基于毒素多肽BmK NaTx-13的全蝎质控工艺研究

目的 基于毒素多肽建立一种新型的全蝎质量检测工艺。方法 从东亚钳蝎毒液中分离得到了一种新型钠通道毒素BmK NaTx-13,制备并鉴定了BmK NaTx-13的特异性抗体,并通过竞争性ELISA法检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量。结果 建立的竞争性酶联免疫吸附法可快速检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量并呈现良好的浓度线性依赖。结论 该研究为全蝎质控提供了一种快速免疫检测方法,为提升全蝎入药质量标准提供了借鉴。      

东亚钳蝎毒素多肽对河豚毒素敏感型钠电流的作用

目的:蝎毒素是一种神经毒素,其对周围神经系统钠通道的作用尚不十分清楚,仍有许多疑题待研究.文中研究东亚钳蝎毒素多肽224(BmK224)对大鼠背根神经节(DRG)神经元电压依赖性河豚毒素敏感型钠电流(TTX-S INa)的影响.方法:分离单个DRG神经元,应用全细胞膜片钳技术观察BmK224对TTX-S INa的影响.结果:BmK224浓度依赖性地抑制TTX-S INa,40μg/ml BmK224使TTX-S INa稳态激活和失活曲线都向超极化方向移动,复活时间延长.可激活通道数增加. 结论:BmK224影响钠通道激活失活过程的作用机制可能是所含的α-蝎毒素使钠通道构象发生改变.     

东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达

利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库,并通过序列比对确定了一条全新的Na⁺通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性,通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构,经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定,而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统,通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间,并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外,全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1 μmol/L浓度下能增大20% Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。     

槲皮素对大鼠DRG神经元Nav1.8电流的作用及机制

研究槲皮素(Que)对大鼠脊髓背根神经节(DRG)神经元Nav1.8通道电流(I_Nav1.8)的作用。在急性分离的大鼠DRG神经元上,用全细胞膜片钳技术,观察Que干预I_Nav1.8的剂量-反应关系以及Que影响的Nav1.8通道电压依赖的激活和失活特性。结果显示Que(10,30,100 μmol/L)可浓度依赖地抑制DRG神经元I_Nav1.8峰值,峰值抑制率分别为(15.32±3.43)%,(22.92±8.24)%和(47.29±11.42)%,半数抑制浓度(IC₅₀)为121.38 μmol/L,Hill系数为0.76;100 μmol/L Que可使DRG神经元的Nav1.8通道激活曲线向去极化方向偏移了0.83 mV,失活曲线向超极化方向偏移了1.86 mV;且与干预前比,半数失活电压(V_1/2)为-(40.23±0.25)mV,有显著性差异(P<0.01)。说明Que可浓度依赖和电压依赖地抑制DRG神经元Nav1.8通道活性,进而降低痛觉信息的传递,改善慢性内脏痛。     

黄芪注射液对高糖或AGEs培养肾小球系膜细胞增殖和Na+-K+-ATP酶活性的影响

[目的]观察黄芪注射液对高糖或糖化终产物(AGEs)培养肾小球系膜细胞(GMC)增殖和Na⁺-K⁺-ATP酶活性的影响。[方法]用含高糖或AGEs的培养液配制黄芪注射液、氨基胍,同时设对照。GMC培养48h后,四甲基氮唑盐(MTT)法考察GMC的增殖情况,试剂盒测试细胞悬液中细胞蛋白含量,再进行Na⁺-K⁺-ATP酶测定。[结果]葡萄糖或AGEs中GMC的吸收度值增大,Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低,与正常培养液比较具有显著性差异。而加入黄芪注射液后,则表现为对抗高糖或AGEs对GMC的增殖作用,并能提高Na⁺-K⁺-ATP酶活性。[结论]黄芪注射液能抑制高糖或AGEs对GMC的过度增殖,修复高糖或AGEs致GMC的Na⁺-K⁺-ATP酶活性降低,起到保护细胞的作用。     

NaV1.6 通道在癫痫发病机制中的研究进展

癫痫是一种常见的大脑疾病,其发病机制复杂多样,至今尚未完全明确。但随着电生理学技术的发展,越来越多的研究结果揭示了癫痫与离子通道的联系。离子通道是神经系统兴奋性产生与调节的关键因子,Na_v1.6作为电压门控钠通道（VGSCs）的亚型之一,其介导的持续性Na⁺电流（I_NaP）和复活性Na⁺电流（I_NaR）是神经元兴奋性的重要组成。Na_v1.6通道表达量的改变及基因突变引起的功能异常均在癫痫中发挥重要作用,可见NaV1.6通道功能障碍是癫痫发病机制之一。通过对该通道的进一步研究有助于了解癫痫的发病机制,并找到有效的治疗方法。     

