腺苷A2A受体与慢性低O2高CO2小鼠神经系统炎症的关系

目的：观察慢性低O2高CO2小鼠脑组织超微结构改变及神经炎症因子表达,探讨腺苷A2A受体与神经系统炎症的关系。方法：实验动物随机分为6组：对照野生组（NC＋/＋）;对照杂合组（NC＋/-）;对照敲除组（NC-/-）;低O2高CO24周野生组（4HH＋/＋）;低O2高CO24周杂合组（4HH＋/-）;低O2高CO24周敲除组（4HH-/-）。利用野生型、A2A受体敲除型小鼠进行对照实验,电镜观察脑组织中神经胶质细胞改变以及外源性炎症细胞浸润;采用RT-PCR方法测定皮层和海马中TNF-αmRNA、IFN-γmRNA、TGF-β1mRNA的表达。结果：电镜示4HH＋/＋组比NC＋/＋组星形胶质细胞数量明显增加,形态以凋亡为主,同时可见足突明显水肿,少突胶质细胞水肿、空泡形成、髓鞘疏松;4HH-/-组比4HH＋/＋组凋亡的星形胶质细胞数量减少,形态仅轻度异常,未见明显水肿;实验动物脑内未见外周炎症细胞浸润。与相应小鼠表型的对照组比较,RT-PCR分析显示低O2高CO24周各组的皮层及海马的TNF-αmRNA、IFN-γmRNA表达上调（P〈0.05）;与4HH＋/＋组比较,4HH-/-组海马TNF-αmRNA表达上调不显著（P〈0.05）。结论：慢性低O2高CO2小鼠脑组织存在程度不等的凋亡与炎症现象,腺苷A2A受体基因敲除可能通过抑制TNF-αmRNA表达等起到神经保护作用。     

慢性低O2高CO2对大鼠海马Bcl-2、Bax基因表达和细胞凋亡的影响

目的：探讨慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞凋亡的诱发作用及对Bcl-2、Bax基因表达的影响。方法：雄性SD大鼠50只,随机均分成5组：正常对照组（NC）、低O2高CO21周组（1HH）、2周组（2HH）、3周组（3HH）和4周组（4HH）。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡;以RT-PCR检测海马Bcl-2mRNA和BaxmRNA的表达。结果：随着低O2高CO2时间延长,凋亡指数（AI）及BaxmRNA水平进行性升高;Bcl-2mRNA先升高后下降（均P〈0.01）。AI与BaxmRNA之间呈显著正相关（r=0.814,P〈0.01）,而与Bcl-2mRNA/BaxmRNA比值之间呈显著负相关（r=-0.405,P〈0.01）。结论：慢性低O2高CO2可以诱发大鼠海马神经细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值下降是促进凋亡的重要因素。     

慢性低O2高CO2对小鼠神经元凋亡及硝基酪氨酸表达的影响

目的:探讨慢性低O2高CO2对小鼠皮层及海马神经细胞凋亡及硝基酪氨酸表达的影响.方法:雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为对照组、低O2高CO22 w组和低O2高CO24 w组,采用原位末端标记法检测皮层和海马区神经细胞凋亡并计算凋亡指数(AI),免疫组织化学染色检测皮层和海马区细胞硝基酪氨酸的表达.结果:慢性低O2高CO22 w组和4 w组小鼠皮层和海马AI及硝基酪氨酸表达均明显高于对照组,两者呈正相关.结论:慢性低O2高CO2可以诱发小鼠皮层和海马神经元凋亡,可能与其促进硝基酪氨酸表达有关.     

慢性缺O2高CO2性大鼠小脑水肿及姜黄素的保护作用

目的探讨缺O2高CO2对大鼠小脑组织的损伤,并阐明姜黄素对其的保护作用。方法成年SD大鼠15只随机分为3组：对照组、实验组及姜黄素组。实验组及姜黄素组于常压低O2高C02舱内建立低O2高C02大鼠脑模型。用HE染色、免疫组化及电镜观察缺O2高CO2情况下大鼠小脑细胞水肿程度差异;实时荧光PCR检测水通道蛋白4（AQP4）mRNA在实验组和对照组中的表达差异。结果实验组大鼠小脑细胞水肿程度明显,AQP4基因的表达相对较高;姜黄素组大鼠小脑细胞水肿程度较轻,AQP4基因的表达明显减少。结论在缺0z高C02的环境中大鼠小脑组织出现水肿,和AQP4基因表达有关,姜黄素对该情况有保护作用。     

