顺铂耐药人宫颈癌HeLa细胞株的建立及其相关耐药微小RNA的表达情况

目的 建立顺铂耐药的人宫颈癌HeLa细胞株,观察其耐药相关微小RNA(miRNA)的表达情况.方法 采用小剂量诱导法建立对顺铂耐药的人宫颈癌细胞株(HeLa/顺铂细胞).比较HeLa细胞株和HeLa/顺铂细胞株的细胞倍增时间、半数抑制浓度(IC50)、耐药指数(RI)、相关耐药基因表达情况及其细胞培养液中肿瘤标志物水平,并分析两种细胞株间异常表达的miRNA表达情况.结果 HeLa/顺铂细胞倍增时间及IC50长于或大于HeLa细胞(均P<0.05),RI值为7.14.HeLa/顺铂细胞培养液癌胚抗原、糖蛋白抗原-125水平均高于HeLa细胞(P<0.05);HeLa顺铂细胞中肺耐药蛋白-1、多药耐药相关蛋白-1及谷胱甘肽S-π的mRNA相对表达量均高于HeLa细胞(P<0.05).HeLa/顺铂细胞miR-29a和miR-34a相对表达量高于HeLa细胞,而miR-99a、miR-92a、miR-155、miR-375、miR-195的相对表达量低于HeLa细胞(均P<0.05).结论 成功建立顺铂耐药HeLa细胞株,其相关耐药miRNA的表达与HeLa细胞株存在差异.     

顺铂联合伊立替康注入综合疗法对HeLa细胞和HEK-293细胞的影响

目的 研究顺铂(DDP)联合伊立替康(Irinotecan)注入综合疗法对HeLa细胞和HEK-293细胞的影响,以评估该模型作为检测方法的有效性,为中晚期宫颈癌的综合化疗提供优化线索.方法 不同浓度DDP,Irinotecan,及双药联合作用于对数生长期的HeLa或HEK-293细胞,通过形态学观察、四甲基偶氮唑盐法(MTT)细胞活力测定,Ki67染色等检测药物对细胞的影响.结果 自10μg/mL DDP对HeLa和HEK-293细胞生长均有抑制作用.自10μM Irinotecan对HeLa细胞生长抑制明显.10μ g/mL DDP与低至2.5μMIrinotecan联合对HeLa细胞抑制作用显著强于同浓度单药.相同联合用药对HEK-293细胞的抑制作用明显较弱.结论 DDP与Irinotecan联合应用,不但提高了DDP综合疗法的效果,而且降低了化疗药物的使用剂量,此类联合治疗可望减轻患者的不良反应.相同联合方案对两种细胞的不同疗效提示了HeLa细胞作为宫颈癌体外模型的特异性.该研究可为宫颈癌综合疗法顺铂联合化疗方案的制定提供理论指导.     

野生型p53基因转染对宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响

目的：探讨转染外源野生型p53基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。并了解p53基因与HeLa细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法：利用脂质体介导，将含人野生型p53cDNA的cCB6.p53质粒导入人宫颈癌HeLa细胞株中，筛选阳性克隆，用免疫组化ABC法检测p53基因的表达情况，加入顺铂72小时后，用四唑盐比色试验检测存活的HeLa细胞数。结果：在G418选择培养基中培养两周后，成功地生长出阳性细胞克隆，免疫组化法证实外源性p53基因在瘤细胞中稳定存在并传给子代，p53基因转染对HeLa细胞的生长有明显的抑制作用。p53表达阳性的HeLa细胞对顺铂的敏感性明显增加，结论：野生型p53基因转染能使HeLa细胞出现生长抑制和化疗敏感性增强。     

丙戊酸钠联合顺氯氨铂对子宫颈癌的作用机制研究

目的 探讨丙戊酸钠(VPA)联合化疗药物顺铂(DDP)对子宫颈癌作用机制.方法 采用3 mmol/L VPA及不同浓度(0.5、1、2.5 μg/ml)DDP单独或联合作用于子宫颈癌HeLa细胞,对照组仅加溶媒;VPA 300 mg/(kg·d)-1,DDP 2 mg/kg,每周2次,作用于HeLa细胞接种后成瘤的裸鼠...     

