二恶英染毒诱导相同芳香烃受体小鼠肝脏基因的差异表达

目的用cDNA微阵列分析(microarray)探查具有相同芳香烃受体(AhR)的不同种系小鼠对二恶英(TCDD)反应的基因表达谱。方法用TCDD染毒具有相同AhR受体表型的BALB,CBA和C3H种系小鼠,染毒剂量为40μg/kg。24 h后取肝脏样品,提取RNA,用cDNA微阵列法,分析肝脏基因表达的差异。结果用测序法确认了BALB,CBA和C3H 3种系小鼠的芳香烃受体的基因型完全相同。cDNA微阵列分析结果显示了TCDD诱导3系小鼠基因变化总数、各系小鼠共同的诱导基因和独特的诱导基因。结论本文数据提供了在不同遗传背景下具有相同AhR受体种系小鼠的不同TCDD诱导基因表达谱,提示了TCDD染毒后3系小鼠的基因表达特异性,为探讨不同种系小鼠对化学物毒性作用的不同反应提供了基础数据。     

芳香烃受体通过介导Th17/Treg分化调控蟑螂过敏原诱导的哮喘

探讨芳香烃受体（AhR）是否能够通过介导肺内Th17/Treg细胞的分化来调控蟑螂过敏原（CRE）诱导的哮喘。方法 通过蟑螂过敏原激发和致敏,建立哮喘小鼠模型。部分哮喘小鼠给予 AhR 激动剂（TCDD）(10 μg/kg)或 AhR 拮抗剂（CH223191）（10 mg/kg）刺激。实验小鼠分为4组：对照组、哮喘组（CRE）、AhR激活组（CRE+TCDD）及AhR拮抗组（CRE+TCDD+CH223191）。通过RT-PCR检测哮喘小鼠肺内AhR及其下游Cyp1a1和Cyp1b1基因的表达;免疫组化染色观察哮喘小鼠肺内炎症变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）监测炎症细胞因子的表达;采用流式细胞术检测肺及纵膈淋巴结中Treg的表达。结果 TCDD和CH223191能够调控哮喘小鼠肺内AhR及其下游基因Cyp1a1和Cyp1b1的表达（P<0.002）;AhR激活后肺内炎症细胞及粘液分泌较CRE组减少,促炎因子IL-4、IL-13和Th17A表达减少（P<0.001）,而抑炎因子IL-10、IL-22和TGFβ1表达增加（P<0.001）,而拮抗AhR后逆转了这一现象,且与CRE组无统计学差异（P>0.05）;AhR激活后肺及纵膈淋巴结中Treg细胞及其转录因子FOXP3表达明显增加（P<0.001）,Th17细胞转录因子RORγt基因表达水平明显降低（P<0.001）,而拮抗AhR后,与激活组相比,肺及纵膈淋巴结中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞及其转录因子FOXP3表达减少（P<0.001）,RORγt基因表达水平增加（P<0.001）;与CRE组相比,差别无统计学意义（P>0.05）。结论 AhR通过介导Th17/Treg细胞分化来调控哮喘小鼠肺部炎症。     

二啞英对小鼠异位子宫内膜影响的分子机制研究

【目的】 探讨四氯二苯并二 英(TCDD)对子宫内膜异位症小鼠模型的影响及其分子学机制? 【方法】 采用小鼠自体子宫内膜移植法建立小鼠子宫内膜异位症模型,分别给予TCDD 0?l?3?10 μg/kg剂量灌胃,每21 d 1次,于建模术后3?6?9周处死,鉴定异位病灶的形成,测量异位病灶体积?采用免疫组化法和RT-PCR法检测各组小鼠异位子宫内膜组织中芳香烃受体(AhR)和细胞色素P450 1A1(CYP1A1)表达水平?【结果】 ①染毒组小鼠异位病灶体积的增加与染毒剂量和时间具有明显的正相关性(r = 为0.727?0.553,均P < 0.05);②染毒组小鼠异位子宫内膜AhR蛋白较对照组增强(P < 0.05);且随染毒剂量增加和染毒时间延长,AhR蛋白表达相应增加(r分别为0.687?0.442,均P < 0.01);③随染毒剂量增加,CYP1A1蛋白表达相应增加(r = 0.640,P < 0.01),对照组未检测到CYP1A1蛋白表达;④染毒组小鼠异位子宫内膜AhR mRNA较对照组增强(P < 0.05)?随染毒剂量增加和暴露时间延长,AhR mRNA表达相应增加(r分别为0.565?0.635,P < 0.01);⑤随染毒剂量的增加,CYP1A1 mRNA表达明显增加(r = 0.659,P < 0.01),对照组小鼠异位子宫内膜病灶中未检测到CYP1A1mRNA?【结论】 TCDD可促进小鼠模型异位子宫内膜病灶的发展,其机制可能与AhR及其下游基因CYP1A1激活有关?AhR及CYP1A1的表达增强是二 英暴露的生化指标     

