稳定转染CDK2干扰RNA真核表达载体的人脑胶质细胞瘤SHG44细胞系的建立

目的：构建CDK2的干扰RNA真核表达载体,并且稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞来抑制CDK2的表达,为人脑胶质细胞瘤的研究提供有价值的资料。方法：1.根据siRNA设计原则和GeneBank数据库中CDK2的cDNA序列,构建CDK2干扰RNA真核表达载体PGenesil-1-CDK2,并测序鉴定。2.利用脂质体法转染CDK2的干扰RNA真核表达载体,G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染干扰RNA真核表达载体的SHG44细胞系,用倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达量。结果：1.成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体。经鉴定证实,构建的siRNAs序列与基因库中序列完全相同,并且未发现有突变、缺失、插入等异常存在。2.获得稳定转染CDK2干扰RNA真核表达载体的SHG44细胞系,命名为PGenesil-1-CDK2-SHG44。结论：成功的建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系。     

脂质体介导Cyclin D1干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2全细胞蛋白质组表达的影响

目的探讨CyclinD1干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2细胞中CyclinD1mRNA的表达、对细胞周期和增殖以及蛋白质组表达变化的影响。方法构建CyclinD1干扰RNA的重组质粒pU6-CyclinD1-siRNA,并设立阴性对照空载体转染组和空白对照组。采用脂质体介导转染肝癌细胞株HepG2细胞,经G418筛选阳性转染细胞克隆,流式细胞术、MTT法检测其细胞周期、细胞生长曲线的改变;反转录PCR法及双向凝胶电泳．质谱技术比较转染前后CyclinD1mRNA的表达和蛋白质组表达的变化。结果（1）成功构建了CyclinD1干扰RNA的重组质粒pU6．CyclinD1．siRNA。并获得稳定转染组细胞HepG2-CyclinD1siRNA。（2）稳定转染组细胞与阴性对照组细胞和空白对照组相比,CyclinD1mRNA表达水平降低。细胞周期明显改变,从G1期到s期发生阻滞。（3）通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到稳定转染组低表达蛋白6个,经数据库搜索分别是锌指蛋白ZFP-36、角蛋白19、热休克蛋白伴侣素10、波形蛋白、肿瘤拒绝抗原gp96、未知蛋白。这些蛋白与细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、以及肿瘤的发生、发展等相关。结论CyclinD1干扰RNA可明显降低肝癌HepG2细胞CyclinD1mRNA的表达,亦可阻滞肝癌HepG2的细胞周期,抑制细胞增殖;CyclinDI干扰RNA干扰后差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、以及肿瘤的发生、发展。     

siRNA干扰HSP90α表达对人肝癌HepG2细胞影响的研究

目的用RNA干扰方法建立稳定的热休克蛋白90α(HSP90α)抑制表达细胞株,研究热休克蛋白90α抑制表达对人肝癌HepG2细胞生物学行为的影响。方法将人HSP90αRNA干扰基因片段连接入pSilencer 2.1-U6 neo载体,重组质粒pSilencerHSP90经亚克隆、纯化、测序鉴定后,用电穿孔法转染到人肝癌细胞系HepG2细胞内。经G418筛选后,阳性克隆被进一步分离培养,形成稳定的HSP90α抑制表达细胞株。将此细胞株作为siRNA干扰组,将未转染的HepG2细胞作为对照组。用荧光定量PCR,免疫印迹检测siRNA对HSP90α的抑制效果,采用CCK-8法测定其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果测序表明HSP90α干扰序列完全正确;siRNA干扰组HSP90αmRNA水平降低,蛋白表达量也有明显的减少;与对照组相比,siRNA干扰组在48 h后可明显抑制细胞增殖,流式细胞术检测siRNA干扰组细胞有明显的G2/M期细胞周期阻滞。结论建立稳定低表达HSP90α的HepG2细胞株;下调HepG2细胞内HSP90α的基因表达可抑制细胞增殖,引起明显的细胞周期阻滞。HSP90α靶向siRNA干扰为肝癌的基因治疗提供了可能。     

