胶质瘤p53、p16、bcl-2、c-fos蛋白表达和细胞凋亡

目的：探讨p53、p16、bcl-2、c—fos基因在胶质瘤的表达水平和细胞凋亡与胶质瘤的发生、发展的关系。方法：采用免疫组织化学和原位末端标记（ISEL）技术,对不同组织学级别150例胶质瘤石蜡标本进行基因蛋白和细胞凋亡的检测。结果：150例胶质瘤中p53、p16、bcl-2、c—fos蛋白的阳性率分别为50．00％、38．67％、61．33％、46．67％;p53、p16、bcl-2蛋白表达差异在各组间均有统计学意义（P〈0．005）,c．fos蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）;随胶质瘤级别升高,bcl-2蛋白表达水平增高,瘤细胞凋亡减少,但差异无显著性（P〉0．05）。结论：p53、p16、bcl-2、c—fos基因的异常表达在胶质瘤的发生、发展过程中起重要作用。p53、p16、bcl-2、c—fos基因的协同作用促使细胞凋亡机制障碍,细胞增殖和凋亡失控。p53、p16、bcl-2、c—fos基因蛋白的检测对判断预后、指导临床基因治疗有重要意义。     

沙鼠短暂脑缺血再灌p53基因表达

目的：研究脑缺血再灌后p53基因表达变化。方法：采用沙鼠短暂前脑缺血再灌损伤模型,应用Northern blot检测脑缺血再灌后不同时期额叶p53 mRNA表达。结果：沙鼠脑缺血6min,在再灌后6h p53 mRNA出现表达增加,持续至第3d（P＜0.05)。结论：沙鼠短暂脑缺血后,促凋亡基因p53存在持续高表达,其结果可能是启动细胞凋亡,导致缺血神经细胞损伤死亡。     

放疗前后宫颈癌细胞凋亡及Fas,p53及bcl—2的表达

目的：探讨Fas ,p53及 bcl-2放疗前后的变化及与细胞凋亡的关系。方法：采用免疫组织化学SP法和脱氧核糖核酸转移介导的缺口末端标记（TUNEL）技术,分别检测40例宫颈鳞癌患者放疗前后同一位点凋亡阳性率及Fas,p53和bcl-2的表达。结果：放疗前后凋亡阳性率有显著性差异（P＜0．01）,放疗后Fas与p53表达明显升高（P＜0．01）,而bcl-2表达明显降低（P＜0．01）;放疗后p53与Fas及bcl-2表达有相关性（P＜0．05）,结论：Fas,P53及bcl-2对放射线诱导的宫颈癌细胞凋亡均具有重要调控作用。P53可能通过上调Fas在宫颈癌中的表达参与了放疗诱导的细胞凋亡过程。     

黄芪皂苷对神经胶质瘤的体外抑制作用及机制研究

目的探讨黄芪皂苷体外抗神经胶质瘤活性及相关机制。方法采用体外培养的SHG44细胞株为研究对象,流式细胞仪检测黄芪皂苷作用后SHG44细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达变化。结果黄芪皂苷可诱导SHG44肿瘤细胞凋亡;黄芪皂苷可引发SHG44肿瘤细胞促凋亡蛋白p53、Bax高表达,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低。结论黄芪皂苷可通过p53信号通路激活和Bcl-2家族介导的细胞色素C途径诱导癌细胞凋亡,从而对神经胶质瘤细胞产生抑制作用。     

电化学疗法与恶性淋巴瘤细胞凋亡与相关基因表达

目的：探讨电化学疗法（ECT）与肿瘤细胞凋亡的关系。方法：采用Tunel法和免疫组化S－P法,分别检测肿瘤未治疗对照组和ECT组B细胞淋巴瘤组织的细胞凋亡率和p53,bcl-2基因的表达。结果：ECT组肿瘤细胞凋亡率（5．18）显著高于对照组（1．05）,p53,bcl-2在ECT组表达分别为80％,25％,在对照组表达分别为15％,90％,ECT组中p53表达与癌细胞凋亡率呈正相关,而bcl-2则与癌细胞凋亡率呈负相关。结论：ECT可诱导癌细胞凋亡,其发生可能与p53和bcl-2基因调控有关。     