大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞相关基因表达谱分析

目的：利用cDNA微阵列技术研究大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化中基因表达谱的变化。方法：分离、培养大鼠骨髓基质细胞，以地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导分化，抽提细胞mRNA并逆转录成cDNA探针，用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达。结果：经诱导后的细胞可见有钙化结节，与正常传代的细胞相比有292个基因的差异表达超过了3倍，而参与转录、翻译、糖基化修饰和调节细胞外基质、信号分子形成及参与代谢的相关基因表达均有不同程度的上调。结论：cDNA微阵列技术可显示细胞在诱导分化中多基因的差异表达，这些差异表达基因是大鼠骨髓基质细胞在增殖和成骨分化诱导中所必需参与的基因。     

不同级别胶质瘤细胞系与侵袭和转移相关的重叠基因

目的利用cDNA微阵列分析不同级别和全反式维甲酸诱导的胶质瘤细胞系与侵袭和转移相关的重叠基因，为进一步研究胶质瘤的侵袭机制提供依据。方法通过cDNA微阵列技术比较两种不同级别胶质瘤细胞系CHG-5和SHG-44以及全反式维甲酸诱导3天的SHG-44细胞系的基因表达谱，消除细胞系间的个体差异，鉴定与胶质瘤侵袭和转移相关的重叠基因。随机选择数个重叠基因进行Northern杂交实验，验证cDNA微阵列结果的可靠性。结果实验鉴定出31个重叠基因，表达上调20个，下调11个。其中，4个重叠基因，包括CD151、G3BP、UGB和CSTB与胶质瘤的侵袭和转移相关。部分重叠基因的可靠性为Northern杂交实验所验证。结论初步揭示不同级别的胶质瘤细胞系之间存在侵袭和转移相关基因的差异表达，提示这些重叠基因可能与胶质瘤的进展有关。     

维生素E对二(口恶)英染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶基因转录的影响

目的研究维生素E对2,3,7,8-四氯代二苯并二噁英(TCDD)染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因转录的影响。方法设计了5个实验组,将45只小鼠随机分为5组,5组动物给予TCDD和维生素E的水平依次为:TCDD0 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE0 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE20 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE100 mg/kg、TCDD100 ng/kg和VE500 mg/kg。喂食4周后取其肝脏,用real-time PCR法测小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1基因mRNA水平。结果TCDD染毒小鼠肝脏细胞色素P450酶1A1、1A2 mRNA水平与对照组相比有升高的趋势,而细胞色素P450酶1B1 mRNA水平明显降低。染毒并给予维生素E20 mg/kg组,其肝脏CYP4501A1的mRNA水平有降低趋势,随着维生素E剂量的增加,YP450 1A1的mRNA水平反而有升高的趋势,当维生素E剂量为500 mg/kg时,其肝脏CYP450 1A1的mRNA明显高于TCDD染毒组。CYP450 1A2的mRNA水平随着维生素E剂量的增加有降低的趋势,在TCDD染毒并给予维生素E500 mg/kg组,其肝脏CYP450 1A2的mRNA水平明显低于TCDD染毒组。而肝脏CYP450 1B1的mRNA水平在染毒并给与维生素E500 mg/kg组,与染毒组相比有上调趋势。结论TCDD能影响或部分影响小鼠细胞色素P450酶1A1、1A2、1B1的基因转录,而维生素E能在一定程度上缓解TCDD的作用。     