尿电解质肌酐比、总蛋白肌酐比在体检和高血压人群中的临床应用

目的 运用尿电解质肌酐比计算膳食盐,评价人群盐摄入量。探讨尿电解质肌酐比、尿蛋白肌酐比(urinary protein/creatinine ratio, TPCR)在体检和高血压患者中的应用价值。 方法 检测948例(其中842名>50岁)健康体检者,616例住院高血压患者的尿钠、尿钾、尿总蛋白和空腹血清脂类项目,计算出尿钠肌酐比,尿钾肌酐比、尿钠钾比(Na⁺/K⁺)、TPCR和血清载脂蛋白B/A1(apoB/apoA1)。 结果 948例体检者按年龄段分组比较中,尿TPCR在50~60岁年龄组与>70岁年龄组差异最明显(P=0.000);842例>50岁体检者不同性别间比较,尿盐、尿钾差异均有统计学意义(P=0.000);高血压组与体检组比较,尿TPCR、尿Na⁺/K⁺、尿盐差异有统计学意义(P=0.000);不同级别高血压的尿盐、Na⁺/K⁺及TPCR等指标均显著增高(P=0.000);616例高血压尿总蛋白与尿Na⁺/K⁺、尿Na⁺具有相关性;图中的尿TPCR浓度随年龄加大逐渐上升,高血压尿TPCR与尿Na⁺/K⁺均显著高于正常体检者。 结论 通过尿电解质计算膳食盐,能简便有效反映人群盐摄入量的高低。尿电解质肌酐比、尿TPCR与高血压的升级及年龄增大紧密相关。     

东亚钳蝎毒素的研究及应用

东亚钳蝎ButhusmartensiiKarsch，（简称BmK）即问荆蝎，广泛分布于我国和东亚地区。用电刺激法将其含毒腺的尾末节剪下研磨萃取即可采得蝎毒。蝎毒包括一系列短链多肽（少于40个氨基酸残基）和长链多肽（60～70个氨基酸残基）。其中长链毒素按作用对象可分为三类：抗哺乳动物神经毒素、抗昆虫神经毒素和抗甲壳纲类动物神经毒素。国内对BmK毒素的研究始于80年代初，目前已取得一些进展。不同BmK毒素的功能有着显著差异，因而是研究结构与功能的理想药物；并且抗昆虫毒素有望成为新型生物杀虫剂。另外，蝎还是一种名贵中药，对一系列神经…     

奥硝唑对映体对小鼠中枢抑制作用研究

探讨左旋和右旋奥硝唑静脉注射(iv)对小鼠中枢神经系统抑制作用的机制,以及奥硝唑光学对映体之间神经毒性的差异,为临床用药提供指导。左旋及右旋奥硝唑(40,60,80 mg/kg,iv)给药30 min后,用转棒实验测定小鼠运动协调能力,以评价药物对小鼠中枢抑制作用的强弱。测定并比较对小鼠给药30 min后全脑Na⁺,K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的影响。右旋奥硝唑可使小鼠呈现中枢抑制状态,影响其运动协调能力,并呈剂量相关性地抑制脑内Na⁺,K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、SDH活性。左旋奥硝唑组则均与对照组无显著性差异。右旋奥硝唑的中枢抑制作用可能与抑制脑内Na⁺,K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性,抑制呼吸链关键酶SDH有关。     

充填蓝宝石用SiO2-TiO2-RO-R''2O系列玻璃的性能

设计并熔制了作为蓝宝石充填材料用的SiO₂-TiO₂-RO-R''₂O（其中R代表二价碱金属离子Ba²⁺、Zn²⁺,R''代表一价碱金属离子Na⁺、K⁺）系列玻璃。通过对玻璃的物理性能（密度和折射率）、热稳定性（玻璃化转变温度和析晶温度）以及玻璃骨架结构的探讨,研究了混合碱效应对玻璃性能的影响。结果表明,该系列玻璃在n（Na⁺）：n（K⁺）=2：3时,其密度、折射率等物理性能符合蓝宝石充填要求,且热稳定性强,充填过程不容易发生析晶,可作为蓝宝石充填材料。     

