温经通络法对胶原性关节炎大鼠血管新生干预作用的研究

目的观察血管内皮细胞生长因子（VEGF）及血管内皮细胞生长因子受体（KDR）在胶原性关节炎（CIA）大鼠血清及滑膜组织中的表达变化,及芍药甘草附子汤的干预作用。方法建立CIA大鼠模型,分组干预后计算关节炎炎症指数（AI）。ELISA法检测血清VEGF、sKDR含量,免疫组织化学法检测关节滑膜VEGF、KDR表达。结果造模后第28天各组大鼠炎症反应明显,用药4周后炎症反应明显好转,对照组和治疗组明显好于模型组（P〈0．05）,但两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。模型组病理评分较正常组显著增高（P〈0．01）,各用药组光镜下病理改变较模型组减轻。血清VEGF、sKDR含量,模型组明显高于正常组（P〈0．05）,用药后对照组和治疗组明显下降（P〈0．05）。免疫组化结果显示,VEGF、KDR均定位于细胞浆,对照组和治疗组的阳性细胞数较模型组明显减少（P〈0．05）。结论芍药甘草附子汤对CIA大鼠有明显的治疗作用,其机制可能与抑制VEGF及其受体表达有关。     

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠软骨破坏的对抗作用

目的 探讨中药通痹灵对类风湿关节炎软骨破坏的对抗作用。方法 采用大鼠胶原诱导性关节炎（CIA）模型，用关节软骨免疫组化染色方法，评价造模后通痹灵早期给药治疗对大鼠软骨病变中肿瘤坏死因子－α（TNF-α），转化生长因子－β（TGF－β）的表达的影响，并与模型组，甲氨碟呤（MTX）组，雷公藤组等进行半定量的平行对比研究。结果 正常组的软骨组织中TNF－α阳性软骨细胞数呈低表达，且染色浅，与模型组的高阳性表达深染色有显著性差异（P＜0．01），也明显优于MTX低剂量组（P＜0．01）。通痹灵高，低剂量组及雷公藤高剂量组较接近正常组的表现，优于MTX高，低剂量组（P＜0．05），与模型组比较差异有显著性（P＜0．01）。正常组软骨组织中TGF－β呈较活跃的表达，模型组与雷公藤高，低组则表达少而染色浅，与正常比较有显著性差异（P＜0．05）。通痹灵高，低剂量组是各病理组中最接近正常组表现的，与模型组比较有显著性差异（P＜0．01）。结论 通痹灵治疗和改善软骨病变的机制可能与其降低软骨细胞异常升高的致炎，致溶骨的细胞因子TNF－α的分流行性并升高保护性因子TGF－β的含量有关。     

HIF-1α、VEGF在CIA大鼠模型中的表达与意义

目的制备牛Ⅱ型胶原诱导性大鼠关节炎(collagen Ⅱ-induced arthritis,CIA)模型,探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在类风湿关节炎发病中的作用。方法50只SD大鼠,随机分为对照组与模型组。建立CIA模型,动态观察各项关节炎活动指标,于造模第21、28、35、42天取踝关节行HE染色及HIF-1α、VEGF免疫组化染色,分析两者在CIA中的相关性及与关节炎活动指标、滑膜病理学评分之间的关系。结果CIA大鼠关节滑膜层和滑膜下层均表达HIF-1α、VEGF二者呈明显正相关,r为0.75(P<0.01),第21天阳性表达量最高,随病程进展,表达逐渐下降,与滑膜病理学评分、滑膜增生评分及血管生成评分呈显著正相关,r分别为0.4、0.48、0.50(P<0.05),与炎症浸润评分无明显相关r为0.30(P<0.05)。结论HIF-1α可能通过调控一系列下游靶基因,如VEGF等,促进滑膜增生及血管生成,影响类风湿性关节炎(rheumatoi...     

川芎嗪抑制Ⅱ型胶原诱发关节炎大鼠滑膜损伤作用机制的研究

目的观察川芎嗪对大鼠胶原性关节炎(CIA)炎症发展和滑膜分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法皮内注射Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA,给予不同剂量川芎嗪灌胃,以环孢霉素A(CSA)为阳性对照.检测关节炎指数积分和炎症足垫厚度,X摄片检测关节结构,透射电镜观察滑膜毛细血管内皮细胞超微结构,免疫组化观察滑膜VEGF的表达和滑膜微血管密度(MVD).结果与模型组比较,CSA和100 mg/(kg·d)川芎嗪可降低关节炎指数积分和炎症足垫厚度,减轻炎症关节结构的破坏,改善滑膜毛细血管内皮细胞超微结构,抑制滑膜表达VEGF和减少滑膜MVD.结论川芎嗪可抑制CIA大鼠关节炎症发展和关节结构的破坏,其机制与川芎嗪可抑制滑膜表达VEGF,从而抑制滑膜组织血管生成密切相关.     