氧化砷诱导人肝癌细胞凋亡相关基因的实验研究

目的：探讨氧化砷（As2O3)对人肝癌细胞诱导凋亡作用的分子机制。方法：以As2O3作用于体外培养的人肝癌细胞株HepG2，通过免疫组化技术对bcl-2,bax,p53,Fas及c-myc五种基因编码蛋白的表达进行检测。结果：经As2O3作用的人肝癌细胞bcl-2基因编码蛋白表达减少，bax,Fas基因编码蛋白表达增加，p53,c-myc基因编码蛋白表达改变不明显，结论：As2O3诱导肝癌细胞凋亡分子机制可能是下调bcl-2基因编码蛋白表达，增强box,Fax基因编码蛋白表达。     

脑缺血再灌注后神经细胞bcl—2和p53mRNA的表达

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2和p53mRNA表达的变化规律。方法：采用原位杂交技术分别观察血1.5h再灌注后2h,6h,12h,1d,2d,3d,7d和14d神经细胞bcl-2,p53mRNA的表达。结果：脑缺血再灌注2h在缺血周围区bcl-2mRNA开始表达，1d达高峰，之后逐渐减弱，14d达接近假手术组水平;p53mRNA于再灌注6h出现，1-2d达高峰，7d达假手术组水平。结论:大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl-2和p53mRNA的表达与缺血性损伤有一定关系，bcl-2和p53mRNA参与了神经细胞凋亡的调节。     

凋亡调节基因bcl-2及p53在早期胚胎中的表达

目的　探讨两种重要的细胞凋亡调控基因bcl-2及p53在着床前小鼠胚胎中的表达及其其对着床前胚胎发育的作用.方法　建立超排卵小鼠早孕的模型,获取着床前胚胎,采用免疫组化LSAB法,检测bcl-2及p53蛋白.结果　在小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚胚中,均检测到bcl-2和p53蛋白.结论　bcl-2和p53凋亡调控基因在小鼠着床前胚胎的表达可能与细胞碎片形成有关,对于维护胚胎正常发育,促进发育异常的胚胎细胞发生凋亡,从而提高胚胎质量有重要意义.体内增殖与凋亡处于一个动态平衡,共同调节胚胎发育凋亡调节基因bcl-2及p53在早期胚胎中的表达@李艳红@姚…     

硒对镉诱导肾细胞凋亡及其相关蛋白bcl-2、p53表达的影响

目的:探讨硒对镉诱导肾小管上皮细胞(LLC-PK1)凋亡及其凋亡相关蛋白bcl-2和p53表达的影响.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测硒对镉抑制LLC-PK1细胞生长的影响,AO/EB荧光双染法观察硒对镉诱导细胞凋亡形态的作用,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白bcl-2和p53表达水平的变化.结果:不同浓度硒对镉的细胞毒性具有一定的拮抗作用,并呈剂量效应关系;40 μmol/L镉可诱导LLC-PK1细胞凋亡,当加入20μmol/L硒预处理30 min再染镉12 h后,细胞凋亡的程度与单独染镉组相比有所减弱.检测凋亡相关蛋白bcl-2和p53的表达,发现镉可上调p53蛋白表达及下调bcl-2蛋白的表达,当加入硒预处理后可对镉引起的p53蛋白上调具有一定的抑制作用,但硒对镉引起的bcl-2蛋白下调作用不明显.结论:硒可拮抗镉性肾细胞凋亡,其机制可能与抑制镉引起促凋亡蛋白p53的上调有关.     

