人参皂苷Rg1对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶诱导的帕金森病小鼠黑质酪氨酸蛋白激酶A4表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠黑质中酪氨酸蛋白激酶A4(Eph A4)表达的影响及意义。方法将45只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、人参皂苷Rg1组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)+人参皂苷Rg1+9-(四氢-2-呋喃基)-9H-嘌呤-6-胺(SQ22536)组和MPTP+人参皂苷Rg1+N-[2-(P-溴苯丙烯盐基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺(H-89)组。正常对照组和模型组小鼠腹腔注射生理盐水,其他各组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药,腹腔注射MPTP构建PD模型,MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组在注射MPTP前30 min分别注射SQ22536和H-89。采用反转录-聚合酶链反应和Western blot检测小鼠黑质Eph A4 mRNA和蛋白表达水平。结果模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.01,P<0.05),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.01);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4 mRNA表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01)。模型组、人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于正常对照组(P<0.01),但人参皂苷Rg1组、MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著低于模型组(P<0.01,P<0.05);MPTP+人参皂苷Rg1+SQ22536组和MPTP+人参皂苷Rg1+H-89组小鼠黑质Eph A4蛋白表达水平显著高于人参皂苷Rg1组(P<0.01,P<0.05)。结论 MPTP可能通过促进小鼠中脑黑质区Eph A4的表达导致PD发生;人参皂苷Rg1可能通过活化腺苷酸环化酶/环磷酸腺苷/蛋白激酶A信号转导通路,降低PD小鼠黑质区Eph A4的表达而改善PD症状。     

人参皂苷Rg1对帕金森病小鼠中脑黑质神经调节蛋白1-ErbB4信号通路活性的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对帕金森病(PD)小鼠中脑黑质中神经调节蛋白1(NRG1)-Erb B4信号通路活性的影响。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为生理盐水对照组、1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型组、MPTP+Rg1组、MPTP+Rg1+N-[2-(P-溴苯丙烯盐基氨基)乙基]-5-异喹啉磺酰胺(H89)组。在注射MPTP前3 d,生理盐水对照组、MPTP模型组小鼠腹腔注射生理盐水1 m L·kg-1·d-1,MPTP+Rg1组、MPTP+Rg1+H89组小鼠腹腔注射人参皂苷Rg1 10 mg·kg-1·d-1,连续4 d,第4天在注射完人参皂苷2 h后,MPTP模型组、MPTP+Rg1组、MPTP+Rg1+H89组小鼠腹腔注射MPTP 20 mg·kg-1,均注射4次,每次间隔2 h,而MPTP+Rg1+H89组在首次注射MPTP前30 min腹腔注射H89 1 mg·kg-1。药物注射后连续7 d观察小鼠行为学变化,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测小鼠中脑黑质中Nrg1与Erb B4基因的mRNA表达情况,采用Western blot检测NRG1受体Erb B4蛋白及磷酸化Erb B4(p-Erb B4)蛋白的表达及其磷酸化水平。结果 MPTP模型组小鼠中脑黑质内Nrg1基因mRNA表达水平低于生理盐水对照组(P=0.007 9)和MPTP+Rg1组(P=0.004 9);MPTP+Rg1+H89组与MPTP模型组相比,Nrg1 mRNA表达水平差异无统计学意义(P=0.151 3);MPTP+Rg1+H89组与MPTP+Rg1组比较,小鼠中脑黑质内Nrg1 mRNA表达水平降低(P=0.049 3)。MPTP模型组小鼠中脑黑质内的Nrg1-typeⅠ/Ⅱ的mRNA表达水平显著低于生理盐水对照组(P=0.001 9)和MPTP+Rg1组(P=0.043 2);MPTP+Rg1+H89组与MPTP模型组小鼠中脑黑质内Nrg1-typeⅠ/ⅡmRNA表达水平比较差异无统计学意义(P=0.688 5);MPTP+Rg1+H89组与MPTP+Rg1组比较,小鼠中脑黑质内Nrg1-typeⅠ/ⅡmRNA表达显著下降(P=0.029 4)。与生理盐水对照组相比,Nrg1-typeⅢmRNA在MPTP组略有降低,但差异无统计学意义(P=0.290 8);与MPTP模型组比较,MPTP+Rg1组小鼠中脑黑质内Nrg1-typeⅢmRNA表达升高(P=0.041 9),MPTP+Rg1+H89组小鼠黑质Nrg1-typeⅢmRNA表达降低(P=0.728 9);MPTP+Rg1+H89组与MPTP+Rg1组小鼠黑质Nrg1-typeⅢmRNA表达比较差异无统计学意义(P=0.164 2)。生理盐水对照组、MPTP模型组、MPTP+Rg1组、MPTP+Rg1+H89组小鼠黑质Erb B4 mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P=0.531 8)。各组小鼠中脑黑质内Erb B4蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P=0.800 5);MPTP模型组小鼠黑质内p-Erb B4蛋白表达水平低于生理盐水对照组(P=0.013 4)和MPTP+Rg1组(P=0.019 9);MPTP+Rg1+H89组p-Erb B4蛋白表达水平低于MPTP+Rg1组(P=0.047 8);MPTP+Rg1+H89组与MPTP模型组p-Erb B4表达水平比较差异无统计学意义(P=0.887 7)。结论 PD小鼠脑内的NRG1基因表达及其Erb B4受体的活性降低,而人参皂苷Rg1可能通过增强小鼠中脑黑质NRG1-Erb B4的通路活性而改善PD的症状。     

