滨蒿内酯对豚鼠哮喘模型的炎性介质抑制作用

目的：研究滨蒿内酯（Seo）对豚鼠哮喘的抗炎作用及机制。方法：制备迟发性哮喘豚鼠模型，免疫组化法检测豚鼠血浆和支气管肺泡灌洗液（BALF）中白介素5（IL-5）含量；电镜法对豚鼠肺组织细胞溶酶体磷脂酶A：（PLA2）进行染色，井通过图像分析定量检测其含量。结果：哮喘组IL-5及PLA2的含量与正常对照组比较明显增高（P〈0．05）；提前雾化给予42mg／L，340mg／L的Seo组与哮喘模型组比较明显降低IL-5及PLA2含量（P〈0．05）。结论：Seo可能通过抑制IL-5及PLA2发挥其对支气管哮喘的作用。     

红细胞生成素对血透患者免疫功能影响的临床研究

本文对10例血透患者接受重组人红细胞生成亲（rHuEPO）治疗前后血红蛋白（Hb）水平和PHA诱导T淋巴细胞转化测定、IL－2诱生能力测定进行了观察,结果经rHuEPO治疗后,患者Hb和淋巴细胞转化功能及IL－2活性均有所增强。结果表明：血透患者T淋巴细胞转化功能和IL－2的诱生能力低下与贫血有关,rHuEPO提高其活性的作用是通过改善贫血而实现的。     

平哮合剂对哮喘豚鼠气道T淋巴细胞凋亡的影响

目的：通过动物实验观察平哮合剂的疗效交探讨其作用的分子机制。方法：采用卵蛋白诱导的豚鼠哮喘模型以平哮合剂治疗，治疗1周后，观察其对哮喘潜状期的影响，并与氨茶碱治疗组进行比较。采用流式细胞仪分析豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中T淋巴细胞的凋亡率。结果：平哮合剂能显延长哮喘豚鼠的诱喘潜伏期，作用与氨茶碱相当（P＞0.05）。哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞的凋亡率与正常组比较有显性差异（P＜0.01），平哮合剂可显提高哮喘豚鼠BALF中T淋巴细胞凋亡率。结论：平哮合剂有明确的平喘作用，其途径之一可能是通过促进气道粘膜中淋巴细胞的凋亡而实现的。     

茴香霉素对小鼠T淋巴细胞活性的调节

目的：研究茴香霉素对小鼠T淋巴细胞活性的影响。方法：通过MTT法检测ConA诱导的T淋巴细胞增殖能力;采用ELISA测定小鼠T淋巴细胞IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌水平。结果：高、中、低茴香霉素剂量组能够抑制T淋巴细胞的增殖能力（与对照组相比P〈0.05,P〈0.01）;各浓度组茴香霉素对小鼠T淋巴细胞IL-2、IL-4及IFN-γ的分泌水平均有抑制作用（与对照组相比P〈0.05,P〈0.01）。结论：茴香霉素对T细胞的增殖及其活性有明显抑制作用,可能为治疗免疫反应性疾病提供新的策略。     

环孢菌素A对哮喘气道炎症影响的实验观察

目的：观察环孢菌素A（CSA）对哮喘气道炎症的影响。方法：将健康豚鼠随机分为健康组、哮喘组与CSA组,分别收集肺泡灌洗液计数细胞总数及分类,应用酶联免疫法（ELISA）检测血清sIL-2R和IL-5水平,透射电镜观察气道上皮细胞损伤及粘膜内嗜酸粒细胞浸润程度,将3组结果进行比较。结果：哮喘组豚鼠BALF细胞总数及分类、血精sIL-2R、IL-5水平明显高于健康组,CAS组比哮喘组明显降低。透射电镜见健康组豚鼠气管与支气管粘膜上皮正常,哮喘组有明显炎性改变,CSA组改变轻微。结论：CSA对哮喘气道炎症具有明显抑制作用,其机理可能与抑制淋巴细胞活化,减少IL-4、IL-5的合成有关。     