高脂饲料对胶原诱导关节炎大鼠关节的影响

目的通过比较不同饮食对胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠关节的影响,明确高脂饲料对关节炎的作用。方法选用Wistar大鼠建立关节炎模型,给予普通和高脂饲料,观察不同饮食条件下大鼠关节炎指数积分、滑膜HE染色以及检测血清中血脂和炎症因子的浓度。结果与普通饲料CIA大鼠组比较,高脂饲料的CIA大鼠关节炎指数积分增加且持续加重,病理切片的滑膜增生层次、血管翳形成和炎性细胞浸润均明显增高,高脂饲料CIA组血清中TC、LDL-C水平明显升高（P〈0.01）,而HDL-C则明显降低（P〈0.05）,前炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-17的浓度也明显升高（P〈0.05）。结论高脂饲料可能通过增强滑膜增生和促进炎症因子来促进CIA关节炎的进展。     

白藜芦醇对佐剂性关节炎大鼠血管内皮因子表达的影响

目的：探讨白藜芦醇( Res)对佐剂性关节炎( AA)模型大鼠关节滑膜组织的抗炎作用和对血管内皮生长因子( VEGF)表达水平的影响。方法60只SD大鼠随机分正常组(10只)和模型组(50只),模型组左后足趾皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型,模型组在建模后12 d再分5组：模型对照组、Res低剂量组(5 mg/kg )、Res中剂量组(15 mg/kg)、Res高剂量组(30 mg/kg)、阳性药塞来昔布组(5 mg/kg),给药16 d后处死大鼠,对各组大鼠踝关节滑膜组织行病理切片、HE染色和VEGF免疫组化染色。观察滑膜增生、血管翳形成、炎症渗出、关节软骨和骨破坏等情况。 Western blot法检测VEGF蛋白的表达情况。结果 Res治疗组的关节病理学评分明显低于模型对照组,免疫组化染色以及Western blot结果显示, Res 能降低滑膜组织 VEGF 表达水平。结论 Res 有改善大鼠关节滑膜炎症、抑制滑膜组织VEGF表达的作用,这可能与Res治疗AA关节炎有关。     

S100A4 siRNA 对佐剂性关节炎大鼠炎症及细胞因子的影响

目的：研究S100A4 siRNA对关节炎大鼠炎症及细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF‐α）、IL‐1β和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,造模后第11天给模型干扰组大鼠关节腔内注射 S100A4 siRNA 片段。观察各组大鼠关节炎指数（AI）的变化及踝关节的病理变化;ELISA 检测血清 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 的表达变化。结果模型干扰组大鼠 TNF‐α、IL‐1β和 VEGF 表达水平均比模型组降低（P＜0．05）;AI 值及踝关节病理积分与模型组比较显著下降,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论抑制 S100A4基因表达,能显著降低致炎细胞因子 TNF‐α、IL‐1β及促血管生成因子 VEGF 的表达,减轻关节滑膜的病理损伤。     

IL-17和RANKL在胶原诱导性关节炎大鼠关节滑膜的表达及^99Tc-TDP的干预作用

目的：探讨白细胞介素17（IL-17）和细胞核因子-κB受体活化因子配基（RANKL）在胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠关节滑膜病变发生发展中的作用及^99锝-亚甲基二膦酸盐（^99Tc—TDP）的干预作用。方法：通过完全弗氏佐剂乳化的鸡Ⅱ型胶原构建CIA大鼠模型。模型大鼠随机分为模型对照组和^99Tc—TDP组,^99Tc-TDP组予0．05μg·（kg·d）^-1^99Tc尾静脉注射,正常对照组与模型对照组予等量生理盐水尾静脉注射。关节炎指数（AI）评分评价关节炎程度,各组大鼠用ELISA法检测血清及关节液IL-17和RANKL浓度,显微镜观察滑膜病理变化,免疫组化法半定量检测滑膜IL-17和RANKL蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型对照组和^99Tc-TDP组血清及关节液IL—17浓度、关节液RANKL浓度、滑膜病理积分、滑膜IL-17和RANKL蛋白表达均增加（P〈0．05）,^99Tc—TDP组上述指标较模型对照组均降低（P〈0．05）,各组血清RANKL浓度无显著性差异（P〉0．05）。结论：IL-17和RANKL参与了CIA大鼠关节滑膜病变的发生发展,^99Tc—TDP可能通过抑制滑膜IL—17和RANKL的表达延缓关节滑膜病变的进展。     

