辛热药仙茅作用于药物代谢酶CYP3A的药性表达研究

目的在观察仙茅对虚寒大鼠神经内分泌功能改善基础上,探讨辛热药仙茅对虚寒状态动物肝脏药物代谢酶的影响及在辛热药性表达中的意义。方法将SD大鼠随机分为空白对照组,虚寒模型组,仙茅大、中、小剂量组。以氢化可的松(3.75 mg/kg)肌肉注射复制虚寒大鼠模型,辛热药仙茅以30、20、10 g/kg干预,红霉素-N脱甲基法检测动物肝脏代谢酶细胞色素P4503A(CYP3A)活性,放免法检测动物血浆环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,Western blot法检测动物肝脏孕烷X受体(PXR)蛋白表达,免疫组化法检测动物肝脏蛋白激酶A(PKA)蛋白表达。结果虚寒大鼠肝脏药物代谢酶活性降低,PXR表达减少,cAMP、cGMP水平降低,PKA表达减少,仙茅各剂量组可提高CYP3A活性和cAMP含量,增强PXR、PKA表达,对cGMP影响不大。结论仙茅可能通过调节cAMP-PKA信号通路改善虚寒状态的代谢功能低下症状,从而表明辛热药的部分药性实质。     

克立硼罗软膏调节角质形成细胞异常活化缓解小鼠银屑病作用

目的 明确克立硼罗软膏(Cri)外用对咪喹莫特(IMQ)诱导小鼠银屑病的治疗作用与机制。方法 用Balb/c小鼠建立IMQ小鼠银屑病模型，分为Cri(7.5、15、30 mg/cm²)组、卤米松(15 mg/cm²)组、模型组及正常组。对小鼠皮损进行银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分，HE染色观察表皮病理变化；免疫组化测定皮损处角蛋白的表达；检测皮损处皮肤环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化-cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)水平。结果 与模型组相比，Cri组小鼠皮肤鳞屑、红斑和增厚减轻，PASI评分降低，皮损处增殖角蛋白(K)6、K16、K17表达水平降低(F=12.62、19.41、28.39,P<0.01),而分化角蛋白K1、K10表达水平增加(F=27.95、9.64,P<0.01)。Cri能提升小鼠皮损处皮肤中cAMP、PKA水平，增加p-CREB的表达。结论 Cri可能通过调节角质形成细胞异常增殖和分化发挥对IMQ诱导的小鼠银屑病的治疗作用。     

依托咪酯调节cAMP/PKA/CREB信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的 探究依托咪酯（Eto）调节环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白（CREB）信号通路对糖氧剥夺/复氧（OGD/R）诱导的神经元损伤的影响。方法 将海马神经元细胞HT22随机分为对照组、模型组、Eto低、中、高剂量组、抑制剂组。MTT法计算细胞增殖抑制率,筛选Eto最佳干预浓度;EdU、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;ELISA法检测细胞中cAMP、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）水平;全自动生化分析仪检测细胞中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;Western blot方法检测细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及cAMP/PKA/CREB信号通路蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组HT22细胞EdU阳性细胞率、cAMP、GSH-Px、PCNA、Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB表达显著降低,凋亡率、IL-6、TNF-α、LDH、MDA、Bax表达显著升高（P<0.05）;与模型组比...     

黄精皂苷对慢性应激抑郁大鼠海马5-HT1AR/cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制。方法 SD大鼠60只随机分为6组:正常组、模型组、SRP(100、200、400 mg/kg)组和氟西汀(2 mg/kg)组。采用不同应激方法建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化,放射免疫法测定海马环腺苷酸(cAMP)含量,免疫组化法测定海马5-羟色胺受体(5-HT1AR)、蛋白激酶A(PKA)、反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平。结果应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠自主活动次数减少,体重降低,糖水消耗减少,处于抑郁状态。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组海马5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著降低,SRP组5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著上调(P<0.01)。结论 SRP对慢性应激抑郁大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB信号通路发挥抗抑郁作用。     

Effect of saponins of Rhizoma Polygonati on the pathway of 5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB in rats with chronic stress induced depression