诱发癫痫持续状态后基质金属蛋白酶-2在小鼠海马与皮层中的表达

目的：观察氯化锂-匹罗卡品所致癫痫持续状态（status epilepticus,SE）小鼠皮层和海马基质金属蛋白酶-2（matrix met－alloproteinases-2,MMP-2）的表达变化,探讨 MMP-2在癫痫发病机制中的作用。方法：选用成年雄性C57/BL6小鼠 48只,并随机分成实验组和对照组。实验组小鼠腹腔注射氯化锂-皮罗卡品制备SE模型,在确定模型成功后8 h采取动物标本进行检测。使用 RT-PCR测定 MMP-2 mRNA含量变化,Western blot检测 MMP-2蛋白表达变化,免疫组化观察 MMP-2分别在海马与皮层的分布规律与特点。结果：（1）海马组织中,对照组与实验组MMP-2 mRNA的表达分别为 0.155 5±0.018 1和 0.743 1±0.014 4,皮层组织中的表达分别为0.204 9±0.018 5和0.871 6±0.037 0,实验组MMP-2 mRNA的表达均比对照组高,差异有统计学意义（t=-45.60,P=0.000;t=-71.83,P=0.000）。（2）MMP-2蛋白水平的表达,在海马组织中分别为 0.084 5±0.009 6和 0.728 4±0.245 1,在皮层组织中对照组与实验组分别为 0.155 6±0.003 9和0.912 5±0.027 7,实验组MMP-2蛋白的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义（t=-76.52,P=0.000;t=-6.99,P=0.000）。（3）免疫组化结果显示,实验组MMP-2在皮层广泛表达,在海马的表达增加主要以 CA1、齿状回、CA3区为主。结论：SE后小鼠海马及皮层内MMP-2在mRNA和蛋白水平的表达均明显升高,表达增加的区域以海马CA1、齿状回及CA3区为主,提示 MMP-2与癫痫的发生、发展可能有着密切的关系。     

低O2高CO2致大鼠海马超微结构改变及川芎嗪的保护作用

目的：观察慢性低O2高CO2对大鼠海马超微结构的影响及川芎嗪注射液的保护作用。方法：雄性SD大鼠30只，随机分为正常对照组、低O2高CO2 4周组（模型组）、低O2高CO2 4周＋川芎嗪治疗组（川芎嗪组）。通过电镜观察海马超微结构并测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果：慢性低O2高CO2使海马神经元和神经胶质细胞水肿、SOD活性降低、MDA含量升高，川芎嗪干预可使上述指标的异常变化明显减轻。结论：川芎嗪对慢性低O2高CO2大鼠海马神经细胞结构损害有保护作用，其机制可能与抗氧化作用有关。     

依达拉奉对大鼠脑出血后水通道蛋白4及血脑屏障的影响

目的研究大鼠脑出血后血脑屏障（BBB）通透性与水通道蛋白4（AQP4）的关系及自由基清除剂依达扭奉的干预作用。方法采用自体动脉血注入尾状核法制成大鼠脑出血模型，Westernblot法观察AQP4的表达，伊文思兰法测量BBB通透性，干湿重法计算脑含水量表示脑水肿。结果与对照组相比，脑出血组及依达拉奉组BBB通透性均在出血后6h开始升高，l-3d最高，依达拉奉组低于脑出血组（P〈0．05）；两组AQP4表达也于6h即开始升高，3d时达到高峰，依达拉奉组低于脑出血组（P〈0．05）；BBB通透性与AQP4表达呈正相关（r=0．585，P〈0．05），与脑水肿变化趋势一致。结论脑出血后可能通过上调APQ4表达，增加BBB通透性，参与脑水肿形成，依达拉奉可抑制此过程。     