卫氏并殖吸虫感染及IL-2对小鼠细胞免疫功能影响的观察

本文以抗小鼠L_3T_4、LyT_3单克隆抗体检测小鼠脾细胞中T_h、T_s数、~3H-TdR掺入法淋巴细胞转化试验及白细胞介素2(IL-2)活性测定的方法,对经口接种卫氏并殖吸虫囊坳小鼠及感染此虫并接受IL-2治疗的小鼠进行了细胞免疫功能的动态观察.结果显示感染小鼠脾细胞中T_h减少、T_s增多;T_h/T_s比值降低.Con-A诱导的淋巴细胞转化受抑制.IL-2诱导及活性测定中,靶细胞掺入cpm值降低.提示卫氏并殖吸虫的感染可使小鼠细胞免疫功能紊乱、降低.接受IL-2治疗组,脾T淋巴细胞转化及IL-2活性水平高于感染组,接近正常对照组;提示IL-2对增强感染卫氏并殖吸虫的小鼠细胞免疫功能有一定作用.     

CTLA4-Ig对支气管哮喘患者外周血IL-13的影响

目的：通过对支气管哮喘患者外周血T细胞表达IL-13的情况及CTLA4-Ig对其影响的研究,进一步明确支气管哮喘的免疫发病机制并为治疗支气管哮喘寻求一条安全有效的途径。 方法：用ELISA和逆转录PCR方法测定支气管哮喘患者外周血在CTLA4-Ig作用前后T细胞表达IL-13的情况。 结果：ELISA法测得哮喘患者IL-13明显高于正常对照组（P<0.01）,CTLA4-Ig明显抑制了IL-13的分泌（P<0.01）。 正常对照组PHA刺激条件下用逆转录PCR方法测不出IL-13的表达;哮喘组在PHA作用下,T细胞表达IL-13的量增加（P<0.01）;同在PHA刺激情况下,CTLA4-Ig使IL-13表达明显下降（P<0.01）。 结论：IL-13在支气管哮喘发病中起重要作用,CTLA4-Ig对T细胞产生IL-13起抑制作用,对哮喘的治疗具有临床意义。     

藏药结血蒿水提物的免疫抑制作用研究

目的研究结血蒿水提取物（AV-ext）对小鼠免疫反应的抑制作用。方法运用淋巴细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应观察AV-ext体外应用和口服给药对小鼠脾细胞增殖的影响；运用小鼠脾细胞增殖试验，观察AV-ext体外应用对小鼠活化脾细胞分泌IL-2的影响；用明胶酶谱法和粘附分析法，观察AV-ext对小鼠活化T淋巴细胞移动和粘附能力的影响。结果AV-ext在1μg／mL-100μg／mL剂量范围内对脾细胞无明显的细胞毒性，但对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠脾细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应具有明显的抑制作用，对小鼠活化脾细胞分泌IL-2、小鼠活化T淋巴细胞分泌基质金属蛋白酶9（MMP-9）及粘附能力有显著的抑制作用；连续7d每日口服给予150mg／kg和300mg／kg的AV-ext，能明显抑制小鼠脾细胞增殖及活化脾细胞分泌MMP-9。结论AV-ext能显著抑制小鼠的细胞免疫反应。     

肉苁蓉多糖的纯化及其对T细胞功能调节的研究

研究肉苁蓉主要成分之—─—多糖对小鼠胸腺T细胞的功能调节。方法：采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖，以DEAE－SephadexA－50和SephacrylS－200柱层析，获得肉苁蓉多糖（CDPS）。再采用噻唑蓝比色法（MTT）观察CDPS对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖反应的影响及对正常小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的影响。结果：CDPS纯化后经SephacrylS－200鉴定为单一对称峰。CDPS体外实验，在12．5～200μg／ml浓度范围内，有单独和协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用（P＜0．01）。CDPS在100μg／ml浓度时，能显著提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的能力．其IL－2活性明显高于对照组（P＜0．01）。结论：肉苁蓉多糖能增加小鼠脾、胸腺淋巴细胞的增殖反应，且与ConA、PHA有协同刺激小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用；并能显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL－2。     