2,3,7,8-TCDD对B淋巴瘤细胞株CH12.LX抗体分泌功能的毒性效应及机制研究

目的 探讨2,3,7,8-四氯二苯-对-二噁英(TCDD)对B淋巴细胞株CH12.LX的抗体分泌功能的毒性效应,及其可能的受体机制.方法 以B淋巴细胞株CH12.LX为细胞模型,以ELISA法检测系列浓度TCDD处理对LPS活化CH12.LX的IgM分泌功能的影响,以RT-PCR和Western blot 法检测CH12.LX细胞内芳香烃受体(AhR)的表达水平,以及TCDD对细胞色素P450Cyp1a1的诱导效应.结果 较低浓度的TCDD(0.03 nmol/L)即对CH12.LX的IgM分泌能力产生了显著的抑制效应(P＜0.05),同时TCDD(10 nmol/L)可显著诱导CH12.LX细胞内Cyp1a1 mRNA的表达(P＜0.05),并于CH12.LX细胞内发现AhR有一定水平的表达.结论 TCDD对B淋巴细胞株CH12.LX存在显著的抗体分泌抑制效应;同时,推测TCDD的这一免疫毒性效应主要可能由AhR介导.     

四环素致BALB/c小鼠肝脏毒性的基因表达谱研究

目的利用毒理基因芯片技术研究四环素肝脏毒性效应的分子机制.方法利用本室构建的小鼠毒理基因芯片和四环素致BALB/c小鼠肝毒性动物模型,观察不同剂量和时相点小鼠肝脏基因表达谱变化,利用Gene OntologyConsortium分析系统并结合层次聚类对差异表达基因进行初步功能分析.结果四环素作用后引发肝脏多种基因表达改变,聚类分析发现高、低剂量四环素作用的表达谱明显差异,高剂量各时相点差异基因聚类分为4类,涉及的分子机制包括能量代谢抑制,蛋白质合成和降解增加,抗氧化体系受损,信号转导基因表达改变促进凋亡发生,以及药物代谢相关酶系基因抑制等.结论毒理基因芯片技术能够为我们在分子水平上提供四环素对小鼠肝脏毒性损伤机制的众多线索,为进一步生物学效应研究奠定基础.     

芳香烃受体及其核转运蛋白融合表达载体的构建与序列鉴定

目的:为用基因工程的方法人工表达芳香烃受体(AhR)及芳香烃受体核转运蛋白(ARNT),构建了融合蛋白的表达载体。方法:抽提C57BL/6J小鼠肝脏总RNA后采用RT-PCR的方法扩增得到芳香烃受体及其核转运蛋白的全长序列。在DNA测序确定其正确性之后,连入表达载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄青霉素筛选阳性克隆,提取质粒进行酶切分析。结果:成功构建了芳香烃受体及其核转运蛋白的重组表达载体。结论:载体构建成功是基因工程制备芳香烃受体及其核转运蛋白的前提,并为进行二恶英毒性机制及生物学检测方法的研究奠定了基础。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

间充质干细胞治疗1型糖尿病的免疫调节机制研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一类具有免疫调节功能的干细胞,近年来成为广为关注的有可能在抗移植排斥和自身免疫性疾病治疗中最有应用潜能的工具细胞。目前MSCs治疗1型糖尿病(T1DM)的机制依然不明了,途径主要有两个方向,一是直接在体外诱导MSCs分化为类胰岛细胞;二是通过利用MSCs的免疫调节途径,阻止T1DM自身免疫的发展。现仅针对MSCs治疗T1DM的免疫调节机制研究方面的进展进行综述。     

1型糖尿病与自身免疫机制研究的新进展

1型糖尿病(T1DM)是由多种因素引起胰岛β细胞损伤与凋亡,导致胰岛素分泌量绝对不足,出现能量代谢紊乱为主要特征的自身免疫疾病。T1DM发病机制复杂,其中涉及特异性细胞免疫、固有免疫细胞、基因易患性、病毒感染及胰岛细胞自身抗体等多方面。该文就近年来对上述因素与T1DM的相关性研究进展予以综述,以加深对T1DM发病机制的理解,为临床防治T1DM提供新的思路与方案。     