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠黑质区FADD和FLIP表达的影响及其意义

目的：探讨人参皂苷Rg1对帕金森病（PD）模型小鼠黑质区凋亡信号蛋白Fas死亡结构域蛋白(FADD)、FADD样白细胞介素1-转化酶样抑制蛋白(FLIP)及Caspase-3表达的影响,阐明FADD和FLIP在PD发病机制中的作用及人参皂苷Rg1对多巴胺（DA）能神经元的保护作用。方法： 45只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,每组15只。模型组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP),人参皂苷Rg1组小鼠注射MPTP前先注射人参皂苷Rg1,对照组小鼠腹腔注射生理盐水。观察各组小鼠行为学变化;采用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、FLIP、FADD及Caspase-3的表达。结果：与对照组比较,模型组小鼠出现典型PD症状,黑质区TH阳性细胞数明显减少(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显增加(P<0.01),胞浆染色深;FADD、FLIP及Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,人参皂苷Rg1组小鼠PD症状减轻,黑质区TH阳性细胞数明显增多(P<0.01),FADD、FLIP及Caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.01),胞浆染色浅;FADD、FLIP和Caspase-3蛋白表达水平降低 (P<0.01)。FADD与Caspase-3阳性细胞数呈正相关关系(r= 0.791,P< 0.05)。结论：人参皂苷Rg1可通过影响PD模型小鼠黑质区FADD和FLIP的表达对DA能神经元起到一定的保护作用。     

人参皂苷 Rg1对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及EphB1、TH、P-c-Jun蛋白表达的影响

目的：观察人参皂苷Rg1对MPTP所致帕金森病（ PD）模型小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡及酪氨酸羟化酶（TH）、EphB1和P-c-Jun蛋白表达的影响。方法：将27只C57BL／6小鼠等分为对照组、模型组和人参皂苷Rg1组。腹腔注射人参皂苷Rg1预防给药3 d,腹腔注射MPTP构建PD模型。观察不同时间点小鼠游泳情况。 MPTP给药2周后采用TUNEL染色检测小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡情况,采用免疫组化检测黑质EphB1蛋白的表达,采用Western blot检测黑质TH、P-c-Jun蛋白的表达。结果：模型组小鼠不同时间点游泳实验分值低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。模型组黑质多巴胺能神经元凋亡数、EphB1阳性细胞数和P-c-Jun蛋白相对表达量均高于对照组和人参皂苷Rg1组,而模型组黑质TH蛋白相对表达量低于对照组和人参皂苷Rg1组（P均＜0．05）。结论：人参皂苷Rg1可能通过减少黑质多巴胺能神经元凋亡以及降低EphB1、P-c-Jun的表达而改善PD的症状。     

磷酸化C-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的 研究磷酸化c-Jun(p-c-Jun)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致亚急性帕金森病(PD)小鼠模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.通过行为学观察,免疫组织化学SP法,免疫荧光双标记法和免疫蛋白印记法,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun免疫组织化学变化以及中脑黑质TH、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化;观察给予JNK通路特异性剂SP-600125对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状.黑质区TH阳性神经元下降约65%(P＜0.001),中脑黑质TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞显著增加,中脑黑质COX-2表达水平明显升高;p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,p-c-Jun表达水平显著升高.免疫荧光双标记染色可见,COX-2和p-c-Jun共同表达于TH阳性细胞.抑制剂组,经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后七天,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%,与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,中脑黑质COX-2表达水平明显降低,p-c-Jun仅表达于黑质区细胞的胞浆内,中脑黑质p-c-Jun表达水平明显下降.结论 p-c-Jun表达对亚急性帕金森病MPTP模型中脑黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制p-c-Jun表达对帕金森病小鼠可能具有一定的神经保护作用.     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.     