目的 探讨黄精皂苷(SRP)对慢性应激抑郁模型大鼠行为学的影响及部分机制.方法 SD大鼠60只随机分为6组:正常组、模型组、SRP(100、200、400 mg/kg) 组和氟西汀(2 mg/kg)组.采用不同应激方法 建立大鼠慢性应激抑郁模型,观察大鼠行为学指标变化,放射免疫法测定海马环腺苷酸(cAMP)含量,免疫组化法测定海马5-羟色胺受体(5-HT1AR)、蛋白激酶A(PKA)、反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平.结果 应激刺激后,与正常组相比,模型组大鼠自主活动次数减少,体重降低,糖水消耗减少,处于抑郁状态.免疫组化结果 显示,与正常组比较,模型组海马5- HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著降低,SRP组5-HT1AR、cAMP、PKA、CREB表达显著上调(P＜0.01).结论 SRP对慢性应激抑郁大鼠的行为学有改善作用,可能是通过调节5-HT1AR/cAMP/PKA/CREB信号通路发挥抗抑郁作用.     

松郁安神方对失眠大鼠海马cAMP/PKA信号通路的影响

目的探讨松郁安神方对失眠大鼠海马5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)介导的环磷酸腺苷(cAMP)信号通路的影响,明确其作用靶点。方法50只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、松郁安神方低剂量组、松郁安神方高剂量组和丁螺环酮组,每组10只。除对照组外,其余4组采用慢性夹尾刺激和腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)建立肝郁失眠大鼠模型。造模成功后,除正常组和模型组外,松郁安神方低剂量组(8.5 g/kg)、松郁安神方高剂量组(17 g/kg)和丁螺环酮组(2.0 mg/kg)按相应剂量灌胃,1次/d,连续14 d。模型组和对照组以等量生理盐水灌胃,频次、时间同前。给药期间,观察大鼠一般状态;给药结束后,观察大鼠体质量、敞箱实验变化,检测各组5-HT1AR及cAMP、蛋白激酶A(PKA)基因和蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、大便颗粒数上升(P<0.05),海马5-HT1AR、cAMP、PKA mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。不同剂量松郁安神方干预后,和模型组相比,松郁安神方高剂量组敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、粪便颗粒数均减少,5-HT1AR、cAMP、PKA mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);松郁安神方低剂量组敞箱实验中央格停留时间、修饰次数、粪便颗粒数减少,5-HT1AR、PKA和cAMP mRNA及蛋白表达上调(P<0.05);高剂量组各项指标与丁螺环酮组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论松郁安神方改善肝郁失眠大鼠睡眠的机制可能是通过海马5-HT1AR介导的cAMP信号通路发挥作用。     

诺卡酮对抑郁样行为和海马中PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的 观察诺卡酮(nootkatone)对慢性不可预知应激(CUS)模型小鼠抑郁样行为、海马脑区神经再生及蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的影响,以探讨诺卡酮的抗抑郁作用及其分子机制。方法 将雄性C57BL/6小鼠随机分为3组：对照组(0.9%氯化钠溶液),CUS组(CUS+0.9%氯化钠溶液),CUS+诺卡酮组(CUS+诺卡酮)。用糖水偏好和强迫游泳试验来评价小鼠的抑郁行为表型;用RT-PCR检测海马BDNF的mRNA表达,用Western blot法检测海马BDNF、PKA及磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达;用免疫荧光检测海马齿状回脑区神经元的再生情况。结果 与对照组相比,CUS组小鼠糖水偏好降低(P<0.05),强迫游泳潜伏期减少和不动时间增加(P<0.05),海马BDNF mRNA和蛋白表达量、PKA和p-CREB蛋白表达量降低(P<0.05);与CUS组小鼠相比,CUS+诺卡酮组小鼠糖水偏好增加(P<0.05),强迫游泳潜伏期增加和不动时间减少(P<0.05...     

滋阴潜阳方对高血压大鼠淋巴细胞内PKA蛋白表达和cAMP水平的影响

目的:探讨高血压的神经免疫调节机制和滋阴潜阳方对高血压大鼠淋巴细胞内信号转导作用的可能环节.方法:采用免疫组织化学染色法和DP801图像分析系统检测"二肾一夹"高血压大鼠淋巴细胞内蛋白激酶A(PKA)蛋白表达.采用放射免疫法检测环磷酸腺苷(cAMP)水平的改变.结果:模型组大鼠淋巴细胞内PKA蛋白表达和cAMP水平明显增强,滋阴潜阳组对此有抑制作用.结论:滋阴潜阳方抑制淋巴细胞内PKA蛋白表达和cAMP水平可能是其发挥神经免疫调节作用的机制之一.     