靶向CDK2、cyclinE的siRNA对HepG2细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin-dependent-kinase 2,CDK2）活性对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。方法：根据基因库中登录的人和鼠CDK2、cyclinE序列,设计并构建CDK2、cyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞术分析CDK2及cyclinE对HepG2细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测CDK2、cyclinE活性的变化caspase-3活性的影响。结果：1.成功构建CDK2及cyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达。2.转染48h后与空载体组相比：psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;蛋白质印迹法分析表明psiCDK2、psiCyclinE组caspase-3酶原被激活。结论：靶向CDK2、cyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖;靶向CDK2、cyclinE的siRNA能激活caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡。     

小分子干扰RNA沉默肝癌细胞CDK2基因对RB、CyclinE、E2F1基因表达的影响

【目的】观察小分子干扰RNA(siRNA)沉默细胞周期素依赖性蛋白激酶(CDK2)基因后,细胞周期相关基因RB、CyclinE、E2F1在肝癌细胞SMMC7721中mRNA的表达。【方法】将前期研究中已构建成功并筛选出的最有效干扰抑制CDK2基因的siRNA序列片段,采用Lipofectamine TM2000脂质体转染法转染肝癌细胞株SMMC7721后分6组:重组质粒组190、重组质粒组191、SMMC7721肝癌组、转染试剂组、阴性对照组、空质粒组。采用实时荧光定量PCR法检测RB、CyclinE、E2F1 mRNA水平。【结果】CDK2的siRNA转染SMMC7721细胞后,RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调。【结论】抑制CDK2基因的表达能使肝癌细胞SMMC7721中RB基因mRNA表达上调,CyclinE、E2F1基因mRNA表达下调,提示肝癌细胞中RB、CyclinE、E2F1基因的表达与CDK2基因的表达具有明显的相关性。     

miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨miR-107对HepG2细胞增殖和细胞周期的影响,以及对CDK6蛋白表达的调控。方法将50 nmol/L的miR-107 mimics 或阴性对照序列由 Lipofectamine 2000转染入人肝癌细胞株 HepG2中;qRT-PCR 法检测转染后HepG2细胞内miR-107表达水平;四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞增殖能力;流式细胞术分析转染后细胞周期的变化;Western blot法检测CDK6蛋白表达水平。结果转染后24 h,miR-107 mimics转染组细胞内miR-107表达水平较空白对照组明显升高(P<0.05);与空白对照组相比,miR-107 mimics转染组HepG2细胞增殖受抑制( P<0.05),处于G0/G1期的细胞增多( P <0.05), CDK6蛋白表达下调( P <0.05)。结论 miR-107能够抑制 HepG2细胞增殖并诱导HepG2细胞G0/G1期阻滞,这可能与其抑制 CDK6蛋白的表达有关。     

小分子干扰RNA下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)下调硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用设计合成的SCD-1 siRNA转染人肝癌细胞HepG2细胞株,转染后细胞分为3组:空白对照组(未做任何处理)、阴性对照组(对照siRNA转染)和SCD-1 siRNA组(SCD-1 siRNA转染)。采用反转录聚合酶链反应检测HepG2细胞SCD-1 mRNA的表达,噻唑蓝法检测HepG2细胞的增殖,用流式细胞术检测SCD-1 siRNA对HepG2细胞凋亡和细胞周期的影响。结果 SCD-1 siRNA组的SCD-1 mRNA表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);转染后24、48、72 h,SCD-1 siRNA组HepG2细胞增殖较空白对照组和阴性对照组明显减慢(P<0.01);SCD-1siRNA组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);SCD-1 siRNA组HepG2细胞在合成前期(G0/G1期)的细胞比例明显高于空白对照组和阴性对照组,在合成期(S期)和合成后期(G2/M期)的细胞比例均明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。空白对照组和阴性对照组HepG2细胞在SCD-1 mRNA表达、细胞增殖、细胞凋亡率及细胞周期方面差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 siRNA可通过下调HepG2细胞SCD-1基因的表达,抑制HepG2细胞的增殖,并促进其凋亡。     

