miR-223-3p在不同分期的糖尿病肾脏疾病血浆中的表达差异及意义

目的 探索mi R-223-3p在糖尿病肾脏疾病 (DKD) 患者血浆中的表达情况及其临床意义.方法应用实时荧光定量PCR技术 (q RT-PCR) 分别检测糖尿病无肾病组60例 (DM组) 、糖尿病早期肾病组60例 (Micro-DKD组) , 糖尿病临床期肾病组60例 (Macro-DKD) 和正常健康对照组60例 (Control组) 血浆中mi R-223-3p的表达变化, 分析其与糖尿病肾脏疾病的关系;运用基因预测分析软件预测mi R-223-3p靶基因.结果与Control组相比, 其余3组患者血浆中mi R-223-3p的表达水平明显下降 (P<0.001) , 随着病情严重程度的进展, 血浆中mi R-223-3p的表达水平下降更加明显.生物信息学分析得出IL6ST和PRKCE为mi R-223-3p的靶基因.结论 mi R-223-3p表达水平在DKD患者血浆中表达下降并与严重程度有关, 可能通过调控其下游靶基因在糖尿病肾脏疾病发生过程中起重要作用.     

miR-106b的免疫调节及其与自噬和凋亡关系的研究进展

micro RNAs(mi RNAs)是一类长度为21~25个核苷酸的内源性非编码小RNAs,在转录后水平上负向调控基因的表达。micro RNA-106b(mi R-106b)作为mi RNAs的一员,其免疫调节功能可通过影响细胞因子和转录因子的表达和TGF-β信号通路来实现。此外,mi R-106b还影响细胞的自噬和凋亡途径。现就近年来mi R-106b的研究进展作一综述。     

冠心病患者血小板Toll样受体4的表达及其意义

目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者血小板Toll样受体4(TLR4)的表达及其与血小板P-选择素、血浆TNF-α水平的关系,探讨血小板参与冠心病发病的可能机制。方法冠心病病人30例,健康对照者10例,流式细胞术检测血小板TLR4和血小板P-选择素的表达,ELISA方法检测血浆TNF-α水平;另用Westernblot检测血小板总TLR4。结果血小板TLR4、血小板P-选择素表达和血浆TNF-α水平在冠心病组分别是26.35±1.79%、30.62±3.22%和15.61±1.36pg/ml;健康对照组分别是18.78±2.15%、14.50±1.13%和8.79±1.20pg/ml,前者明显高于后者(P0.05)。变量间相关分析显示,血小板TLR4的表达水平与P-选择素及血浆TNF-α呈正相关(Pearson相关系数分别为0.618和0.745,P0.01)。结论冠心病患者血小板TLR4表达增高,可能与冠心病血小板的高反应性和发病有关。     

