核小体结合蛋白1在前列腺癌中的表达和意义

目的 通过检测核小体结合蛋白1（NSBP1）在正常前列腺（NP）、良性前列腺增生（BPH）、前列腺癌（PCa）组织中的表达,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。方法 采用Western印迹方法检测NSBP1在10例NP组织、15例PCa组织中的蛋白表达差异;采用免疫组织化学方法检测19例NP组织、26例BPH组织、40例PCa组织中NSBP1的表达水平。结果 NSBP1在PCa组织中蛋白表达高于在NP组织中的表达,差异有统计学意义（t=37．308,P〈0．01）。3种组织中NSBP1的阳性及弱阳性表达率为56．5％（48／85）,其中NP、BPH、PCa组织中分别为36．8％（7／19）、34．6％（9／26）、80．0％（32／40）。PCa组织中NSBP1表达水平明显高于NP及BPH组织（t=-3．569,-4．152,P〈0．01）。在PCa中NSBP1的表达水平与PCa病理分期、Gleason评分（GS）、血清前列腺特异抗原（PSA）均不相关（P=0．911,0．666,0．779）。结论 NSBP1在PCa中高表达,并可能参与了PCa的发生发展过程。     

单羧酸转运蛋白4(MCT4)在前列腺癌中的表达及调控研究

目的 探讨单羧酸转运蛋白4（monocarboxylate transporters 4,MCT4）在前列腺癌组织及细胞系中的表达情况,明确其在前列腺癌细胞中的调控作用。方法 应用免疫组织化学方法检测MCT4蛋白在前列腺癌（prostate cancer,PCa）、良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）及癌旁组织（para-carcinoma tissues,PCT）中的表达,分析其与前列腺癌Gleason评分及淋巴结转移的关系。免疫印迹（Western blotting）法检测不同前列腺癌细胞系中MCT4蛋白表达差异,分析抑制MCT4蛋白表达对N-cadherin、E-cadherin及pERK1/2的调控作用。结果 免疫组化检测显示,MCT4蛋白在前列腺癌、前列腺增生及癌旁组织中均有表达;但PCa中MCT4表达水平明显高于BPH及PCT（P=0.003）。另外,MCT4蛋白表达与前列腺癌是否有淋巴结转移密切相关,转移组显著高于非转移组（P=0.022）。Western blotting检测结果显示,在前列腺正常上皮细胞及激素依赖性前列腺癌细胞LNCap中MCT4表达较弱,而在恶性程度较高的去势抵抗性前列腺癌细胞PC3及DU145中表达明显增强。抑制PC3细胞中MCT4表达可以使N-cadherin及pERK1/2的蛋白表达下降,而使E-cadherin蛋白表达水平升高。结论 单羧酸转运蛋白4可能参与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）进程及ERK1/2通路的调控,促进前列腺癌的进展和转移,对前列腺癌的临床诊断和治疗有重要意义。     

MADD抑制人前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的：检测含促分裂素原活化蛋白激酶激活死亡结构域蛋白（MAPK-activating death domain-containing protein,MADD）在前列腺癌组织及良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）组织中的表达并探讨其对前列腺癌细胞凋亡的作用。方法：收集40例人前列腺癌及35例BPH组织,免疫组化染色技术检测MADD的表达情况;Western blot技术检测MADD在人前列腺癌细胞株（LNCaP、PC-3和PC-3M）和良性前列腺细胞株（BPH1）中的表达情况;应用MADD siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,Western blot检测其MADD、caspase-3和PARP表达,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡变化。结果：MADD在前列腺癌组织中的表达高于BPH组织（P=0.000）;人前列腺癌细胞株LNCaP、PC-3M和PC-3中MADD表达水平明显高于良性前列腺细胞株BPH1（P=0.009、P=0.001、P=0.000）,沉默PC-3细胞中MADD表达,导致活化型caspase-3和PARP降解产物表达增加,并诱导PC-3细胞凋亡增加和增殖活力降低（P=0.000）。结论：前列腺癌组织中MADD表达明显增高,MADD在前列腺癌中可能作为凋亡抑制因子发挥功能。     