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)RNA干扰载体的构建及鉴定

目的:构建稳定的转染人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)基因的RNAi载体.方法:遵循RNA干扰目标序列的选取原则,对ppGalNAc-T2基因mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),PCR方法扩增得到siRNA内源表达系统,转染至人胃癌细胞株SGC7901,运用RT-PCR方法检测筛选得到其中能高效引起ppGalNAc-T2基因表达沉默的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA Oligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;构建ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体,酶切及测序鉴定后转染SGC7901细胞并经G418筛选得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,RT-PCR方法检测该转染细胞株ppGalNAc-T2表达水平.结果:采用RNAi技术,将高表达ppGalNAc-T2的SGC7901细胞的T2表达水平明显降低.结论:成功构建稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株,为今后进一步深入研究ppGalNAc-T2的生物学功能奠定了基础.     

人子宫颈癌基因-2干扰抑制HepG2肝癌细胞mRNA的表达

目的利用构建的特异性针对HCCR-2的干扰质粒RNAi-H1,研究HCCR-2干扰对HepG2肝癌细胞mRNA的影响.方法将干扰质粒用脂质体法转染HepG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.Real-timePCR检测HCCR-2mRNA表达水平.结果Real-time PCR结果表明HepG2-H1mRNA表达明显减少.结论HCCR-2干扰可以抑制HepG2肝癌细胞mRNA的表达.     

CyclinE干扰RNA对肝癌HepG2细胞增殖和蛋白质组的影响

目的:研究siRNA对HepG2细胞株cyclinE表达的抑制及细胞生长的影响,并用双向凝胶电泳和质谱技术分析鉴定转染前后细胞内差异表达的蛋白质.方法:构建质粒表达载体pU6-cyclinE-shRNA,稳定转染肝癌HepG2细胞株,获得HepG2-cyclinEshRNA细胞系,RT-PCR检测cyclinE mRNA表达,MTT测定细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期.裂解、抽提HepG2-cyclinEshRNA细胞和Cl期肝癌HepG2细胞全蛋白,用双向电泳技术进行分离后.用Proxpress2D分析软件对两组细胞全蛋白质表达谱进行差异分析,并应用MALDI-TOF-MS和数据库搜索鉴定差异显著的蛋白点.结果:HepG2-cyclinE-shRNA细胞与转染空质粒HepG2细胞和未转染的HepG2细胞相比,生长速度减慢,出现G0/G1期细胞增多,C2/M和S期细胞减少.双向电泳后软件分析G1期肝癌HepG2细胞株平均检测到435±51(n=3)个蛋白点,HepG2-cyclinEshRNA细胞376±44(n=3)个,匹配分析,筛选出两组间差异6倍及以上且出现频率大于等于50%的蛋白点20个.应用质谱鉴定出角蛋白19、波形蛋白、神经多肽113等8个G1期HepG2细胞高表达蛋白点.结论:在HepG2细胞株中,导入eydinE干扰RNA,可有效抑制cyclinE的表达,进而使细胞增殖减缓,逆转其恶性表型.两组细胞蛋白质谱有明显差异,鉴定出G1期HepG2细胞高表达蛋白点8个,这些蛋白的高表达引起肿瘤的基因修饰异常、分化异常、增殖紊乱,肿瘤侵袭转移.     