1型糖尿病(T1D)的细胞免疫学发病机制的研究进展

 近年来,1型糖尿病(type 1 diabetes,T1D)的发病率不断上升,其发病是遗传、环境、免疫等因素共同作用引发了胰岛β细胞为主体的自身免疫损害反应。T1D的发病机制涉及免疫应答及调节等免疫过程,其中细胞免疫在T1D的发病过程中起着重要作用,CD4+及CD8+ T淋巴细胞的浸润,B淋巴细胞、自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)、树突状细胞(dendritic cells,DC)等免疫细胞共同参与了β细胞的损伤,最终引起T1D的发病。     

基于肠道菌群及其代谢产物短链脂肪酸防治1型糖尿病的研究进展

1型糖尿病（T1DM）是由T淋巴细胞介导的胰岛β细胞被定向破坏的慢性自身免疫性疾病，多发于儿童和青少年。研究发现，肠道菌群及其代谢产物短链脂肪酸（SCFAs）在T1DM的预防和治疗中发挥重要作用，肠道菌群调节将为T1DM的防治提供新的思路和方法。本文综述了肠道菌群及其代谢产物SCFAs防治T1DM的研究进展，探究SCFAs、膳食纤维、益生菌和益生元、肠道菌群移植及中药治疗改善T1DM的研究现状，为临床应用提供参考。     

Current and Future Clinical Applications of Zinc Transporter-8 in Type 1 Diabetes Mellitus

Objective:

To evaluate the utility of zinc transporter-8 (ZnT8) in the improvement of type 1 diabetes mellitus (T1DM) diagnosis and prediction, and to explore whether ZnT8 is a potential therapeutic target in T1DM.

Data Sources:

A search was conducted within the medical database PubMed for relevant articles published from 2001 to 2015. The search terms are as follows: “ZnT8,” “type 1 diabetes,” “latent autoimmune diabetes in adults,” “type 2 diabetes,” “islet autoantibodies,” “zinc supplement,” “T cells,” “β cell,” “immune therapy.” We also searched the reference lists of selected articles.

Study Selection:

English-language original articles and critical reviews concerning ZnT8 and the clinical applications of islet autoantibodies in diabetes were reviewed.

Results:

The basic function of ZnT8 is maintaining intracellular zinc homeostasis, which modulates the process of insulin biosynthesis, storage, and secretion. Autoantibodies against ZnT8 (ZnT8A) and ZnT8-specific T cells are the reliable biomarkers for the identification, stratification, and characterization of T1DM. Additionally, the results from the animal models and clinical trials have shown that ZnT8 is a diabetogenic antigen, suggesting the possibility of ZnT8-specific immunotherapy as an alternative for T1DM therapy.

Conclusions:

ZnT8 is a novel islet autoantigen with a widely potential for clinical applications in T1DM. However, before the large-scale clinical applications, there are still many problems to be solved.     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B及其抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)作为蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)中一员,在胰岛素和瘦素信号转导中发挥关键的负调控作用。最近研究表明,PTP1B与内质网(ER)应激、胰岛β细胞增殖以及胰岛素分泌有重要的关联;且与2型糖尿病(T2DM)和肥胖症的发生、发展密切相关,其靶向抑制剂已成为治疗这些代谢性疾病的研究热点。本文以PTP1B的结构特点及其与T2DM和肥胖症的关系为基础,根据结合位点将PTP1B抑制剂进行分类,并对其最新研究进展进行综述,旨在为靶向PTP1B的抗T2DM和肥胖症药物研发提供参考。     

1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶反应性T淋巴细胞的测定

目的 探讨糖尿病患者血清中谷酸脱闳酶反应性Ｔ淋巴细胞的阳性反应及临床意义。方法 应用对硝基苯２酰氨基已糖（ＮＡＧ）微量酶反应比色法反映细胞增殖,检测３７例１型糖尿病（ＤＭ）患者外周血单核细胞对谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）的反应性,并以２型ＤＭ、其他自身免疫性疾病患者及正常人各３０例对照。结果 １型ＤＭ ＧＡＤ反应性Ｔ细胞的阳性率为３５．１％（１３／３０）,其他自身免疫性疾病１０％（３／１０）,而２型ＤＭ     