人前列腺癌组织中Hic-5/ARA55的表达及临床意义

[摘要] 目的 探讨局部黏着蛋白Hic-5/ARA55在前列腺癌组织标本中的表达及其与患者临床特征（TNM分期、Gleason评分）之间的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测前列腺癌组织标本中Hic-5/ARA55的表达情况。结果 前列腺癌患者组织标本中都有Hic-5/ARA55的表达,但表达量不同,T1～T2期和T3～T4期的阳性率分别为52.00%(13/25)和12.50%(2/16);Gleason评分≤7分和>7分的阳性率分别为52.17%(12/23)和16.67%(3/18),前者和后者相比均具有统计学意义（P<0.05）。结论 Hic-5/ARA55的蛋白表达水平与前列腺癌患者的临床特征（TNM分期、Gleason评分）显著相关,肿瘤的TNM分期越早,Gleason评分≤7分的患者其表达量越高。它可能是一种对前列腺癌具有抑制作用的蛋白质,对于前列腺癌的治疗和预后有指导意义。     

敲减CMTM3增强前列腺癌细胞系PC3迁移与侵袭能力

目的：应用慢病毒载体shRNA对PC3细胞中的人趋化素样因子超家族成员3（CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 3,CMTM3）进行敲减,以探究CMTM3对前列腺癌细胞系生物学行为改变的影响。方法： 研究分为两组进行,其中shN为未敲减CMTM3的PC3细胞系对照组,sh393为敲减CMTM3的PC3细胞系实验组。运用Western blot检测PC3细胞系慢病毒shRNA敲减CMTM3后的表达,Transwell与细胞划痕实验检测敲减CMTM3对PC3细胞系迁移能力的影响,Matrigel实验检测敲减CMTM3对PC3细胞系侵袭能力的影响。结果： 前列腺癌细胞系PC3经慢病毒敲减CMTM3后,sh393组CMTM3表达水平明显低于shN组（0.004 0±0.000 4 vs. 0.490 0±0.055 7,P<0.001）, 且sh393组侵袭（248.6±4.5 vs. 113.0± 3.3）、迁移（203.6±1.9 vs. 103.0±1.2）及迁移愈合能力（95.0±2.9 vs. 33.0±1.5）均明显强于shN组（P<0.001）。结论： 敲减CMTM3可以影响PC3细胞的迁移与侵袭能力,CMTM3下调与PC3细胞系肿瘤生物学特性的改变可能具有负相关性。     

缺氧诱导因子-1α及P53蛋白在前列腺增生和癌变组织中的表达及对判断预后的意义

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia—inducible factor-1α,HIF-1α）及P53蛋白在前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）及前列腺癌中的表达情况及两者在前列腺癌发病中的作用及其临床意义。方法：采用免疫组织化学sP法检测40例BPH、40例前列腺癌及10例正常前列腺组织中P53及HIF-1α表达情况。结果：P53在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中阳性表达率分别为t0％（4／40）、80％（32／40）,其在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织（P〈0．05）,前列腺癌组织中表达率高于BPH组织（P〈0．05）。HIF-1α在正常前列腺组织中不表达,在BPH、癌性前列腺组织中的阳性表达率分别为40％（16／40）、75％（30／40）,在BPH组织中表达率高于正常前列腺组织（P〈0．05）,前列腺癌组织中表达率高于BPH组织（P〈0．05）。P53、HIF-1α与前列腺癌的分期有关（P〈0．01）。前列腺癌组织中HIF-1α与P53表达呈正相关（r=0．648）。结论：HIF-1α、P53的异常表达在BPH和癌变的发病中起重要的作用。它们可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在前列腺增生和癌变组织中的表达及对判断预后的意义