免疫抑制蝎毒活性肽Im169的重组表达和功能鉴定

目的:筛选鉴定新型蝎毒免疫活性肽。方法:从海南斑等蝎(Isometrus maculates)毒腺组织c DNA文库中筛选和分离蝎毒肽基因,通过GST融合蛋白表达纯化、肠激酶酶切和高压液相色谱(HPLC)分离的方法,获得色谱纯重组蝎毒活性肽,酶联免疫吸附(ELISA)实验检测细胞因子,鉴定免疫调节活性。结果:筛选得到一个新的蝎毒活性肽基因Im169,其编码的成熟肽由29个氨基酸组成,其中含有6个半胱氨酸。Im169多肽对T淋巴细胞IL-2、TNF-α和IFN-γ等细胞因子的分泌具有明显的抑制作用,且作用呈浓度依赖性(P<0.05)。序列分析显示:Im169多肽和蝎钾通道毒素的相似性最高,提示其是一个潜在的钾通道毒素多肽。功能机制分析显示:Im169多肽通过抑制T细胞表面的钾通道,从而发挥免疫抑制功能。结论:发现了一个新的蝎毒免疫调节肽,丰富了对蝎毒活性肽的功能认识,为自身免疫疾病的药物开发提供了新的多肽模板。     

东亚钳蝎毒BmK-9-(2)对豚鼠心室肌细胞钠通道的影响

目的 :观察东亚钳蝎毒 Bm K- 9- (2 )对豚鼠心室肌细胞钠通道的作用。方法 :采用全细胞膜片钳方法。结果 :Bm K- 9- (2 )使钠通道峰值电流增加 2 7%。峰值钠电导增加 1 7%。钠通道未失活成分增加 8%。 Bm K- 9- (2 )对心肌细胞钙通道没有明显影响。结论 :Bm K- 9- (2 )可激活钠通道并使钠通道失活过程延长     

蝎毒抗肿瘤有效成分SVⅡ-A4的提纯及抑瘤活性观察

目的：分离纯化东亚钳蝎原毒,提取活性多肽成分SVⅡ—A4,并观察其抑瘤活性。方法：（1）分离纯化,采用分子筛凝胶柱层析和离子交换柱层析分离纯化蝎毒;（2）纯度分析,用SDS—PAGE电泳和HPLC色谱法对SVⅡ—A4进行纯度分析;（3）活性观察,用MTF法（酶反应比色法）观察比较不同浓度（1、10、100mg／L）的蝎毒及其成分与SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞（A549、HL-60、K562／S及K562／ADR）的抑制作用。结果：经过两步的分离纯化获得5个蝎毒多肽成分,其中的蝎毒抗肿瘤有效成分SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞的抑制作用与阳性对照组相当。结论：经过优化提纯方法,两步即可从东亚钳蝎原毒中获得色谱纯度达96．73％的抑瘤活性单体成分SVⅡ-A4,初步观察,SVⅡ-A4对4种肿瘤细胞均显示出明显的抑制作用及一定的剂量-效应关系,而且它对布耐药细胞株（K562／ADR）的抑制作用较阳性对照组强有进一步开发利用的价值。     

钠离子通道在神经病理性疼痛中的作用研究进展

多种钠离子通道亚型在初级感觉神经元中的表达及动态调节,影响神经病理性疼痛的发生、发展及维持过程。SCN9A基因(编码Nav1.7)的多个位点突变被认为与人类多种可遗传的疼痛疾病密切相关。转基因技术和特异性敲除技术的应用发现,Nav1.3、Nav1.8和Nav1.9在神经病理性疼痛的发生和维持方面起到重要的作用。因此,研究电压依赖性钠离子通道在神经病理性疼痛中的作用,有利于揭示该种疾病的发生和维持机制,也可为开发新一代镇痛药物提供理论依据。     

东亚钳蝎毒素的镇痛作用与吗啡镇痛作用的比较

用辐射热甩尾反射测定大鼠痛阈的方法，观察并比较了东亚钳蝎毒素和吗啡的镇痛作用。结果表明：向侧脑室内注射２μＬ或肌肉注射０．０５μＬ、０．０１％蝎毒液的镇痛作用分别比相同给药途径、同浓度、同剂量吗啡的镇痛作用强，二者差异非常显著，Ｐ＜０．０ｌ。侧脑室内注射０．０３％蝎毒液２μＬ的镇痛作用比同浓度、同剂量吗啡的镇痛作用梢强，但无显著差异，Ｐ＞０．０５。蝎毒经肌肉注射后在较短的时间内即可使大鼠痛阈明显升高。证明蝎毒可通过血脑屏障进入中枢神经系统，产生镇痛作用。     

