选择性臂丛损伤后脊髓降钙素基因相关肽mRNA的表达

目的探讨选择性臂丛损伤后脊髓前角、后角降钙素基因相关肽（CGRP）表达变化对脊髓运动神经元轴索再生的影响。方法 29只SD大鼠随机分为4组：撕脱组（A组,n=8）,撕脱＋切断组（B组,n=8）和撕脱＋半横断组（C组,n=8）和对照组（n=5）。术后2周取脊髓第7颈节的前角和后角,用SYBRGreen荧光定量RT-PCR方法检测脊髓前角、后角中CGRPmRNA的表达。结果对照组脊髓前、后角CGRPmRNA呈低表达,前角表达略高于后角。A、B、C三组前角CGRPmRNA表达上调,C组上调幅度最显著,A、B、C三组后角CGRPmRNA表达均下调。结论脊髓CGRP表达改变是臂丛损伤再生中的特异性蛋白的重组反应,尤其是前角CGRP高表达对运动神经元轴突再生可能具有重要作用。脊髓前、后角的CGRP的功能可能不同。     

川芎嗪对兔脊髓缺血损伤依剂量的治疗作用

目的研究川芎嗪（TMP）注射液对兔脊髓缺血损伤治疗作用的剂量效应关系. 方法 26只新西兰雄性大白兔,随机分成四组:对照组即C组（n=6),单组缺血再灌注;T1组(n=6)、T2组(n=8)和T3组(n=6),分别在肾下主动脉阻断20 min后开放时恒速静脉泵入TMP注射液15,30和60 mg*kg-1. 采用肾下主动脉（IRA）阻断法造成脊髓缺血(20 min)/再灌注模型,观察再灌注后4,8,12,24和48 h神经功能评分（neurologic deficit score）,并于48 h处死动物取脊髓（L5-L7）制标本行病理组织学观察. 结果用不同剂量TMP治疗的T1,T2和T3组在各时间点神经功能评分和再灌注48 h脊髓前角正常神经元数均明显高于C组（P<0.01）,且T2组和T3又明显高于T1组（P<0.05）,而T2组和T3组无显著差异, 神经功能评分与其对应脊髓前角正常神经元计数之间有显著相关性(r=0.776, P<0.01). 结论 TMP注射液对脊髓缺血损伤有治疗作用,并呈一定的剂量效应关系.     

臂丛神经根损伤后aFGF基因在脊髓运动神经元的表达

目的：研究大鼠臂丛神经根损伤后酸性成纤维细胞生长因子（aFGF)在脊髓前角运动神经元的表达及表达的保护作用。方法：选用120只健康成年SD系大鼠，随机分为脊髓神经根损伤组、假手术组和正常对照组，每组再设1h组、6h组、24h组、48h组，实验组造成臂丛神经损伤，取大鼠脊髓标本，然后应用免疫组化技术（LSAB）染色，观察aFGF基因在脊髓前角运动神经元的表达。结果：在脊髓神经根损伤后的手术后不同时间组中，损伤脊髓神经元表达不同。在损伤1h表达高峰，持续至伤后6h，在脊髓神经损伤24h后恢复正常。在假手术组和正常对照组的手术后不同时间组中，表达结果无差异。结论：神经元损伤后，脊髓运动神经元aFGF基因表达增加，提示这与脊髓运动神经元修复机制有关，尤其是早期修复过程中aFGF基因表达增加具有很重要的抗损伤保护作用。     

大鼠脊髓全横断后相关部位的BDNF表达

目的 探讨大鼠脊髓全横断损伤后相关部位（大脑皮质、横断脊髓上端、下端和比目鱼肌）脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达变化．方法 首先建立正常对照组和实验组模型，其中实验组又依照大鼠全横断脊髓损伤术后1、3、7、14d不同观察时间点分为4个亚组，分别抽提横断脊髓上端及其相连的大脑皮质、横断脊髓下端和比目鱼肌组织中总RNA，用RT-PCR技术检测BDNFmRNA的表达，以β-actin为参照确定各时相BDNFmRNA的相对水平．结果（1）大鼠脊髓全横断损伤后，BDNFmRNA在大脑皮质、脊髓横断上、下端和肌肉中均有表达，且在正常对照组中大脑皮质的BDNFmRNA表达少于脊髓横断上、下端（P〈0．05）；（2）手术后14d时肌肉组织中BDNFmRNA的表达较手术后1d和3d组均有明显增加（P〈0．05）。说明大鼠脊髓全横断损伤14d时，脊髓下端相连的骨骼肌组织中的BDNFmRNA表达上调．结论BDNF在骨骼肌表达增加，提示BDNF可能参与维持骨骼肌的功能，或者转运入脊髓下端对下位运动神经元发挥营养作用．     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元凋亡及其机制研究

