几种酶在大鼠内吞体膜上的细胞化学定位

目的研究多种酶在不同器官内吞体膜上的活性。方法用细胞化学方法,以Ce3 或Pb2 作捕捉剂,分别检测碳酸酐酶,Mg2 -ATP酶,Na -K -ATP酶,5’-核苷酸酶,NADPH oxidase在大鼠肾近曲小管上皮细胞、肝细胞以及人体嗜中性白细胞内吞体膜上的酶活性。结果上述碳酸酐醇,Mg2 -ATP酶,Na -K -ATP酶,5’-核苷酸酶及NADPH oxidase分别在大鼠肾脏近曲小管,肝脏及人体白细胞的内吞体膜上都有酶活性存在。结论 内吞体功能复杂,它可能与细胞的pH值,水盐代谢,能量、蛋白质的代谢以及活性氧的产生等都有一定的关系。     

过氧化物酶体增殖物激活受体与血管平滑肌细胞增殖的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferator—activated receptors,PPARs）是核受体超家族中的一类配体依赖的核转录因子,它通过多种途径抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖,进而在动脉粥样硬化（AS）、经皮冠状动脉介入性治疗（PCI）术后再狭窄的治疗中发挥重要作用。近年来对PPARs及其配体的研究很多,本文就其与VSMCs增殖有关的研究近况作一综述。     

过氧化物酶体增殖物激活受体β在肿瘤坏死因子α介导HaCaT角质细胞凋亡中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）导致HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α对过氧化物酶体增殖物激活受体β（peroxisome proliferator activated receptor-β,PPARβ）表达时空和转录活性的影响。方法：采用Hoechst 33258染色后观察凋亡细胞的形态学改变,并计算凋亡细胞百分率,Caspase活性定量检测试剂盒分析Caspase-3的活性变化,RT—PCR和Western印迹观察TNF-α致PPARβmRNA及蛋白的表达,应用凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析TNF-α介导PPARβ的DNA结合活性及转录活性的改变。结果：HaCaT角质细胞经5、10、20ns／ml TNF-α处理24h后,Hoechst 33258染色示随着TNF-α剂量的增加,凋亡细胞增多,凋亡细胞核百分率分别为12％±3％、32％±4％、57％±5％;HaCaT角质细胞经TNF-α（10、20ns／ml）处理不同时间后,Caspase-3的活性增强（P〈0．01）。继而Western印迹显示,HaCaT角质细胞经10as／ml TNF-α处理12、24h后PPARβ的蛋白表达显著增加,HaCaT角质细胞经不同浓度的TNF-α处理24h后PPARβ蛋白表达水平亦增加;RT-PCR检测示TNF-α（10、20ns／ml）处理3、6h后PPAR[3mRNA的表达增强,说明TNF-α可诱导PPARβ的表达。进而凝胶迁移滞留实验及荧光素酶报道基因分析表明TNF-α可以增强PPARβ的DNA的结合活性和转录活性。结论：在TNF-α介导HaCaT角质细胞凋亡中,TNF-α可增强PPARβmRNA、蛋白水平的表达以及DNA结合活性和转录活性。     

人肝细胞微体的酶细胞化学和超微结构立体定量研究

本文报道对15例正常人肝组织标本进行了肝细胞微体的立体定量研究,以及过氧化氢酶(CATase)、葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)、焦磷酸硫胺素酶(TPPase)、胞嘧啶单核苷酸酶(CMPase)细胞化学反应。人肝细胞的微体大多呈椭圆形,有一层单位膜包绕,内含均匀细颗粒状,在胞浆中成簇分布。微体的体密度为1.33±0.38％(x±s),数密度为40676±6809个/mm~3(x±s),线粒体/微体的数量比为10.29±2.5(x±s)。酶细胞化学反应的研究发现,内质网腔与微体不相通,与微体相连的纤细膜结构G-6-P酶细胞化学反应阴性,表明此膜结构不是内质网,可能为特殊的微体网状结构。高尔基复合体与微体结构上不存在移行关系,而一部分微体出现了分裂、芽生的现象,此结果表明新的微体是由细胞中原有的微体分裂产生。     

