姜黄素对阿尔茨海默病模型小鼠胰岛素受体底物-1的影响

目的 观察姜黄素对阿尔茨海默病模型APP/PS1双转基因小鼠胰岛素受体底物-1(IRS-1)和磷酸化胰岛素受体底物-1(p-IRS-1)表达的影响,探讨姜黄素神经保护作用机制.方法 将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组、姜黄素高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组,并以同窝阴性小鼠作为正常对照组.连续灌胃6个月后,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法进行检测.结果 免疫组化染色,模型组小鼠大脑海马CA1区IRS-1阳性细胞较正常组明显增加(P＜0.01),与模型组相比,各干预组IRS-1阳性细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01),p-IRS-1结果与IRS-1结果相反.Western blot检测海马IRS-1和p-IRS-1的蛋白表达结果与免疫组化检测结果一致.RT-PCR检测IRS-1 mRNA表达结果与免疫组化和Westernblot结果一致.结论 姜黄素可以使APP/PS1双转基因小鼠海马增加的IRS-1和减少的p-IRS-1得以恢复,并调节IRS-1 mRNA表达,改善APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导,提示姜黄素可能通过调节胰岛素信号转导机制发挥抗阿尔茨海默病作用.     

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的 应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况.方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力.运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量.结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P＜0.01).空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041).APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P =0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P =0.089、0.059).APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P =0.076、0.074).结论 早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一.     

姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠Aβ生成和降解的影响

目的 观察姜黄素对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠B淀粉样蛋白(β amyloid,Aβ)生成酶早老素2(presenilin 2,PS2)和Aβ降解酶胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)表达的影响,探讨姜黄素在AD防治中的机制.方法 将3月龄的APPswe/PS1dE9双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组[罗格列酮组,0.92 mg/(kg·d)]、姜黄素大[400 mg/(kg·d)]、中[200 mg/(kg·d)]、小[100 mg/(kg·d)]剂量组,每组10只;并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常对照组10只.每天灌胃给药1次,模型组和正常对照组用等体积0.5%羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)灌胃.灌胃3个月后,应用Morris水迷宫、免疫组织化学等方法,检测动物的学习记忆能力、海马Aβ生成酶PS2和降解酶IDE表达变化.结果 行为学检测,模型组小鼠的游泳轨迹多为边缘型,而正常对照组、阳性对照组、姜黄素各组小鼠的游泳轨迹多为趋向型和直线型.Aβ生成酶PS2和降解酶IDE的免疫组织化学染色结果,模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01),与模型组相比,姜黄素各组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞减少(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞平均灰度值较正常对照组降低(P<0.05),姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比明显增加(P<0.01).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞明显增加(P<0.05).模型组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显增加(P<0.01),姜黄素各组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞平均灰度值同模型组相比均明显降低(P<0.01).结论 姜黄素能通过减少Aβ生成酶和增加Aβ降解酶的表达,降低Aβ蛋白的表达进而改善APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的学习记忆能力.     

姜黄素对小鼠海马 Aβ生成酶和降解酶的影响

目的探讨姜黄素对9月龄AD小鼠海马CA1区β淀粉样蛋白(Aβ)生成酶早老素2(PS2)及降解酶胰岛素降解酶(IDE)和脑啡肽酶(NEP)的持续影响。方法将3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、罗格列酮组(10 mg/kg)和姜黄素高、中、低(400、200、100 mg/kg)剂量组,同窝非转基因C57/BL6J小鼠作为对照组,连续灌胃6个月,应用免疫组织化学和Western-blot检测Aβ生成酶PS2、Aβ降解酶IDE和NEP的表达。结果与对照组相比,模型组Aβ生成酶PS2表达增加(P0.01);与模型组相比,各干预组小鼠海马Aβ生成酶PS2表达减少(P0.01或P0.05),海马CA1区PS2阳性细胞减少(P0.05)。与对照组相比,模型组Aβ降解酶IDE和NEP表达显著减少(P0.01);与模型组相比,各干预组小鼠海马Aβ降解酶IDE和NEP表达增加(P0.01或P0.05),海马CA1区IDE和NEP阳性细胞增加(P0.01或P0.05)。结论增加AD模型小鼠海马Aβ降解酶IDE和NEP的表达,减少Aβ生成酶PS2的表达,是姜黄素减少Aβ沉积的作用机制之一。     