目的探讨大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞（schwann cells，SCs）中核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）的表达及其对脊髓运动神经元凋亡的调控作用。方法健康成年雄性SD大鼠36只，体重200～250g，随机分为正常对照组（n=-6）和坐骨神经钳夹损伤组（n=30）。采用免疫组化、计算机图像分析技术，对正常和损伤后不同时间1、3、7、14及21d的坐骨神经SCs中NF—κB的表达进行检测。同时取与坐骨神经相连的L4～L6段脊髓作原位末端标记技术（TUNEL）检测脊髓运动神经元的凋亡。结果与正常对照组相比较，损伤组坐骨神经SCs中NF—κB的表达显著改变，其变化趋势为先升高后降低，伤后3d达高峰。随后逐渐下降，21d接近正常值；损伤组脊髓运动神经元凋亡数在损伤后表现出相同的变化趋势。相关分析表明两者呈显著正相关。结论坐骨神经损伤后脊髓运动神经元发生不同程度的凋亡，SCs中NF—κB可能参与这种凋亡的调控过程。     

亚硒酸钠对异丙肾上腺素致损豚鼠心肌细胞延迟外向钾电流的影响

采用全细胞膜片钳技术,以豚鼠单个心肌细胞钾通道电流为指标,观察硒对正常及ＩＳＯ致损心室肌细胞延迟外向钾电流的影响。结果表明,硒对正常心室肌细胞外向钾电流影响不明显,但可抑制异丙肾上腺素引起的延迟外向钾电流增加。使Ｉｋｓｔｅｐ 从（２９３３±１６１）ｐＡ降至（１６９４±１７６）ｐＡ,Ｉｋｔａｉｌ从（１２１０±１５３）ｐＡ降至（７９６±２０９）ｐＡ。提示硒具有抗异丙肾上腺素损伤效应,对心室肌细胞起到一定的保护作用。     

水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流及其尾电流的影响

目的 采用全细胞膜片钳技术记录耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion neurons,SGNs)外向整流钾电流及其尾电流,分析水杨酸钠对耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流的影响,初步探讨其耳毒性机制.方法 采用全细胞膜片钳技术记录急性分离并进行细胞短时间(2～3 h)血清培养后,耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流及其尾电流曲线,同时记录不同浓度水杨酸钠(0.01、0.1、0.5、1、10 mmol/L)对2种电流的影响.结果耳蜗SGNs上可记录到外向电流,该电流对4-氨基吡啶(4-AP)敏感,证明其为钾电流,该钾电流具有延迟整流特性;1 mmol/L水杨酸钠能明显抑制耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流;+50 mV的去极化电压刺激可使最大稳态电流幅值减少(46.3±2.0)%,水杨酸钠对此电流的抑制具有浓度依赖性,外液洗脱后耳蜗SGNs外向延迟整流钾电流可基本恢复正常.另外,可记录出耳蜗SGNs延迟整流钾电流的尾电流曲线;水杨酸钠可降低此尾电流峰值,并缩短尾电流的时间常数,加速尾电流的失活.结论 钾电流在耳蜗SGNs正常电生理活动中有重要作用.水杨酸钠抑制耳蜗SGNs外向整流钾电流及其尾电流,并加速尾电流的失活,这种作用可导致耳蜗SGNs的电生理活动异常,从而引发水杨酸钠对听觉功能的损害.     

环孢A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1表达的影响

目的探讨环孢霉素A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达的影响.方法成年SD大鼠分SCT组（T9横断）,和SCT后给予环孢霉素A处理组.脊髓横断组用环孢霉素A处理（1 mg/200 g）7 d后处死动物.取后肢骨骼肌用免疫组化染色（n=5）确定RAF-1 mRNA在后肢骨骼肌的定位分布.RT-PCR技术检测RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达变化（n=8）.结果与手术组比较（0.95±0.13）,环孢霉素A处理（0.75±0.14）导致RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达明显下调（P〈0.05）;RAF-1蛋白产物主要分布在细胞浆.结论环孢霉素A处理能有效下调脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达水平.     

