广州地区HCMV临床病毒株UL137 基因的结构 特征与多态性

 【目的】 研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒(HCMV) 临床低传代分离株 UL137 基因的结构特征与基因多态性? 【方法】 从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株,经多重PCR鉴定后分别命名为HCMV D2?D3和D52?对3株临床分离株进行HCMV UL137基因全序列PCR扩增,PCR产物纯化后进行基因克隆,构建HCMV UL137-pMD18-T重组质粒;基因测序;将HCMV UL137基因序列呈报GenBank,并进行基因生物信息学分析?【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株?克隆测序后呈报GenBank并被收录,收录序列号分别为:DQ180388?DQ180376?DQ180360?通过序列分析,结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守,同源性在96.91%～100%之间,其变异均为碱基替换;编码蛋白均由96个氨基酸残基组成,同源性在90.63%～100%之间,超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间;编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS?MYS?cAMPs三类,其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守,cAMPs位点仅在5株病毒出现;编码蛋白等电点在11.50～12.00之间,呈强碱性?【结论】 广州地区临床低传代分离株HCMV UL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性?提示HCMV UL137 ORF可能是一个具有重要功能的基因?     

广州地区HCMV临床病毒株UL137基因的结构特征与多态性

【目的】研究广州地区新生儿感染人巨细胞病毒（HCMV）临床低传代分离株UL137基因的结构特征与基因多态性。【方法】从62份被证实为临床HCMV感染的新生儿尿液标本中分离获得3株低传代临床病毒株，经多重PCR鉴定后分别命名为HCMVD2、D3和D52。对3株临床分离株进行HCMVUL137基因全序列PCR扩增，PCR产物纯化后进行基因克隆，构建HCMVUL137-pMD18-T重组质粒；基因测序；将HCMVUL137基因序列呈报GenBank，并进行基因生物信息学分析。【结果】成功从广州地区新生儿感染HCMV患儿体内分离3株HCMV临床病毒株。克隆测序后呈报GenBank并被收录，收录序列号分别为：DQ180388、DQ180376、DQ180360。通过序列分析，结果显示低传代分离株UL137基因DNA序列高度保守，同源性在96．91％～100％之间．其变异均为碱基替换：编码蛋白均由96个氨基酸残基组成，同源性在90．63％～100％之间，超半数的变异发生在第61～81位氨基酸残基之间：编码蛋白翻译后修饰位点包括PKS、MYS、cAMPs三类，其中4个PKS和44～49位的MYS高度保守，cAMPs位点仅在5株病毒出现；编码蛋白等电点在11．50～12．00之间，呈强碱性。【结论】广州地区临床低传代分离株HCMVUL137基因核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列极为保守，但仍存在-定多态性。提示HCMVUL137ORF可能是-个具有重要功能的基因。     

湖南狂犬病毒P基因和M基因分子遗传特征

目的了解湖南省狂犬病毒的分子流行病学特征以及其与疫苗株的差异。方法对4株湖南狂犬病病毒P和M基因同时进行了RT-PCR扩增、克隆和测序。结果同源性分析表明，4株湖南街毒P和M基因核苷酸同源性分别为97．3％-99．4％和98．4％-99．8％；与其它I型狂犬病病毒和疫苗株核苷酸同源性比较，P基因分别为78．4％-90．2％和81．8％-86．8％；M基因的分别为81．8％-92．1％和84．7％-90．6％。4株野毒P和M基因氨基酸同源性分别为98．0％-99．3％和98．5％-99．0％。结论4株病毒P基因和M基因的核苷酸序列及推导的氨基酸序列与我国现用的人用及兽用疫苗株存在一定差异。进化关系表明，4株病毒均为基因I型狂犬病毒；与我国宁夏分离株最近；与其它I型毒株分离自菲律宾和泰国等东南亚的毒株亲缘关系较近；而与翼手目的毒株关系最远。     