胃黏膜相关组织淋巴瘤组织中miR-142-5p及miR-155表达及其临床意义

目的筛选胃黏膜相关组织(MALT)淋巴瘤的micro RNAs(mi RNAs)谱,并探讨mi RNAs表达与胃MALT淋巴瘤临床病理生物学行为的关系。方法收集台州市第一人民医院和温州医科大学附属第一医院2003年1月~2013年6月间手术治疗胃MALT淋巴瘤47例,检测手术切除标本的石蜡mi RNAs水平,并比较mi RNAs谱中mi R-142-5p及mi R-155的表达及其临床意义。结果胃MALT淋巴瘤组织中有38条mi RNA上调,包括差异17倍mi R-142-5p和4.5倍mi R-155;另外,有28条下调包括mi R-34a表达差异为4.9倍。本研究结果发现胃MALT淋巴瘤组织mi R-142-5p及mi R-155表达显著高于相应正常胃黏膜(P<0.01),且Hp感染阳性胃MALT淋巴瘤病例mi R-142-5p相对表达量显著低于Hp感染阴性病例(0.65比1.29,P=0.022),且较大肿瘤(≥5 cm)病例的mi R-142-5p相对表达量显著高于小肿瘤(<5 cm)病例(1.63比1.36,P=0.038),肿瘤浸润深度超过肌层及全层病例的mi R-142-5p表达显著高于肿瘤浸润局限于黏膜及黏膜下层病例(1.19比0.67,P=0.041),且Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期组mi R-142-5p相对表达量显著高于Ⅰ期病例(1.36比0.67,P=0.034)。另外,本资料表明Hp感染阳性胃MALT淋巴瘤病例mi R-155相对表达量显著低于Hp感染阴性病例(1.34比11.46,P=0.010),且较大肿瘤(≥5 cm)病例的mi R-155相对表达量显著低于小肿瘤(<5 cm)病例(1.34比4.36)(P=0.048),肿瘤浸润深度超过肌层及全层病例的mi R-155表达显著高于肿瘤浸润局限于黏膜及黏膜下层病例(1.86比1.37,P=0.048),且Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ期组mi R-155相对表达量显著高于Ⅰ期病例(13.90比1.81,P=0.009)。结论胃MALT淋巴瘤组织与正常胃组织之间mi RNAs表达差异显著,尤其是mi R-142-5p及mi R-155基因,且这两种基因表达与肿瘤大小、核分裂像及恶性程度等密切相关,提示mi RNA在胃恶性淋巴瘤的发生发展过程中发挥重要作用。     

血浆miR-499在脓毒症合并心肌损伤的诊断价值

【目的】探讨血浆mi R-499水平在脓毒症合并心肌损伤的诊断价值。【方法】选择我院收治的脓毒症患者112例,根据患者有无合并心肌损伤分为脓毒症心肌损伤组(A组,n=45)、脓毒症未合并心肌损伤组(B组,n=67)。采用实时荧光定量技术检测患者血浆mi R-499水平。同期20例健康志愿者为对照(NC组)。【结果】脓毒症心肌损伤组mi R-499水平明显高于脓毒症未合并心肌损伤组及正常对照组(P<0.01);脓毒症合并重度心肌损伤患者(LVEF<30%)血浆mi R-499表达水平高于脓毒症合并轻度心肌损伤患者(30%≤LVEF<50%)(P<0.05);用ROC曲线分析mi R-499在脓毒症合并心肌损伤中的诊断价值,得到ROC曲线下面积为0.889(95%CI 0.821~0.957)。【结论】脓毒症心肌损伤患者外周血mi R-499表达水平显著升高,且和心肌损伤程度正相关,提示mi R-499的检测可作为脓毒症心肌损伤的判断指标。     

苯并芘对血小板聚集和P-选择素表达的影响

目的:通过比较苯并芘对ADP、胶原和凝血酶三种刺激剂诱导血小板聚集和P-选择素表达的影响,探讨苯并芘对血小板活化的作用。方法:抽取健康志愿者静脉血液20 ml,采用聚集仪检测血小板在苯并芘和不同刺激剂下的聚集率,并用流式细胞仪检测血小板表面P-选择素的表达情况。结果:10μmol/L、1μmol/L和0.1μmol/L苯并芘均不能引起血小板聚集,经10μmol/L苯并芘孵育血小板后,在胶原和凝血酶的刺激下也不能增强血小板的聚集。但是,经苯并芘孵育后的血小板在ADP的刺激下聚集率达到(80±10)%,与未经苯并芘孵育的血小板相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测P-选择素的表达结果显示苯并芘孵育后的血小板能在ADP诱导下P-选择素表达增强(P<0.01),而凝血酶则不能引起该改变。结论:苯并芘刺激ADP诱导的血小板聚集和P-选择素表达增强很大程度上是通过ADP介导的信号通路。     