腺苷A1受体在妊娠期高血压以及子痫前期中的作用

目的 探讨腺苷A1受体(A1R)在妊娠期高血压以及子痫前期发病机制中的作用.方法 取剖宫产分娩的妊娠期高血压(n=6)、子痫前期(n=14)和正常对照(n=15)产妇胎盘组织,采用免疫荧光检测A1R在胎盘组织中的表达部位,蛋白质印迹法检测A1R在胎盘中的表达量.建立常氧、缺氧(8、24、48、72 h)以及缺氧复氧(8 h)滋养细胞模型,运用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测A1R在细胞中的表达情况,Transwell和蛋白质印迹法检测加入A1R拮抗剂8-环戊基-1,3-二丙基黄嘌呤(DPCPX)后对缺氧的胎盘滋养细胞侵袭性和蛋白激酶A(PKA)表达的影响.结果 A1R在胎盘表面的滋养细胞以及内皮细胞中均有表达.与正常胎盘比较,A1R在轻度和重度子痫前期胎盘组织中表达升高(P＜0.01).A1R在体外胎盘滋养细胞缺氧模型中的表达随着缺氧时间的延长而逐渐升高(P＜0.05).胎盘滋养细胞缺氧模型中滋养细胞的侵袭能力较正常组下降(P＜0.01),PKA表达下降(P＜0.05);加入拮抗剂DPCPX可以增强滋养细胞的侵袭性(P＜0.05),同时上调PKA的表达水平(P＜0.05).结论 缺氧程度的增加可以使A1R表达升高,A1R在胎盘滋养细胞中的作用机制可能与调节PKA相关.     

血管活性肠肽对便秘大鼠排便及结肠组织中#br# VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的：观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对便秘大鼠肠道水液代谢、环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路(cyclic AMP protein kinase A signaling pathway,cAMP-PKA)和水通道蛋白3(water channel protein 3,AQP3)的影响,探讨VIP治疗便秘的作用及机制。方法：45只健康成年Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组、模型+ VIP组。给药4周后,墨汁灌胃法检测大鼠首粒黑便排出时间;根据大鼠粪便干湿重计算粪便含水率;HE染色观察各组大鼠结肠组织形态学变化;Western 印迹检测各组大鼠结肠组织中 VIP和AQP3蛋白表达水平;定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)检测各组大鼠结肠组织中cAMP,PKA和AQP3 mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠首粒黑便出现时间延长,粪便含水率明显减少(均P<0.01);结肠黏膜上皮部分破坏,杯状细胞体积减小,数量明显减少;结肠组织中VIP和AQP3蛋白含量明显减少,AQP3,cAMP和PKA mRNA相对表达水平均有所降低(均P<0.05)。与模型组比较,模型+VIP组大鼠首粒黑便出现时间缩短,粪便含水率明显增加(均P<0.05);结肠黏膜上皮完整性明显改善,杯状细胞体积增大,数量增多;结肠组织中VIP和 AQP3蛋白含量增多,CAMP,PKA和AQP3 mRNA相对表达水平升高(均P<0.05)。结论：VIP静脉注射能够调节肠道水液代谢,改善大鼠便秘症状,其机制可能与调节VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。     

中药清解灵对肝脏保护作用的实验研究

目的探讨中药清解灵对急性重症胆管炎(ACST)大鼠肝损害的保护作用.方法制造急性重症胆管炎大鼠模型,通过测定血清中ALT、AST、ALP、r-GT、TBA、PaIb活性或浓度变化,观察中药清解灵配合胆管减压的治疗作用.结果急性重症胆管炎大鼠肝脏受损严重.表现为血清ALT、AST、ALP、r-GT、TBA较正常组明显升高(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001),PaIb较正常组明显降低(P＜0.01).治疗后,尽管ALT、AST和ALP仍高于正常组(p＜0.001或P＜0.01或P＜0.05),但与造模组相比已显著降低(P＜0.05或P＜0.001).结论中药清解灵对肝脏有保护作用.     

