性绝大多数是嗜异性抗体干扰所致,SARS-CoV-2 IgG抗体阳性者可能还存在其他潜在未知的干扰因素。嗜异性抗体对胶体金法的干扰大于化学发光法。因此,非疑似COVID-19患者或确诊COVID-19患者不宜进行SARS-CoV-2抗体检测指导临床,一定要考虑实验的干扰因素。     

ELISA、MEIA和WB检测TORCH—IgM和IgG抗体的效果

目的探讨三种方法对TORCH—IgM、IgG抗体检测结果的相关性,评价免疫印迹法在临床上检测TORCH—IgM、IgG抗体的应用价值。方法应用酶联免疫法（ELISA）、微粒子酶免疫法（MEIA）和免疫印迹法（WB）对196份临床孕妇筛查样本进行TORCH—IgM、IgG抗体检测,分析各种方法的抗体检出率和总符合率。结果ELISA、MEIA和wB检测TORCH—IgG抗体符合率分别为抗HSVl／2IgG为90％,抗CMVIgG为91％,抗RvIgG为84％,抗ToxIgG为98％。检测TORCH—IgM抗体符合率分别为抗HSV1／2IgM为87％,抗CMVIgM为89％,抗RvIgM为85％,抗ToxIgM为94％。结论WB检测临床标本TORCH—IgM、IgG抗体结果与ELISA、MEIA法所获得的结果具有较高的符合率,其灵敏度高、特异强为临床检测TORCH—IgM、IgG抗体提供了新的检测手段。     

基于量子点标记技术的免疫层析法检测新型冠状病毒N蛋白IgG抗体研究

背景 基于目前新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）,早诊断、早隔离、早治疗是防控传染的重要方法。建立方便快捷的免疫层析检测技术,对于防控SARS-CoV-2的传播十分必要。 目的 建立基于量子点标记技术的免疫荧光层析法检测抗SARS-CoV-2 N蛋白IgG抗体的方法,判断被检测者是否感染过SARS-CoV-2或者是否接种过SARS-CoV-2灭活疫苗。 方法 2020年8月将制备好的鼠抗人二抗和抗N蛋白抗体固定至硝酸纤维素（NC）膜上,分别作为检测线（T）和质控线（C）,然后将量子点标记的SARS-CoV-2 N蛋白均匀喷洒在玻璃纤维上,干燥后组装、切割、包装成试纸条。用该试纸条分别检测35例COVID-19患者和50例健康人的血清,以酶联免疫吸附测定法（ELISA）试剂盒初筛结果作为对照,计算量子点荧光免疫层析法的检测特异度和灵敏度,并利用N蛋白抗体标准品检测试纸条灵敏度。 结果 本研究制备的试纸条特异度为100.00%,灵敏度为94.29%,灵敏性为8.53~17.06 ng/ml抗体浓度。 结论 采用量子点标记技术检测血清中的抗N蛋白IgG抗体,操作简单、快速,灵敏度及特异度强。     

化学发光免疫分析技术在新型冠状病毒肺炎辅助诊断中的应用价值

目的评估化学发光免疫分析技术（CLIA）检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的IgM和IgG抗体在新型冠状病毒肺炎（COVID-19）辅助诊断中的应用价值。方法选取2020年1月31日至3月16日温州市中心医院收治的COVID-19住院患者66例（阳性组）,均根据临床诊断和SARS-CoV-2核酸检测结果阳性确诊为COVID-19。选取同期根据临床诊断和SARS-CoV-2核酸检测排除COVID-19的发热患者50例（对照组）。采用CLIA对116例研究对象的229份血清进行SARS-CoV-2IgM和IgG抗体检测。结果CLIA检测SARS-CoV-2IgM抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为57.54%（103/179）、92.00%（46/50）、92.26%（103/107）、37.70%（46/122）;检测IgG抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为88.27%（158/179）、96.00%（48/50）、98.75%（158/160）、69.57%（48/69）;联合检测IgM和IgG抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为88.83%（159/179）、88.00%（44/50）、96.36%（159/165）、68.75%（44/64）。IgM抗体与IgG抗体可在0～7d检出,随着病程进展阳性率逐步升高,在22～28d阳性率均到达顶峰,此后IgM抗体阳性率逐渐降低,而IgG抗体阳性率依旧维持较高水平。结论CLIA检测SARS-CoV-2抗体具有良好的灵敏度和特异度,在病程的22～28d检测阳性率最高,该方法简便、快捷,在COVID-19的辅助诊断中有重要的应用价值。     