胶原诱导关节炎大鼠CD44和Fas／FasL的表达

目的了解胶原诱导关节炎（CIA）大鼠血清及滑膜CD44、Fas／FasL的变化及其在类风湿关节炎（RA）发病机制中的作用。方法选取雌性Wistar大鼠40只,随机分为对照组8只,CIA组32只。对照组不做任何处理,CIA组建立CIA模型,30d后测定关节炎指数（AI）,用ELISA法检测血清CD44、Fas和FasL水平,RT—PCR检测滑膜CD44水平,免疫组化法检测滑膜Fas、FasL水平。结果CIA组大鼠血清CD44和Fas、FasL水平均高于对照组,差异有显著性（t=11．917～195．960,P〈0．01）;滑膜CD44、Fas的表达亦明显高于对照组,而滑膜FasL的表达低于对照组,差异有显著性（t=6．916～20．264,P〈0．01）。CIA组大鼠血清CD44、Fas／FasL水平与AI呈正相关（r=0．603、0．485,P〈0．05）,血清CD44水平与Fas／FasL水平呈正相关（r=0．533,P〈0．05）。结论CD44可能通过上调Fas的表达、下调FasL的表达,使得Fas和FasL结合减少,从而引起细胞凋亡减少,导致滑膜增生,参与RA的发病过程。     

通痹灵对CIA大鼠滑膜组织病理改变的影响

目的：研究通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎（CIA）模型大鼠滑膜组织病理的影响。方法：滑膜组织常规脱水、包埋、制片、苏木精-伊红染色，观察炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生及巨噬样A型的细胞增生情况。结果：通痹灵对CIA大鼠滑膜组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型的细胞有明显抑制作用。4种细胞病理改变的总 积分与模型组比较，差异有非常显性。结论：通痹灵治疗类风湿性关节炎的机制可能与抑制炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞增生有关。     

通痹灵对抗胶原诱导性关节炎小鼠骨质破坏的作用研究

[目的]探讨通痹灵(TBL)抗关节炎骨质破坏的作用机理。[方法]以小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)为动物模型,分别以高剂量和低制量TBL对模型小鼠灌胃给药,并以甲氨喋呤(MTX)作为阳性对照,观察TBL对CIA小鼠关节炎症程度、关节破坏程度以及关节切片免疫组化染色中明胶酶A和B表达的影响。[结果](1)TBL高剂量(5.7g·kg-1·d-1)治疗8周能降低关节炎症状计分及放射线计分(P<0.01或P<0.001);(2)明胶酶A和B表达与关节炎症状计分及关节放射线计分显著相关(P<0.05或P<0.005);(3)TBL高剂量治疗能明显降低明胶酶A和B在关节滑膜、软骨和滑膜翳中的表达(与CIA组相比P<0.01或P<0.001)。[结论]中药TBL可控制CIA小鼠关节明胶酶A和B的表达,这可能是其能改善RA的软骨和骨质破坏的机制之一。     

昆仙胶囊对大鼠诱导性关节炎滑膜及血清γ IP-10的影响

目的:观察昆仙胶囊对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜及血清中γIP-10的调节作用,探讨昆仙胶囊补肾祛风湿法治疗类风湿关节炎的作用机理。方法:采用尾根部皮下多点注射Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型。将实验用Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、MTX组及昆仙胶囊低、中、高剂量组。测量各组大鼠后肢关节肿胀度,检测各组关节影像学改变及滑膜病理变化,ELISA法检测大鼠血清中γIP-10含量,RT-PCR法检测大鼠滑膜组织γIP-10 mRNA的表达水平。结果:MTX组和昆仙胶囊各剂量组大鼠关节炎症状减轻,滑膜细胞增生、炎性细胞浸润及血管翳形成等病损较模型组明显改善(P<0.05);与正常组相比,模型组血清γIP-10含量和滑膜组织γIP-10 mRNA表达均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,MTX组和昆仙胶囊中、高剂量组大鼠血清γIP-10含量下降(P<0.05),MTX组和昆仙胶囊各剂量组滑膜组织γIP-10 mRNA基因表达下降(P<0.05),尤以昆仙胶囊高剂量组下降明显(P<0.01)。结论:昆仙胶囊能显著缓解胶原诱导关节炎大鼠关节炎症状及滑膜细胞病损,明显下调大鼠血清和滑膜细胞中γIP-10的高表达,减轻慢性关节滑膜炎及血管炎病变。     