蠲痹颗粒醇提物调控MAPK信号转导抑制T细胞活化效应机制的研究*

目的 探讨蠲痹颗粒醇提物（JBKL）在丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号转导通路中抑制T细胞活化的效应机制，揭示扶阳学派应用扶阳理论治疗类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的现代免疫学机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测JBKL对伴刀豆球蛋白（Con A）、脂多糖（LPS）诱导T、B脾淋巴细胞增殖活性及细胞毒性的影响；建立体外抗CD3单克隆抗体（Anti-CD3 mAb）诱导的T细胞活化模型，MTT检测JBKL对T细胞体外活化增殖的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）测定干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-17A（IL-17A）、IL-10和IL-6在细胞上清中的含量；蛋白质印迹法（Western blot）检测体外纯化CD4+ T细胞中ERK和p38蛋白的磷酸化水平。结果 JBKL在浓度30 μg/mL时显著抑制Con A、Anti-CD3 mAb和LPS诱导的T细胞和B细胞增殖功能；JBKL在浓度（3~30） μg/mL时对正常脾淋巴细胞无明显的细胞毒性作用，明显下调IFN-γ、IL-17A和促炎因子IL-6的含量，而促进IL-10的分泌；JBKL在浓度100 μg/mL时抑制MAPK信号通路，可降低纯化CD4+ T细胞磷酸化ERK和p38蛋白的表达。结论 JBKL阻碍T细胞介导的免疫反应，减少MAPK信号通路磷酸化ERK和p38蛋白表达，可能是其治疗RA的重要分子机制之一。     

滨蒿内酯对哮喘豚鼠气道炎症的抑制及其清除氧自由基作用

目的 :研究滨蒿内酯 (Sco)对豚鼠哮喘的治疗作用。方法 :采用卵白蛋白 (OA)致敏的豚鼠迟发哮喘模型 ,观察哮喘豚鼠给药后特异性引喘潜伏期 ,支气管肺泡灌洗液 (BALF)白细胞分类计数和支气管形态学改变 ,并检测血浆和肺组织超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)水平。结果 :Sco(2 0mg/kg)腹腔注射 ,可明显延长哮喘豚鼠特异性引喘潜伏期 (P <0 .0 1) ,减少BALF中各细胞组分 (P <0 .0 1) ,减轻支气管炎症性改变 ,也可使哮喘豚鼠血浆和肺组织SOD、MDA水平趋于正常 (P <0 .0 1)。结论 :Sco具有明显的平喘作用 ,此作用是通过抗炎和清除活性氧来实现的     

滨蒿内酯对ryanodine介导哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放的抑制作用

目的该实验就滨蒿内酯(Scoparone,Sco)降低气道平滑肌细胞(airway smooth muscle Cells,ASMC)细胞内钙浓度(cytoplasmic Ca2+concentration,[Ca2+]i)的途径及平喘作用的机理进行初步的探讨。方法建立卵蛋白诱导的哮喘豚鼠模型,通过离体豚鼠气管环的舒缩实验和测定培养的ASMCs[Ca2+]i浓度的方法,分析Sco对哮喘豚鼠ryanodine受体介导的内钙释放的影响。结果显示在细胞外含钙或无钙时,预先给予Scoparone可抑制5μmol/L ryanodine引起的正常、哮喘组豚鼠离体气管环收缩反应;Scoparone可明显降低对照组及哮喘组豚鼠原代培养ASMCs[Ca2+]i水平且哮喘组更为明显(P<0.01);Scoparone明显降低原代培养的ASMCs[Ca2+]i对5μmol/L ryanodine的反应性(P<0.01)。结论 Sco明显降低正常和哮喘豚鼠原代培养的ASMCs[Ca2+]i,对后者的作用明显大于前者;Sco对ASMCs的[Ca2+]i降低作用主要是通过抑制细胞内钙释放途径实现的,明显抑制哮喘豚鼠ASMCs ryanodine受体介导的内钙释放。     