辣根过氧化物酶/吲哚乙酸系统作为基因导向性酶前体药物疗法的研究

目的:研究辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)系统作为基因导向性酶前体药物疗法(GDEPT)体外作用于人喉鳞癌Hep-2细胞株所产生的细胞毒性作用。方法:构建pcDNA3.1-HRP,将其瞬时转染Hep-2细胞后,Western blotting检测HRP蛋白的表达,MTT法检测加药IAA后对细胞增殖的影响。结果:pcDNA3.1-HRP构建成功,瞬时转染Hep-2细胞后Western blotting能检测到HRP蛋白的表达,MTT法显示HRP/IAA系统能较明显抑制细胞增殖。结论:HRP/IAA系统具备一定的作为基因导向性酶前体药物疗法治疗肿瘤的潜力。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与脓毒症的相关研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)通过多种机制参与脓毒症的调控,影响脓毒症的进展。一方面,PPARγ阻止转录因子及其辅助因子与一氧化氮合酶、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、诱导型环氧合酶2等炎症相关因子启动子上的相应位点结合,进而抑制靶基因的表达。因此,其在脓毒症的高炎性反应阶段发挥明显的抗炎作用,改善了部分脓毒症患者的预后。另一方面,PPARγ能诱导免疫细胞的凋亡和中性粒细胞的麻痹,这在高炎性反应阶段可能是有利的,但是在抗炎性反应为主的脓毒症后期,则可能会增加二次感染的机会,导致病情恶化。PPARγ在脓毒症中的作用目前仍存在争议,尚有待进一步的研究阐明。     

胃泌素释放肽前体在小细胞肺癌诊断中的研究进展

应用酶联免疫检测(ELISA)法检测人胃泌素释放肽前体(ProGRP)，对小细胞肺癌(SCLC)有较高的敏感性和特异性。它不仅可用于SCLC的早期诊断，而且有助于疗效的判断和肿瘤复发的早期发现，故有较高的临床实用价值。ProGRP是比神经元特异性烯醇化酶更为特异、敏感的SCLC肿瘤标志物。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

氯胺酮对脑缺血大鼠突触体ATP酶活力的影响

目的 研究氯妥酮（ＫＴ）对大鼠脑缺血ＡＴＰ酶活性变化的影响。方法 采用大鼠四动脉阻断脑缺血模型，缺血１０ｍｉｎ后测量纹状体和海马突触体Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋－ＡＴＰ和Ｃａ＾２＋－＝ＡＴＰ酶活性。结果 脑缺血时两个脑区的ＡＴＰ酶活性均显著下降。缺血的前预先应用ＫＴ２５ｍｇ．ｋｇ＾－１和５０ｍｇ．ｋｇ可拮抗脑缺血时ＡＴＰ酶活性的下降。结论 ＫＴ可通过拮抗脑缺血时ＡＴＰ酶活性的下降对抗脑缺血损伤。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α对人卵巢癌细胞的凋亡作用

目的研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ共激活因子1α（PGC-1α）对人卵巢上皮癌细胞凋亡的调控作用。方法选用人卵巢癌细胞株H08910进行体外培养,实验组设3组的对照组加入绿色荧光蛋白（GFP）基因的腺病毒载体,Ad-GFP组（绿色荧光感染）,Ad-PCG-1α组（PCG-1α绿色荧光感染）采用Hoeches染色法检测细胞凋亡,并用流式细胞仪测定凋亡率。定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞内凋亡相关基因Bax和Bcl-2mRNA的表达。选用中国仓鼠正常卵巢细胞（CHO）作为对照,同样方法过表达PGC-1仪检测凋亡。结果在人卵巢癌细胞H08910中过表达PGC-1α能明显诱导细胞凋亡,光学显微镜观察到细胞凋亡,流式细胞仪测定凋亡率达58．9％。过表达PGC-1α使H08910细胞内的Bax表达上调1．5倍,而Bcl-2表达下降了69％。而在正常仓鼠卵巢细胞中过表达PGC-1α,细胞未见明显的凋亡发生。结论PGC-1α能显著诱导人卵巢癌细胞发生凋亡,促凋亡基因Bax表达上调和抗凋亡基因Bcl-2表达下降可能是诱发细胞凋亡的机理之一。PGC-1α具有特异性促肿瘤细胞凋亡的作用。     