电压门控性钠通道Nav1.7 及其特异性阻断剂在神经病理性痛中的研究进展

电压门控性钠通道（voltage gated sodium channel,Nav）在痛觉的产生和传导中具有重要作用。在痛觉传导通路中,Nav1.7选择性表达于小直径外周感觉神经元和交感神经节神经元,可通过强化阈下刺激并设定Nav1.8和Nav1.9激活开放的阈值,从而影响神经元兴奋性。该本综述将重点阐述由Nav1.7通道基因突变所致的神经病理性痛的研究进展。Nav1.7可作为治疗疼痛的有效靶点,高选择性的Nav1.7阻断剂将对治疗疼痛具有重要的临床应用价值。     

大鼠窦房结电压门控钠通道不同亚型的表达及其对心率的影响

目的 检测大鼠窦房结中电压门控钠通道不同亚型的表达情况并探讨其功能.方法 采用免疫荧光技术检测钠通道亚型Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7在大鼠窦房结中的表达,用激光共聚焦显微镜进行观察和图像分析.建立大鼠离体灌流心脏模型,观察钠通道特异性阻断剂河豚毒素对离体灌流心脏自发性节律即固有心率的影响.结果 河豚毒素敏感的神经型钠通道亚型Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7以及河豚毒素不敏感的心脏型Nav1.5均存在于大鼠窦房结组织中,但是神经型钠通道的蛋白表达更为丰富(P＜0.05).100 nmol/L河豚毒素灌流可以选择性阻断神经型钠通道亚型(推测为Nav1.1、Nav1.6、Nav1.7),同时不阻断河豚毒素不敏感的钠通道亚型(推测为Nav1.5),大鼠固有心率不受影响[(0.5±2.9)%,P＞0.05];2 μmol/L河豚毒素同时阻断河豚毒素敏感的钠通道亚型以及对河豚毒素不敏感的钠通道亚型后,大鼠固有心率显著下降[(22.1±2.1)%,P＜0.001].结论 Nav1.1、Nav1.5、Nav1.6和Nav1.7在大鼠窦房结组织中均有表达.虽然神经型钠通道亚型的蛋白含量更为丰富,心脏型Nav1.5对于维持正常的窦房结活动可能更为重要.     

Modulation of BmKAS-1 and BmK1-3-2 to sodium channel in rat dorsal root ganglion neurons

Objective To investigate what effects BmKAS-1 (a polypeptide purified from the Chinese sc orpion Buthus martensi Karsch ［BmK］ and named as BmK activator of skeletal -muscle ryanodine receptor) and its upstream mixture BmK1-3-2 have on Na(+) c hannels in dorsal root ganglion (DRG) small diameter neurons.Methods The whole-cell patch-clamp technique was used to investigate the effects of BmKAS-1 and BmK1-3-2 on Na(+) current in rat small diameter DRG neurons.Results About 50% peak Na(+) current was suppressed by 10 μg/ml of BmK1- 3-2. 1.62 μg/ml of BmKAS-1 also blocked 50% peak Na(+) cu rrent, and there was an obvious dose-dependent relationship.Conclusion Both BmK1-3-2 and BmKAS-1 have a blocking effect on Na(+) channels, and this may one of the mechanisms for the analgetic effect of BmK1-3-2 and BmKAS-1.     

From noxiustoxin to scorpine and possible transgenic mosquitoes resistant to malaria

Scorpion venom contains different types of peptides toxic to a variety of organisms whose molecular targets have been described as mainly ion-channels of excitable cells where they cause impairment of function. Based on mouse, cricket, and crustacean bioassays, specific toxins for each group of animals have been found. Chromatographic techniques were used to isolate and chemically characterize these peptides. One of the best-studied peptides is noxiustoxin, a 39-amino acid residue-long peptide specific for K(+)-channels. Hadrurin is another scorpion venom peptide whose activity was shown to be bactericidal to a variety of species. Structural similarities of a newly discovered peptide (scorpine) with those of defensins and cecropins showed that scorpion venom contains peptides toxic to microorganisms and malaria parasites. Scorpine was shown to disrupt the sporogonic development of Plasmodium berghei. Using this system as a model for malaria, we introduced the gene of scorpine into a vector for generation of transgenic flies resistant to the infection by Plasmodium. The final aim of this work is to incorporate this gene under the promoter of proteolytic enzymes of digestive tract of mosquitoes for synthesis and liberation of toxic peptide(s) into stomach of freshly fed mosquitoes potentially carrying Plasmodium gametes. In this manner, a putative transgenic mosquito with these characteristics would secrete a toxic peptide with digestive enzymes into midgut, impairing proper development of Plasmodium, hence controlling malaria, one of the most important tropical diseases worldwide.