小鼠免疫细胞活性与光滑假丝酵母菌胞外多糖关系的研究

目的:探讨光滑假丝酵母菌胞外多糖对小鼠免疫细胞活性的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测该胞外多糖对小鼠脾细胞增殖的刺激作用和对小鼠脾细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)和干扰素-γ(IFN-γ)的刺激作用,并观察该胞外多糖对小鼠NK细胞杀伤活性的影响。结果:产自海南红树林的光滑假丝酵母菌胞外多糖在体外能显著刺激小鼠脾细胞增殖;显著增强小鼠脾细胞分泌IL-2和IFN-γ的能力;另外该胞外多糖还具有促进NK细胞杀伤K562细胞的能力。结论:产自海南红树林的光滑假丝酵母菌胞外多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。     

Effects of cryptotanshinone on immune functions in rats with adjuvant arthritis

Background Cryptotanshinone （CT） was originally isolated from the dried roots of Salvia militorrhiza, an herb that is used extensively in Asian medicine and the extracts of this herb have been used in the treatment of several pathologies, including cardiovascular diseases, hematological abnormalities, hepatitis, and hyperlipidemia, but no studies had been carried on the treatment for rheumatic diseases with it. This study aimed to investigate the effects of cryptotanshinone on immune functions in rats with adjuvant arthritis （AA）. Methods Complete Freund＇s adjuvant was used to induce AA in rats. Thymus and spleen was aseptically taken from normal rats and the AA rats. Then a thymus lymphoid cell suspension, splenic lymphoid cell suspension and peritoneal macrophage cell suspension were prepared. After adding CT （0.1 ug/ml, 1.0 ug/ml, 10 ug/ml, 100 ug/ml, 1000 ug/ml） into the suspension, T and B lymphocytes proliferation was determined by 3-（4,5-2 dimethylthiazal-2yl）2,5- diphenyltetrazoliumbromide （MTT） assay. And the activities of interleukin-1 （IL-1） and IL-2 were measured by the mouse lymphocytes proliferation assay. Results Thymic T and splenic B lymphocyte proliferation of the AA rat was significantly lower, and could be stored through using CT in vitro. CT （100ug/ml and 1000ug/ml） increased T or B lymphocytes proliferation in vitro （P 〈0.01）. In AA rats, the levels of IL-1 released by abdominal PMφ significantly increased whereas the level of IL-2 released by T cells decreased in vitro. CT （1000 pg/ml） decreased the production of IL-1 and promoted production of IL-2 in vitro （P 〈0.05）. Conclusions CT can ameliorate the abnormal immunological functions in AA rats.     

Nuclear factor- κB in signal conduction of protein kinase C in T lymphocytes from an asthmatic guinea pig model