广州地区HCMV低传代临床病毒株UL143基因的多态性研究

目的 研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL143基因的多态性.方法 对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株进行HCMV UL143基因全序列扩增,扩增产物克隆到pMD18-T载体上测序,并将其序列与GenBank中公布的其它临床分离株UL143基因一起进行分析.结果 D3株UL143基因因碱基缺失形成多处终止密码无法产生有功能的蛋白:Toledo株UL143基因开放读码框由279个核苷酸组成,编码蛋白由92个氨基酸残基组成;其它临床分离株UL143基因开放读码框均由252个核苷酸组成,DNA序列比较保守,变异均为碱基替换,编码蛋白由83个氨基酸残基组成,氨基酸序列也很保守,不同临床分离株氨基酸变异率为1.2%～2.4%;HCMV UL143蛋白翻译后修饰位点在除Toledo株之外的所有分离株中均高度保守,没有缺失或新增;不同临床分离株UL143蛋白二级结构有所不同;除Toledo株外,其余分离株UL143蛋白的等电点均为8.75.结论 临床低传代分离株HCMV UL143基因DNA及其编码产物的氨基酸序列极为保守,但仍存在一定多态性.     

人巨细胞病毒UL137基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL137基因在先天巨细胞病毒感染临床低传代分离株中的多态性。方法：选择经荧光定量PCR方法检测HCMV-DNA为阳性的临床分离株进行涵盖UL137全序列的UL136，UL138基因全序列PCR扩增，对扩增阳性的标本进行全序列的测序，核实测序结果，拼接出UL137基因编码序列，进行相关分析。结果：经分析获得22株HCMV临床分离株UL137ORF核苷酸序列，核苷酸变异分布于整个编码区，但主要集中在5’端220—290bp处，均为核苷酸碱基替换，无插入及移码突变。在UL137预测编码蛋白氨基酸序列中，新增2个半胱氨酸位点，导致17株临床分离株在71-76位氨基酸出现了N相连豆蔻酰化位点（MYR）的新增，及第90～92位氨基酸硫化cAMP位点的相应缺失。结论：HCMVUL137基因在临床低传代分离株中高度保守，但存在一定的多态性。     

广州地区人巨细胞病毒临床低传代株UL140基因的多态性

目的研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床低传代分离株UL140基因的多态性。方法对3株经多重PCR鉴定的HCMV临床低传代分离株UL140基因进行全序列扩增、克隆、鉴定、测序及呈报Genbank,应用生物信息学方法分析UL140基因翻译后修饰位点、二级结构及等电点。结果成功分离3株HCMV临床病毒株(D2、D3、D52),经鉴定后被Gen Bank收录。序列号分别为:DQ180373、DQ180385和DQ180357。分析显示HCMV临床低传代D2、D3和D52病毒株的UL140基因全长576 bp,其DNA序列比较保守,编码蛋白由191个氨基酸残基组成,HCMV UL140蛋白翻译后修饰位点在所有分离株中均比较保守;所有株外,其余分离株UL140蛋白的等电点均在4.88-5.12之间。结论广州地区人巨细胞病毒UL140基因及其编码的氨基酸序列相对保守,但仍存在一定的多态性,与Toledo相比,本地区分离得到病毒株具有其明显差异,这一差异可能对HCMV临床感染与致病机制研究具有重要影响。     

人巨细胞病毒UL145基因在先天感染患儿临床株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL145序列在先天感染患儿临床株中的基因多态性，探讨HCMV基因多态性与先天感染引起的不同临床症状之间的关系。方法：对16株临床低传代分离株和15株未传代临床株的HCMV临床标本分别进行UL145全序列PCR扩增，对PCR扩增阳性的31例标本进行序列测定及分析，并且与9株已在GenBank递交的HCMVUL145序列进行比较分析。结果：序列分析结果表明31株HCMV临床株的UL145基因是高度保守的。所有临床株的HCMVUL145开放阅读框架均为393bp，编码蛋白含有130个氨基酸。所有临床株的核苷酸同源率为95．9％～100％，编码蛋白的同源率为97．7％～100％。临床症状不同的患儿其HCMVUL145基因及其编码蛋白具有相似的结构。所有先天感染患儿临床株的UL145编码蛋白具有蛋白激酶C（PKC）磷酸化功能位点和酪蛋白激酶（CK2）磷酸化功能位点。结论：HCMVUL145基因在临床株中是高度保守，未发现其与HCMV先天感染不同临床症状间存在明显的关系。HCMV UL145基因的高度保守性在先天感染中具有重要作用。     

