染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

目的 探讨染料木黄酮对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备的帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用.方法 将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组.用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)及多巴胺转运体(DAT) 基因的表达水平.应用高效液相色谱法检测纹状体(Str)内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(DOPAC)含量.结果 MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低,染料木黄酮预处理组可逆转上述改变(F=20.31、13.19,P<0.01).MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少,应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P<0.01).结论 染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用.     

乌鸡白凤丸有效成分对帕金森病模型小鼠的神经保护作用

目的探讨乌鸡白凤丸有效成分（BFP）对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）诱致C57BL小鼠黑质神经元凋亡的保护作用及其可能机制。方法C57BL小鼠连续5d皮下注射MPTP（30mg／kg）制备帕金森病小鼠模型。给予BFP预处理后，用酪氨酸羟化酶（TH）免疫组织化学法观察黑质神经元的变化；同时应用免疫组织化学法检测Bax蛋白表达; 应用高效液相-电化学方法检测纹状体（Str）多巴胺（DA）及其代谢产物二羟基苯乙酸（DOPAC）和高香草酸（HVA）的含量变化。结果BFP预处理能使黑质致密带（SNc）TH免疫阳性神经元数目较MPTP组明显增多，而Bax蛋白表达较MPTP组明显减少；可使Str区DA及其代谢产物DOPAC、HVA含量明显增加。结论BFP有效成分可以拮抗神经毒性物质MPTP对C57BL小鼠黑质多巴胺能神经元的损伤，其作用机制可能与其抗凋亡作用有关，Bax表达的降低可能是BFP抗凋亡作用的途径之一。     

人参皂苷Rg1拮抗MPTP诱导小鼠黑质中铁增高的作用

目的研究人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法 C57BL6小鼠随机分为正常对照组(NS,i.p.)、MPTP组(30 mg/kg×5 d,i.p.)及Rg1(5 mg/kg×8 d,i.p.)预处理组。应用免疫组织化学法、Perls’铁染色、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以及图像分析等技术观察黑质内多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)免疫反应活性变化、铁染色阳性细胞数的变化和DAT mRNA的表达水平的变化,用高效液相色谱法(HPLC)检测小鼠纹状体内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid,HVA)含量。结果与正常对照组相比,MPTP组黑质内铁染色阳性细胞数增高以及纹状体内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少;与MPTP组相比,Rg1预处理组黑质内铁染色阳性细胞数降低以及纹状体内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显增加(P<0.01)。与正常对照组相比,MPTP组黑质内DAT免疫反应活性和DAT mRNA的表达明显降低(P<0.01);与MPTP组相比,Rg1预处理组黑质内DAT免疫反应活性和DAT mRNA的表达有所增高(P<0.05)。结论 Rg1对MPTP致PD小鼠黑质DA能神经元的损伤具有一定的保护作用,其机制可能与Rg1能通过降低MPTP诱导的铁过多聚积从而拮抗氧化应激反应有关。     

烟碱对帕金森病模型小鼠多巴胺释放的影响及机制探讨

目的：研究烟碱对帕金森病（Parkinson’s disease,PD）模型小鼠不同脑区多巴胺（dopamine,DA）的影响及其机制。方法:应用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP）制备PD小鼠模型,应用爬杆实验检测小鼠运动功能,应用酪氨酸羟化酶免疫组化观察小鼠中脑黑质致密部（substantia nigra pars compacta, SNpc）多巴胺能神经元数目,应用高效液相色谱法检测小鼠不同脑区（纹状体、海马、皮质）DA的含量,应用蛋白质免疫印迹检测小鼠纹状体多巴胺转运体（dopamine transporter,DAT）的变化。结果：①烟碱可显著改善MPTP导致的野生型小鼠运动功能障碍;②烟碱可显著改善MPTP诱导的野生型小鼠中脑SNpc多巴胺能神经元的丢失;③烟碱可显著减轻MPTP所致的野生型小鼠纹状体DA含量的减少,烟碱对α7-烟碱型乙酰胆碱受体（nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs）敲除型（knockout,KO）小鼠MPTP模型中纹状体DA含量的减少无明显恢复作用,烟碱对野生型小鼠或α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中海马和皮质中的DA含量无明显影响。④烟碱可显著增加野生型小鼠MPTP模型中纹状体DAT的含量,烟碱对α7-nAChRs KO小鼠MPTP模型中的纹状体DAT的减少无逆转作用。结论：烟碱可以激活α7-nAChRs抑制PD模型小鼠SNpc区多巴胺能神经元的死亡,提高纹状体DAT水平;促进纹状体DA含量增加,从而在PD模型小鼠中发挥神经保护作用。     