Eaf2基因调控microRNA抑制白内障发生的机制研究

目的探讨Eaf2基因敲除小鼠中micro RNA的表达情况,以及Eaf2基因对人晶状体上皮细胞凋亡及晶状体内micro RNA表达的影响。方法利用Lipofectamine 2000瞬时转染p EGFP-C1-Eaf2质粒过表达Eaf2基因,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,利用Real time q-PCR方法检测人晶状体上皮细胞中micro RNA的表达情况;利用Real time q-PCR方法检测Eaf2基因敲除小鼠micro RNA的表达情况。结果 p EGFP-C1-Eaf2质粒转染组细胞凋亡率显著低于对照组,mi R-125b、let-7a的表达显著高于对照组,而mi R-204的表达显著低于对照组;Eaf2基因敲除小鼠mi R-125b、let-7a的表达显著低于对照组,而mi R-204的表达显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Eaf2基因可能通过调控micro RNA的表达抑制人晶状体上皮细胞凋亡,从而在白内障发生中发挥晶状体保护作用。     

结直肠癌早期筛查中人血浆及粪便miR-92a-1表达水平分析

目的探讨结直肠癌早期筛查中联合检测人血浆和粪便中的mi R-92a-1表达水平的临床意义。方法选择2013年1月‐2015年1月该院收治的结直肠癌患者55例和健康者55名为研究对象,检测所有人的血浆和粪便标本中的mi R-92a-1表达水平并进行对比。结果根据ROC曲线,观察组血浆中mi R-92a-1的敏感性为83.6%,大便中mi R-92a-1的敏感性为32.7%;联合检测血浆和大便标本时敏感性为89.1%,联合检测与单本检测相比存在显著性差异(P0.05)。结论联合检测血浆和粪便中的mi R-92a-1表达水平对于结直肠癌早期筛查具有重要的临床意义。     

miR-29b的作用靶点及其对Huh7细胞增殖及凋亡的干预作用

目的探讨mi R-29b(micro RNA-29b)的作用靶点及其对肝肿瘤细胞系Huh7细胞增殖及凋亡的干预作用。方法荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Huh7的mi R-29b和Mcl-1表达水平。通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受micro RNA调控。将mi R-29b模拟物通过Lipofectamine 2000顺时转染Huh7细胞,检测mi R-29b对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测mi R-29b模拟物转染对Huh7细胞增殖的影响。Annexin V/PI染色法检测mi R-29b对Huh7细胞凋亡的影响。结果肝肿瘤细胞相比于正常肝细胞高表达Mcl-1(3.42±0.15比1.00±0.04,P0.05)低表达mi R-29b(0.43±0.04比1.00±0.06,P0.05),在肝癌细胞中转染mi R-29b可使Mcl-1的表达水平下降(0.37±0.03比1.03±0.07,P0.05),转染mi R-29b可抑制Huh7细胞的增殖(0.85±0.11比1.68±0.17,P0.05)并诱导其发生凋亡[(28.4±2.10)%比(3.6±0.06)%,P0.05]。结论 Mi R-29b下调Huh7细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

冠心病患者阿司匹林抵抗及其相关因素分析

目的 初步探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)患者的阿司匹林抵抗(AR)情况及其相关因素.方法 CHD组(经冠脉造影确诊,156例)和对照组(冠脉造影正常,44例)服用阿司匹林(100mg/d)≥1周后,检测比较两组间血小板聚集率(PAG)及血浆P-选择素浓度.根据患者对阿司匹林的反应情况将CHD组分为AR亚组(35例)、阿司匹林半抵抗(ASR)亚组(28例)、阿司匹林敏感(AS)亚组(93例),检测血生化指标并对比分析各组间临床特征、PAG及血浆P-选择素浓度.结果 CHD组PAGAA、血浆P-选择素浓度及AR发生率均显著高于对照组(P<0.05或0.01);AR亚组合并糖尿病比例、总胆固醇及LDL-C浓度均明显高于AS亚组(P<0.05或0.01);ASR、AR亚组PAGAA、PAGADP及P-选择素浓度均显著高于AS亚组(均P<0.01);而AR亚组PAGAA、PAGADP及P-选择素浓度均明显高于ASR亚组(P<0.05或0.01);CHD组血浆P-选择素浓度与PAGAA、PAGADP均呈现显著的正相关(r=0.509、0.382,均P<0.01).结论 CHD患者阿司匹林抗血小板治疗疗效会降低,AR或ASR患者血浆P-选择素浓度及AR患者总胆固醇、LDL-C浓度均较高,合并糖尿病的患者AR发生率较高.     