电针对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力及LC3Ⅱ、P62表达水平的影响

目的 研究电针对APP/PS1双转基因小鼠自噬相关蛋白LC3Ⅱ及受体蛋白P62相关的作用机制.方法 将7月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、电针治疗组,以同窝转基因阴性小鼠为正常对照组.电针治疗组予电针涌泉、百会,15 min/次,隔日1次,治疗6周,利用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力以及用Western blot法检测小鼠海马区域LC3Ⅱ及P62蛋白的表达.结果 水迷宫结果显示,模型组与正常对照组比较,逃避潜伏时增加(P<0.01);WB结果显示,与对照组相比,模型组LC3Ⅱ表达增强,P62表达减弱(P<0.05);与模型组相比,针刺组LC3Ⅱ表达减弱,P62表达增强(P<0.05).结论 APP/PS1转基因鼠存在神经元自噬途径功能亢进,电针可能通过抑制自噬水平,从而改善学习记忆功能.     

参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5表达的影响

目的探讨参枝苓口服液对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元突触信号传递相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5表达的影响。方法将雄性3月龄APP/PS1双转基因小鼠随机分成5组,模型组、多奈哌齐组[0.92 mg/(kg·d)],参枝苓大剂量组[50 g/(kg·d)]、参枝苓中剂量组[25 g/(kg·d)]、参枝苓小剂量组[12.5 g/(kg·d)]。正常组为同月龄同背景野生型C57BL/6J小鼠。连续灌胃3个月,进行行为学跳台实验。实验结束后取海马组织,运用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学方法检测小鼠海马CA1区突触相关蛋白α7-nAChRs和mGluR5的表达。结果 Western blot检测显示,模型组小鼠海马α7-nAChRs的蛋白条带比正常组小鼠明显变窄,颜色变浅(P0.01)、而mGluR5蛋白条带明显增宽,颜色变深(P0.01);与模型组小鼠相比,各干预组α7-nAChRs蛋白条带增宽、颜色变深(P0.05或P0.01),mGluR5蛋白条带变窄、颜色变浅(P0.05或P0.01)。免疫组织化学染色检测小鼠海马α7-nAChRs和mGluR5的阳性细胞表达结果与Western blot检测结果一致。结论参枝苓口服液可能是通过调节小鼠海马CA1区突触中的关键蛋白,改善突触功能发挥减缓阿尔茨海默病(AD)大脑损伤,维持记忆获得能力,从而发挥抗痴呆作用。     

链脲佐菌素对APP/PS1转基因小鼠学习记忆及JNK信号通路的影响

目的 观察链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对APP/PS1转基因小鼠学习记忆和海马组织MKK4、JNK、c-Jun磷酸化水平的影响.方法 3月龄APP/PS1转基因小鼠腹腔内注射STZ,采用Morris水迷宫实验观测学习记忆功能,应用尼氏染色观察海马神经元细胞形态,应用免疫印迹法检测海马组织内MKK4、JNK和c-Jun的表达水平.结果 水迷宫隐蔽平台实验中,从第2天到第5天,给予STZ后APP/PS1转基因小鼠逃避潜伏期和目标路径均明显长于对照组(P＜0.05或P＜0.01);Nissl染色显示STZ组小鼠海马神经元损伤明显;与对照组比,STZ组海马组织中磷酸化JNK和c-Jun的表达水平明显增高,分别增高到217.78 ±23.49和189.27±17.80(P＜0.01).结论 STZ可使APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能减退,神经元损伤,其机制可能与JNK信号转导通路有着密切的关系.     

姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠空间学习与海马HSP70蛋白表达的影响

目的 探讨姜黄素对APPswe/PS1△9转基因小鼠海马热休克蛋白70(HSP70)表达及对APPswe/PS1 A9转基因小鼠空间学习能力的影响,为AD治疗提供新的理论依据.方法 实验动物分为野生小鼠组、APP/PS1转基因小鼠组、姜黄素干预组、槲皮素(HSPs抑制剂)和姜黄素共同干预组.5月龄转基因小鼠腹腔注射姜黄素150 mg·kg-1·d-1,连续4周,槲皮素和姜黄素共同干预组采用给予150mg· kg-1·d-1姜黄素腹腔注射,同时给予槲皮素50mg· kg-1 ·d-1腹腔注射,连续4周.Western blot测定APP/PS1小鼠海马区HSP70蛋白的表达,Morris水迷宫测试APP/PS1小鼠学习记忆能力,主要观察指标为小鼠找到平台的潜伏期和穿越平台次数.结果 Western blot结果显示,APP/PS1转基因小鼠海马中HSP70蛋白的表达与WT小鼠相比明显降低(OD值:APPswe/PS1△9:0.31±0.14;WT:1.14±0.51,P＜0.01).小鼠腹腔注射给予姜黄素后HSP70的表达较APP/PS1转基因鼠明显升高(OD值:姜黄素:0.91±0.20,P＜0.05).腹腔注射姜黄素或同时给予槲皮素,连续4周后,Morris水迷宫测试结果显示,与WT小鼠相比,APP/PS1小鼠找到平台的潜伏期明显延长[APPswe/PS1 △9:(82.3±6.8)s;WT:(29.5±4.4)s]、穿越平台的次数显著降低[APPswe/PS1 △9:(2.7±1.1)次;WT:(5.2±2.1)次].姜黄素给药后小鼠找到平台的潜伏期较APP/PS1小鼠明显缩短[(47.7±7.6)s],穿越平台的次数增多[(4.5±1.9)次],而小鼠同时给予姜黄素和HSPs抑制剂槲皮素后,找到平台的潜伏期较姜黄素单独给药明显延长[(69.7±9.1)s],穿越平台的次数减少[(3.2±1.6)次].结论 姜黄素可促进APP/PS1转基因小鼠海马HSP70蛋白的表达,同时可提高APP/PS1转基因小鼠的空间学习能力,这可能与姜黄素提高HSP70表达有关,结果提示姜黄素对于AD可能具有潜在的治疗价值.     

金思维提取物对APPswe/PS1dE9转基因小鼠海马淀粉样前体蛋白表达水平的影响

目的观察金思维提取物(GAPT)对APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP表达水平的影响。方法将3月龄的APPswe/PS1d E9转基因小鼠随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组及GAPT大、中、小剂量组,并以同月龄遗传背景相同的C57BL/6J小鼠作为正常组,每组12只,灌胃给药6个月后,以蛋白印迹法(Western blot)检测海马内淀粉样前体蛋白(APP)表达变化。结果模型组小鼠海马中APP表达水平显著高于正常组(P0.01);各治疗组与模型组相比,APP蛋白表达水平均显著降低,其中GAPT小剂量组(P0.01)、GAPT中剂量组(P0.01)、GAPT大剂量组(P0.01)、多奈哌齐组(P0.01);各GAPT组与多奈哌齐组比较结果 APP表达水平均高于多奈哌齐组,其中GAPT小剂量组(P0.01)、GAPT中剂量组(P0.01)有显著性差异,而GAPT大剂量组(P0.05)无明显差异。结论GAPT可能具有抑制APPswe/PS1d E9双转基因小鼠海马内APP蛋白过度表达的作用。     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。