实验性脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内的表达

目的：观察全脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内表达的变化规律和意义。方法：采用大鼠4血管结扎全脑缺血30min再灌流模型。用免疫组织化学染色法观察Bak和Bad基因在脑内的表达。结果：全脑缺血再灌流后12h开始在皮质和海马等缺血易损部位：Bak表达降低。24h达最低点;而Bad则表达升高,24h达最高点：表达变化最明显的时间均是24-48h,此时间与脑缺血后脑细胞凋亡发生的高峰时间一致。结论：脑缺血再灌流可以诱导Bak和Bad基因在脑内表达发生变化。这种变化与脑细胞凋亡的发生关系密切。Bak在脑缺血后表达降低说明其在脑内表达可抑制细胞凋亡。     

慢性阻塞性肺病患者肺内细胞增殖与凋亡的研究

目的研究细胞增殖、凋亡及其调节基因在慢性阻塞性肺病（ＣＯＰＤ）继发肺动脉高压中的作用。方法应用免疫组化及原位缺口末端ＤＮＡ碎片标记技术检测ＣＯＰＤ患者肺内细胞增殖及凋亡,并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测ＣＯＰＤ患者肺内ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因表达。结果ＣＯＰＤ患者及对照组肺内（包括肺小血管壁）均存在着一定比率的增殖及凋亡细胞。两组相比,ＣＯＰＤ组增殖指数增高而凋亡指数减少,增殖与凋亡比值显著增高,约为对照组４倍。在ＣＯＰＤ患者肺内,增殖细胞绝大部分位于肺小血管壁,而凋亡细胞在肺小血管壁上较对照组少见。ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及蛋白表达在ＣＯＰＤ肺内比对照组明显增高,主要在肺小血管壁。ｃｍｙｃｍＲＮＡ表达量约为对照组３倍,ｂｃｌ２ｍＲＮＡ三条带表达量约为对照组２５～３５倍,ｐ５３基因ｍＲＮＡ表达量比对照组显著减少,约为１／３倍。结论可能由于ｃｍｙｃ、ｂｃｌ２及ｐ５３基因异常表达所致的细胞增殖与凋亡异常参与了ＣＯＰＤ时的肺血管结构改建的调节,亦即参与了ＣＯＰＤ继发的肺动脉高压过程     

化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察异黄酮类化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:利用大脑中动脉栓线阻断法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,观察化合物N-2035对缺血再灌注大鼠的脑水肿、细胞内钙及凋亡抑制基因bcl-2表达的影响。结果:化合物N-2035能改善局灶性脑缺血再灌注损伤脑水肿,降低细胞内钙,增加bcl-2的表达。结论:化合物N-2035对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与化合物N-2035抗细胞凋亡有关。     

Protective effect of isoflurane and sevoflurane on ischemic neurons and expression of Bcl-2 and ICE genes in rat brain

Objective To study the protective effect of volatile anesthetics, isoflurane and sevoflurane, on ischemic neurons after cerebral ischemia-reperfusion in rats and its possible molecular mechanism. Methods Rat cerebral ischemia-reperfusion model was developed by occlusion of the middle cerebral artery （MCA） and bilateral common carotid arteries （CCAs） 1 h after reperfusion. Using flow cytometry （FCM） and Northern blot hybridization, we calculated the number of apoptotic bodies and detected the expression of bcl-2 mRNA and interleukin-113 converting enzyme （ICE） mRNA. Results The apoptotic bodies in hippocampus analyzed by FCM peaked at appeared 24 h after reperfusion, and decreased about 54% and 40%, respectively, after treatment with isoflurane and sevoflurane, as compared with ischemic group. There was no significant difference in the expression of bcl-2 mRNA and ICE mRNA between the inhaled anesthetic groups and ischemic group in hippocampus 24 h after MCA/CCAs occlusion. Conclusion Isoflurane and sevoflurane partially inhibit apoptosis but have no significant effect on the expression of bcl-2 and ICE genes.     