人参皂甙Rg1通过P38信号通路影响帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2的表达

目的 研究P38信号通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制,以及人参皂甙Rg1对P38信号通路的影响和对多巴胺神经元的保护作用.方法 采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型.用免疫组织化学和免疫蛋白印记法,观察小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,前列腺素E2(PGE2)以及磷酸化P38(p-P38)的表达变化;并观察给予人参皂甙Rg1对上述变化的影响.结果 与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞显著增加(P＜0.01).在MPTP第5次注射后24 h,黑质区TH阳性神经元显著丢失60%(P＜0.01);经人参皂甙Rg1处理后,模型小鼠PD症状减轻,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区p-P38,COX-2,PGE2阳性细胞明显减少(P＜0.01),在MPTP第5次注射后24 h,TH阳性细胞数较对照组仅下降30%.结论 P38通路在亚急性PD模型早期对黑质COX-2表达可能起重要调控作用:人参皂甙Rg1可影响P38信号通路及COX-2的表达而对小鼠多巴胺神经元起到一定保护作用.     

JNK通路对亚急性帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的:研究JNK在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用,以探讨可能导致PD黑质多巴胺(DA)能神经元变性失活的机制. 方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,观察模型小鼠行为学变化,观察PD模型小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,磷酸化c-Jun的表达变化;观察给予JNK通路特异性抑制剂SP600125对上述变化的影响. 结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区COX-2阳性细胞显著增加,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,在MPTP第5次注射后7 d,黑质区TH阳性神经元显著丢失65% (P＜0.01);经SP600125处理后,模型小鼠PD症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7 d,TH阳性细胞数仅下降约15%,与模型组比较,在MPTP第3次注射后6 h,黑质区COX-2阳性细胞明显减少(P＜0.01),黑质区p-c-Jun表达于细胞质内. 结论:JNK通路在亚急性PD MPTP模型早期对黑质COX-2表达中可能起重要调控作用;抑制JNK通路对PD小鼠具有神经保护作用.     

PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的分析帕金森病(PD)小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白(DAT)基因转录状况.方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两组;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照.以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录.结果与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH(+)细胞减少,DATmRNA转录降低(P＜0.05).正常对照组中小脑部位DAT mRNA转录低于黑质部位(P＜0.05).结论多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低.DAT mRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DAT mRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强.     

白藜芦醇在PD小鼠模型中对TLR3/TRIF信号通路及脑内炎症微环境的影响

目的 建立1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的小鼠PD模型,探究白藜芦醇(resveratrol,Res)对PD小鼠TLR3/TRIF信号通路及中脑黑质炎症微环境的影响.方法 雄性C57/BL6小鼠30只,按照随机数字表法分为对照组、MPTP组和MPTP+ Res组,每组各10只.对照组腹腔注射相同体积生理盐水;MPTP组腹腔注射生理盐水新鲜配制的MPTP 30 mg/(kg·d),连续7d,结束注射7d后取材;MPTP+ Res组:Res用乙醇溶解为50 mg/mL,用PBS以1∶4的体积比进行稀释,连续注射MPTP 7 d后,腹腔注射Res 28 d,结束注射7d后取材.采用免疫组化及免疫荧光分别观察小鼠中脑黑质中多巴胺能神经元的变化及小胶质细胞、星形胶质细胞的活化状态.采用实时荧光定量PCR技术检测中脑黑质相关炎症因子mRNA的表达.结果 免疫组化结果显示:与MPTP组相比,MPTP+ Res组小鼠中脑黑质TH标记的多巴胺能神经元的数量及形态未发生明显变化;CD11b标记的小胶质细胞胞体相对变小,呈圆形及椭圆形,突起减少,变细、变长;而GFAP标记的星形胶质细胞胞体变小,胞体呈圆形,突起变短.qPCR实验结果表明:与MPTP组相比,MPTP+Res组小鼠中脑黑质部位TLR3、IFN-β的mRNA表达量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05),但TRIF的mRNA表达量未见明显变化,促炎因子iNOS、TNF-α的mRNA表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).而抗炎因子Arg-1的mRNA表达量明显增加.结论 Res可能通过抑制小胶质细胞及星形胶质细胞活化及激活TLR3/TRIF信号通路,降低中脑黑质的促炎因子的释放,从而改善MPTP诱导的小鼠PD模型中的炎症微环境.     