PD小鼠模型的多巴胺转运蛋白mRNA转录

目的分析帕金森病(PD)小鼠模型中脑黑质多巴胺转运蛋白(DAT)基因转录状况.方法用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)腹腔注射C57BL小鼠,制作PD鼠模型,分10、18d两组;用相同体积生理盐水腹腔注射作为正常对照.以Dot-Blot方法检测小鼠中脑黑质部位DAT基因转录.结果与正常对照相比,MPTP组小鼠行为异常,中脑黑质部位TH(+)细胞减少,DATmRNA转录降低(P＜0.05).正常对照组中小脑部位DAT mRNA转录低于黑质部位(P＜0.05).结论多巴胺能神经元及其DAT mRNA转录量随PD的发生而减少或降低.DAT mRNA转录量可反映残存多巴胺神经元量或功能状况,反映PD的状况,高DAT mRNA转录的细胞对MPTP毒物敏感性增强.     

人参皂苷Rg1和IGF-Ⅰ对帕金森病小鼠DA能神经元作用

目的观察人参皂苷Rg1、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）及二者合用对小鼠黑质纹状体系统多巴胺（DA）能神经元的神经保护作用。方法 C57BL/6去卵巢（OVX）小鼠50只,采用腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）方法制备帕金森病（PD）模型小鼠,随机分为对照组、MPTP组、Rg1组（10mg/kg腹腔注射）、IGF-Ⅰ组（0.5g/L侧脑室注射）、Rg1＋IGF-Ⅰ组,每组10只。应用高效液相色谱法检测各组纹状体内DA的含量,免疫组织化学染色法检测黑质内酪氨酸羟化酶免疫阳性（TH-IR）神经元数目。结果 MPTP组纹状体内DA含量、黑质TH-IR神经元数目较对照组明显降低,差异有显著性（F=21.23、45.45,q=11.67、14.24,P〈0.01）。Rg1组、IGF-Ⅰ组及Rg1＋IGF-Ⅰ组纹状体DA含量、黑质TH-IR神经元数目较MPTP组明显升高,差异有显著性（q=5.66～17.91,P〈0.01）;Rg1＋IGF-Ⅰ组与Rg1组、IGF-Ⅰ组比较,差异有显著性（q=4.37～8.74,P〈0.05）。结论 Rg1、IGF-Ⅰ及二者合用均能够对抗MPTP对黑质纹状体系统DA能神经元的毒性作用,且Rg1与IGF-Ⅰ合用具有协同作用。     

平帕汤对PD模型小鼠多巴胺能神经元保护作用的研究

目的:探讨平帕汤对帕金森病(PD)模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法:在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的PD小鼠模型基础上,随机分为正常组,模型组和平帕汤组,采用爬杆测试法观察平帕汤对PD小鼠行为特征的影响;采用高效液相电化学法(HPLC-ECD)检测各组小鼠纹状体内多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量;采用免疫组化染色法观察各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞表达的变化。结果:末次注射MPTP后,与正常组相比,模型组爬杆时间和评分明显增加(P0.05),平帕汤组显著增加(P0.01);与模型组相比,平帕汤组DA、DOPAC值有上升趋势,DA/HVA值则明显增加(P0.01,P0.05);平帕汤组黑质TH阳性细胞的表达程度明显提高(P0.05或P0.01)。结论:平帕汤能保护帕金森病模型小鼠脑黑质多巴胺能神经元,挖掘其功能潜力,振奋其分泌能力,从而提高脑内黑质纹状体系统多巴胺的浓度,最终达到防治PD的作用。     