黄芪注射液联合顺铂对HeLa细胞生长的影响

目的研究不同浓度黄芪注射液单独或联合顺铂对HeLa细胞生长的影响。方法单独或联合应用不同浓度的黄芪注射液、顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞系,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达。结果 MTT法检测结果显示黄芪注射液对HeLa细胞生长影响的最佳作用浓度为1 000 g.L-1,最佳作用时间为48 h。黄芪注射液组、顺铂组、黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞凋亡率均高于对照组,且黄芪注射液联合顺铂组HeLa细胞的凋亡率显著高于黄芪注射液组和顺铂组,各组之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。各组间比较,黄芪注射液联合顺铂组Bax、p53蛋白的表达量最高,Bcl-2蛋白的表达量最低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度的黄芪注射液对HeLa细胞有促凋亡作用,可协同顺铂增强对HeLa细胞的促凋亡作用,其作用机制与增强p53、Bax蛋白的表达、减弱Bcl-2蛋白的表达有关。     

顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和凋亡

目的：探讨顺铂对HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2蛋白表达及核转位的影响,并观察细胞自噬和凋亡的变化。方法：使用不同浓度的顺铂(0、2.5、5、10μmol/L)干预HeLa人宫颈癌细胞,MTT法检测细胞活性,Transwell实验观察细胞迁移能力,mCherry-GFP-LC3B融合蛋白腺病毒转染HeLa细胞观察自噬水平的变化,流式细胞术检测细胞凋亡水平,免疫蛋白印迹检测Nrf2在细胞质和细胞核内的表达情况,免疫荧光法观察Nrf2的核转位情况。结果：与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可抑制HeLa细胞的活性及细胞迁移能力(P<0.05),且随着药物浓度增高抑制作用增强(P<0.05)。与对照组相比,2.5、5、10μmol/L的顺铂均可促进HeLa细胞中LC3B的表达、细胞凋亡及Nrf2的核转位(P<0.05),降低细胞质中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05),并升高细胞核中Nrf2的蛋白表达水平(P<0.05)。结论：顺铂通过增加HeLa人宫颈癌细胞中Nrf2入核促进细胞自噬和细胞凋亡,并抑制细胞的活性和迁移能力。     

槲皮素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨槲皮素联合顺铂对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度槲皮素及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h后,采用MTT检测细胞的增殖活性、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况、激光扫描共聚焦显微镜观察用PI荧光标记的细胞核的形态学变化。结果:槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(P<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,槲皮素与顺铂联合应用具有一定的协同效应。     

iNOS抑制剂1400 W对宫颈癌HeLa细胞株生长的抑制作用

 目的 探讨诱导型一氧化氮合酶抑制剂1400 W单独或者联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞株生长及凋亡的影响。方法 培养宫颈癌HeLa细胞株,应用MTT法检测1400 W及顺铂对HeLa细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测1400 W及顺铂对HcLa细胞凋亡的影响;RT-PCR检测1400 W及顺铂对HeLa细胞E6,p53 mRNA表达的影响。结果 1400 W和顺铂均能抑制HeLa细胞生长,其抑制作用与剂量呈正相关。1400 W单药并不增加HeLa细胞凋亡,而1400 W联合顺铂后明显增加HeLa细胞凋亡（P＜0.05）,两者联合也使HeLa细胞E6,p53 mRNA表达明显下降（P＜0.05）。结论 1400 W及顺铂均可抑制HeLa细胞增殖。1400W联合顺铂明显增加宫颈癌HeLa细胞凋亡率,并且较单独使用顺铂时作用更显著。顺铂联合iNOS抑制剂抗肿瘤可能是一种更有希望的新辅助疗法。     

掌叶半夏有效提取物单独或与顺铂联合对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用

目的观察中药掌叶半夏有效提取物(PE)对体外培养宫颈癌HeLa细胞的作用,以及PE对HeLa细胞对顺铂(DDP)敏感性的影响,以期寻找药物治疗宫颈癌更完善的途径。方法体外培养宫颈癌HeLa细胞,分别用PE、DDP及DDP PE处理细胞;用倒置相差显微镜观察细胞生长及摄影,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。结果PE及DDP对宫颈癌HeLa细胞的生长均表现出明显的抑制作用,低剂量PE可加强DDP对HeLa细胞的抑制作用;流式细胞术检测结果显示PE作用后HeLa细胞呈现出凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞的比例明显增加。结论PE对宫颈癌HeLa细胞有明显的抑制生长和促凋亡作用,同时能提高HeLa细胞对顺铂的敏感性。     