沉默CDK7基因对HepG2细胞株的抗增殖作用

OBJECTIVE: To screen the antisense oligodeoxynucleotides (ASODN) that inhibit cultured hepatoblastoma HepG2 cell proliferation, and evaluate the antiproliferative potency of modified ASODN. METHODS: ASODN sequences were selected based on the secondary structure of human CDK7 mRNA predicted with RNAStructure 3.71 software. The binding thermodynamics of CDK7 mRNA to ASODN was analyzed by OligoWalk program. The sequences with the strongest effect against cultured HepG2 cell proliferation in vitro were selected, and the fragments complementary to 1-5 bases upstream or downstream to the complementary region were structurally modified and screened. RESULTS: The partial phosphorothioate ASODN complementary to 284-303 region of human CDK7 mRNA was the most powerful inhibitor, and the antiproliferative activity reached 40.4+/-12.6%; in the second round of screening, the antiproliferative activity of the full phosphorothioate ASODN complementary to the 287-306 region of the mRNA on HepG2 cells was 68.3+/-2.6%, with IC50 of 51.9+/-8.6 nmol/L. CONCLUSION: Proliferation of HepG2 cells can be significantly inhibited by the screened ASODN, which might be used as a lead compound in the development of specific CDK7 inhibitors.     

沉默CDK7基因对HepG2细胞株的抗增殖作用

目的 筛选对体外培养HepG2细胞抗增殖作用最强的反义寡脱氧核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides,ASODN)序列,探讨经二次优化后该ASODN片段的抗增殖作用。方法 根据RNAStructure3.71计算机软件模拟人CDK7mRNA获得的二级结构确定待选ASODN,经OligoWalk程序分析这些片段与mRNA互补时的热力学参数变化,以此优选待筛ASODN,以体外培养人肝癌HepG2细胞为筛选体系获得抗增殖作用最强的ASODN,对该片段分别依次向互补区上、下游错位1~5个碱基获得10条ASODN,经结构优化后进行二次筛选。结果 初筛结果显示互补于人CDK7mRNA第284~303片段的部分硫代修饰ASODN抗增殖作用最强,为(40.4±12.6)%;二次筛选显示互补于第287~306片段的全磷酸硫代修饰ASODN抗增殖作用最强,抑制率为(68.3±2.6)%,半数抑制浓度为(51.9±8.6)nmol/L。结论 筛选得到的ASODN片段可显著抑制体外培养HepG2细胞的增殖,有可能作为先导化合物开发特异性CDK7抑制剂。     

顺铂对肝癌细胞株HepG2增殖和SATB1表达的影响

目的:观察特异AT序列结合蛋白1(special AT-rich sequence-binding protein 1,SATB1)在不同肝癌细胞株中的表达情况,并探讨顺铂对肝癌细胞株HepG2的细胞形态及SATB1表达的影响。方法:半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HepG2、BEL-7402、SMMC-7721三种肝癌细胞株中SATB1 mRNA的表达情况;HepG2细胞株中加入终浓度为2.5、5.0和10.0μg/ml顺铂培养24 h,倒置显微镜下观察细胞形态变化。结果:SATB1在肝癌细胞株BEL-7402、SMMC-7721、HepG2中均有表达,差异无统计学意义(P0.05)。HepG2细胞与顺铂共培养24 h后,倒置显微镜下可见细胞形态明显改变,细胞数减少,损伤、死亡的细胞增多。SATB1 mRNA的表达随着顺铂浓度的增加而减少,其中5.0、10.0μg/ml顺铂组SATB1 mRNA的表达量与对照组差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SATB1在三种肝癌细胞株中均有表达,顺铂可抑制HepG2细胞增殖和SATB1的表达,从而达到抑制肝癌细胞生长的目的。     