甘麦大枣汤加味对抑郁症大鼠海马cAMP-蛋白激酶A途径的影响

目的：探讨甘麦大枣汤加味方对抑郁症模型大鼠海马信号转导cAMP-蛋白激酶A（PKA）途径的影响。方法：以孤养加慢性不可预见性中等刺激所致抑郁症大鼠为模型，灌服甘麦大枣汤加味方，通过旷场行为测定、糖水消耗试验观察行为变化，放免法测定海马cAMP含量以及原位杂交法测定海马5-HT1A受体、PKA mRNA表达。结果：模型组大鼠垂直活动、水平运动及糖水消耗显著下降，海马cAMP、PKAmRNA表达显著上升（P〈0．01）。用药组与模型组比较，水平运动及垂直活动上升，糖水消耗增加，cAMP含量显著下降，PKAmRNA表达显著下降（P〈0．01）且呈量效关系。结论：甘麦大枣汤加味方下调抑郁症大鼠海马信号转导cAMP—PKA途径可能是该方纠正抑郁症模型大鼠行为学变化的环节之一。     

睡眠剥夺抗抑郁机制中腺苷及其受体对海马蛋白激酶A的影响

目的：研究快眼动睡眠剥夺（麟D）抗抑郁机制中腺苷及其受体对海马蛋白激酶（PK）A的影响。方法：成年雄性SD大鼠分为正常对照组（8只）和应激模型组（48只。经21d慢性不可预见性应激（CUS）、蔗糖水消耗和强迫游泳实验测试后再随机分为抑郁模型组、睡眠剥夺组、水环境对照组、Ns对照组、腺苷A1受体拮抗剂组、腺苷A2A受体拈抗剂组（每组8只）,行72hREMSD,以免疫组化的方法检测海马PKA的表达）。结果：应激模型组蔗糖水消耗量明显降低（P〈0．01）,强迫游泳实验中的不动时间明显增加（P〈0．01）。海马CAI区PKA的表达无统计学意义,抑郁模型组海马CA3区PKA水平明显降低（P〈0．01）。与抑郁模型组比,睡眠剥夺组、腺苷A1受体拮抗剂组海马CA3区PKA水平升高（P〈0．01,P〈0．05）,腺苷A2A受体拮抗剂组无统计学意义。结论：72hREMSD可以提高抑郁模型海马CA3区PKA的表达,在72hREMSD过程中腺苷A1受体的失活可使海马CA3区PKA的表达增加,而腺苷A2A受体失活则无此效应。     

丙酮酸乙酯对利福平致小鼠肝损伤的保护作用

目的 探讨丙酮酸乙酯(EP)对利福平致小鼠肝损伤的保护作用及其可能机制.方法 24只C57BL/6小鼠随机分成3组:正常对照组、模型组(利福平,200 mg· kg-1· d-1)和EP组(利福平200 mg· kg-1· d-1+丙酮酸乙酯40 mg· kg-1· d-1),每组8只.造模后第7天处死小鼠,检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、碱性磷酸酶(ALP),观察小鼠肝脏病理学变化,检测小鼠肝组织总胆汁酸(TBA)、丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)及乙酰化的HMGB1(AC-HMGB1)蛋白的表达情况.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠血清TBIL、DBIL、ALP、ALT水平升高(P<0.05);肝细胞空泡变性、脂肪变性明显,部分肝细胞可见嗜酸性变、核溶解或固缩;肝组织TBA、MDA的含量提高(P<0.05),SOD减少(P<0.05),HMGB1及AC-HMGB1表达增多(P<0.05),HMGB1胞浆表达为主.与模型组相比,EP组小鼠血清TBIL、DBIL、ALP、ALT水平降低(P<0.05);肝组织病理学变化改善;肝组织TBA、MDA的含量降低(P<0.05), SOD增多(P<0.05),HMGB1及AC-HMGB1的表达水平降低(P<0.05),HMGB1以胞核表达为主.结论 丙酮酸乙酯能够减轻利福平所致的小鼠肝损伤,其机制可能与丙酮酸乙酯抗氧化,下调肝组织HMGB1及AC-HMGB1的表达和调节HMGB1的分布有关.     

血清总胆汁酸在早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积中的诊断意义

目的：探讨血清总胆汁酸（TBA）在早产儿胃肠外营养相关性胆汁淤积诊断中的意义。方法选取2013年1月至2013年12月应用胃肠外营养（PN）支持治疗14 d 以上的早产儿65例,按照是否合并胃肠外营养相关性胆汁淤积（PNAC）分为对照组（53例）及观察组（12例）,对比观察两组早产儿谷丙转氨酶（ ALT）、谷草转氨酶（ AST）、碱性磷酸酶（ ALP）、谷氨酰转肽酶（GGT）、TBA、血清总胆红素（TBil）以及直接胆红素（DBil）之间的差异。结果观察组早产儿血中 ALT、AST、ALP、TBA 及 DBil 均高于对照组,差异有统计学意义（P ﹤0.05）。TBA 的灵敏度和特异度均高于 ALT、AST、ALP、GGT、TBil,差异有统计学意义（P ﹤0.05）,且当血清 TBA 为36μmol/ L 时,其血清诊断灵敏度、特异度分别为83.3%、96.2%,此时 TBA 的准确度最高。结论监测血清 TBA可作为早产儿 PNAC 的早期诊断指标。     