丹参酮ⅡA可激活Nrf2/ARE通路对帕金森病MPTP模型小鼠多巴胺能神经元起保护作用

目的:研究Nrf2/ARE通路在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)所致帕金森病(PD)动物模型发病机制中可能的作用,探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性坏死的可能机制,以及丹参酮ⅡA对Nrf2/ARE通路的影响和对多巴胺能神经元的保护作用。方法:将60只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。PD模型组和丹参酮ⅡA组小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA。观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶(TH)、核转录因子(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状。在MPTP最后一次注射后48小时,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显下降,Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平明显增加(P<0.01),在MPTP最后一次注射后7天,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%(P<0.01)。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,在MPTP最后一次注射后48小时,中脑黑质区Nrf2、NQO1和GFAP阳性细胞数量和蛋白表达水平进一步升高(P<0.01),在MPTP最后一次注射后7天,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:Nrf2/ARE通路在急性PD模型DA能神经元内可能被激活,其可能通过上调NQO1的表达对黑质DA能神经元起到保护作用,丹参酮ⅡA可能通过激活Nrf2/ARE通路对小鼠多巴胺能神经元起到一定保护作用。     

抑制p38MAPK通路对帕金森病模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达的影响

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路对亚急性帕金森病(PD)模型小鼠中脑黑质Bcl-xl/Bcl-2死亡相关因子(BAD)和半胱氨酸蛋白酶3(easpase-3)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元进行性变性丢失的可能机制.方法 健康雄性C57BL/6N小鼠45只,随机分为3组,(1)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)模型组:腹腔注射MPTP(30 mg/kg,溶于生理盐水),1次/d,连续5 d;(2)抑制剂组:在每次MPTP注射前1h腹腔注射SB203580(10 mg/kg,溶于5mg/ml DMSO)1次/d,连续5 d;(3)对照组:注射与模型组和抑制剂组等量的生理盐水和DMSO.观察模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、BAD、caspase-3和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表达变化,及给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对上述表达变化的影响.结果 模型小鼠出现典型的PD行为学症状,中脑黑质区TH阳性神经元和蛋白水平分别下降约60%和65%(P<001).p-p381APK、BAD和caspase-3阳性细胞数及蛋白水平显著增加(P<0.01);经p38MAPK特异性抑制剂SB203580处理后,PD小鼠行为学症状改善,TH阳性神经元和蛋白水平下降程度明显减轻;中脑黑质BAD、caspase-3和p-p38NAPK阳性细胞数显著减少,蛋白水平下降明显(P<0.01).结论 p38MAPK通路在亚急性PD模型小鼠黑质BAD和caspase-3表达中可能有重要调控作用,p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580对PD小鼠具有一定的神经保护作用.     

香青兰总黄酮对帕金森病模型小鼠黑质DAT和VMAT2蛋白表达的影响

目的:探讨香青兰总黄酮(total flavones of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对帕金森病(Parkinson’s disease, PD)模型小鼠中脑黑质内多巴胺转运蛋白表达的效果。方法:C517BL/6J小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)制备PD动物模型,多种行为学实验方法评价动物运动功能;尼氏染色观测黑质区多巴胺能神经元的数量;RT-PCR和Western blot检测黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)、囊泡单胺转运蛋白2(Vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)和多巴胺转运蛋白(Dopamine transporter, DAT)的表达情况。结果:行为学检测表明,TFDM组显著增加小鼠的运动距离(P<0.05),显著增加小鼠的下落潜伏期(P<0.05),明显减少小鼠的爬杆时间(P<0.05);MPTP腹腔注射明显减少了黑质内多巴胺能神经元的数量,TFDM显著的提高了PD模型小鼠黑质内多巴胺能神经元数量;RT-PCR结果显示,TFDM组的TH、VMAT2和DAT的mRNA表达均显著增高(P<0.05);TFDM组TH、VMAT2和DAT蛋白表达均明显上调(P<0.05)。结论:TFDM可能通过上调VMAT2和DAT蛋白的表达,减少DA能神经元丢失,进而改善PD模型小鼠运动功能障碍。     