Effects of Triptolide on the Expression and Activity of NF-κB in Synovium of Collagen-induced Arthritis Rats

Summary： The expression and activity of NF-kB in the synovium of collagen-induced arthritis （CIA） rats was detected in order to investigate the possible therapeutic effects of triptolide on rheumatoid arthritis （RA）. The experimental Wistar rat model of CIA was set up by intradermal injection of emulsion of bovine collagen 11 and the successful rate of setting-up models was evaluated by arthritis index （AI）. Rats were grouped randomly into three groups： normal, model and treatment group. The expression of TNF-α and IL-6 in synovial fluid was detected by ELISA, and the expression and activity of NF kB in synovium by immunohistochemistry method and by electrophoretic mobility shift assay （EMSA） respectively. As compared with normal group, the expression of TNF a and IL-6 in synovia （P〈0. 05）, and the expression and activity of NF-kB （P〈0.05） in synovium were increased in model group. There was statistical difference in above-mentioned indexes between model group and treatment group. Triptolide may play a protective role in IRA via downregulating the expression and activity of NF-kB in synovium.     

Effects of Triptolide on the Expression and Activity of NF-κB in Synovium of Collagen-induced Arthritis Rats

The expression and activity of NF-κB in the synovium of collagen-induced arthritis (CIA)rats was detected in order to investigate the possible therapeutic effects of triptolide on rheumatoid arthritis (RA). The experimental Wistar rat model of CIA was set up by intradermal injection of emulsion of bovine collagen Ⅱ and the successful rate of setting-up models was evaluated by arthritis index (AI). Rats were grouped randomly into three groups: normal, model and treatment group.The expression of TNF-α and IL-6 in synovial fluid was detected by ELISA, and the expression and activity of NF-κB in synovium by immunohistochemistry method and by electrophoretic mobility shift assay (EMSA) respectively. As compared with normal group, the expression of TNF-α and IL-6 in synovia (P＜0.05), and the expression and activity of NF-κB (P＜0.05) in synovium were increased in model group. There was statistical difference in above-mentioned indexes between model group and treatment group. Triptolide may play a protective role in RA via downregulating the expression and activity of NF-κB in synovium.     

雌激素对胶原诱导关节炎动物模型发病过程的作用

目的    研究雌激素对胶原诱导关节炎（CIA）发病过程的影响以及对肽基精酰胺脱亚胺基酶4（PADI4）和TXNDC5表达的影响。方法    雄性Lewis大鼠29只随机分成4组：正常对照组（H组,n=6）、CIA模型组（C组,n=8）、雌激素干预组（T组,n=8）和雌激素组（E组,n=7）。皮下注射牛Ⅱ型胶原（CⅡ）建立CIA模型,其间进行雌激素干预。ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子α（TNFα）、白介素-1β(IL-1β)和血管内皮生长因子（VEGF）的含量;免疫组织化学法、Western-blot法和real-time PCR法检测滑膜中PADI4和TXNDC5的表达。结果    与C组相比,T组的关节炎发病时间约延缓6d（P=0.045）,炎症程度和发病率无显著差异;TNFα和IL-1β的含量无明显改变,VEGF含量明显升高（P=0.023）;T组滑膜组织异常增殖并伴毛细血管增生,PADI4主要表达于滑膜衬里及侵润的炎性细胞,TXNDC5主要分布于滑膜衬里及毛细血管的内皮细胞。雌激素明显刺激CIA滑膜中TXNDC5的表达（P＜0.05）,但对PADI4的表达无显著影响。结论    雌激素虽然能延缓关节炎的发病时间,但可能通过上调TXNDC5的表达,刺激类风湿关节炎（RA）滑膜毛细血管增生。     