重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤时糖调节蛋白78表达的影响

目的探讨重复高压氧预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护中糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,体重250～300g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12)假手术组(S组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和重复高压氧预处理(HOP组)。HOP组采用高压氧预处理[1000ml/L O2,2.5 atmosphere absolute(ATA),1h/d,5天],最后一次处理后24h,I/R组和HOP组采用Zivin法制备脊髓缺血再灌注模型(缺血15min,再灌注1h),24、48、72h后分别评价后肢运动功能,然后处死大鼠,取L5～7节段脊髓组织,测定GRP78的mRNA及其蛋白表达水平,光镜下观察病理学结果。结果与S组比较,I/R组和HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数降低,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05);与I/R组比较,HOP组后肢运动功能和脊髓前角正常运动神经元计数升高,脊髓组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平上调(P<0.05)。HOP组脊髓组织病理学损伤程度轻于I/R组。结论重复高压氧预处理可上调大鼠脊髓缺血再灌注时GRP78表达,从而减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤。     

转化生长因子β1在大鼠周围神经再生过程中的作用

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠周围神经损伤后再生过程中的作用及是否参与了再生中脊髓前角运动神经元碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的调节。方法: 将48只成年SD大鼠在右侧坐骨神经压榨损伤术后随机分为TGFβ1组和生理盐水（NS）组。TGFβ1组在坐骨神经压榨损伤近心端注射TGFβ1 50μL(0.1μg/mL)，术后隔日在右侧下肢后群肌内注射TGFβ1 50μL, 对照组同样方法注射等量NS。实验动物分别存活3，7，14和21d后运用免疫组织化学方法检测TGFβ1对脊髓前角运动神经元bFGF蛋白的表达变化。存活21d的实验动物还用半薄切片和Fast Blue逆行荧光示踪方法观察TGFβ1对坐骨神经损伤后远端的再生情况。结果：TGFβ1组脊髓前角bFGF蛋白的表达高于NS组（P<0.05）；损伤远侧端再生轴突数目、直径与髓鞘厚度TGFβ1组均明显好于NS组（P<0.05）； TGFβ1实验组脊髓和背根节内荧光标记细胞数量明显多于NS组（P<0.01）。结论：外源性TGFβ1可以促进周围神经损伤后再生；TGFβ1上调周围神经损伤后脊髓前角运动神经元bFGF的表达。     

地塞米松对脊髓损伤后TNF-α和IL-6表达的影响

目的：探讨实验性大鼠脊髓挫伤后,急性期炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）在脊髓内的表达变化以及地塞米松对其表达的影响。方法：采用改良Allen’s法建立大鼠脊髓（T12）损伤模型,90只SD大鼠随机分成正常组（n=6）、SCI组（n=42）和DEX组（n=42,于SCI后15min尾静脉注射DEX30mg/kg）,分别于损伤后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h取材,做常规HE染色和用抗TNF-α和抗IL-6行免疫组织化学方法染色。结果：TNF-α和IL-6在正常大鼠脊髓组织不表达;TNF-α、IL-6在脊髓损伤后1h均有表达,于48小时回落到正常。TNF-α在24h达高峰;IL-6在12h达高峰。地塞米松干预后二者均受到明显抑制。结论：大剂量地塞米松对TNF-α、IL-6有明显的抑制作用。     