Na~+/K~+-ATP酶α1亚单位小干扰RNA和哇巴因诱导肝癌HepG2细胞S期阻滞及其机制

目的 观察哇巴因联合Na~+/K~+-ATP酶(钠泵)α1亚单位小干扰RNA(siRNA)对人肝癌HepG2细胞增殖和细胞周期的影响.方法 分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织和肝癌细胞系SMC7721、Bel7402和HepG2细胞钠泵α1亚单位的表达.CCK-8法检测采用钠泵α1亚单位siRNA和哇巴因作用肝癌HepG2细胞增殖抑制状况,分析各组细胞的钠泵活性变化,流式细胞术分析细胞周期变化.实时定量PCR和蛋白质印迹法检测钠泵α1、促分裂源活化蛋白激酶1(MAPK1)、细胞围期蛋白1(CyclinA)、周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白抑制因子(P21~(WSF1))表达的变化.结果 肝癌组织标本的钠泵α1亚单位密度值(174.7±16.8)明显高于正常肝组织(65.3±7.9,P<0.05);HepG2细胞钠泵α1亚单位表达明显高SMMC-7721和Bel-7402细胞(P<0.05).siRNA、哇巴因和联合用药可抑制HepG2细胞的增殖,联合实验组效果更显著(P<0.05),0.03μmol/L siRNA组、0.1 μmol/L哇巴因和联合实验组细胞24、48和72 h抑制率分别为17.4%、20.3%、24.3%,37.5%、44.3%、51.2%,52.3%、70.2%、88.2%.各实验组均出现钠泵活性降低,以联合实验组最显著(P<0.05).0.1 μmol/哇巴因和联合实验组HepG2细胞S期比例从24.2%上升至66.5%和75.2%;实时定量PCR和蛋白质印迹检测显示哇巴因组和联合实验组P21<'WAF1>表达上调而钠泵μ1亚单位、MAPK1、CyclinA、CDK2和PCNA表达下调.结论 钠泵α1亚单位siRNA联合哇巴因抑制HepG2细胞钠泵后可抑制细胞增殖,而P21~(WAF1)表达上调和CyclinA/CDK2/PCNA周期调控复合体生成减少可能是引起S期阻滞的主要原因.     

siRNA对HepG2细胞mcl-1表达的影响

目的:探讨特异性siRNA对肝癌细胞系HepG2中mcl-1表达的影响.方法:将特异性siRNA经脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG2;半定量RT-PCR观察干扰前后mcl-1 mRNA水平变化,比较对应不同位点的两对siRNA片段对mcl-1的干扰效果,分析RNA干扰的特异性、时效性;Western Blot检测转染前后Mcl-1蛋白表达情况.结果:特异性siRNA片段能有效降低mcl-1 mRNA水平,最大干扰效率达67.25%,高于作为对照的非相关片段;对应不同位点的两对siRNA片段对mcl-1均可产生干扰作用,彼此间差别不大;干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h稍有降低;Western Blot证明转染siRNA-F1后Mcl-1蛋白表达下调.结论:RNA干扰技术可有效下调肝癌细胞系HepG2中mcl-1 mRNA水平,明显下调Mcl-1蛋白表达.     

低剂量阿司匹林诱导产生的自噬减弱其对人肝癌HepG2细胞系的抑制作用

目的 研究一定浓度的阿司匹林对人肝癌HepG2细胞系的增殖抑制作用及产生抑制作用可能的原因.方法 采用MTT法和平板克隆实验研究阿司匹林对人肝癌HepG2细胞增殖活力的影响.吖啶橙荧光染色法观察阿司匹林对人肝癌HepG2细胞内自噬小体的影响.Western blot法检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在人肝癌HepG2细胞中的表达.结果 10 mmol/L浓度的阿司匹林能抑制人肝癌HepG2细胞的增殖活力,但增加HepG2细胞中自噬小体的数量,增加AMPK表达,降低 mTOR的表达,且和40 μm自噬抑制剂氯喹(CQ)联合使用时,CQ能够增强10 mmol/L浓度阿司匹林对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用.结论 联合自噬抑制剂CQ减弱浓度为10 mmol/L的阿司匹林诱导产生的自噬从而明显增强其抗HepG2作用.     