血小板黏附分子在缺血性脑血管疾病中的表达

为探讨血小板黏附分子CD11b在缺血性脑血管疾病患者中的表达,用流式细胞术(FCM)分析外周血血小板表面黏附分子CD11b表达;用ELISA方法检测患者血浆中可溶性黏附分子P-选择素含量。结果,60例缺血性脑血管疾病患者血小板表面CD11b表达量和可溶性P-选择素含量比正常人30例显著增高(P<0.05)。CD11b和P-选择素可以作为血小板检测的敏感和特异的分子标记物,对缺血性脑血管疾病的诊断与监测有一定的临床应用价值。     

miR-182在体内外肝癌细胞中的表达及对肝癌的诊断价值

目的 探讨mi R-182在体内和体外细胞中的表达及对肝癌的诊断价值。方法 荧光定量PCR检测正常肝细胞系L-O2与肝癌细胞系Hep G2、Hep G3B、Huh7的mi R-182表达,以及肝癌组和对照组各40例mi R-182的表达。并且用ROC曲线分析血浆mi R-182对肝癌的诊断效能。结果 (1)Hep G2、Hep G3B及Huh7三种肝癌细胞系的mi R-182表达水平均显著高于正常肝细胞系L-O2(均P<0.05);(2)肝癌组血浆mi R-182相对表达量远高于对照组(P<0.05);(3)肝癌组mi R-182的异常表达与性别、年龄、肿瘤大小无显著相关性(均P>0.05),而与肿瘤的分化程度、临床分期、淋巴结转移有关(均P<0.05);(4)ROC曲线分析提示mi R-182诊断肝癌的曲线下面积(AUC)为0.852(95%CI:0.762~0.942),敏感度为87.5%,特异度为80.0%,约登指数为0.675,阳性预测值为△Ct1=5.25,当低于这个值时,提示mi R-182表达升高,罹患肝癌的可能性增大。结论 血浆mi R-182的高表达可能成为肝癌诊断的新方法 。     

MiR-26b增强顺铂对宫颈癌细胞株Hela的杀伤活性研究

目的观察micro RNA-26b(mi R-26b)联合顺铂对宫颈癌细胞的杀伤效果,并探讨其作用机制。方法荧光定量PCR方法检测人正常宫颈上皮细胞系CRL-2614及宫颈癌细胞系Hela、SiHa和C-33a的mi R-26b表达水平。MTT法检测顺铂单独治疗及联合mi R-26b治疗对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。利用生物信息学及Western blot方法验证mi R-26b是否调节Hela细胞Mcl-1表达。构建Mcl-1真核表达载体,MTT法检测Mcl-1表达载体转染对mi R-26b联合顺铂杀伤Hela细胞疗效的影响。结果宫颈癌细胞系mi R-26b表达水平:Hela细胞为(0.21±0.04),Si Ha细胞为(0.42±0.03),C-33a细胞为(0.33±0.03),显著低于正常宫颈上皮细胞系CRL-2614的(1.00±0.05)(P0.05)。mi R-26b联合1μmol/L顺铂治疗组对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(52.6±6.9)%]显著高于1μmol/L顺铂单治疗组[细胞活力抑制率为(6.7±3.5)%]。mi R-26b转染后,Hela细胞Mcl-1蛋白表达水平下降。mi R-26b联合1μmol/L顺铂在Mcl-1表达载体转染后对Hela细胞的杀伤活性[细胞活力抑制率为(19.6±6.7)%]显著低于未转染Mcl-1表达载体的mi R-26b联合1μmol/L顺铂组[细胞活力抑制率为(55.7±7.6)%]。结论 Mi R-26b通过靶向于Mcl-1增强顺铂对宫颈癌细胞系Hela的杀伤活性。     