小剂量顺铂对放射治疗HeLa细胞肿瘤增敏作用的实验研究

目的研究小剂量顺铂对HeLa细胞肿瘤(实验性宫颈肿瘤)放射治疗的增敏作用,探讨其增敏机制.方法将实验动物裸鼠分为空白对照组、单纯放疗组、单纯顺铂组和顺铂加放疗组4个组,分别观察各组肿瘤的生长情况,并绘制生长曲线.结果单纯放、化疗都可使HeLa细胞肿瘤生长受到抑制,顺铂加放射组与单纯放射组、单纯顺铂组存在显著差异(P＜0.01).3组肿瘤生长抑制率分别为69.5%,77.3%,90.2%.结论小剂量顺铂可明显增加放疗的敏感性,为临床肿瘤合理治疗提供了理论依据.     

顺铂诱导survivin表达改变与宫颈癌细胞化疗敏感性的关系

目的探讨survivin基因在顺铂(DDP)诱导的宫颈癌细胞凋亡中的作用.方法用宫颈癌Hela细胞株进行培养传代,MTT试验检测DDP不同药物浓度对宫颈癌细胞生长的抑制作用.分别在加药前、加药后24、48、72 h和96 h采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测survivin mRNA和蛋白的表达.同时利用流式细胞术定量检测细胞周期和细胞凋亡.结果 DDP对宫颈癌细胞生长均有明显的抑制作用,并有浓度和时间的依赖性.随浓度增加,宫颈癌细胞凋亡率表现先上升,后下降;随时间延长,在高浓度DDP组凋亡率明显增加,在低浓度DDP组凋亡率增加不明显.0.1 mg/L和1 mg/L DDP处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加.结论小剂量顺铂处理宫颈癌细胞,survivin mRNA和蛋白表达随作用时间的延长而增加,这可能是宫颈癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一.     

丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞的数量及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平的影响,探讨丁酸钠对HeLa细胞增殖的作用及相关机制。方法体外分组培养的HeLa细胞分别加入不同浓度的丁酸钠作用72h后,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长情况,逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞VEGFmRNA表达情况。结果经不同浓度的丁酸钠作用后,宫颈癌HeLa细胞增殖水平及VEGFmRNA表达水平较对照组均有明显降低,在一定范围内呈现浓度依赖性。结论丁酸钠不但能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,还可抑制宫颈癌HeLa细胞VEGF基因的表达水平。丁酸钠抑制VEGF基因表达水平的作用可能是其抑癌机制之一。     

丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及可能的机制。方法 MTT法检测不同浓度（0.5、1、2、4、8 mg/L）TanⅡA处理24、48、72 h对HeLa细胞的抑制率;免疫印记法（Western blot）测定Cx43及skp2表达。结果 MTT实验显示TanⅡA对宫颈癌hale细胞的生长具有明显抑制作用,其作用强度随药物作用时间及浓度的增加而增强;免疫印记法显示丹参酮ⅡA上调cx43,同时降低skp2表达。结论丹参酮ⅡA能明显抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖,其机制可能与上调cx43的表达,抑制skp2的表达有关。     

紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞生长及其claudin-7表达的影响

目的 探讨注射用紫杉醇脂质体对人宫颈癌HeLa细胞增殖及claudin-7蛋白表达水平的影响.方法 体外培养人宫颈癌 HeLa细胞,采用 MTT法观察不同浓度紫杉醇脂质体（0.01、0.1、1、10、100 μmol/L）对HeLa细胞增殖的抑制作用;采用Western blot法检测HeLa细胞claudin-7蛋白表达水平在不同浓度紫杉醇脂质体作用下的变化.结果 5个浓度的紫杉醇脂质体均能显著抑制HeLa细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性;Western blot显示HeLa细胞经不同浓度紫杉醇脂质体处理48 h后,随着紫杉醇脂质体浓度的增高,claudin-7蛋白表达逐渐减弱.结论 紫杉醇脂质体对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显的抑制作用,HeLa细胞claudin-7蛋白的表达在紫杉醇脂质体影响下是下调的.     

紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:观察紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。方法:体外培养HeLa细胞。ELISA法测定细胞培养液组蛋白/DNA碎片。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析Sub-G1细胞百分率。ELISA法检测细胞Caspase-3活性。结果:CAS以浓度依赖方式增加HeLa细胞组蛋白/DNA碎片的渗漏(P<0.05),同时显著升高HeLa细胞Sub-G1百分率(P<0.05)。CAS以Caspase依赖方式激活HeLa细胞Caspase-3(P<0.05)。结论:CAS能有效诱导HeLa细胞凋亡。     

胰岛素对人宫颈癌Hela细胞化疗敏感性的影响

目的探讨胰岛素能否增强人宫颈癌Hela细胞对顺铂（DDP）的化疗敏感性及其相关机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞株,MTr法检测5U／L胰岛素作用3、6、9、12、15、18、21h后,联合DDP（7．26mg／L）对人宫颈癌Hela细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪检测对照组、DDP组、胰岛素组及联合组（胰岛素化疗前作用6h）的细胞周期时相变化情况。结果DDP组、胰岛素化疗前作用不同时间组与对照组相比,Hela细胞的增殖抑制率明显上升（P〈0．01）;且胰岛素于化疗前提前作用3、6、9、12、15h后加入DDP,宫颈癌Hela细胞的增殖抑制率明显高于DDP组（P〈0．01）。流式分析显示DDP组及胰岛素组的S期细胞比例较对照组高（P均〈0．01）,联合组s期细胞比例较DDP组高（P〈0．01）。结论胰岛素具有较显著的DDP化疗增敏作用,胰岛素作用时机选择是胰岛素对宫颈癌细胞化疗增敏作用的关键。     

Effects of Smac gene over-expression on the radiotherapeutic sensitivities of cervical cancer cell line HeLa

Background　Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases(Smac) isanovelproapoptoticgene,whichplaysanimportantroleintheapoptosis inducingeffectsofirradiationontumorcells ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofextrinsicSmacgenetransferanditsover expressioninradiotherapeuticsensitivitiesofcervicalcancercells Methods　AftertheSmacgenewastransferredintothecervicalcancercelllineHeLa, subclonedcellswereobtainedbypersistentG418selection CellularSmacgeneexpressionwasdetectedbyRT PCR…     

楤木皂苷通过降低 Akt／NF-κB 通路抑制HeLa 细胞的增殖并促进其凋亡

目的：探讨！木皂苷对人宫颈癌 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响。方法以体外培养的人宫颈癌 HeLa 细胞为研究对象,实验分为阴性对照组和！木皂苷组（50、100、200μg／mL）共4组,分别给予 RPMI-1640培养液和！木皂苷（50、100、200μg／mL）处理。24、48和72 h 后,分别收集各组细胞,采用 MTT 法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 技术测定细胞内蛋白（pAkt1、pIкBα、NF-κB p65、Bcl-2和 Caspase-3）表达水平。结果！木皂苷呈时间-剂量依赖性地抑制 HeLa 细胞的增殖,并增加其凋亡水平。另外,！木皂苷显著降低 Akt1和 IкBα的磷酸化水平,减少 NF-κB（亚基 p65）和 Bcl-2的蛋白表达,相反却显著增加 Caspase-3的含量。结论！木皂苷通过降低 Akt／NF-κB 信号通路的活性抑制宫颈癌 HeLa 细胞的增殖并促进其凋亡。     

miR-26a下调TET抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭

目的探讨TET对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其调控机制。方法siRNA敲低宫颈癌HeLa细胞中TET的表达。细胞计数法、克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测TET对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力的影响。TargetScan软件预测TET与miR-26a之间的结合位点,qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验检测TET与miR-26之间的关系。结果TET敲低抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力。经预测miR-26a与TET1、TET2和TET3之间均存在结合位点;共转染野生型TET和miR-26a模拟物可降低荧光素酶活性;转染miR-26a抑制HeLa细胞中TET的表达。结论miR-26a通过下调TET1、TET2和TET3的表达而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭能力。