重组人促红细胞生成素对兔脊髓缺血/再灌注损伤的作用

目的探讨重组人促红细胞生成素（rHuEPO）对兔脊髓神经细胞缺血／再灌注损伤的作用及其可能的作用机制。方法40只健康成年新西兰大白兔随机分为4组：假手术组（A组），对照组（B组），小剂量（1000U／kg）rHuEPO组（C组），大剂量（3000U／kg）rHuEPO组（D组），每组10只。建立兔脊髓缺血／再灌注损伤模型，通过兔耳缘静脉B组注射生理盐水3ml／kg，C、D组注射相应剂量rHuEPO。分别于缺血／再灌注损伤后4h、8h、24h、48h、7d对动物进行后肢运动神经功能评分。7d时处死动物，取L3-5，节段脊髓组织行病理学检查，用苏木精-伊红染色观察脊髓标本的一般病理学改变及脊髓前角运动神经元数量变化；TUNEL法检测脊髓前角运动神经元凋亡情况。结果缺血／再灌注损伤后各时间点，C、D组后肢运动神经功能评分明显优于B组（P〈0．01），但低于A组（P〈0．01）。伤后4h和7d评分C组低于D组（P〈0．05）。伤后7d苏木精-伊红染色显示脊髓组织病理学改变C、D组明显轻于B组，较A组严重。伤后7d脊髓前角运动神经元计数C、D组明显高于B组（P〈0．01），但低于A组（分别为P〈0．01和0．05），D组高于C组（P〈0．05）。伤后7d脊髓前角运动神经元的凋亡指数C、D组明显低于B组（P〈0．01），D组低于C组（P〈0．05）。结论rHuEPO具有抗凋亡作用，对脊髓由于缺血而引起的神经运动功能损害具有保护作用。     

Single voltage-dependent potassium channels in isolated habenula neurons(Preliminary report)

目的：观察和探讨缰核细胞膜上延迟整流钾电流（Ｉｋ）的性质。方法：应用细胞吸附式膜片钳记录技术。结果：去极化阶跃电压激活该通道电导为３０～３５ｐＳ的外向单通道电流；呈电压依赖性；平均开放时间随去极化电位的增长（０ｍＶ～６０ｍＶ）由３．７２±１．５ｍｓ提高到３２．２±５．６ｍｓ。可以认为，通道的开放不依赖于电极内Ｃａ２＋的存在，四乙基胺明显抑制通道的开放。结论：由以上结果判断，此电流为外向延迟整流钾电流（Ｉｋ）。     

不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响

为了解不同类型损伤对脊髓背角神经元的影响，采用本室建立的SD成年大鼠脊髓挤压伤、半横断伤和全横断伤模型，分别于术后第24h，7d,21d处死动物并设正常对照组，取L3节段脊髓制作20μm厚连续冰冻切片，间隔取片行苏木精染色，光镜下观察损伤位点尾侧端背角的形态改变,计数背角神经元数，结果：组间比较，挤压伤者较正常者神经元明显萎缩，胞体周围有空隙，神经元数无明显减少（P＞0.05），半横断伤和全横断伤者均出现大量空泡，未见丰满而轮廓清楚的神经元，残存的少数神经元明显萎缩，术后神经元数明显减少且以全横断伤者为甚（P＜0.01），组内比较，3种损伤术后各时相神经元数的变化均无显著性差异（P＞0.05），结果表明：不同类型损伤时对背角神经元存活的影响不同，全横断伤者最重，半横断伤者次之，挤压伤者相对较轻。     

SD大鼠脊髓全横断损伤后神经细胞凋亡的研究

目的检测SD大鼠脊髓全横断损伤后神经细胞凋亡的形态及数量变化.方法建立SD大鼠脊髓全横断损伤模型,采用原位细胞凋亡TUNEL法检测术后3、7、14d和21d损伤断面头、尾侧脊髓中凋亡神经细胞的形态及数量变化.结果损伤后不同时点脊髓灰、白质均有凋亡细胞分布,细胞核呈紫色及黄褐色双重染色,形态不一;损伤后3d,脊髓损伤断面头、尾端腹角即出现大量神经细胞凋亡,并持续至21d;各时点头、尾侧与假手术组比较,脊髓腹角神经细胞凋亡数均增加（P〈0.05）;凋亡的胶质细胞数在21d较14d减少（P〈0.05）.结论脊髓损伤后广泛存在神经细胞凋亡,是继发性损伤的主要形式.     