对赤芍醇提浸膏和水提液治疗胆汁淤积型肝损伤的药效筛选

目的:筛选有治疗胆汁淤积型肝损伤作用的赤芍提取物。方法:将小鼠随机分成正常对照组、模型组、赤芍醇提浸膏高、中、低剂量组,水提液高、中、低剂量组和阳性药赤丹退黄颗粒组;用α-萘异硫氰酸酯建立胆汁淤积型小鼠模型,连续给药6天后,检测血清ALT、BIL、ALP、TBA等指标,并进行病理组织观察和半定量分析。结果:赤芍醇提浸膏能显著降低血清DBIL、ALP、ALT和AST值(P<0.05或P<0.01),并能明显改善α-萘异硫氰酸酯引起的组织损伤(P<0.01),中剂量作用与阳性对照药相似;而水提液没有治疗作用(P>0.05)。结论:赤芍治疗胆汁淤积型肝炎的有效药物成分主要在赤芍醇提浸膏中。     

S-腺苷蛋氨酸对奈乙硫氰酸酯致大鼠药物型胆汁淤积性肝病肝纤维化的保护作用

目的：研究 S-腺苷蛋氨酸(SAMe)对奈乙硫氰酸酯(ANIT)诱发大鼠药物型胆汁淤积性肝病肝纤维化的保护作用。方法将18只 SD 大鼠分为3组：A 组(空白对照组)、B 组(造模+NS)、C 组(造模+SAMe),每组各6只,各组大鼠腹腔注射后72 h 处理。采用全自动生化分析仪检测各组肝脏血清学指标,并取肝脏组织行 HE 染色及 MASSON 染色观察肝脏病理组织学变化及胶原含量改变。结果C 组大鼠的血清学指标谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)、直接胆红素(DBiL)、间接胆红素(IBiL)、谷胺酰转肽酶(γ-GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)明显低于 B 组,3组之间比较差异均有统计学意义(P <0.05);但3组之间总胆固醇(Chol)水平差异无统计学意义(P >0.05)。C 组大鼠的胶原纤维含量及胶原纤维面积比均明显低于 B 组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论SAMe 能通过改善药物型胆汁淤积性肝病的肝功能,降低胶原纤维含量及面积,进一步保护肝脏组织。     

苔黑酚葡萄糖苷对L02细胞肝药酶CYP3A的调控作用研究

目的 观察苔黑酚葡萄糖苷对体外培养的正常肝细胞株L02中CYP3A的影响,探讨苔黑酚葡萄糖苷是否通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的活性。方法 分别用cAMP-PKA信号通路中蛋白激酶A（PKA）激动剂环腺苷酸（cAMP）类似物8-溴-环腺苷酸（8-Br-cAMP）及其抑制剂H-89、苔黑酚葡萄糖苷干预L02细胞,MTT法检测细胞活力,完整细胞免疫组化法检测PKA蛋白表达,红霉素-N-脱甲基法检测CYP3A活性,Western blotting检测细胞中孕烷X受体（PXR）蛋白表达。结果 与对照组（加入不含药的无血清培养基）相比,苔黑酚葡萄糖苷处理后的细胞CYP3A的活性增强,PKA、PXR蛋白表达增强,与8-Br-cAMP的作用相似。结论 苔黑酚葡萄糖苷可通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的表达,表明其可能是仙茅表现出辛热药性的主要成分之一。     

低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制

目的 观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制。方法 取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合。采用50 Hz 0.6 mT PEMFs处理3、6、9 d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120 min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达。观察p-CREB核转位情况。采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况。结果 PEMFs处理ROBs 3、6、9 d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366(P=0.0324)和36.574±1.339(P=0.0134)。PEMFs处理30(P=0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P=0.0079)、90 min(P=0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P=0.0012) 和60 min(P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15(P=0.0018)、30(P=0.0087)、90(P=0.0250)和120 min(P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15(P=0.0075)、30(P=0.0017)、60(P=0.0074)和90 min(P=0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组。PEMFs处理ROBs 15 min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内。将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上。RNA 干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX(F=57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组。结论 PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成。