低灌注时水通道蛋白-4在血脑屏障通透性升高中的作用

目的 探讨慢性低灌注时,水通道蛋白-4(aquaporin-4, AQP4)的表达与构型变化在血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性增高中的作用。方法 Wistar大鼠采用双侧颈总动脉结扎术(2-vessel occlusion, 2VO)建立慢性低灌注模型,测定2VO术后不同时间点脑组织伊文思蓝(evans blue, EB)含量,评价BBB通透性,RT-PCR和Western印迹法测定不同时间点AQP4 mRNA及蛋白水平表达,免疫荧光双标法观察AQP4的构型变化。结果 2VO术后早期,BBB通透性迅速升高,AQP4 mRNA和蛋白表达水平与BBB通透性变化趋势一致,均在术后3d时达到高峰,1、2周时仍显著升高(P<0.01),随着慢性缺血时间的延长,无论是BBB通透性还是AQP4 mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,至3个月时与假手术组相比,差异无统计学意义。而AQP4的功能构型OAPs与BBB通透性变化趋势呈负相关,2VO术后早期AQP4与GFAP共定位明显减少,随后逐渐增多,术后3个月时恢复至正常水平。结论 慢性低灌注状态可引起BBB通透性升高,AQP4的表达与构型改变与BBB通透性密切相关。     

慢性间歇低氧对幼鼠脑区JNK表达的影响

目的：研究慢性间歇低氧对幼鼠学习记忆脑区JNK表达的影响。方法：SPF级健康雄性SD幼鼠（3～4周龄）40只,随机分为4组：间歇低氧2周组（2IH组）、间歇低氧4周组（4IH组）、对照2周组（2C组）和对照4周组（4C组）。建立慢性间歇低氧幼鼠模型,以RT-PCR法和Western blot法分别测幼鼠海马及前额叶皮层JNK1 mRNA和磷酸化JNK（p-JNK）蛋白的表达。结果：2IH、4IH组幼鼠海马、前额叶皮层的JNK1 mRNA和磷酸化JNK（p-JNK）蛋白均明显高于相应对照组（P〈0.05或P〈0.01）。结论：JNK的激活可能参与了慢性间歇低氧幼鼠脑损伤过程。     

地塞米松对脑出血大鼠脑AQP4影响的研究

目的通过建立大鼠自体血脑出血(ICH)模型,观察地塞米松对水孔蛋白4(AQP4)表达的影响及血脑屏障(BBB)的通透性与AQP4表达的关系。方法建立自体血ICH模型后,大鼠随机分为脑出血模型对照组(ICH组)和脑出血加地塞米松干预组(DEX组),观察脑出血后12h、1d、3d、5d、7d各点大鼠BBB通透性及AQP4的表达。结果ICH组大鼠BBB通透性从12h开始明显增加,1d达高峰(20.350±1.294),灶周AQP4的蛋白及其mRNA光密度值均至第3天达到高峰(0.806±0.113,1.112±0.072),BBB通透性的变化与AQP4蛋白及其mRNA的变化成正相关(r=0.898和r=0.847,P<0.01)。脑出血12h后DEX组BBB通透性和AQP4的表达均较ICH组降低。结论地塞米松可以保护脑出血大鼠BBB,并降低AQP4的表达,并且BBB通透性与AQP4及其mRNA成正相关。     

高压氧对蛛网膜下腔出血大鼠脑内基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:探讨高压氧(HBO)对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在蛛网膜下腔出血(SAH)后的表达的影响及其对血脑屏障(BBB)的保护作用。方法:采用自体股动脉血枕大池单次注血法建立大鼠实验性SAH模型。造模成功后分不同时间点对HBO组给予高压氧暴露。并分不同时间点测脑含水量、BBB通透性及MMP-9的表达情况。结果:SAH后各组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达较Sham组显著升高(P<0.05),但在同一时间点HBO组较SAH组脑含水量、BBB通透性、MMP-9表达显著减少(P<0.05)。结论:HBO可能通过抑制MMP-9的表达,减轻了BBB的破坏,从而减轻脑水肿,对大鼠SAH后BBB具有保护作用。     

大鼠局灶性脑挫裂伤不同损伤区域水通道蛋白4表达变化的实验研究

目的探索水孔通道蛋白4（AQP4）在局灶性脑挫裂伤（CCII）不同损伤区域表达变化,及其对创伤性脑水肿血脑屏障（BBB）的影响。方法雄性成年Wistar大鼠,随机分为假手术组和CCII组,其中CCII组分为损伤中心组和损伤外周组。参照改良Feeney’s自由落体硬膜外撞击法制作CCII模型。结果损伤中心组和损伤周围组脑组织含水量明显高于假手术组;免疫组织化学结果显示损伤中心组在各检测时间点的AQP4含量和伊文思蓝（EB）含量均明显高于假手术组和损伤周围组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CCII后AQP4蛋白的表达变化趋势和BBB的通透性相一致;损伤中心AQP4含量与损伤周围AQP4含量存在差异,这与相应区域的脑组织水肿类型相关。脑挫裂伤外周水肿带AQP4含量是降低的,损伤中心部位AQP4含量是升高的。损伤中心以血管源性脑水肿为主,脑挫裂伤外周水肿带以细胞毒性脑水肿为主。     