新型冠状病毒肺炎患者IgM、IgG和IgA抗体应答规律分析

目的了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者体内新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体—免疫球蛋白(Ig)M、IgG和IgA的应答规律。方法使用酶联免疫吸附试验检测SARS-CoV-2特异性IgM和IgG抗体,使用磁微粒化学发光法检测SARS-CoV-2特异性IgA抗体。结果 COVID-19患者血浆中SARS-CoV-2特异性IgM、IgG抗体水平(中位数)在发病后第4周达到峰值,IgA抗体一直处于较低水平。重型患者IgM和IgG抗体水平达到峰值的时间与非重型患者一致,抗体峰值水平高于非重型患者(OD 450中位数:IgM:2.837 vs. 1.133,P=0.005;IgG:3.777vs. 3.376,P=0.031),发病5周后的抗体水平高于非重型患者(OD 450中位数:IgM:1.454 vs. 0.263,P=0.021;IgG:3.136 vs. 2.552,P=0.027)。重型患者IgA抗体水平达到峰值的时间晚于非重型患者(第5周vs.第3周),发病第4周和第5周的抗体水平均高于非重型患者(S/CO中位数:第4周:9.654 vs. 2.546,P=0.035;第5周:20.580 vs.2.861,P=0.046)。结论 SARS-CoV-2感染可引起机体广泛的免疫应答,血清抗体检测在辅助诊断中可发挥重要作用。重型患者产生的抗体应答有一定延迟,但抗体水平高于非重型患者。     

结核分枝杆菌免疫层析和荧光PCR联合检测方法的应用

目的探讨一种基于免疫层析法和荧光PCR DNA定性检测技术的肺结核多重诊断模式。方法以208例疑似结核患者为研究对象,采用免疫层析法检测其血清特异性抗结核抗体,同时采用荧光PCR方法检测其痰液中结核分枝杆菌DNA,并将两种方法的检测结果进行比较。结果免疫层析法检测结果显示,16份血清标本呈阳性,阳性率为7.7%;荧光PCR方法检测结果显示,14份痰液标本呈阳性,阳性率为6.7%。两种检测方法协同诊断率为100.0%。结论结核分枝杆菌免疫层析法和荧光PCR法相结合的实验室诊断模式有助于肺结核的快速诊断和传染风险性评估。     

三种SARS-CoV-2抗体胶体金试剂诊断效能评价及假阳性控制策略探讨

目的探讨胶体金免疫层析法(GICA)在新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测中的价值。方法收集四川大学华西医院2020年1至2月期间12例SARS-CoV-2感染患者的33份血清,以及45例排除SARS-CoV-2感染患者的45份血清,采用三种不同厂家的GICA检测试剂盒进行检测。结果三种GICA试剂的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为66.7%～90.9%、73.3%～100.0%、71.4%～100.0%和80.4%～91.7%。漏诊率为9.1%～33.3%,误诊率为0～26.7%,约登指数为0.64～0.79。检出率随样本稀释滴度的增加而降低,1∶4及以上滴度水平时所有试剂的阳性检出率均超过50%。检测干扰因素主要包括人类免疫缺陷病毒感染、高类风湿因子、溶血。结论临床实验室应注意不同试剂的检测能力和潜在交叉反应的差异,或使用多种抗体的组合。     

金标免疫层析法测定人巨细胞病毒IgM抗体方法的建立

目的　建立金标免疫层析法检测人巨细胞病毒IgM抗体的方法。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金 ,用胶体金标记抗人 IgM单克隆抗体 ,金标免疫层析法与EIA法检测 392份临床标本 ,2种方法进行比较。结果　EIA法阳性率 2 .5 5 % ,金标免疫层析法阳性率 2 .5 5 % ,两者的符合率 10 0 % ,两者间无显著性差异。结论　金标免疫层析法是一种具有灵敏、快速、准确、稳定等特点的方法 ,适合基层医疗机构使用。     