ERK/AP-1途径在蛋白酶激活受体2促进肝癌细胞增殖中的作用

目的 探讨胰蛋白酶和蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂SLIGKV-NH_2对肝癌细胞增殖的影响及其细胞内信号转导机制.方法 免疫荧光及逆转录(RT)-PCR法检测HepG2细胞PAR-2蛋白及mRNA的表达;用SLIGKV-NH_2、胰蛋白酶、反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2及PD98059干预细胞生长.用流式细胞术检测细胞周期改变情况;噻唑蓝(MTT)法检测对细胞增殖能力的影响;RT-PCR法检测PAR-2、c-fos及增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达变化;Western印迹检测c-fos和PCNA蛋白表达变化.结果 肝癌HepG2细胞存在PAR-2蛋白和mRNA的表达.50μmol/LSLIGKV-NH_2、25 nmol/L胰蛋白酶处理细胞后,PAR-2 mRNA表达量(PAR-2/β-肌动蛋白)分别为0.70±0.04,0.99±0.05,高于对照组(0.35±0.05,F=135.534,P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2组G_0/G_1期比例均明显低于对照组[(56.11±0.85)%、(57.85±0.46)%比(79.12±0.67)%,均P<0.01],S期、G_2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)则明显高于对照组(均P<0.01).胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以诱导肝癌HepG2细胞增殖(F=319.287,P<0.01),上调c-fos、PCNA mRNA和蛋白的表达(均P<0.01),且这些作用可被ERK激活性蛋白激酶(MEK)抑制剂PD98059抑制(均P<0.01);反PAR-2激动肽VKGILS-NH_2对HepG2细胞增殖能力的影响不明显,与对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05).结论 肝癌HepG2细胞表达PAR-2.胰蛋白酶、SLIGKV-NH_2可以通过激活PAR-2诱导HepG2细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK/AP-1信号通路所介导.     

黄连素对人肝癌Hep G_2细胞周期及凋亡的影响

目的:观察黄连素对人肝癌细胞Hep G2生长的影响及其可能机制。方法:将浓度分别为0,25,50,100,200μmol/L的黄连素与人肝癌细胞Hep G2共同培养24,48,72 h,用RSB法检测黄连素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制率;用流式细胞分析仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率及Caspase-3、CyclinB1、CDC2、CDK4蛋白的表达。结果:黄连素对人肝癌细胞Hep G2生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大;流式细胞仪分析显示黄连素将人肝癌细胞Hep G2阻滞于S、G2/M期。黄连素作用48 h后人肝癌细胞Hep G2凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而加大。黄连素作用48 h后Hep G2细胞的Caspase-3、CDC2蛋白表达增加;而CDK4、Cy-clinB1蛋白表达降低。结论:黄连素可能通过增加Hep G2细胞CDC2蛋白表达,降低CDK4、CyclinB1蛋白表达使其阻滞于S、G2/M期;可能通过增加Caspase-3蛋白表达增加Hep G2细胞凋亡。     

健脾化瘀方对肝癌HepG2细胞生物行为学的影响

目的：本研究旨在探讨：①健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的生物行为学影响;②健脾化瘀方体外对人肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法：①采用MTT法、黏附实验、Transwell小室侵袭迁移实验,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2增殖、黏附和侵袭的影响;②利用流式细胞仪,AnnexinV/PI双染色法,研究不同浓度健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2早期凋亡的诱导作用。结果：①健脾化瘀方有抑制人肝癌细胞株HepG2增殖的作用,并呈一定的浓度依赖性：同一时间不同浓度各组细胞的生长抑制率有明显差异（P〈0.01）。②健脾化瘀方高、中浓度（2、1mg/mL）作用HepG 2细胞40、60和120min时,细胞的黏附能力明显降低（P〈0.01）。健脾化瘀方作用HepG 2细胞24h后,侵袭的细胞数减少（P〈0.05）。③健脾化瘀方对人肝癌细胞HepG2作用48h后,有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用（P〈0.05）。结论：①健脾化瘀方对人肝癌细胞株HepG2的增殖具有抑制作用;②健脾化瘀方能抑制人肝癌细胞株HepG2的黏附能力和侵袭能力;③健脾化瘀方有诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的作用。