microRNA-574-3p抑制结肠癌细胞增殖的机制研究

目的观察微小RNA-574-3p(micro RNA-574-3p,mi R-574-3p)对结肠癌细胞增殖的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法采用结肠癌细胞HCT116作为实验对象,细胞转染mi R-574-3p mimic和阴性对照分别作为mi R-574-3p mimic组和阴性对照组,同时以正常HCT116细胞作为空白对照组。RT-qPCR检测细胞mi R-574-3p表达; CCK-8法检测细胞增殖活力;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期变化; Western blot法检测Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及P53蛋白表达变化。结果与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组mi R-574-3p表达明显上调(P0.01),且在36～72 h细胞活力明显降低(P0.01)。与阴性对照组相比,mi R-574-3p mimic组细胞克隆形成率显著降低(P0.01),同时S期细胞比例显著增加(P0.01)。相较于阴性对照组,mi R-574-3p mimic组Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A蛋白表达显著下调(P0.01),P53蛋白表达明显上调(P0.01)。阴性对照组与空白对照组上述各指标均无明显差异。结论 mi R-574-3p可抑制结肠癌HCT116细胞增殖,这可能与下调Cyclin A1、CDK2、PCNA、Cdc25A及上调P53蛋白表达,最终诱导细胞S期阻滞有关。     

成人血小板微颗粒绝对计数方法的建立

目的建立成人血浆血小板微颗粒（PMPs）绝对计数方法。方法应用流式细胞仪检测P-选择素表达的阳性血小板百分数,血栓素B2（TXB2）酶联免疫测定试剂盒检测血浆中TXB2含量,流式细胞仪检测3种常用抗凝剂来源或标本冻存后的血小板微颗粒浓度。结果前列腺素E1（PGE1）对血小板活化的抑制作用呈现剂量依赖性,三磷酸腺苷双磷酸酶（Apyrase）对血小板P-选择素表达的影响不明显,PGE1和Apyrase对抑制血小板活化有协同作用;乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝来源的血浆PMPs的浓度较枸橼酸钠和肝素抗凝来源PMPs的浓度均低（均P〈0.01）;标本是否为冻存液以及加否二甲基亚砜冻存液对检测无血小板血浆（PFP）中PMPs浓度没有影响（P〉0.05）。结论体外检测PMPs时,宜选用EDTA-K2抗凝管,并且抗凝管中加入抑制血小板活化的抑制剂PGE1和Apyrase,终浓度分别为3.0×10-7mol/L和0.5U/ml,低温离心得到PFP,PFP可以直接冻存也可立即检测PMPs。     

血小板活化与急性胰腺炎的相关性研究

目的:通过检测血小板标志物P-选择素及血小板活化因子(PAF)的水平,探讨血小板活化在急性胰腺炎(AP)发病中的作用。方法:以ELISA法检测62例AP患者及50例健康对照者血清PAF水平,以放射免疫法法检测受试者血浆P-选择素水平。结果:AP患者血清PAF水平明显高于健康对照组(P<0.05),SAP组与MAP组相比差异有统计学意义(P<0.05);AP患者血浆可溶性P-选择素水平与健康对照组相比有显著增高,且有统计学意义(P<0.05)。结论:血小板活化在AP的发生及发展中起一定作用,可能与病情严重程度有关。     

MicroRNA-149在肿瘤中的研究进展

微小RNAs(micro RNAs,mi RNAs)是一类广泛存在于真核生物中的小分子非编码RNA,长度约为20~22纳特斯拉,其在转录后水平通过降解靶m RNA或抑制其表达。Mi RNA-149作为micro RNA的家族成员之一,在多种疾病中的不同作用机制以及表达水平差异引起广大学者的关注与研究,已成为mi RNA领域的研究热点。     