自噬诱导剂海藻糖对帕金森症小鼠的治疗作用

目的：探讨自噬诱导剂海藻糖对帕金森症小鼠的治疗作用。方法：使用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶盐酸盐（MPTP）建立小鼠帕金森症模型,通过观察小鼠中脑黑质区多巴胺（DA）神经元数量、纹状体内神经递质多巴胺及代谢产物变化,判断海藻糖治疗帕金森症的作用。结果：（1）免疫组化染色发现MPTP使小鼠黑质区DA神经元数量明显减少。海藻糖干预后可增加DA神经元数量。（2）HPLC检测发现MPTP造成小鼠纹状体中多巴胺明显减少,海藻糖组可增加神经递质及代谢物。结论：海藻糖能减少MPTP造成的黑质区DA神经元丢失,增加纹状体中多巴胺的含量,海藻糖能有效治疗帕金森症。     

乌鸡黑色素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶致亚急性帕金森病模型小鼠的神经保护作用研究

目的 探讨乌鸡黑色素对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）致帕金森病（PD）模型小鼠的神经保护作用及其机制。方法 2013年3月-2014年5月,按照随机数字表法将60只雄性C57/B6小鼠分为对照组（n=10）、MPTP模型组（n=12）和乌鸡黑色素治疗组（n=38）;乌鸡黑色素治疗组又进一步分为10 mg/kg治疗组（n=13）、30 mg/kg治疗组（n=13）和100 mg/kg治疗组（n=12）。对照组小鼠采用0.9%氯化钠溶液灌胃。MPTP模型组和乌鸡黑色素治疗组小鼠腹腔注射MPTP（30 mg/kg,1次/d,共7 d）,同时乌鸡黑色素治疗组小鼠分别灌胃给予不同剂量的乌鸡黑色素（10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg,1次/d,共7 d）。剔除建模不成功小鼠,最后实际入组小鼠分别为对照组10只、MPTP模型组10只、10 mg/kg治疗组10只、30 mg/kg治疗组9只、100 mg/kg治疗组9只。比较各组小鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫阳性纤维的表达变化、黑质致密部TH免疫阳性神经元数及纹状体TH水平。结果 对照组可见大量呈束状、密集、排列规则有序TH免疫阳性神经纤维;MPTP模型组TH免疫阳性神经纤维稀疏、断裂且排列零散无序;乌鸡黑色素治疗组与模型组染色结果相比,仍可见呈束状、较密集、排列较有序的TH免疫阳性神经纤维,尤其以30 mg/kg治疗组最为明显。MPTP模型组、10 mg/kg治疗组、30 mg/kg治疗组、100 mg/kg治疗组黑质致密部TH免疫阳性神经元数低于对照组（P＜0.05）;30 mg/kg治疗组黑质致密部TH免疫阳性神经元数高于MPTP模型组（P＜0.05）。MPTP模型组、10 mg/kg治疗组、30 mg/kg治疗组、100 mg/kg治疗组纹状体TH水平低于对照组（P＜0.05）;30 mg/kg治疗组、100 mg/kg治疗组纹状体TH水平高于MPTP模型组（P＜0.05）。结论 乌鸡黑色素灌胃给药能减缓MPTP诱导的亚急性PD模型小鼠黑质多巴胺能神经元的死亡和纹状体TH免疫阳性神经纤维的丢失,提示口服乌鸡黑色素对于PD模型小鼠有潜在的神经保护作用。     

磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响

目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.     