核因子NF-κB对帕金森病MPTP模型小鼠黑质COX-2表达的影响

目的:研究核因子(NF-κB)在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致小鼠帕金森病(PD)模型中的影响和对环氧合酶-2(COX-2)的表达调控作用以及人参皂甙Rgl对其的影响,探讨导致多巴胺(DA)能神经元变性失活的可能机制.方法:采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型,用免疫组织化学法和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH),COX-2,前列腺素E2(prostaglandine2,PGE2)以及NF-κB的表达变化;并观察给予人参皂甙Rgl对上述变化的影响.结果:与对照组小鼠相比,模型组小鼠出现典型PD症状,在MPTP第5次注射后24 h,黑质区NF-κB(34.6±5.6),COX-2(28.2±5.1),PGE2(36.1±4.2)阳性细胞较对照组NF-κB(2.5±0.8),COX-2(1.0±0.3),PC-E2(3.2±0.4)阳性细胞显著增加(P<0.01),TH阳性神经元显著丢失60%(P<0.01);经人参皂甙Rgl处理后,模型组小鼠PD症状减轻,与模型组比较,黑质区NF-κB(4.9±2.1),COX-2(1.9±0.7),PGE2(4.6±0.3)阳性细胞明显减少(P<0.01),TH阳性细胞数较对照组仅下降32%.结论:核因子NF-κB在亚急性PD模型早期对黑质COX-2表达中可能起莺要调控作用;人参皂甙Rg1可能影响NF-κB及COX-2表达而对小鼠多巴胺神经元起一定保护作用.     

GDNF 对MPTP 诱导帕金森病小鼠黑质TH mRNA、 Ephrin B2、p-c-Jun 的影响

目的 研究胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对1- 甲基-4- 苯基-1，2，3，6- 四氢吡 啶（MPTP）诱导帕金森模型小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）、Ephrin B2、磷酸化c-Jun（p-c-Jun）表达的影 响，探索GDNF 治疗帕金森病的价值。方法 选取84 只小鼠并采用MPTP 复制帕金森病模型，选取72 只 模型复制成功的小鼠随机分为实验组和模型组，每组36 只；另随机选取36 只健康小鼠作为对照组。对实验 组小鼠右侧侧脑室注射GDNF，模型组和对照组小鼠注射等量生理盐水。10 d 后比较3 组小鼠TH 神经元变 化、检测TH mRNA、Ephrin B2 和p-c-Jun 蛋白的表达。结果 模型组和实验组毁损侧神经元数、神经纤 维密度少于对照组（P <0.05），实验组神经元数高于模型组（P <0.05）；模型组TH mRNA 表达水平低于对 照组和实验组（P <0.05）。模型组小鼠Ephrin B2、p-c-Jun 蛋白表达水平高于对照组和实验组（P <0.05）。 结论 GDNF 能够提高MPTP 诱导帕金森病模型小鼠黑质TH 表达，降低Ephrin B2 和p-c-Jun 蛋白表达， 进而对小鼠多巴胺能神经元产生保护作用，提示GNDF 可能在治疗人帕金森病上具有一定价值。     

丹参酮ⅡA对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其机制

目的：探讨丹参酮ⅡA对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱发的帕金森病（PD）模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元损伤的影响,阐明其对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。 方法：将60只C57BL/6N小鼠随机分为对照组、PD模型组和丹参酮ⅡA组,每组20只。PD模型组和丹参酮ⅡA小鼠采用MPTP制备PD小鼠模型,丹参酮ⅡA组制备PD模型后腹腔注射丹参酮ⅡA,观察各组小鼠行为学表现,采用免疫组织化学、免疫蛋白印迹和免疫荧光双标法检测各组小鼠中脑黑质区酪氨酸羟化酶（TH）、整合素超家族成员Ⅰ型跨膜蛋白（cd11b）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）阳性细胞数和蛋白表达水平。 结果：与对照组比较,PD模型组小鼠出现典型的PD样症状;PD模型组小鼠中脑黑质区TH阳性神经元数和蛋白表达水平较对照组减少约45%和50%,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平增加（P<0.01）。与PD模型组比较,丹参酮ⅡA组小鼠PD样症状减轻,黑质区TH阳性神经元数量和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,cd11b、p47-phox和iNOS阳性细胞数明显减少（P<0.01）,蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论：丹参酮ⅡA可在一定程度上阻抑MPTP诱导的PD模型小鼠中脑黑质区多巴胺能神经元的丢失,其神经保护作用机制可能与抑制小胶质细胞激活、NADPH氧化酶和iNOS表达有关。     