广州市1例境外误诊登革热的新型冠状病毒肺炎病例调查

对1例境外误诊为登革热的新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）进行流行病学调查,探讨被误诊的可能关键环节,为制定登革热流行期的新型冠状病毒肺炎防控策略提供依据。运用描述性流行病学方法对COVID-19病例及其密切接触者和可疑感染来源进行调查和分析,采用RT-PCR方法进行新型冠状病毒核酸检测、免疫层析法进行登革热病毒抗原、抗体检测。结果该COVID-19病例于病前14 d有武汉和柬埔寨居住史,2020年1月23日发病,在柬埔寨“某集团医院”门诊就诊1月30日检测登革热抗原NS1结果为可疑阳性,登革热抗体IgM、IgG结果均为阴性,该医院诊断为“可疑登革热”。1月31日凌晨,病例入境广州在某酒店隔离观察。经酒店驻点医务人员为病例采血送海珠区疾病预防控制中心以免疫层析法（胶体金）排查登革热,结果登革病毒NS1抗原阴性,IgM、IgG抗体均为阴性,排除“登革热”。1月31日医院采集咽拭子标本检测,结果新型冠状病毒核酸阳性,以“新型冠状病毒肺炎疑似病例”网络直报,2月1日广州市疾病预防控制中心复核新型冠状病毒核酸阳性,以“新型冠状病毒肺炎确诊病例”进行订正。COVID-19早期症状与登革热相似。在登革热流行期,做好登革热与COVID-19早期鉴别诊断非常重要,早诊早治,是预防疫情扩散的关键。     

新型冠状病毒IgM-IgG抗体检测试剂盒的制备及对15例患者临床应用初试

目的 开发一种快速检测SARS-CoV-2病毒的IgM-IgG抗体的胶体金免疫层析检测试剂盒,并优化研发及应用策略,分析IgM-IgG抗体联合检测在新冠病毒检测中的临床应用价值。 方法 表达纯化SARS-CoV-2病毒S蛋白的RBD和NTD结构域,通过胶体金制备工艺包被抗原及多克隆抗体,制备IgM-IgG抗体检测试剂盒;收集15例阳性患者的血清进行抗体检测分析,计算试剂盒检测的阳性率,分析SARS-CoV-2抗体IgM-IgG对病毒响应的过程。 结果 在15例核酸RT-PCR检测阳性的患者血清样本中,IgM-IgG联合抗体检测的阳性率为73.33%,其中IgM阳性占总标本数的53.33%,IgG阳性占总标本数的60.00%;5例境外人员中有3例为抗体阳性;对患者的流行病学分析发现,病毒感染1周以上的患者共7例,抗体检测全部为阳性;抗体检测试剂盒的灵敏度73.33%,特异性95.00%。 结论 IgM-IgG联合抗体检测法具有快速、方便、易操作等特点,可以作为核酸检测的辅助手段对疑似患者(尤其是境外人员及无症状患者)进行初筛;且IgM-IgG的检测结果可以作为推测患者病毒感染过程的依据;快速检测IgM-IgG抗体将为COVID-19疾病的诊断和治疗提供帮助。     

2019冠状病毒病康复者特异性IgG 抗体效价的影响因素及变化趋势

目的： 探讨2019 冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)康复者严重急性呼吸综合征冠状病毒 2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)特异性IgG 抗体的影响因素及效价变化趋势,为康复 者恢复期血浆临床治疗的可行性提供理论依据。方法： 采用胶体金免疫层析法检测2020 年2 月19 日至4 月6 日期间 随诊的113 例COVID-19 康复者SARS-CoV-2 特异性IgG 抗体及其效价,分析高效价组(抗体效价≥1?160)与低效价组 (抗体效价<1?160)病例的基本特征及治疗因素差异;连续监测高效价组特异性IgG 抗体效价,分析效价变化趋势。 结果： 高效价组与低效价组患者年龄、ABO血型分布、COVID-19 临床分型、发病时间、入院后首次C-反应蛋白、 淋巴细胞绝对值、CD19+CD3-淋巴细胞绝对值及病程中是否接受糖皮质激素治疗差异均无统计学意义(均P>0.05),高 效价组男性占比高于低效价组(P<0.05);高效价组SARS-CoV-2 特异性IgG 抗体效价在患者出院28 d 后全部下降至1? 160 以下。结论： 男性COVID-19 患者较女性患者可能更容易产生高效价SARS-CoV-2 特异性IgG 抗体。康复者 SARS-CoV-2特异性IgG抗体效价峰值维持时间较短,用于临床治疗的康复者血浆应在患者康复出院后28 d内采集。     