miR-31、miR-21和miR-155在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的分析mi R-31、mi R-21和mi R-155在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)中的表达水平,并探讨其与DLBCL临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,RT-PCR)检测92例DLBCL患者和84例对照mi R-31、mi R-21和mi R-155的表达水平,间期荧光原位杂交技术分析患者MYC和p53基因的异常情况,根据Hans的分类方法分为生发中心B细胞型(germinal center Bcell type,GCB型)和非生发中心B细胞型(non-GCB型)。结果 DLBCL组mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平高于对照组(P0.05),mi R-31、mi R-21及mi R-155在non-GCB型的表达高于GCB型(P0.05)。与MYC基因没有发生重排的患者相比,mi R-31、mi R-21及mi R-155在MYC重排的患者中表达下调(P0.05)。mi R-31、mi R-21及mi R-155在p53基因丢失组的表达较基因正常组下调(P0.05)。BCL-2蛋白阳性组mi R-31、mi R-21及mi R-155的表达较BCL-2蛋白阴性组下调(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,mi R-31、mi R-21及mi R-155高表达的DLBCL患者生存率低于低表达的患者(P0.05)。应用单因素和多因素Cox模型分析,发现mi R-31、mi R-21及mi R-155表达水平、免疫分型、p53基因与预后差异有统计学意义(P0.05)。结论 mi R-31、mi R-21和mi R-155对DLBCL的诊断分型及预后判断有一定的参考价值,有望成为DLBCL治疗的新靶点。     

胰腺癌患者血浆miR-744表达及临床意义

目的探讨胰腺癌患者血浆中mi R-744表达水平与临床特征的关系及其作为胰腺癌肿瘤标志物的可行性。方法采用实时荧光定量PCR检测50例胰腺癌患者、50例慢性胰腺炎患者及50名健康对照组中血浆mi R-744的表达水平,分析mi R-744与胰腺癌临床特征间的关系。并绘制ROC曲线,以判定血浆mi R-744是否能作为胰腺癌早期诊断的标志物。结果 mi R-744在胰腺癌患者血浆中的相对表达量显著高于慢性胰腺炎患者(12.5±6.3 vs1.4±2.6,P0.01)及正常对照组(12.5±6.3 vs 1.0±1.7,P0.01),胰腺癌患者血浆mi R-744水平与肿瘤TNM分期等临床特征无显著相关性。ROC曲线分析显示,血浆mi R-744水平可有效地从胰腺癌患者、慢性胰腺炎患者和健康对照组中诊断出胰腺癌患者(AUC=0.8,95%CI:0.7~0.8),敏感性和特异性分别为80.1%和62.2%。mi R-744、CA199、CEA联合诊断(AUC=0.9,95%CI:0.7~0.8)敏感性和特异性分别为83.4%和93.3%。结论胰腺癌患者血浆中mi R-744表达明显上调,表明mi R-744有望成为胰腺癌早期诊断标志物。     

高通量测序筛查特发性膜性肾病患者外周血细胞microRNA的差异性表达

目的 :寻找特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者外周血单个核细胞小核糖核苷酸(micro RNA)的差异性表达以及发生碱基突变的难易度。方法:运用高通量测序技术分别对IMN患者和健康对照者(NC)的micro RNA进行测序,构建IMN与NC组之间micro RNA差异性表达谱。并对两组的micro RNA进行碱基编辑分析,寻找发生了碱基突变的micro RNA,比较IMN与NC组micro RNA碱基突变的难易程度。结果:通过构建表达谱,找到了has-mi R-208b、has-mi R-195-3p、has-mi R-23b-5p、has-mi R-95、has-mi R-503、has-mi R-449a、has-mi R-486-3p与has-mi R-27 8个micro RNAs最具有差异性表达。2组共同表达的41个micro RNA中,IMN比NC更容易发生碱基编辑而引起碱基突变。结论:IMN患者与健康对照者的micro RNA存在着差异性表达,差异性表达的micro RNA特异性很高,可以作为深入研究IMN发病机制的靶点。IMN患者相比健康对照者更容易发生micro RNA碱基编辑引起碱基突变,这些发生碱基突变的micro RNA可能用于解释IMN的病因基础。