Genistein对MPTP致帕金森病去势模型小鼠多巴胺能神经元保护作用及其机制研究

目的研究大豆异黄酮活性成分genistein对1一甲基一4一苯基一1,2,3,6一四氢吡啶（1一methy-4-phenyl一1,2,3,6一tetrahydropyridine,MPtP）制备的去卵巢（OVX）帕金森病（Parkinson’sdisease,PD）档型小鼠多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法雌性C57BL6小鼠行双侧去卵巢手术（OVX）后,分为对照组、MPTP组、genistein预处理组和雌激素预处理组。     

甘草黄酮对MPTP帕金森病小鼠多巴胺能神经元的影响

目的 观察甘草黄酮对MPTP帕金森病（PD）小鼠多巴胺（DA）能神经元的影响. 方法 制作MPTP小鼠PD模型,随机分为3组：模型组（每日一次腹腔注射给予25 mg/kg MPTP,连续5次）、空白组（每日一次腹腔注射给予等量生理盐水）和甘草黄酮处理组（除给予MPTP外,每日一次灌胃给予30 mg/kg甘草黄酮,连续7次）.采用行为学观察、免疫组织化学和免疫蛋白印记法观察模型小鼠的行为学表现、DA能神经元数量和腹侧中脑酪氨酸羟化酶（TH）蛋白表达水平.并观察甘草黄酮处理后对上述指标的影响. 结果 模型组小鼠出现PD典型行为学表现,黑质致密部DA能神经元数量（56.2 ±3.5vs152.4±8.6）和腹侧中脑TH含量（3.1 ±0.5 vs14.7±0.9）较对照组显著下降（P＜0.01）.甘草黄酮处理组小鼠行为表现较轻.与模型组相比,黑质致密部DA能神经元的丢失和腹侧中脑TH含量下降均明显改善（P＜0.01）. 结论 甘草黄酮对MPTP帕金森病小鼠DA能神经元具有神经保护效应.     

MK-801诱导的精神分裂症发育模型大鼠脑组织DA,DOPAC,Glu和GABA浓度的变化

目的：通过对MK-801诱导的精神分裂症（schizophrenia,SZ）发育模型大鼠和慢性给药模型大鼠脑组织多巴胺（dopamine,DA）、二羟苯乙酸（dihydroxy-phenyl acetic acid,DOPAC）、谷氨酸盐（glutamate,Glu）和γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）浓度的比较研究,探讨围产期N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体阻断致SZ的神经生化机制。方法：60只新生雄性SD大鼠于出生后6天按批次随机分为SZ发育模型组（MK-801F）、SZ慢性给药模型组（MK-801M）和正常对照组（Control）;SZ发育模型大鼠于出生后7~10d皮下注射MK-801（0.1mg/kg,Bid）,SZ慢性给药模型大鼠于出生后47~60d腹腔注射MK-801（0.2mg/kg,Qd）,对照组大鼠于相应时段注射0.9%的生理盐水。出生后第60天分批进行行为学测试,出生后第63天取各组大鼠大脑内侧前额叶皮质（medial prefrontal cortex,mPFC）和海马组织并匀浆,以高效液相色谱-库仑阵列电化学法检测组织匀浆中的DA,DOPAC,Glu和GABA水平,并计算分析DA和Glu的利用率。结果：SZ发育模型大鼠mPFC和海马DA及DOPAC的浓度较正常对照组明显降低（P〈0.05）;mPFC区GABA浓度和Glu利用率较正常对照组明显降低（P〈0.05）;mPFC区DA浓度较SZ慢性给药模型组明显降低（P〈0.05）;海马DOPAC浓度及DA利用率较SZ慢性给药模型组明显降低（分别P〈0.01,P〈0.05）。结论：SZ发育模型成年大鼠mPFC区DA,Glu和GABA系统功能减退,海马DA系统功能减退。     