针刺对脑缺血大鼠神经元凋亡的影响

目的观察针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元内细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（CDK4）和神经元凋亡的影响。方法大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,再灌后针刺大鼠,应用免疫组化、免疫印迹法和流式细胞计数法分别检测CDK4和细胞凋亡。结果缺血组再灌注48h后海马CDK4表达升高,凋亡细胞增多,针刺组CDK4表达和凋亡细胞明显减少（P〈0．01）。结论针刺对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与调控细胞周期因子从而抑制凋亡有关。     

黄芪多糖抗心肌缺血作用与机制

目的研究黄芪多糖抗心肌缺血作用及其机制。方法 40只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药物组（复方丹参片）及黄芪多糖高、低剂量组,采用冠状动脉结扎的方法建立大鼠心肌缺血模型。TUNEL法观察各组大鼠的心肌细胞凋亡情况,采用Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠心肌细胞凋亡相关因子mRNA和蛋白表达相关水平,并探讨它们之间的相互关系。结果与模型组相比,给药组bcl-2mRNA和蛋白表达明显升高（P〈0.05）,caspase-3mRNA和蛋白表达明显降低（P〈0.05）,给药组能明显改善心肌细胞凋亡。结论黄芪多糖对心肌缺血大鼠模型心肌梗死有明显保护作用,其作用机制可能与上调bcl-2及下调caspase-3相关。     

Effects of L-Tetrahydropalmatine on the Expressions of bcl-2 and bax in Rat after Acute Global Cerebral Ischemia and Reperfusion

Polygenesregulateapoptosis .bcl 2isananti apoptosisgene ,whilebaxisapro apoptosisgene .L Tetrahydropalmatine (L THP) ,akindofalkaloidextractedfromtraditionalChinesemedicineRhizomacorydalis,possessesanalgesic ,sedativeandhypnoticeffects.Recently ,ithasbeen…     

黄芪对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的：探索黄芪对大鼠急性心肌炔血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法：采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血再灌注(IR)模型，分别以地高辛随机引物法及免疫组化法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax、bcl—2基因的蛋白表达情况。结果：缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于假手术组(P＜0．01)，黄芪治疗组心肌细胞凋亡(P＜0．05)明显受到抑制。IR组和黄芪组bax和bcl--2基因蛋白表达均明显增加(P均＜0．01)，黄芪明显抑制bax基因表达(P＜0．05)，但对bcl—2基因表达无明显影响。结论：急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡加剧，bax、bcl—2参与了缺血再灌注时心肌细胞凋亡凋控，黄芪可抑制凋亡加速基因bax的表达，因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的　探讨丹参对大鼠急性心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　采用结扎大鼠左冠状动脉法制备心肌缺血 +再灌注模型 ,2 4只大鼠随机均分为 :①缺血再灌注 (IR)组 :缺血45min ,再灌注 1h ,滴注生理盐水 ;②丹参治疗 (DS)组 :缺血 45min ,再灌注 1h ,滴注丹参注射液 (5mg/kg ,制药厂生产 ) ;③假手术 (Sham)组 :行假手术 ,滴注生理盐水 ,分别采用地高辛随机引物法及免疫组织化学法检测心肌凋亡细胞、心肌细胞bax和bcl 2基因的蛋白表达情况。结果　缺血再灌注心肌细胞凋亡数量显著高于Sham组 (P <0 .0 1) ,DS组心肌细胞凋亡明显受到抑制 (P <0 .0 5 )。IR组和DS组bax、bcl 2基因蛋白表达均明显增加(P值均 <0 .0 1) ;丹参明显抑制bax基因表达 (P <0 .0 5 ) ,但对bcl 2基因表达无明显影响。结论　急性心肌缺血再灌注时心肌细胞调亡加剧 ,bax和bcl 2参与调控缺血再灌注时心肌细胞调亡 ,丹参可抑制调亡加速基因bax的表达 ,因而在缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的保护方面有一定价值。     

