间歇性低氧对大鼠解偶联蛋白2基因表达的影响

目的 探讨间歇性低氧对大鼠脂肪组织中解偶联蛋白2(UCP2)基因表达的影响.方法 将40只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只,分别置于模拟海拔4000米的常温、低氧氧舱中(0天、1天、7天和21天),每天8小时,应用半定量的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠白色脂肪组织(WAT)中UCP2 mRNA的表达水平.结果 大鼠置于低氧环境21天后,其WAT中UCP2 mRNA的表达水平较其他3组显著降低.结论 随着低氧时间的延长,UCP2 mRNA的表达水平降低;UCP2 mRNA表达的降低可能是对间歇性低氧改变的一种适应性反应.     

甲状腺激素对大鼠解偶联蛋白-2基因表达的影响

目的:探讨甲状腺激素对大鼠骨骼肌组织(SM)、肝组织(LV)和白色脂肪组织(WAT)中解偶联蛋白-2(UCP2)基因表达的影响。方法:正常雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组、甲状腺功能亢进(甲亢)组和甲状腺功能低下(甲低)组,应用左旋甲状腺素钠和甲巯咪唑造成大鼠甲亢和甲低状态;用放免法检测血清总T3、T4的浓度;用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SM、LV和WAT中UCP2mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,甲亢组大鼠SM、LV和WAT中UCP2mRNA的水平分别增加了65%、50%和40%,甲低组大鼠SM、LV和WAT中UCP2mRNA的水平分别降低了9%、24%和20%,差异均具有统计学意义,P<0.05。结论:过量甲状腺激素对SM、LV和WAT中UCP2基因的表达具有上调作用,甲状腺激素水平过低则下调SM、LV和WAT中UCP2基因的表达。     

肥胖大鼠白色脂肪组织中PPARγ、UCP2基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性研究

目的:探讨高脂饮食诱导下肥胖大鼠白色脂肪组织(whiteadiposetissue,WAT)中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activatedreceptor-γ,PPARγ)、解偶联蛋白2(uncouplingprotein2,UCP2)基因与血清1α,25-(OH)2-D3的相关性。方法:①36只SD大鼠,标准饲料平衡1周后,随机分成2组,肥胖组和标准对照组,分组后分别用高脂饲料和标准饲料继续饲养6周;②采用ELISA方法测定血清1α,25-(OH)2-D3;③RT-PCR技术分析WAT中PPARγ和UCP2基因mRNA的表达水平。结果:①肥胖组大鼠的体重增值高于标准对照组(P<0.05),提示肥胖模型制备成功。②肥胖大鼠血清1α,25-(OH)2-D3低于标准对照组(P<0.05)。③WAT中PPARγ和UCP2mRNA表达均高于标准对照组(P<0.05)。结论:肥胖大鼠WAT中PPARγ诱导UCP2高表达,1α,25-(OH)2-D3与UCP2mRNA表达趋势相反。     

PAQR9对棕色脂肪产热及UCP1表达的影响

目的 初步探究孕激素和脂联素受体家族成员9（progestin and adipoQ receptor family member 9,PAQR9）对棕色脂肪产热及解偶联蛋白1（uncoupling protein 1,UCP1）表达的影响。方法 选取C57BL/6J小鼠的白色脂肪组织（white adipose tissue,WAT）、棕色脂肪组织（brown adipose tissue,BAT）及前棕色脂肪细胞系DE2-3和间充质干细胞C3H10T1/2细胞系进行研究。实时荧光定量PCR技术检测不同条件下PAQR9及UCP1的mRNA水平,蛋白免疫印迹法检测UCP1的蛋白质水平。实时荧光定量PCR技术和油红O染色法检测脂肪细胞的成脂分化情况。结果 C57BL/6J小鼠BAT中PAQR9的mRNA水平显著高于WAT。冷刺激诱导下,BAT和腹股沟皮下WAT中PAQR9的mRNA水平显著升高。DE2-3细胞诱导分化成熟即第6天时,PAQR9的mRNA水平显著高表达。在DE2-3细胞中过表达PAQR9,UCP1的mRNA水平显著上调,细胞耗氧量显著增加,而DE2-3细胞成脂分化功能无显著性差异。在DE2-3细胞中敲低PAQR9,UCP1的mRNA水平显著下调。在C3H10T1/2细胞第4~6天脂肪细胞分化成熟时,PAQR9的mRNA水平显著上调,在敲低PAQR9后UCP1蛋白质水平下调,而C3H10T1/2细胞成脂分化功能无显著性差异。结论 PAQR9能够促进棕色脂肪细胞产热,调控产热基因UCP1的表达。     