胰高血糖素样肽-1类似物对帕金森病模型小鼠运动及多巴胺能神经元的影响

目的 研究胰高血糖素样肽-1类似物（Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质区多巴胺能神经元的保护作用.方法 取10～12周健康雄性C57/BL6小鼠56只,采用随机数字表法随机分为对照组（Control组）,模型组（MPTP组）,单纯注药组（Val8组）与治疗组（MPTP＋Val8组）.MPTP组腹腔注射MPTP （30 mg/kg＆#183;d）,同时Control组给予等体积0.9％生理盐水,Val8组腹腔注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL（25 nmol/kg）,MPTP＋Val8组注射完MPTP后1h后注射（Val8） GLP-1-Glu-PAL,连续8d.每天药物注射完2h后进行游泳实验及转棒实验以观测小鼠行为变化.第8天行为学测试完1h后处死小鼠,免疫组化法检测小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）阳性细胞数.结果 MPTP成功诱导了帕金森病模型,第1天到第8天,MPTP组与Control组相比,小鼠的游泳评分[（1.715±0.143）分]及掉落潜伏期[（68.048±7.823）分]明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,而黑质致密部TH阳性细胞也明显减少（P＜0.01）;MPTP＋Val8组小鼠的游泳评分[（1.120±0.143）分]及掉落潜伏期[（20.546±7.823）分]则优于MPTP组,差异有统计学意义（P＜0.05）,并且TH阳性细胞数显著增多（P＜0.01）.结论 （Val8） GLP-1-Glu-PAL对MPTP所致的帕金森病小鼠黑质区多巴胺能神经元具有保护作用.     

宁心解郁胶囊对慢性抑郁大鼠大脑皮质单胺类神经递质及其代谢产物的影响

目的 观察宁心解郁胶囊对慢性抑郁大鼠大脑皮质单胺类神经递质及其代谢产物的影响.方法 以慢性不可预见性的刺激配合孤养,制备慢性综合应激法抑郁大鼠模型,造模成功的大鼠按随机数字表分为模型组、宁心解郁胶囊高剂量组[10.8mg/（kg·d）]、宁心解郁胶囊中剂量组[3.6 mg/（kg·d）]、宁心解郁胶囊低剂量组[1.2 mg/（kg·d）]、盐酸帕罗西汀组[3.6 mg/（kg·d）].采用HPLC-ECD系统测定各个实验组大鼠大脑皮质中单胺类神经递质,去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）及其主要代谢产物3,4-二羟基苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的表达含量.结果 与空白组相比,模型组NE、DA、5-HT含量显著下降,差异具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.与模型组相比,宁心解郁各剂量组的DA含量均升高;低剂量和高剂量组的5-HT含量升高[分别为（272.15± 129.89） ng/g,（445.08±127.56）ng/g,（375.33±52.38） ng/g];低剂量组和中剂量组的NE含量升高[（408.08±89.55） ng/g,（530.12± 149.87）ng/g,（542.53±96.10） ng/g],中剂量和高剂量组的HVA含量升高,低剂量组的DOPAC含量升高;盐酸帕罗西汀组的5-HT、DA、NE含量升高,差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）.结论 宁心解郁胶囊具有抗抑郁作用,其抗抑郁的作用机制与可调节大脑皮层的单胺类神经递质的含量及其代谢产物有关.     

3-硝基丙酸预处理对多巴胺神经元生存预后影响的研究

目的观察不同3-硝基丙酸（3-Nitroproplonle acid，3NP）预处理方式对黑质多巴胺神经元（Dopaminergic neurons，DA）存活能力的影响，寻求3NP预处理保护黑质DA神经元的最佳预处理方式。方法以6-OHDA为损毁剂建立大鼠在体及离体PD模型。在体3NP预处理组于造模前2h、1d、3d、5d、7d分别腹腔注射不同荆量3NP（10mg／kg、20mg／kg、40mg／kg），观察6-OHDA损毁2周后大鼠的行为学；黑质脑片体系在含0．01mM6-OHDA的人工脑脊液Ⅱ（ACSFⅡ）中加入不同浓度3NP（0．1mM、0．3mM、0．6mM）共孵育脑片至不同时间点（0、5h、1h、2h、3h）。采用免疫组织化学方法检测黑质酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）蛋白表达。结果20mg／kg3NP预处理的各个时间点均可以显著改善APO诱发PD大鼠的旋转行为；同时3NP可以抑制6-OHDA诱导的黑质TH样免疫反应阳性细胞数减少。其中在离体脑片体系中，0．3mM3NP预处理1h、2h时间差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01）；在体试验中20mg／kg3NP预处理的各个时间点差异均有显著性（P〈0．05），其中以3NP预处理3d显著性差异更加明显（P〈0．01）。结论适宜剂量3NP预处理对PD大鼠黑质DA神经元具有保护效应，3NP预处理可能成为延缓DA神经元变性的新策略。