人巨细胞病毒UL135基因在临床低传代分离株中的多态性研究

目的：研究人巨细胞病毒（HCMV）UL135基因编码序列在临床低传代分离株中的多态性，探讨HCMV基因多态性与其感染引起不同临床疾病之间的关系。方法：对29株经荧光定量PCR方法检测HCMV．DNA为阳性的临床低传代分离株的细胞培养上清液进行HCMVUL135全序列PCR扩增，并对PCR扩增阳性的25例标本进行序列测定及分析。结果：29株临床低传代分离株有25株PCR扩增阳性。25株分离株UL135开放读码框架（0RF）长度均与Toledo株相同，其核苷酸的变异率为0．1％-2．6％。与Toledo株相比，部分分离株具有氨基酸翻译后修饰位点的新增或缺失。25株临床分离株UL135蛋白质二级结构预测结果显示了第28位、313—317位、161—163位、171位氨基酸均有蛋白质结构二级的改变。结论：25株HCMV临床低传代分离株UL135基因及其编码产物的氨基酸序列比较保守，但仍存在一定程度的多态性，未发现UL135基因的变化与HCMV先天感染导致的不同疾病存在着相关联系。     

广东流行的三株登革1型病毒包膜蛋白基因的序列测定与分析

目的通过对广东省不同地区、不同流行期间分离的三株登革1型病毒(DVI)的结构蛋白E基因进行序列测定及分析．了解各流行株之间的遗传差异，追踪其可能的传染来源：方法应用RT-PCR技术扩增病毒的结构蛋白E基因，克隆到PMD18-T载体．转化JM109宿主菌，挑取阳性克隆进行鉴定及序列测定，应用计算机软件与国内外参考及流行株进行同源性分析．并绘制基因系统发生树：结果3株DVI病毒E基因序列长度均为l485bp，编码495个氨基酸，核苷酸序列同源性在91％～98％之间、推测的氨基酸序列同源性在94％～99％之间：GD23／95与A88核苷酸(氨基酸)同源性为95％(98％)，与其他株的同源性相对较低，2株属同一基因型；GD14／97和GD05／99与Cambodia共享序列非常接近．3株同属另一基因型。结论广东省1997、1999和1995年流行的登革热可能来自境外不同的疫源地。     

肾综合征出血热患者流产胎儿分离毒株84FLi的全基因序列分析

目的：克隆和测定汉滩病毒疫苗生产株84FLi的全基因组序列,了解其分子基础。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）,分节段扩增84FLi株L、M和S基因片段的cDNA,直接用PCR产物或克隆人pMD18-T载体后进行测序。结果：84FLi株L、M、S3个片段的全基因组序列为6533,3616和1688个核苷酸,分别编码2151,1135,429个氨基酸。A、C、G、T4种核苷酸分别为3830,2050,2510和3447个,GC含量为38．52％,AT含量为61．48％。序列同源性分析表明84FLi株与分离自广州的RG9株和分离自安徽的Chen4株高度同源。S片段核苷酸的同源性99．6％。与HTNV的国际标准毒株76－118的3个片段核苷酸同源性分别为83．7％、84．0％和87．2％,氨基酸同源性分别为97．5％、96．0％和97．9％。结论：84FLi株属于汉滩型病毒,并与分离自国内的汉滩病毒同源性较高,与中国株Chen4株和RG9株属于同一亚型。     

饮料——多维益寿津对血脂影响

为观察饮料——多维益寿津对血脂的影响,在10只兔和278人进行了试验。结果证实:饮料可减少喂兔胆固醇而引起的血清T-C升高,对T-C,HDL-C,T-C/HDL-C异常的人服饮料6周后其均值都转为正常,TG虽未转为正常,但降低亦显著(P<0.05),对血脂正常的人服饮料后的均值,仍都在正常范围内。血脂异常人服饮料后转正常者为T-C62％,HDL-C64％,T-C/HDL-C80％,TG44％,血脂正常人服后转为异常者,依次是0,7％,0,19％。     