胃泌素释放肽前体在小细胞肺癌中的诊断价值

目的评价胃泌素释放肽前体(Pro GRP)对小细胞肺癌(SCLC)的诊断价值。方法选取2013年2月至2014年4月在蚌埠医学院第一附属医院住院治疗的70例SCLC患者(SCLC组)、40例非小细胞肺癌(NSCLC)患者(NSCLC组)及30例肺良性疾病(BDP)患者(BDP组)作为研究对象。采用化学发光免疫分析法和放射免疫分析法检测患者血清中Pro GRP和NSE的水平,探讨ProGRP诊断SCLC的价值。结果 SCLC组患者血清中Pro GRP[1088.05(437.51,2294.03)ng/L]和NSE[15.11(9.52,25.10)μg/L]的水平均显著高于NSCLC组[43.26(32.13,49.17)ng/L、[7.24(5.32,9.99)μg/L]和BPD组[38.46(30.81,43.72)ng/L、7.27(4.81,9.71)μg/L](P<0.05)。以BPD为对照组,受试者工作特征(ROC)曲线确定的血清Pro GRP诊断SCLC的截断点为52.29 ng/L,ROC曲线下面积为0.982,95%CI 0.959~1.005;以NSCLC组为对照,血清Pro GRP和NSE的ROC曲线下面积分别为0.973和0.764,两者比较差异有统计学意义(Z=4.26,P<0.05),获得Pro GRP诊断SCLC的截断点为86.96 ng/L。Pro GRP诊断SCLC的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值及约登指数分别为88.6%、96.7%、98.4%、78.4%及0.852,均高于NSE的60.0%、90.0%、93.3%、49.1%、0.5。结论血清Pro GRP的水平对SCLC有较高的辅助诊断价值。     

大鼠肝星状细胞活化过程中过氧化物酶体增殖因子活化受体γ表达的动态变化

目的 研究大鼠肝星状细胞（HSC）活化过程中过氧化物酶体增殖因子活化受体γ（PPARγ）表达的动态变化。方法 采用肝脏原位灌流酶消化，Nyeodenz密度梯度离心方法体外分离大鼠HSC，分别采用半定量RT-PCR和Western blot检测基因和蛋白表达水平。结果 HSC体外培养过程中，出现与体内肝纤维化发生过程中相似的活化过程。在静止、中间活化、活化的HSC中，PPARγ达水平不断下降。结论PPARγ表达水平随着HSC活化程度的增加而不断下降，可能在维持HSC静止表型方面发挥重要作用。     

多酶体破壁提取蜂花粉中活性蛋白的工艺研究

花粉壁可分为外壁和内壁,外壁主要为纤维素、孢粉素等;内壁则由果胶质、纤维素、半纤维素等组成[1].未经破壁的花粉结构致密,内含的生物活性物质释放慢且不完全.     

颈动脉体神经递质的研究进展

颈动脉体是重要的外周化学感受器 ,感受动脉血中PO2 、PCO2 和pH值的变化 ,对维持低氧下的内环境稳定和细胞的正常氧合作用非常重要。颈动脉体表达多种神经递质及其受体 ,这些神经递质在基础状态和刺激条件下的释放 ,在化学感受器转导和传递及其调节中起着重要的作用。     

过氧化物酶体增殖体激活受体γ激动剂对炎症状态下人肾小球系膜细胞ABCA1表达的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对炎症状态下人肾小球系膜细胞(HMC)ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响,探讨影响受体表达和延缓肾小球疾病进展的可能干预措施。方法培养的HMC随机分为5组继续培养24 h：空白组：普通培养的细胞;对照组：5 ng/mL白细胞介素-1β(IL-1β);实验组：5 ng/mL IL-1β+2.5μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2,应用实时定量PCR法测定不同剂量PPAR-γ激动剂15d-PGJ2对IL-1β作用下HMC ABCA1 mRNA的影响。培养的HMC随机分为4组继续培养24 h：空白组：普通培养的细胞;对照组：5 ng/mL IL-1β;实验组：5 ng/mL IL-1β+5μmol/L 15d-PGJ2,5 ng/mL IL-1β+10μmol/L 15d-PGJ2,应用Western印迹方法测定不同剂量15d-PGJ2对IL-1β诱导的ABCA1蛋白表达的影响。结果炎症因子IL-1β能够抑制HMC的ABCA1表达,15d-PGJ2呈剂量依赖性地增加IL-1β抑制的ABCA1 mRNA和蛋白表达。与对照组(5 ng/mL IL-1β)比较,2.5、5、10μmol/L 15d-PGJ2实验组ABCA1 mRNA表达分别升高1.34、2.15、2.88倍,5、10μmol/L 15d-PGJ2实验组ABCA1蛋白表达分别升高1.16、1.54倍。结论 PPAR-γ激动剂15d-PGJ2剂量依赖性改善IL-1β对ABCA1 mRNA和蛋白表达的抑制,对炎症导致的系膜细胞脂质失衡具有保护作用。     