低氧习服对模拟高原低氧大鼠肺组织的影响及其HIF-1α表达变化

目的观察低氧习服对模拟高原低氧大鼠肺组织的影响及其HIF-1α表达变化。方法56只Wistar大鼠随机分成7组,每组8只：常氧对照组（N组）、急性低氧对照组（H0组）、急性低氧组（H1组）、3000m低氧习服组（C3.0组）、3000m低氧习服＋急性低氧组（C3.1组）、5000m低氧习服组（C5.0组）、5000m低氧习服＋急性低氧组（C5.1组n=8）。习服完成后,置于模拟海拔6000 m急性低氧24小时,检测动物习服完成后肺组织HIF-1α表达情况及不同低氧习服水平对大鼠急性低氧后肺结构改变的影响。结果急性低氧组肺组织显微和超微结构出现明显的间质性肺水肿,而经过低氧习服后间质性肺水肿则明显减轻;Western Blot方法未检测到各习服组肺组织表达HIF-1α,但HIF-1α mRNA在N组有一定量的表达,而C3.0组和C5.0组HIF-1α mRNA表达均明显高于对照组。结论低氧习服后肺组织HIF-1α mRNA表达的提高有利于减轻大鼠低氧性肺水肿。     

疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝组织UCP2 mRNA及蛋白表达的影响

目的观察疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝病（non—alcoholic fatty liver disease,NAFLD）大鼠肝组织解偶联蛋白2（uncoupling protein 2,UCP2）mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨疏肝健脾方药治疗NAFLD的作用机制。方法采用高脂饲料喂养12周复制雄性SD大鼠NAFLD模型,将模型大鼠分为疏肝纽、健脾组、疏肝健脾综合组（综合组）、三七脂肝丸组（三七组）、模型组,各组给予相应治疗8周。测定各组大鼠血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇含量。采用RT—PCR方法检测肝组织UCP2 mRNA的表达,免疫组织化学方法检测肝组织中UCP2蛋白活性变化。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织中UCP2 mRNA表达水平显著升高（P〈0．05）;与模型组比较,疏肝组、健脾组和综合组UCP2 mRNA表达水平显著下降（P〈0．05）。模型组肝组织UCP2蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,各用药组UCP2蛋白表达水平均显著下调（P〈0．01）。结论疏肝健脾方药可使NAFLD大鼠肝组织中UCP2基因和蛋白表达水平降低。     

高原低氧环境下大鼠肾脏血红素氧合酶-1的表达及意义

目的研究高原低氧环境下大鼠肾脏血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA及蛋白的表达、分布及活性变化情况。方法将60只雄性Wistar大鼠随机分为高原组（50只,海拔4600m）和对照组（10只,海拔1500m）,高原组又分为1、3、7、14、21d组（每组均为10只大鼠）。用Westernblot法、RT-PCR及免疫组化染色标记法检测HO-1基因及蛋白的表达及分布情况。结果与对照组比较,高原组HO-1mRNA在第一天就呈现表达上升（0.75±0.10,P〈0.05）,在第三天时达峰值（0.94±0.07,P〈0.05）,差异有统计学意义,以后逐渐下降,直至接近于对照组。HO-1蛋白在大鼠到达高原时即呈现表达升高（0.35±0.03）,7d时达高峰（0.68±0.03,P〈0.05）,差异有统计学意义,以后逐渐下降,直至接近对照组。结论在高原低氧环境下,大鼠肾脏HO-1mRNA及蛋白的表达会随时间发生改变,在缺氧早期呈上升趋势,后逐渐下降到正常水平,其改变可能与机体对缺氧的耐受性及对高原低氧产生习服有关。     