Objective To explore the role of nuclear factor- κB (NF- κB) in the signal conduction of protein kinase C (PKC) regulated proliferation, apoptosis and expression of Th2 cytokines - interleukin- 4 (IL- 4) and interleukin- 5 (IL- 5) of T lymphocytes in the bronchial alveolus lavage fluid (BALF).Methods T lymphocytes were isolated and purified from BALF of asthmatic guinea pigs in normal and asthmatic groups, and were stimulated with PKC agitator phorbol 12- myristate 13- acetate (PMA) and NF- κB inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC), respectively.The expressions of NF- κB, IL- 4 and IL- 5 mRNA and protein, the proliferation and apoptosis of T lymphocytes were observed by immunohistochemistry, in situ hybridization, ELISA, MTT and TUNEL, respectively. Results The activation of NF- κB, proliferation response, and expression of IL- 4 and IL- 5 mRNA and protein in T lymphocytes stimulated by PMA were significantly higher than those of their blank control (P&lt;0.01), while those indexes of T lymphocytes stimulated by PMA and PDTC simultaneously were significantly lower than those stimulated by PMA alone (P&lt;0.01).The apoptotic index of T lymphocytes stimulated with PMA were significantly lower than that of their blank control (P&lt;0.01), and the apoptotic index of asthmatic guinea pig T lymphocytes stimulated with PMA and PDTC simultaneously were significantly higher than that stimulated by PMA alone (P&lt;0.01).The significant positive correlations were found between the activation of NF- κB and the proliferation (r=0.64, P&lt;0.001), and the expression of IL- 4 and IL- 5 mRNA and protein of T lymphocytes, respectively (r=0.55-0.68, P&lt;0.001).There was also significant negative correlation between the activation of NF- κB and apoptosis of T lymphocytes (r=0.62, P&lt;0.001). Conclusions NF- κB may participate in the signal conduction of PKC regulated proliferation, apoptosis and expression of IL- 4 and IL- 5 of T lymphocytes in asthma.The activation of NF- κB in PKC signal conduction pathway of T lymphocytes may play an important role in the pathogenesis of asthma.     

蝙蝠蛾拟青霉抗排斥反应机理的初步研究

选用蝙蝠蛾拟青霉人工发酵培养物(简称PHC),采用~(125)IUdR释放法和B淋巴细胞酵母多糖补体成环法(简称 ZAC),分别观察不同浓度的PHC对同种异体植皮鼠,在植皮后不同时间免疫功能的变化。结果表明:100％、200％PHC 显著抑制脾T淋巴细胞转化反应和NK细胞活性;白细胞介素2(IL-2)诱生液能显著解除这种抑制作用。实验浓度的PHC对ZAC无显著性影响。提示:PHC是一种免疫抑制剂,可能通过减少IL-2而选择性抑制T淋巴细胞系统。     

骨髓间充质干细胞体外诱导免疫调节机制的探讨

目的:观察骨髓间充质干细胞(BM MSCs)对体外活化T细胞的免疫调节作用。方法:提取Wistar大鼠BM MSCs及新鲜脾淋巴细胞做共培养。实验分3组,3个时间点:分别为0、24、48 h脾淋巴细胞/BM MSCs+刀豆蛋白A(ConA)(实验组),脾淋巴细胞+ConA(对照组),单纯淋巴细胞组(空白组)。MTT检测T淋巴细胞活性,ELISA检测细胞因子TNF-α、IL-10及TGF-β水平,流式检测Foxp3+调节性T细胞表达率。结果:(1)与对照组相比,实验组24、48 h在2个时间点T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05);(2)与对照组相比,实验组TNF-α在2个时间点有显著降低(P<0.05),实验组IL-10、TGF-β表达水平有显著升高(P<0.05);(3)实验组Foxp3+T调节细胞表达率高于对照组;(4)随着时间延长,空白组及对照组T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05),实验组T淋巴细胞活性随时间延长差异无统计学意义。结论:BM MSCs可以抑制T淋巴细胞活化,并通过减少炎症因子TNF-α的释放抑制免疫应答。另外,BM MSCs可通过自分泌及诱导T调节细胞产生并分泌免疫抑制因子IL-10、TGF-β下调免疫反应,产生免疫耐受。     

血小板激活因子对小鼠脾细胞增殖以及产生IL—2,NKCF和CSF的影响

本文研究了PAF对BALB/c小鼠脾细胞增殖以及产生IL-2,NKCF和CSF的影响。[~3H]TdR掺入法检测脾细胞增殖结果表明PAF在10~(-10)～10~(-7)mol/L范围内显著抑制ConA诱导的脾细胞增殖。用CTLL-2细胞测定IL-2,YAC-1细胞检测NKCF,小鼠骨髓细胞测定CSF,结果表明当PAF浓度为10~(-7)mol/L时,三种因子的产生均被明显抑制。PAF对小鼠脾细胞功能的抑制可能与其广泛的病理生理作用有关。