目的：探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothekial-growth factor,VEGF）在前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）和前列腺癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测40例BPH及40例前列腺癌中HIF-1α、VEGF表达情况。结果：HIF-1α在正常组织中不表达,在BPH中表达率为60%,在前列腺癌中的表达率为75%,且与前列腺癌的分期有关（P〈0.01）。VEGF在正常组织中不表达,在BPH中表达率为20%,在前列腺癌中的表达率为80%,且与前列腺癌的分期有关（P〈0.01）。前列腺癌组织中HIF-1α与VEGF表达呈正相关（r=0.654,P〈0.01）。结论：HIF-1α、VEGF的异常表达在BPH和癌变的发病中起重要的作用,可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。     

前列腺癌中MMP-9和VEGF的表达及相关性研究

目的：探讨基质金属蛋白酶（ MMP-9）和血管内皮生长因子（ VEGF）在前列腺癌组织中的表达以及两者的关系。方法：应用免疫组织化学技术检测120例前列腺增生（ BPH）和120例前列腺癌（ PCa）组织中MMP-9和VEG的表达水平,并分析两者表达与前列腺癌临床病理特征的关系。结果：120例PCa中MMP-9和VEGF阳性表达率分别为85.01％、83.32％,与BPH组织进行比较,差异均有统计学意义（ P 〈0.05）。MMP-9和VEGF与PCa的病理分级和临床分期有关,且二者呈正相关。结论：MMP-9和VEGF蛋白在PCa中高表达,两者与前列腺癌的发生、发展相关,可以作为预后的判断指标。     

转谷氨酰胺酶4在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨转谷氨酰胺酶4（transglutaminase 4, TGM4）在前列腺癌诊断及预后评价中的可能价值。 方法 对159例前列腺癌患者的存档石蜡标本行TGM4免疫组织化学染色;根据染色情况将TGM4表达水平分为4级：不表达,弱表达,中表达和高表达。通过查阅病历、调用我院前列腺癌随访数据库和电话随访等方式获得患者临床病理资料及随访信息;进而对TGM4表达水平与前列腺癌临床病理特征及预后信息的关系进行统计学分析。 结果 与癌旁组织相比,TGM4在前列腺癌组织中高表达（P<0.001）,且表达水平在不同Gleason分级（P<0.001）和前列腺特异抗原（PSA）水平（P=0.005）间差异有统计学意义。单因素Cox回归分析提示TGM4高表达是前列腺癌生化复发的高危因素（P=0.020）,但多因素Cox回归分析并不支持TGM4高表达是前列腺癌生化复发的高危因素（P=0.139）。 结论 TGM4在前列腺癌中高表达,且在高Gleason分级和高PSA水平的前列腺癌中表达更高,值得进一步研究。     

前列腺癌组织中VEGF和TGF-β1表达的关系

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）与转化生长因子（TGF-β1）在前列腺癌中的表达及意义。方法选取不同分级的前列腺癌组织和前列腺增生组织,采用免疫组织化学S-P法染色,检测VEGF及TGF-β1的表达情况。结果63例前列腺癌组织中病理分级（按Gleason分级系统）分化良好癌、中等分化癌、分化不良癌中VEGF的蛋白表达率分别为36.3%（8/22）,68.1%（15/22）,100%（19/19）。随着Gleason评分增加,VEGF蛋白表达率明显升高（P〈0.05）。病理分级中分化良好癌、中等分化癌、分化不良癌TGF-β1的蛋白表达率分别为18.1%（4/22）,45.4%（10/22）,78.9%（15/19）。随着Gleason评分增加,TGF-β1蛋白表达率明显升高（P〈0.05）。结论①VEGF的表达与前列腺癌的Gleason评分正相关;②TGF-β1的表达与Gleason评分正相关;③VEGF和TGF-β1的表达呈正相关。     