葛根素对低O2高CO2肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞线粒体途径凋亡的影响

目的：研究在慢性低O2高CO2情况下，葛根素对肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）线粒体途径凋亡的影响。方法：雄性SD大鼠40只，随机分为正常对照组（N组）、慢性低O2高CO2周组（H2w组）、慢性低O2高CO2 4周组（H4w组）、慢性低O2高CO2 4周＋葛根素组（H4w＋G组），每组10只。TUNEL法检测PASMCs凋亡；免疫组化测定PASMCs线粒体细胞色素C（Cyt—c）释放量及胞浆Bcl-2、Bax含量；分光光度法检测肺组织匀浆caspase 9酶活性。结果：①H2w组、H4w组和H4w＋G组mPAP、RV／（LV＋S）、PAMT、PASMCs胞浆Bcl-2含量均显著高于N组（P〈0．01），Cyt—c释放量、Bax含量及肺组织匀浆caspase 9酶活性均显著低于N组（P〈0．01）；H2w组、H4w组各级PASMCs和H4w＋G组肺弹力型动脉和肺微细动脉PASMCs凋亡指数显著低于N组（P〈0．01）。②H4w＋G组mPAP、RV／（LV＋S）、PAMT、肺弹力型动脉和肺微细动脉PASMCs中Bcl-2含量均显著低于H4w组（P〈0．01）；弹力型动脉和肌型动脉PASMCs凋亡指数、Cyt—c释放量，肺组织匀浆caspase 9酶活性均显著高于H4w组（P〈0．01）；Bax含量在H4w＋G组与H4w组间差异无显著性（P〉0．05）。结论：葛根素有抑制慢性低O2高CO2肺动脉高压和肺血管重建的作用，促进PASMCs通过线粒体途径凋亡可能是其作用机制之一。     

茶多酚对急性寒冷暴露诱导血脑屏障开放的保护

目的：通过建立大鼠急性寒冷暴露动物模型,探讨茶多酚对急性寒冷暴露所诱导的大鼠血脑屏障开放可能的保护作用。方法：选取40只SD大鼠,随机分为正常对照组、冷暴露组以及低、中、高剂量茶多酚防护组,通过-15℃低温暴露3h建立大鼠急性冷暴露模型,用比色法测定脑组织中伊文思蓝含量,结合干-湿比重法检测脑组织中含水量变化,探讨不同剂量茶多酚对急性寒冷暴露所诱导的大鼠血脑屏障开放的影响。结果：冷暴露3h后大鼠脑组织伊文思蓝含量以及脑组织水分含量显著增高,血脑屏障（BBB）通透性明显增加,添加不同剂量的茶多酚能够不同程度地抑制寒冷暴露所导致的血脑屏障通透性的增加。结论：茶多酚能够对急性寒冷暴露所诱导的血脑屏障开放起到一定的防护作用,从而能在一定程度上抑制寒冷所诱导的中枢神经系统功能的异常。     

九香止泻片对湿热型泄泻肠易激综合征模型大鼠AQP4、PKA与cAMP表达的影响

目的探讨九香止泻片对湿热型泄泻肠易激综合征(IBS)模型大鼠肠道水通道蛋白4(AQP4)、cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)与环腺苷酸(cAMP)的影响。方法 40只SD大鼠,随机分为空白组、模型组、九香止泻片组、盐酸洛哌丁胺对照组,每组10只,除空白组外,其余各组大鼠在造模成功后分别给予不同药物或蒸馏水连续灌胃7 d,腹腔麻醉取血处死后取结肠组织测定大鼠肠道AQP4、PKA表达与cAMP含量。结果与空白组比较,模型组肠道AQP4、PKA蛋白表达均显著降低(P<0.05),cAMP含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,九香止泻片组和盐酸洛哌丁胺对照组肠道AQP4、PKA蛋白表达均显著增强(P<0.05),cAMP含量显著增加(P<0.05);九香止泻片组和盐酸洛哌丁胺对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论九香止泻片可能通过激活cAMP-PKA信号通路调控湿热型泄泻IBS模型大鼠肠道中AQP4的表达进而改善腹泻症状,是治疗湿热型泄泻IBS的有效方药。     