六味地黄丸对甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2、 骨骼肌UCP3mRNA表达的影响

目的:探讨六味地黄丸对甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2、骨骼肌UCP3mRNA表达的影响。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为空白组、甲状腺素甲亢模型组、甲状腺素+低剂量六味地黄丸组和甲状腺素+高剂量六味地黄丸组,每组12只。利用RT-PCR测定各组大鼠脂肪组织UCP2与骨骼肌UCP3mRNA表达,并检测各组大鼠血清T3、T4,红细胞Na+-K+-ATP酶活力,肝脏MDA含量和SOD活力。结果:与甲状腺素甲亢模型组相比,甲状腺素+高剂量六味地黄丸组大鼠脂肪组织UCP2和骨骼肌UCP3mRNA表达水平显著下调(P<0.05),红细胞Na+-K+-ATP酶活力降低(P<0.05),血清T3、T4以及肝组织MDA含量显著降低(P<0.01),肝脏SOD活力显著增加(P<0.01);甲状腺素+低剂量六味地黄丸组甲亢大鼠脂肪组织UCP2表达水平下调,但差异无统计学意义(P>0.05),骨骼肌UCP3mRNA表达水平显著下调(P<0.05),血清T(3P<0.05)、T4以及肝组织MDA含量显著降低(P<0.01),红细胞Na+-K+-ATP酶活力降低,但差异无统计学意义(P>0.05),肝脏SOD活力显著增加(P<0.01)。结论:六味地黄丸可以下调甲状腺素所致甲亢大鼠脂肪组织UCP2和骨骼肌UCP3mRNA表达。     

参龙煎剂对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织基质金属蛋白酶2与金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响

目的：观察博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中基质金属蛋白酶2（matrixmetalloproteinase-2,MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metallo proteinase-1,TIMP-1）mRNA的表达,探讨中药复方参龙煎剂防治大鼠肺纤维化的作用机制。方法：230只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组和参龙煎剂低、中、高剂量组,采用气管内注入博来霉素的方法建立Wistar大鼠肺纤维化模型。正常对照组和模型组大鼠第2日起每日予生理盐水灌胃,其余各组大鼠按配好的参龙煎剂以等容药品灌胃。苏木素-伊红染色和Masson染色观察不同时间点大鼠肺组织病理变化,以评价模型是否成功。逆转录聚合酶链反应检测大鼠肺组织MMP-2和TIMP-1mRNA的表达水平。结果：各组大鼠肺组织在各个时间点均有MMP-2和TIMP-1mRNA表达。与正常对照组大鼠比较,模型组大鼠在第7天时MMP-2和TIMP-1mRNA基因转录水平均显著增高,尤以MMP-2mRNA增加明显,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;在第14天时,MMP-2和TIMP-1mRNA的基因转录表达继续增高,但TIMP-1mRNA增加更显著,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;第28天时,MMP-2已有所下降,但TIMP-1mRNA表达仍持续性增高,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。与模型组大鼠比较,治疗组大鼠第7天MMP-2和TIMP-1mRNA基因转录水平降低,尤其是MMP-2的表达降低更明显,第28天时这种降低作用仍持续存在,以参龙煎剂中剂量组大鼠表现最明显,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论：参龙煎剂可能是通过上调TIMP-1mRNA的表达来抑制MMP-2mRNA表达水平,从而起到延缓肺纤维化的作用。     