跨膜蛋白CMTM2在人睾丸和精子中的表达及定位

目的：通过研究跨膜蛋白CMTM2在睾丸和精子中的表达来探讨CMTM2蛋白在男性生殖系统中潜在的功能。方法：Western blot方法检测CMTM2在人睾丸及精子中的表达,免疫组织化学及组织免疫荧光方法检测CMTM2在人睾丸组织中的定位,TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位。结果：CMTM2在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中CMTM2定位于各级生精细胞的细胞膜,睾丸组织冰冻切片免疫荧光检测的结果与免疫组织化学一致,进一步证实CMTM2存在于睾丸各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近。以TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位,在顶体反应前后,CMTM2在人精子的定位及表达量未发生改变。结论：CMTM2在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和精卵融合过程中发挥作用,是男性不育研究的靶基因。CMTM2在男性生殖系统中的表达呈现细胞与生精区域的特异性,提示其高度参与生精功能,但目前针对CMTM2在男性生殖系统与精子生成过程中的作用仍未明确,今后可以采用体外受精 胚胎移植等技术进一步研究CMTM2的作用。     

鼠抗人CMTM7单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人CMTM7(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing 7)蛋白的单克隆抗体,探讨CMTM7蛋白的分子结构和生物学功能.方法:通过生物信息学对CMTM7的蛋白序列进行分析,选取了3段序列合成多肽并与钥孔戚血蓝素(keyhole limpet hemocyanin, KLH)偶联,混合后免疫Balb/c小鼠.取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞SP2/0进行常规融合,间接ELISA方法进行筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗CMTM7蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用Western blot、免疫荧光以及免疫细胞化学等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了2株稳定分泌抗CMTM7蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为MC9和2C9,其免疫球蛋白亚类均为IgG1.MC9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基163～175区域(CMTM7_163-175),可用于Western blot、免疫荧光和免疫细胞化学分析(immunocytochemistry, ICC).2C9单抗识别的抗原表位位于CMTM7氨基酸残基19～44区域(CMTM7_19-44),该单抗只能用于Western blot分析.初步的功能研究提示,CMTM7蛋白在植物血凝素(phytohemagglutinin, PHA)活化早期的外周血淋巴细胞中表达上调.结论:获得了特异性好、能够识别不同抗原表位以及不同用途的鼠抗人CMTM7蛋白的单克隆抗体,为研究CMTM7蛋白的分子结构以及功能特性奠定了基础.     

人EGFR基因真核表达质粒的构建及其在293细胞中的表达

目的:构建人表皮生长因子(EGFR)基因真核表达系统,拟为EGFR靶向腺病毒准备包装细胞.方法:用RT-PCR法,从人A431细胞中逆转录出EGFR基因cDNA,插入到pcDNA3.1(+)质粒中,拟构建EGFR真核表达载体,经测序证实.用脂质体将重组质粒转染293细胞,经G418筛选获得稳定表达EGFR重组克隆,用Western blot鉴定转染细胞中EGFR基因的表达.结果:经限制性内切酶酶切及测序结果分析证实EGFR基因已插入重组质粒.Western blot方法证实转基因293细胞中存在人EGFR基因的表达.结论:成功构建的人EGFR/pcDNA3.1(+)真核表达系统能够在293细胞稳定表达.     

不同临产状态的子宫平滑肌组织中与#br# NF-κB相互作用差异蛋白质的分析

目的：分析不同临产状态子宫下段平滑肌组织中与NF-κB相互作用的差异蛋白质,为分娩机制的研究提供新的实验及理论依据。方法：分别采集足月未临产、自然临产和前列腺素E2栓诱导临产(药物临产组)的孕妇子宫下段平滑肌组织。Western印迹验证NF-κB P65表达;联合免疫共沉淀、SDS-PAGE、电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)和蛋白质生物信息分析等技术,分析不同临产状态子宫平滑肌组织中与NF-κB相互作用的差异蛋白质,并利用Western印迹进行验证。结果：人类临产前后子宫下段平滑肌组织中NF-κB表达均为阳性,与NF-κB P65相互作用的差异蛋白,自然临产前后鉴定出9个,药物临产前后鉴定出5个,其中不同临产状态共同差异表达的蛋白3个,分别为热休克蛋白70(heat shock 70 kD protein,HSP70)、膜联蛋白A6和结蛋白,经Western印迹验证与蛋白表达相符。这些差异蛋白分别属于分子伴侣、信号转导、细胞骨架和能量代谢相关的蛋白质。结论：子宫平滑肌细胞中NF-κB通过与分子伴侣、信号传导、细胞骨架和能量代谢等相关的多种蛋白质相互作用,参与分娩的启动或调节。     