高压氧预处理诱导兔脊髓缺血耐受的远期效果观察

目的：探讨高压氧预处理诱导的兔脊髓缺血耐受能否长期存在．方法：实验一,16只雄性新西兰大白兔,随机分为2组（n=8）：对照组,即常压空气组;HBO组,即高压氧（HBO）预处理组（1000mL/L O2,2．5ATA,1h／d,5d）,最后一次处理后24h所有动物均采用肾下腹主动脉阻断法造成脊髓缺血（20min）,观察再灌注后1,2,7,14,21d时的神经功能学评分．实验二,32只雄性新西兰大白兔,分组同实验一（n=16）,重复上述处理,并分别于再灌注后2,21d每组各灌注8只动物取脊髓（L5-7）,制作标本,行组织病理学观察．灌注动物前进行神经功能学评分．结果：HBO组神经功能学评分在1,2,7,14,21d时均明显优于对照组（P〈0．05）,但组内比较,HBO组再灌注7,14,21d时的神经功能学评分与2d时均无显著差别;HBO组脊髓前角正常神经元计数在2,21d时均明显优于对照组,但组内比较,HBO组再灌21d时的脊髓前角正常神经元计数与2d时无显著差别;神经功能学评分与其对应脊髓前角正常神经细胞计数之间有显著相关性（r2d=0．903,P〈0．01;r21d=0．922,P〈0．01）．结论：高压氧预处理可以诱导兔脊髓缺血耐受,且此效应长期存在．     

SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

脊髓损伤后弱激光照射对胶质瘢痕的影响

目的：研究大鼠脊髓损伤后弱激光经皮照射对脊髓胶质瘢痕的影响．方法：SD大鼠30只,随机分成对照组和照射组（n=15）,制成脊髓半横断模型,经皮照射相应的损伤脊髓节段．在1,3,7,14d行BBB评分,在3,7,14d行普通HE染色和免疫荧光标记染色观察．结果：照射组的BBB评分高于对照组,有统计学差异（P〈0．05）;照射组比对照组脊髓空洞范围减小（P〈0．05）,并且损伤区周边NF分布较多,GFAP表达较少;照射组损伤区内硫酸软骨素蛋白多糖（CSPGs）的表达明显低于对照组（P〈0．05）．结论：脊髓损伤后用弱激光经皮照射导致损伤区范围胶质瘢痕减少,CSPGs表达下降,从而减轻继发性损伤,有利于神经轴突再生和功能恢复．     

胶质细胞源性神经营养因子对运动神经元病培养模型的保护作用

目的 利用运动神经元病的脑片和脊髓片培养模型,观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对运动神经元的保护作用.方法 取1日龄SD乳鼠的大脑做脑片培养,取8日龄SD乳鼠脊髓做脊髓片培养.脑片在培养2周后,脊髓片在培养1周后,随机分为对照组、模型组（100 μmol/L THA）、不同浓度GDNF组（1 ng/ml、5 ng/ml和50 ng/ml）,继续培养3周后,SMI-32免疫组化染色,分别计数脑片中皮层运动神经元和脊髓片中前角运动神经元数目的变化,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的含量.结果 模型组SMI-32阳性的皮层运动神经元数目和脊髓运动神经元数目较对照组明显减少,差异有显著性意义（P＜0.05）,而GDNF各组神经元存活数目较模型组显著增多,差异有显著性意义（P＜0.05）,脑片组和脊髓片组中的模型组LDH含量均对照组显著增高,差异有显著性意义（P＜0.05）,GDNF各组培养液中LDH含量较对照组均升高,差异有显著性意义（P＜0.05）.结论 GDNF能保护运动神经元免受谷氨酸兴奋毒性的损伤,使得GDNF在临床上治疗MND成为可能.     

大鼠肝细胞外向钾电流的实验研究

目的：研究大鼠肝细胞上外向钾电流。方法：全细胞膜片钳制方法观察大鼠肝细胞延迟外向钾电流（Ｉｋ）和瞬间外向钾电流（Ｉｔｏ）及去甲肾上腺素等对Ｉｋ的影响。结果：正常细胞外液条件下，大鼠肝细胞在保持电位－５０ｍＶ，＋１４０ｍＶ刺激电压时Ｉｋ为（２．８５±１．２１）ｎＡ。应用改变保持电位（－８０ｍＶ和－３０ｍＶ）的方法。初步区分Ｉｔｏ和Ｉｋ，Ｉｔｏ值为（１．３９±０．５８）ｎＡ。结论：去甲肾上腺素明显降低Ｉｋ，异丙肾上腺素和乙酰胆碱对Ｉｋ无影响