孕早期高中链脂肪酸膳食对子代大鼠UCP2的影响

目的探讨孕早期膳食对子代肥胖和肥胖相关基因解偶联蛋白2（UCP2）表达的影响,寻找肥胖预防和治疗的靶标,寻求合理的孕期膳食。方法 Wistar孕早期大鼠分别食用标准膳食（SD）和高中链脂肪酸膳食（HMCFAD）,所产雄性子鼠分别为对照组（CON）和高中链脂肪酸组（HMF）,断乳后食用SD至成年,将CON组的大鼠随机分为两组：一组继续食用SD（CON组）;另一组高脂膳食诱导肥胖,为高脂对照（HFC）组。处死大鼠取材,检测UCP2 mRNA的表达。结果与对照组相比,HMF组大鼠的体重降低（P〈0.05）;UCP2的表达持续升高。结论孕早期HMCFAD可通过程序性升高子代UCP2基因的表达降低子代成年高脂诱导肥胖的发生。     

高原肺动脉高压症动物模型的建立及生理机能反应的初步研究

目的建立高原病动物模型并对相关生理机能反应进行初步研究。方法将30只Wistar大鼠随机分成15天和30天2个组后运至海拔4300m处饲养。分别在第15天和第30天进行Pap、RV／（LV＋S）比值等测定。另外,随机选取12只大鼠作为较低海拔（2260m）对照组,10只高原鼠兔作为高海拔（4300m）对照组。结果30只Wistar大鼠经15天和30天饲养后,两个实验组Pap、RV／（LV＋S）比值分别为42．80±6．09、0．50±0．06（15天）;50．0±10．20、0．50±0．08（30天）,显著高于高原对照组（21．88±6．09,0．32±0．03）和较低海拔组（24．50±8．06,0．30±0．01）,P值均小于0．01。15天和30天组HAPH患病率分别为87％和100％,但体循环压没有显著差别。结论通过对Wistar大鼠各项生理指标的测定,认为在海拔4300m地区饲养15天就可完全建立高原肺动脉高压症的动物模型,并进一步说明低海拔动物与高原特有动物具有对低氧环境的不同生理反应机制。     

模拟高原缺氧大鼠脑线粒体UCP活性与含量的变化及其对线粒体能量合成的影响

目的 观察模拟高原暴露大鼠脑线粒体UCP活性和含量的改变,探讨其对线粒体能量合成功能的影响.方法 健康成年SD大鼠置于模拟海拔5 000 m低压舱中,23 h/d,连续3 d.差速离心法分离大鼠脑组织线粒体,Clark氧电极法测定线粒体的呼吸活性,罗丹明123法测定线粒体膜电位,高压液相色谱法测定腺苷酸的含量,用[3H]-GTP结合法测定线粒体UCP活性及含量.结果 高原缺氧导致大鼠脑线粒体解偶联蛋白与[3H]-GTP结合的解离常数Kd下降37%,结合[3H]-GTP的最大量Bmax增加2.9倍(P＜0.01);线粒体的呼吸ST3氧耗减为对照组的83.1%,而ST4则升高28%,RCR降为对照的66.67%(P＜0.01);相关分析显示,ST4与反映UCP活性的Kd呈显著负相关,而与UCP含量Bmax呈显著正相关(P＜0.01);同时线粒体内ATP含量仅为对照组的58.4%(P＜0.01),线粒体膜电位显著下降(P＜0.01).结论 模拟高原缺氧暴露可增加脑线粒体解偶联蛋白活性和含量,揭示缺氧时线粒体的呼吸氧耗及能量的生成的改变与关系.     

高原低氧对大鼠血液HIF-1α含量和组织器官COX表达的影响

目的 探讨慢性低氧对大鼠血清中HIF-1α含量和组织器官COX表达的影响.方法 Wistar大鼠110只由兰州运至西宁市(海拔2200m)后随机分为:对照组(n=50,立即采集外周血分离血清,收集各脏器标本,深低温冻存);高原组[n=60,将大鼠运至青海果洛州花石峡镇(海拔4300m)饲养30天造模,采集外周血并分离血...     