附子联合MPTP诱导肝阳上亢型PD小鼠亚急性模型与慢性模型的建立及比较

目的 附子联合1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(anendons combined 1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导C57BL/6小鼠肝阳上亢PD亚急性模型和肝阳上亢PD慢性模型的建立,通过行为学、病理学及分子生物学方法对模型进行评估。方法 小鼠随机分为正常组、模型组、肝阳上亢PD亚急性组MPTP[25mg/(kg·d)]注射7天、肝阳上亢PD慢性组[25mg/(kg·d)],每3.5天注射1次,注射5周,在注射MPTP前,各模型组附子煎液灌胃4周。爬杆、转棒实验检测小鼠行为学变化;免疫组化检测小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(trosine hydroxylase,TH)的表达,免疫印迹检测各组小鼠蛋白含量变化,实时定量PCR检测TH mRNA表达变化。结果 与正常组比较,肝阳上亢PD慢性组小鼠行为变化明显,模型组及肝阳上亢PD亚急性组小鼠变化较低,在爬杆实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠爬杆时间明显长于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05),转棒实验中,肝阳上亢PD慢性组小鼠在棒时间明显短于模型组及肝阳上亢PD亚急性组(P<0.05)。中脑黑质区TH阳性细胞表达含量方面,与正常对照组比较,肝阳上亢PD慢性组TH表达量显著下降(P<0.05),模型组及肝阳上亢PD亚急性组表达量高于肝阳上亢PD慢性组;免疫印迹及实时定量PCR检测结果表明,肝阳上亢PD慢性组小鼠在蛋白及mRNA表达量均为最低(P<0.05)。结论 肝阳上亢PD慢性组小鼠与单纯MPTP模型组及肝阳上亢PD亚急性组比较,损伤程度更高,周期更长,更具有与人类PD相似的临床症状,提示该模型有望成为PD发病机制研究潜在的稳定模型。     

PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的 分析帕金森病（PD）小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白（DAT）基因转录状况。方法 用1－甲基－4－苯基－1,2,3,6－四氯吡啶（MPTP）腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两种;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照。以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录。结果 与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH（＋）细胞减少,DATmRNA转录降低（P＜0．05）。正常对照组中小脑部位DATmRNA转录低于黑质部位（P＜0．05）。结论 多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低。DATmRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DATmRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强。     

知母活性成分ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型的保护作用

目的 研究知母活性成分ZMR对慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元的影响.方法 C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组.模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组小鼠经皮下注射MPTP及腹腔注射丙磺舒建立慢性MPTP损伤小鼠模型;建模开始1周后,ZMR低剂量组给予ZMR 10 mg·kg-1·d-1, ZMR高剂量组给予ZMR 26 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药60 d.各组小鼠分别进行Rotarod行为学测试,黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察,ELISA法测定纹状体内胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白含量.结果 与模型组比较,ZMR低剂量和高剂组的Rotarod行为学得分分别提高20.6%和23.8% (P<0.05);黑质TH阳性细胞分别增加104.1%和228.8%(P<0.05);纹状体GDNF蛋白水平分别提高99.0%和125.5% (P<0.01),纹状体BDNF蛋白水平分别提高76.8%和80.2%(P<0.01).结论 ZMR提高慢性MPTP损伤小鼠模型纹状体GDNF和BDNF蛋白水平,增加黑质TH阳性细胞数量,改善小鼠运动能力.提示ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元具有保护作用.     

知母活性成分ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型的保护作用

目的 研究知母活性成分ZMR对慢性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元的影响.方法 C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组.模型组、ZMR低剂量组和ZMR高剂量组小鼠经皮下注射MPTP及腹腔注射丙磺舒建立慢性MPTP损伤小鼠模型;建模开始1周后,ZMR低剂量组给予ZMR 10 mg·kg-1·d-1, ZMR高剂量组给予ZMR 26 mg·kg-1·d-1,连续灌胃给药60 d.各组小鼠分别进行Rotarod行为学测试,黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色观察,ELISA法测定纹状体内胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白含量.结果 与模型组比较,ZMR低剂量和高剂组的Rotarod行为学得分分别提高20.6%和23.8% (P<0.05);黑质TH阳性细胞分别增加104.1%和228.8%(P<0.05);纹状体GDNF蛋白水平分别提高99.0%和125.5% (P<0.01),纹状体BDNF蛋白水平分别提高76.8%和80.2%(P<0.01).结论 ZMR提高慢性MPTP损伤小鼠模型纹状体GDNF和BDNF蛋白水平,增加黑质TH阳性细胞数量,改善小鼠运动能力.提示ZMR对慢性MPTP损伤小鼠模型黑质纹状体通路多巴胺神经元具有保护作用.