氯离子通道阻滞剂通过抑制MAPK通路减轻低氧高二氧化碳性肺血管收缩

目的：探究氯离子通道阻滞剂尼氟灭酸对低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）的影响及与MAPK信号通路的关系。方法：采用大鼠HHPV模型,将所有二级肺动脉环随机分为：常氧组（N组）、低氧高二氧化碳组（H组）、DMSO组（HD组）、尼氟灭酸组（NFA组）、尼氟灭酸＋SB203580组（NFA＋SB组）、尼氟灭酸＋U0126组（NFA＋U组）,按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定各组肺动脉环的张力变化。结果：NFA＋SB组、NFA＋U组二级肺动脉环的收缩峰值较HD组均明显下降（P〈0．05和尸〈0．01）,但I期快速收缩和I期快速舒张均无明显差异（均P〉0．05）;NFA＋SB组的收缩峰值较NFA组明显下降（P〈0．05）,但NFA＋U组的收缩峰值较NFA组无明显变化（P〉0．05）。结论：氯离子通道阻滞剂可通过抑制MAPK信号通路,减轻二级肺动脉环Ⅱ期持续性收缩,并逆转为舒张状态,从而发挥拮抗HHPV的作用。     

脾阳虚证大鼠回肠水通道蛋白4表达变化研究

目的：通过对脾阳虚大鼠回肠水通道蛋白4（AQP4）表达的检测,探讨脾阳虚证状态下大鼠水液代谢的影响。方法：对正常组、脾阳虚模型组、中药反证组分别行免疫组织化学、RT-PCR及Western blot的方法检测AQP4在回肠的表达及分布情况。结果：①脾阳虚状态下,大鼠回肠上皮细胞细胞膜的AQP4分布量显著减少,经温补脾阳中药治疗后,其分布量有所回升,但仍低于正常组。②脾阳虚模型组AQP4 mRNA及蛋白表达量均明显低于正常组（P〈0.05）。中药反证组AQP4 mRNA表达量均明显高于模型组（P〈0.05）,蛋白表达虽然有所提高,但却没有统计学意义（P〉0.05）。结论：脾阳虚证状态下大鼠回肠AQP4表达下调,导致回肠对水分的吸收出现障碍,提示可能与脾阳虚证的病理机制有关。     

慢性低氧高二氧化碳对小鼠大脑线粒体功能的影响

目的：探讨慢性低氧高二氧化碳对小鼠大脑线粒体功能的影响。方法：雄性C57BL/6小鼠30只,随机分成2组：A组（低氧高二氧化碳组15只）和B组（正常对照组15只）。A组饲养于氧舱中,舱内氧浓度为9%～11%,二氧化碳浓度为5%～6%,每天8h～每周6d,共4周,其余时间与B组一样,生活于正常环境。测量脑组织ATP,ADP,AMP的浓度;线粒体膜电位、COXⅠ和Ⅲ活性。结果：低氧高二氧化碳组小鼠脑组织ATP,AMP浓度显著低于正常对照组（P〈0.01）,线粒体形态明显改变,脑线粒体膜电位低下、COXⅠ和Ⅲ活性受到抑制（P〈0.01）,脑组织SOD、GSH活性降低（P〈0.01）。结论：慢性低氧高二氧化碳可导致小鼠大脑线粒体功能明显异常,其机制可能与氧化应激反应有关。     

L-硝基-精氨酸甲酯对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的:观察L-硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障功能和MMP-9表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:将60只SD大鼠随机分为3组:1假手术组;2对照组;3L-NAME治疗组。用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型,再灌注48h后干湿重法测定缺血脑组织含水量,用伊文思蓝测定血脑屏障通透性,免疫组织化学技术检测MMP-9的表达,同时电镜观察血脑屏障的变化。结果:脑缺血再灌注48h,对照组缺血侧脑含水量明显升高,EB含量也明显增加,电镜观察发现血脑屏障破坏严重,MMP-9的表达也较假手术组显著增加;而应用L-NAME处理的大鼠其缺血脑组织含水量明显减少,缺血侧EB含量较对照组也明显降低(P<0.05),同时电镜观察到血脑屏障的破坏减轻,而MMP-9表达水平也明显低于对照组。结论:L-NAME对大鼠脑缺血再灌注损伤后的血脑屏障具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制MMP-9表达来实现的。