过氧化物酶体氧化应激与肿瘤关系的研究进展

过氧化物酶体是真核细胞中广泛存在的一种细胞器,参与并介导细胞多种生物学过程。近年来研究已证实过氧化物酶体是细胞中自由基产生与清除的重要位点。过氧化物酶体中自由基生成与清除平衡机制对维持细胞正常功能是极为重要的,当过氧化物酶体发生氧化应激时产生大量自由基,这种自由基变化与人类肿瘤的发生、发展密切相关,并可能从多个层面影响肿瘤进程。该文就过氧化物酶体的氧化应激机制及其在肿瘤发生、发展中的作用进行综述。     

蜂花粉多酶体破壁的中试工艺研究

蜂花粉细胞壁结构致密,口服营养成分不易被人体吸收,因此多需破壁后服用,并由此衍生出诸多花粉破壁方法,包括机械破壁法、酶解破壁法、微波、微生物发酵、温差等破壁方法[1],但每种方法均或多或少存在一些不足之处.本课题组在先前研究中,根据蜂花粉的细胞特征,采用多种生物酶混合的多酶体系对蜂花粉进行酶解破壁,筛选出了实验室条件下的蜂花粉破壁条件[2],现在此研究的基础之上.对其进行中试工艺的研究.     

大鼠精子顶体蛋白酶的增龄变化

采用固定明胶底物薄膜法，对不同月龄大鼠精子顶体蛋白酶的活性进行检测。结果：青年组大鼠精子顶体蛋白酶活性反应阳性率高，反应出现时间早，反应晕直径大且亮度强；中年组反应阳性率低，反应时间延迟，反应晕直径小且亮度弱；老年组反应极不明显。表明大鼠随年龄的增长和机体的老化，其精子顶体蛋白酶活性逐渐降低甚至消失。     

糖基化终末产物对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ mRNA表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ（PPAR-γ）mRNA表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠20只随机分为4组(每组5只)，AGEs组 (给予AGEs同时尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白)，AGEs+AG组［给予AGEs同时腹腔注射氨基胍（AG)］，天然血清组(注射天然大鼠血清蛋白)和空白对照组（不施加处理的正常大鼠)。各组大鼠每日注射1次，连续注射6周，RT-PCR 检测PPAR-γ mRNA 表达水平。结果：各组大鼠肾皮质均有PPAR-γ表达；与天然血清组及空白对照组比较，AGEs组大鼠肾皮质PPAR-γ　mRNA表达明显降低 （P＜0.01）, 而同时注射AG的大鼠PPAR-γ mRNA表达水平无明显降低。结论：大鼠肾皮质表达PPAR-γ；AGEs能降低大鼠肾皮质PPAR-γmRNA的表达水平，提示AGEs可能通过对肾脏保护性因子PPAR-γ的影响参与糖尿病肾病的发病机制。     

活化的过氧化物酶体增生物激活受体-γ诱导人类肺癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨配体活化的过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)-γ对人肺癌细胞生长的影响及其机制。方法 以逆转录聚合酶链反应和Western印迹法分别检测肺癌细胞系上PPAR-γ的表达,以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测经PPAR-γ的配体作用后的细胞增殖情况,以TUNEL检测PPAR-γ的配体作用后的细胞凋亡情况,以原位杂交和免疫组化检测处理前后bax和bcl-2的mRNA和蛋白质水平的变化,并以免疫组化检测处理前后细胞半胱氨蛋白水解酶-3的表达情况。结果 肺癌细胞系上有PPAR-γ的表达,经配体活化后能明显抑制细胞生长,且与时间和剂量有关;配体活化后的PPAR-γ能诱导细胞凋亡,且半胱氨蛋白水解酶-3与bax、bcl-2在诱导凋亡前后均有增加,与凋亡程度呈正相关,但bax／bcl-2比值在凋亡前后亦增加。结论 PPAR-γ经配体活化后能通过诱导凋亡而抑制肺癌细胞的生长,且bax／bcl-2的比值与半胱氨蛋白水解酶-3在此过程中起作用,因此该受体在肺癌的发病及进展中起重要作用,有可能成为未来肺癌治疗的新靶点。