SPA-1通过Rap1信号通路参与疾病的发生和发展

SPA-1为一种小分子蛋白酶激活蛋白,目前在细胞及肿瘤中研究较多。在细胞中,SPA-1通过与不同的分子或者蛋白相互作用,影响Rap1三磷酸鸟苷酶活性,从而参与细胞功能的调节。在肿瘤方面,SPA-1在乳腺癌和白血病中的研究较多,大量临床研究发现SPA-1与乳腺癌有重要联系,而动物实验发现SPA-1与白血病有关,还发现SPA-1-/-的小鼠部分发生了狼疮样肾小球肾炎,猜测SPA-1在自身免疫疾病中起一定作用。但SPA-1在这些疾病中具体作用机制尚在进一步探索之中。     

Glycemic control,complications, and associated autoimmune diseases in children and adolescents with type 1 diabetes in Jeddah,Saudi Arabia

Objectives:

To investigate the relationship between metabolic control, acute and long-term complications, the coexistence of autoimmune diseases, and to assess the different factors that can affect the glycemic control level among children with type 1 diabetes mellitus (T1DM).

Methods:

This is a cross-sectional study that included 228 T1DM children and adolescents visiting the pediatric diabetes clinic at the King Abdulaziz University Hospital (KAUH), Jeddah, Saudi Arabia from January 2013 to January 2014. The clinical and laboratory characteristics of the patients were recorded. Metabolic control, complications, and associated autoimmune diseases were evaluated.

Results:

The mean age of patients was 10.99 years, and the glycated hemoglobin (HbA1c) level was 8.8%. Acute complications included ketoacidosis in 65.4% of patients, and hypoglycemic attacks in 68.9%. Long-term complications were detected in patients including retinopathy (4.4%), microalbuminuria (16.2%), and dyslipidemia (8.3%). Autoimmune thyroiditis was noted in 14%, and celiac disease was found in 19.7% of patients. A significant difference was found in pubertal and pre-pubertal age groups in terms of glycemic control (p=0.01).

Conclusion:

The level of HbA1c was found to be higher among the pubertal age group. A relationship between autoimmune diseases and gender was determined.Type 1 diabetes mellitus (T1DM) is one of the most common chronic diseases in pediatric patients. The incidence of T1DM among children is rising worldwide, and varies depending on different factors. The overall annual increase is estimated at 3% with approximately 70,000 children worldwide expected to develop T1DM every year.1 In Saudi Arabia, the reported prevalence in children and adolescents was 109.5/100000 in 2008.2 Type 1 diabetes mellitus is an autoimmune disease characterized by insulin deficiency due to destruction of pancreatic beta cells. Patients with T1DM are at high risk of developing other autoimmune diseases, such as autoimmune thyroiditis (AIT) and celiac disease (CD).3,4 Moreover, T1DM can lead to numerous complications in pediatric patients, with the most common acute complications including hypoglycemia, and diabetes ketoacidosis (DKA). Long-term complications in childhood include retinopathy, nephropathy, and dyslipidemia, among others. In this study, we aimed to assess the relationships between glycemic control, acute and long-term complications, associated autoimmune diseases,and to assess other different factors that can affect or predict the glycemic control level among children with T1DM visiting the pediatric diabetes clinic at King Abdulaziz University Hospital (KAUH), Jeddah, Saudi Arabia.     

5种自身抗体与1型糖尿病的预测和诊断

1型糖尿病(T1DM)是遗传易感个体通过自身抗原介导的免疫反应所引起胰岛β细胞破坏的慢性自身免疫性疾病。自身抗体的发现为T1DM的预测和诊断提供了新的途径。目前,在众多胰岛自身抗体中,得到普遍认可的主要是5种抗体:谷氨酸脱羧酶抗体、胰岛素自身抗体、胰岛细胞抗体、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体和锌转运体8抗体。相关研究进一步证明了这5种抗体在T1DM前驱期和发病期的临床价值。