戊型肝炎病毒合成肽决定簇检测抗HEV的研究

利用３段分别代表ＨＥＶ３个基因区的合成多肽，研制成ＥＬＩＳＡ抗ＨＥＶ检测试剂。此试剂对ＩｇＧ及ＩｇＧ检测出阳性率在急性ＮＡＮＢＮＸ肝炎患者中分别为５４．１％（５３／９８）和３３．７％（３３／９８），在其他疾病患者正常献血员中则分别为２．７％－６．３％和０％－２．６％。与Ｇｅｎｅｌａｂｓ重组抗原生产的检测试剂比较，两者有很好的一致性，其阳性符合率为９０．０％，阴性符合率为９８．５％，总符合率为９７．     

SARS-Cov-2实验室检测技术的应用及展望

新型冠状病毒肺炎疫情爆发以来,我国的病毒检测能力不断提高,检测技术也在不断地发展和创新。以实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和宏基因组测序为代表的病毒检测技术在辅助疾病确诊、监测病毒变异等方面发挥了关键作用;基于血清/血浆IgM/IgG抗体的检测技术是辅助确诊的重要方法;高特异性的逆转录环介导等温扩增技术、能够核酸定量的数字PCR和灵敏度更高的SHERLOCK技术也极具特色与发展潜力。以上检测技术代表了病原微生物检测技术的现在及未来发展方向。本文对新型冠状病毒检测技术的基本原理、技术特点及应用现状进行探讨。     

两种化学发光系统检测甲胎蛋白的可比性研究

目的探讨州泰ZT-480型化学发光分析系统与贝克曼Access2型化学发光分析系统检测血清甲胎蛋白(AFP)的可比性及临床可接受性。方法收集120份新鲜血清标本,其AFP浓度范围覆盖AFP的可报告范围,分别在州泰ZT-480型及贝克曼Access2型化学发光分析仪上同时检测。以贝克曼Access2型化学发光分析仪为比较系统,对采用州泰ZT-480型化学发光分析系统检测的结果进行相关性分析,偏差分析,评估阴、阳性符合率。结果 AFP检测结果在两系统间的差异具有统计学意义(P<0.01),相关系数为0.977 3,在20ng/mL、400ng/mL处,相对偏差分别为24.1%、7.9%,两系统的阳性符合率、阴性符合率、总符合率分别为100.0%、95.4%、96.7%。结论两系统的临床可接受性能具有可比性,州泰ZT-480型化学发光分析系统可用于AFP的临床检测。     

成都市91名医务人员接种新冠疫苗加强针后特异性抗体分析

目的 了解成都市公共卫生临床医疗中心医务人员接种新冠疫苗加强针后1月血清特异性抗体产生情况,并与新型冠状病毒肺炎（简称新冠肺炎）既往感染者疫苗免疫后特异性抗体比较,分析加强免疫针效果。方法 以接种新冠灭活疫苗第三剂（加强免疫针）的医院医务人员为试验组,以接种两剂新冠灭活疫苗的新冠肺炎既往感染者为对照组。使用化学发光法分别检测对试验组加强免疫后1月、对照组免疫后24~78 d（中位时间58 d）血清SARS-CoV-2 IgG抗体及总抗体,比较对照组疫苗免疫前后抗体变化以及两组免疫后抗体的差异。结果 试验组加强免疫后SARS-CoV-2 IgG阳性率为94.5%（86/91）,均值（6.92±3.40）COI、总抗体均值（460.64±265.98）COI。男、女性IgG阳性率、IgG量、总抗体量的差异均无统计学意义（P>0.05）,≥40岁组IgG阳性率及总抗体量均低于22~<30岁组（F=3.269,P<0.05）;采用Fisher确切概率法分析,对照组疫苗免疫后SARS-CoV-2 IgG抗体及总抗体显著高于免疫前（P<0.001）。试验组加强免疫后1月和对照组疫苗免疫后SARS-CoV-2总抗体分别为（460.64±265.98） 和（595.40±294.36）COI,试验组加强免疫后1月比对照组疫苗免疫后低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 接种新冠灭活疫苗加强免疫针后体内抗体将快速达到高峰,虽然效果可能会受到年龄的影响,但仍普遍有效。新冠肺炎既往感染者免疫接种后的保护力可能强于非感染者加强免疫接种后。符合加强免疫接种条件的非感染者以及免疫接种条件的新冠肺炎康复者,都该及时接种以减少感染或再次感染SARS-CoV-2的风险。