颚口线虫的研究

报告对颚口线虫进行有关学科的综合研究。结果:生物学方面,据SEM显示,江西地区猪胃寄生颚口线虫确为刚刺颚口线虫。流行病学方面,对长江中下游流域和湖泊水域地区终宿主和中间宿主进行调查,发现终宿主——猪的成虫阳性率8.22％(131/1592),猫胃未见成虫;中间宿主——淡水鱼体内     

甲状腺激素低下对小鼠脑β-肾上腺素能受体的影响

为证实甲状腺激素对中枢神经系统的影响与β受体活动的关系,本文采用内服甲基硫氧嘧啶制作小鼠低甲状腺激素的模型,再用放射配基结合分析法测定小鼠脑β受体最大结合容量(Bmax)和亲和力(KD)的变化。并以助阳药进行实验性治疗。结果表明:脑组织B受体Bmax较对照组显著减少(p<0.00     

氯烯雌酚醚对继发闭经妇女性腺轴功能的影响

选择24例继发闭经妇女，其中，卵巢早衰7例；下丘脑性闭经9例；多囊卵巢综合征8全忽有患者均用氯烯雌酚醚（泰舒）治疗，于治疗前、后，作黄体释放激素垂体兴奋试验；用放射免疫法测促卵泡素，黄体生成素、血清促乳素、雌二醇。结果提示，泰舒有类似甾体雌激素样的正负反馈效应。其作用与血清雌二醇水平有关。     

大鼠血脑锰含量与中脑基底神经节中5-羟色胺多巴胺的关系

16只大鼠,随机分4组,其中1组空白对照,3组均腹腔注射硫酸锰染毒后,测血锰和中脑、基底神经节中5-羟色胺、多巴胺、锰的含量。发现血锰含量与5-羟色胺呈负相关(P<0.01和 P<0.05);与多巴胺含量相关不明显(P>0.05)。中脑和基底神经节中锰含量与多巴含量没有相关关系(P>0.05)。     

氯化钐、氯化镨对大鼠肝脏形态及LPO、SOD活性的影响

本实验采用不同途径给予断乳Ｗｉｓｔａｒ大鼠小剂量（０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ）氯化角钐（ＳｍＣｌ３）、氯化镨（ＰｒＣｌ３）后，测定了肝脏中过氧化脂质（ＬＰＯ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的含量，观察了肝脏的超微结构。结果表明：ＳｍＣｌ３和ＰｒＣｌ３均使肝脏中ＬＰＯ活性降低、ＳＯＤ活性升高，二者比较ＰｒＣｌ３的作用更为明显，肝脏未见明显形态学改变。     

垂体瘤45例疗效分析

本文分析了45例垂体瘤的治疗,经随访总控制率为78％。并就治疗方法,放疗剂量与疗效的关系进行了讨论。认为该病宜首选放疗,其放疗剂量以4000—5000rad较合适。复发后可行放疗或手术治疗。     

接触苯女工外周血淋巴细胞微核率观察

报道63名苯作业工人外周血淋巴细胞微核率的变化,发现笨暴露者微核率非常显著地高于对照组(P<0.01),且接触相似浓度水平的笨作业者微核率变化存在着性别差异,女工徽核率高于男性工人(P<0.01),差异非常显著。     

不同保存液对离体胎鼠脑组织SOD MDA含量及超微结构的影响

观察了室温与4℃条件下,含钙拮抗剂和不含钙拮抗剂的不同保存液对胎鼠脑组织超微结构的影响;并利用超氧物岐化酶(soD)和丙二醛(MDA)为指标,观察了不同保存液保存的离体胎鼠脑组织中自由基和脂质过氧化水平的变化。结果揭示低温、低钙和钙拮抗剂有利于离体胎鼠脑组织的保存。     

儿童坏疽性皮炎7例分析

报道儿童坏疽性皮炎7例,年龄最小3个月,最大10岁。并就其病因、临床表现、治疗等进行了初步分析。