前列腺良、恶性病变中表皮生长因子受体和增殖细胞核抗原的表达及其相关性

目的 探讨前列腺良、恶性病变组织中表皮生长因子受体(EGFR)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及其相关性研究。方法 应用免疫组织化学ABC法,检测36例前列腺癌(PCa),20例前列腺增生(BPH)组织中EGFR、PCNA的表达情况。结果 BPH组EGFR阳性表达率高于PCa组(P<0.05);PCa组比BPH细胞增生活跃(P<0.01)。EGFR阳性表达的前列腺癌比EGFR阴性者细胞增殖活跃(P相似文献   

血管抑制因子在前列腺癌及前列腺增生组织中的表达及意义

 【目的】探讨前列腺增生（BPH）和前列腺癌（PCa）组织中血管增生抑制因子，如视网膜色素上皮细胞源因子（PEDF）、血管抑素（angiostatin）、内皮抑素endostatin的表达情况及其血管依赖性生长的分子机制。【方法】收集正常前列腺、前列腺增生和前列腺癌组织标本，RT—PCR技术检测样品中PEDF、angiostatin、endostatin的mRNA表达量，Western blot技术检测样品中PEDF蛋白的表达量。【结果】和正常前列腺组织相比，PEDF表达量在BPH中无明显变化（P〉0．05），在前列腺癌中普遍显著下降（P〈0．05）；良性前列腺增生组织中endostatin表达量较正常前列腺组织显著升高（P〈0．05），前列腺癌比正常前列腺显著升高（P〈0．05），而且前列腺癌组织较良性前列腺增生进一步显著增高（P〈0．05）；三种组织中均未检测到angiostatin的表达。【结论】良性前列腺增生及前列腺癌组织抑制因子表达变化可能和其血管依赖性生长相关；PEDF可能是前列腺组织最主要的血管增生内源性抑制因子。     

eIF3b在三阴性乳腺癌细胞增殖和侵袭中的作用

目的：探讨真核细胞翻译起始因子3 的亚基b（eIF3b）基因在三阴性乳腺癌（TNBC）增殖和侵 袭中的作用。方法：采用免疫组化法检测50 例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、细胞计数试剂盒8（CCK-8）、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹（Western blot）法分别检测RNA干扰（RNAi）前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果：50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织（P ＜0.01）,与Ki-67 表达、淋巴结转移有关（P ＜0.05）,而与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型无关（P ＞0.05）。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降（P ＜0.05）,细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P ＜0.05）,Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组（P ＜0.05）。结论：eIF3b在TNBC组织中高表达;eIF3b基因沉默可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与阻断Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞周期有关。     

A CLONALLY DERIVED CELL LINE, 9L－EGFR IS USEFUL FOR THE STUDIES OF CANCER CELLS BEARING EGF RECEPTOR

Since the epidermal growth factor receptor (EGFR) is a key regulator in ceU sig-naling pathways of cancer ceU. To investigate the mechanism between cancer cells survival and its EGFR expression, drug selection of cancer cells target therapy, we generated a cell line, 9L-EGFR, which stably expressed human EGFR; the parental rat glioma cell line, 9L, does not con-tain endogenous EGFR message or protein. Our results show that 9L- EGFR cells had high levels of EGFR on their cell surface by using RT- PCR, Western analysis and Flow cytometry analysis.The EGFR transfected into 9L cells was capable of being activated by EGF, in which either phos-phorylated (p-EGFR) or total (EGFR) was showed by Western blot. This investigation may contribute to the further studies of cancer cells bearing EGFR.     

二氢睾酮对前列腺癌LNcap和PC-3细胞株EGFR mRNA表达的影响

目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据.方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性.结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低.低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降.结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性.AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控.