高原大鼠严重烧伤后氧化应激反应对小肠凋亡相关基因Bax，Bcl-2表达的影响

目的：探讨高原大鼠严重烧伤延迟复苏后氧化应激反应对肠上皮细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响.方法：将Wistar大鼠132只分为兰州组（15171m）和高原组（3840m）,兰州组包括兰州即时复苏组（LIFR,n=30）、兰州延迟复苏组（LDFR,n=30）、假伤组（LCG,n=6）,高原组包括高原即时复苏组（HIFR,n=30）、高原延迟复苏组（HDFR,n=30）、假伤组（HCG,n=30）。大鼠背部30％TBSA（总体表面积）Ⅲ度烫伤后,立即或伤后6h液体复苏。观察伤后肠黏膜中丙二醛（MDA）和总巯基（TSH）变化及凋亡相关基因Bax,Bcl-2表达变化。结果：高原地区MDA和TSH变化较兰州地区明显,免疫组化观察到伤后肠上皮Bax阳性细胞较兰州地区增多;HDFR组肠上皮Bax阳性表达早于LDFR组且更严重;MDA变化与肠上皮细胞Bax阳性表达成正相关（立即复苏组r=0.939,P〈0.01;延迟复苏组r=0.938,P〈0.05）;TSH变化与肠上皮细胞Bax阳性表达成负相关（立即复苏组r=-0.949,P〈0.01;延迟复苏组r=-0.934,P〈0.01）.Bcl-2基因表达高原地区均为阴性结果,兰州地区伤后6,12h为阴性表达,其他情况为弱阳性表达.结论：高原大鼠烧伤延迟复苏后肠上皮细胞的严重氧化应激反应及Bax基因表达,可能是其凋亡增加的重要原因之一。     

氨茶碱对急进高原大鼠部分生理病理变化的影响

目的：观察平原Wistar大鼠急进实地4 300 m海拔高原后,氨茶碱药物干预对急进大鼠体内部分病理生理 指标的影响及其意义。方法：将21只成年健康Wistar大鼠按体质量随机分为平原组(海拔55 m)、高原缺氧组(海拔 4 300 m)、高原缺氧+氨茶碱组(海拔4 300 m),连续给药5 d后,取眼眶静脉丛血2 mL分析其主要生化指标,同时解 剖大鼠,取腹主动脉血1 mL分析其主要血气指标,完整摘取脑、肺、肝组织进行病理切片观察。结果：与平原组 相比,缺氧组与给药组乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、尿素(urea solution,Urea)、血清氯离子浓度(serum chloride concentration,cCl−)均明显升高(P<0.01),白蛋白(albumin,ALB)、 肌酐(creatinine,Cr)、血氧饱和度(oxygen saturation,SatO2)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞压积(hematocrit value,Hct)、二氧化碳分压(partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)、氧分压(partial pressure of oxygen,PaO2)、缓冲 碱(buffer base,BB)、剩余碱(blood base excess,BE)等指标均明显降低(P<0.01),与缺氧组相比,给药组Cr、酸碱值 (pH)、Hct、血清钠离子浓度(cerum sodium concentration,cNa+)、cCl−均明显升高(P<0.01),门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate transaminase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、ALB、PaCO2、血清钾离子浓度(serum potassium concentration,cK+)均明显降低(P<0.01或P<0.05)。病理结果显示：缺氧组和给药组脑、肺、肝组织与平原组 相比均有明显损伤,而给药组与缺氧组相比,损伤有所减轻。结论：氨茶碱能够通过改变急进大鼠的血气、生化指 标状态,保护大鼠脑、肺、肝功能,减轻急进高原造成的损伤,其机制可能与氨茶碱舒张支气管平滑肌,改善机体 通气量以及抗炎作用有关。