苗药验方四大血可减少关节炎大鼠滑膜组织的坏死性凋亡和血管新生：基于抑制RIPK1/RIPK3/MLKL通路

目的 探究贵州苗医验方“四大血”（SX）对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠滑膜组织坏死性凋亡和滑膜血管新生的作用机制。方法 将42只SD大鼠均分为空白组（Nor）、模型组（Mod）、雷公藤多苷片阳性对照组（GTW,40 g/kg）和SX高、中、低剂量组（SX 40 g/kg、SX 20 g/kg、SX 10 g/kg）,7只/组。构建CIA大鼠模型。建模后测量大鼠双后肢足跖肿胀程度并进行关节炎指数评分。ELISA法检测血清中TNF-α、IL-1β和IL-17变化,HE染色法观察大鼠关节滑膜病理变化,Real-time PCR检测滑膜组织中VEGF、MMP-9、Ang-1、RIPK1、RIPK3、Caspase-8 mRNA表达水平,Western blot检测滑膜组织中VEGF、MMP9、Ang-1、STAT-3、RIPK1、RIPK3、MLKL、p-MLKL、Caspase-8蛋白表达水平。结果 GTW组和SX高、中、低剂量组足跖肿胀度及关节炎指数评分均小于Mod组（P<0.05）。在光镜下观察大鼠关节滑膜病理组织切片,Mod组可见大量炎性细胞浸润,各层组织结构混乱;而药物治疗组中,炎性细胞浸润、滑膜血管新生和滑膜增生程度均降低。且随SX剂量增高,治疗效果呈逐渐增强的趋势。与Mod组相比,GTW组和SX 40 g/kg组大鼠血清中TNF-α、IL-1β和IL-17含量,滑膜组织中RIPK1、RIPK3、VEGF、Ang-1、MMP9 mRNA和蛋白表达均降低（P<0.05）,Caspase-8 mRNA和蛋白表达水平增高（P<0.05）并下调Stat-3蛋白表达和MLKL的磷酸化水平（P<0.05）。结论 SX可以改善CIA大鼠滑膜血管新生,其机制可能与抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路激活,并下调促血管生长因子VEGF、Ang-1、MMP9、STAT-3表达有关。     

痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜VEGF表达水平的影响

目的：观察痹肿消汤对实验性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子（VEGF）表达水平的影响，探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎（RA）的作用机制。方法：75只SD大鼠随机分为4组，皮下注射Ⅱ胶原诱导实验性关节炎模型，用免疫组化法检测各组不同时间点大鼠滑膜VEGF的表达，同时采用关节炎指数积分法评价其关节炎症状。结果：免疫大鼠88.57%出现关节炎症状；模型组的关节炎指数积分逐渐增加，而痹肿消汤组和甲氨喋呤组关节炎指数积分则在30d后逐渐下降。正常组滑膜组织未见明显VEGF表达，模型组VEGF表达明显高于痹肿消汤组和甲氨喋呤组（P＜0.01）；随着时间的延长，模型组VEGF表达逐渐升高，痹肿消汤组和甲氨喋呤组的VEGF表达明显低于模型组（P＜0.01），且痹肿消汤组又低于甲氨喋呤组（P＜0.05）。结论：VEGF参与了RA疾病滑膜炎的形成和发展过程；其VEGF表达的高低与关节炎症状的轻重有关。痹肿消汤和甲氨喋呤均具有阻断关节炎滑膜组织VEGF表达，且痹肿消汤阻断作用优于甲氨喋呤；提示痹肿消汤可能通过阻断VEGF的表达来阻抑关节炎滑膜血管翳的形成或骨质侵蚀。     

穿山龙总皂苷对CIA大鼠关节滑膜组织NF-κB p65活性及STAT3表达的影响

 目的 通过观察穿山龙总皂苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜组织核转录因子-κB (NF-κB)及信号转导子和转录激活因子3(STAT3)表达的影响,探讨穿山龙总皂苷抑制类风湿性关节炎血管新生可能的信号转导通路作用机制。方法 将造模成功的60只CIA大鼠随机分为CIA模型组、雷公藤组(阳性对照组)、穿山龙总皂苷组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组,另设正常对照组,每组12只。造模成功以后分别给予相应的药物灌胃,连续治疗35天 d。应用TransAMTM NF-κB p65活性检测试剂盒检测滑膜组织中NF-κB p65的DNA结合活性。应用免疫组织化学染色的方法观察滑膜组织中STAT3蛋白的表达。结果 与正常对照组相比,CIA模型组大鼠滑膜细胞核蛋白提取物中NF-κB p65的DNA结合活性和滑膜组织中STAT3蛋白的表达显著增高,有统计学意义(P＜0.01);与CIA模型组相比,穿山龙总皂苷组、雷公藤组、薯蓣皂苷元组、穿山龙水溶性皂苷片组的NF-κB p65的DNA结合活性和STAT3蛋白的表达均显著降低,有统计学意义(P＜0.01);各治疗组之间两两比较均无统计学意义(P＞0.05)。结论 穿山龙总皂苷可能通过抑制NF-κB信号转导通路中NF-κB p65的活性和JAK-STAT信号转导通路中重要底物STAT3蛋白的表达,起到抑制类风湿性关节炎血管新生的作用。