异氟烷和七氟烷对缺血神经元c-fos和bcl-2基因表达的影响及神经保护作用

为了解吸入麻醉药异氟烷和七氟烷对缺血神经元的保护作用和对c fos、bcl 2基因表达的影响 ,将大鼠右大脑中动脉和双侧颈总动脉分别结扎 1h,造成脑缺血再灌模型 ,缺血期间分别吸入异氟烷和七氟烷。然后分别检测脑梗死体积、海马组织神经元凋亡变化和c fos、bcl 2基因表达情况。结果显示 :缺血期间吸入麻醉药组脑梗死体积、凋亡神经元细胞数和c fosmRNA表达水平显著低于缺血组 ,而bcl 2mRNA表达水平吸入麻醉药组和缺血组之间没有明显差别。表明异氟烷和七氟烷对缺血神经元有保护作用 ,能衰减c fosmRNA表达 ,但对bcl 2mRNA的表达无明显影响。     

大鼠慢性前脑缺血解除后脑过度灌注模型的建立

目的 建立大鼠慢性前脑缺血基础上的脑过度灌注模型.方法 选取雄性Wistar大鼠72只依随机数字表均分为两个模型建造组.缺血模型采用双侧颈总动脉结扎,随机数字表分为空白对照、假手术组、缺血2周组、缺血4周组,每组9只,结扎前后分别测定脑额叶血流、比较各组行为学评分、脑梗死面积.过度灌注模型是在缺血模型基础上,再灌注同时经尾静脉持续输注去氧肾上腺素4μg·kg-1·min-1,使再灌注后脑额叶血流超过基础值的200%.随机分为空白对照组、盐水组、过度灌注0.5 h组、过度灌注2 h组,每组9只,再灌注前后分别测定脑额叶血流,比较各组行为学评分、血脑屏障通透性、脑干湿重比值.结果 大鼠双侧颈动脉结扎后前脑血流减少可达67%±2%,脑过度灌注组与盐水输注组的脑血流变化值差异有统计学意义(P＜0.01).缺血2周组的神经功能评分、脑梗死面积与正常对照组差异无统计学意义,缺血4周组的脑梗死面积与正常对照组差异有统计学意义.脑过度灌注2 h组的血脑屏障通透性改变有统计学意义(P＜0.05).结论 结扎大鼠双侧颈总动脉2周后脑过度灌注2 h可较好地建立大鼠脑过度灌注综合征模型.

Abstract：

Objective To establish the cerebral hyper-perfusion model after chronic forebrain ischemia in rats. Methods A total of 72 male rats were equally randomized into 2 modeling groups. The ligation of bilateral common carotid artery could induce chronic forebrain ischemia. And 36 rats were randomly grouped by ischemia duration: control group ( n = 9 ), sham group ( n = 9 ), 2-wcek ischemia group ( n = 9 ) and 4-wcek ischemia group ( n = 9 ). The blood flow in frontal lobe was measured at pre- and post-ligation. The neurological score and cerebral infarction area were also compared among the groups. The min-1 via tail vein to produce cerebrally hyperperfused blood flow rate over 200% of baseline following chronic ischemia. According to cerebral hyper-perfusion duration, 36 rats were randomly assigned into 4 groups: control group ( n = 9 ), saline infusion group ( n = 9 ), 30-minute cerebral hyper-perfusion group ( n = 9) and 2-hour cerebral hyper-perfusion group ( n = 9). The blood flow in frontal lobe was measured before and after cerebral hyper-perfusion. The neurological score, blood-brain barrier permeability and drywet weight ratio of brain also were compared among the groups. Results The forebrain blood flow decreased by 67% ± 2% after the ligation of bilateral common carotid artery. There was significant difference between cerebral hyper-perfusion and saline infusion groups ( P ＜ 0. 01 ). No statistic difference was observed in neurological score and cerebral infarction area between 2-week ischemia and control groups. But it was obvious between 4-week ischemia and control groups. The permeability in blood-brain barrier of rats significantly increased in 2-hour hyper-perfusion group ( P ＜ 0.05 ). Conclusion The 2-hour duration of cerebral hyper-perfusion following a 2-week ligation of bilateral common carotid artery may establish a reliable cerebral hyper-perfusion model in rats.