STAg滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用

目的 观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)于妊娠前不同时间滴鼻免疫小鼠对弓形虫垂直传播的阻断作用.方法 BALB/c雌鼠130只随机分为STAg和PBS组,分别用sTAg(20 μg/只)和PBS滴鼻免疫2次(间隔2周).末次滴鼻后雌雄鼠以2:1分批交配,各组获得孕鼠30只,各组按末次免疫时间的不同(妊娠前3 d,9 d,15 d)分为3小组,分别为PBS3、PBS9、PBS15组和STAg3、STAg9、STAg15组.全部孕鼠于妊娠第8天用8 000个/只速殖子灌胃攻击.妊娠第18天颈椎脱臼处死,记录孕鼠感染率、活胎率,检测孕鼠小肠冲洗液sIgA水平,测定孕鼠肝、胎盘和胚胎脑组织弓形虫抗原.结果 随着免疫时间推迟,STAg组感染率降低,STAg15组感染率最低,但三组间比较无统计学差异(P＞0.05),STAg各组孕鼠感染率均低于相应PBS各组,但差异无统计学意义(P＞0.05).STAg组小肠冲洗液sIgA水平逐渐升高,STAg15组高于STAg3组(P＜0.05)和STAg9组(P＞0.05),STAg15组明显高于PBS各组(P＜0.05).随着免疫时间推迟STAg组活胎率增加,STAg15组活胎率高于STAg3组和STAg9组,但差异无统计学意义(P＞0.05),STAg15组活胎率显著高于PBS15组(P＜0.05).STAg组胎盘感染率和胚胎感染率均呈减少趋势(P＞0.05),STAg组胎盘和胚胎感染率均低于PBS各组,但差异无统计学意义(P＞0.05).各组胎盘感染率高于胚胎感染率,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 妊娠前15 d STAg末次滴鼻免疫小鼠,可有效诱导孕鼠黏膜及系统免疫应答,提高孕鼠抗弓形虫感染作用,降低胎盘、胚胎感染率,减少垂直传播的发生,部分阻断垂直传播.     

重组人IL-2对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群及垂直传播的影响

目的研究重组人IL-2对感染弓形虫孕鼠T细胞亚群及垂直传播的影响。方法取BALB/C孕鼠90只,随机分为空白组、感染组、IL-2组。于妊娠第8d空白对照组腹腔注射0.2ml生理盐水,其余各组腹腔注射200个弓形虫速殖子,并于妊娠第7、8、9dIL-2组每只孕鼠腹腔注射1 000UIL-2,其余两组腹腔注射0.2ml生理盐水。妊娠第10、12、14、16d取妊娠鼠脾,流式细胞仪检测CD4~＋及CD8~＋水平,并在妊娠第12d解剖孕鼠,观察活胎率及胎仔脑组织弓形虫感染情况。结果与空白组相比,妊娠各期感染组的脾CD4~＋T细胞水平显著降低,而CD8~＋T细胞水平显著升高（第10、12、1 4d）,二者比值明显倒置;IL-2组的CD4~＋T细胞水平在妊娠第10、12、14d高于感染组,CD8~＋T细胞水平在妊娠第10、12、14d低于感染组,CD4~＋/CD8~＋T细胞比值在妊娠第10、12、14d高于感染组。活胎率也明显升高,宫内胚胎弓形虫感染率明显降低。结论 IL-2可以改善感染弓形虫孕鼠的细胞免疫功能,提高孕鼠免疫力,减少垂直传播概率。     

弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立

目的 探讨乙底酚(己烯雌酚，DES)处理时，弓形虫垂直传播小鼠动物模型的建立条件。方法 采用不同数量(0、200、400、800、1600、3200)复苏的弓形虫速殖子，于不同妊娠期(妊娠第6、8、10天)按种小鼠，并用一定剂量DES处理后，于妊娠第18天处死，观察其流产情况及未流产小鼠的胎仔脑组织弓形虫感染情况。结果妊娠第6天按种速殖子，流产率高，垂直传播率低；妊娠第10天接种时，流产率低，垂直传播率高。流产率和垂直传播率都随着接种速殖子数量的增加而升高。结论 于妊娠第8天接种复苏后的弓形虫速殖子400个／只建立的弓形虫垂直传播的小鼠动物模型，既可以使流产率控制在较低水平，又不会全部发生垂直传播。     

IL-12和IL-12受体在刚地弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制研究

目的探讨IL-12和IL-12受体（IL-12R）在弓形虫感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将24只C57BL/6孕鼠随机分为感染组（n=12）和对照组（n=12）,感染组小鼠于孕8d每只腹腔注射400个RH株刚地弓形虫速殖子,对照组注射等量无菌PBS,所有孕鼠均于孕14d时安乐死,观察胎盘及胎鼠的发育情况,采用流式细胞仪的方法检测小鼠子宫自然杀伤细胞（uNK）表面的IL^-12受体表达水平的高低,用ELISA的方法检测小鼠胎盘分泌的IL-12细胞因子水平的高低。结果在孕14d感染组小鼠的胎盘出血坏死较多,未感染的对照组小鼠胎盘血供丰富。感染组小鼠的死胎率比对照组小鼠显著增加（P〈0.01）。弓形虫感染组孕鼠子宫自然杀伤细胞表面的IL^-12受体表达水平明显高于正常对照组（P〈0.05）,感染组孕鼠胎盘中的IL-12水平明显高于正常对照组（P〈0.05）。结论 IL-12水平升高和IL-12受体的高表达在弓形虫感染致不良妊娠结局中发挥重要作用。     

孕中期弓形虫感染对胎鼠生长发育及营养状况的影响

目的探讨孕中期弓形虫感染孕鼠对胎鼠生长发育及营养状况的影响。方法BALB/c孕鼠在孕第8天经腹腔接种弓形虫速殖子,于孕14、16、18d处死,剖取胎鼠。记录胚胎总数、死胎数、活胎数。测量活胎身长、尾长。火焰原子吸收分光光度法测定活胎体内Zn、Cu、Fe微量元素含量。采用考马氏亮蓝G-250染色法对胎鼠总蛋白进行定量分析。结果①在孕14、16、18d,染虫组的胚胎总数、活胎数、胎鼠的平均体重比对照组均明显减少(P<0.05)。染虫组胎鼠平均身长、尾长在孕14d时虽有下降,但无统计学意义(P>0.05),而孕16、18d时均明显下降(P<0.05)。②染虫组胎鼠体内Zn含量在孕14～18d均低于对照组(P<0.05);Cu含量在孕14d与对照组无差异,而在孕16、18d均低于对照组(P<0.05);Fe含量在孕14～18d均低于对照组(P<0.05)。③染虫组孕14d胎鼠总蛋白含量与对照组无差别(P>0.05),而孕16、18天均明显减少(P<0.01)。结论孕中期弓形虫感染孕鼠,可引起胚胎营养不良和发育障碍。     

孕期弓形虫感染对胎盘的入侵和病理损害的研究

目的探讨孕期弓形虫感染对胎盘的入侵和病理损害情况。方法孕8dBALB/c小鼠经腹腔接种弓形虫速殖子,在孕10、12、14、16和18d剖腹取胎鼠,分离胎盘并精确称重。采用HE染色观察胎盘的病理损害情况,RNA原位杂交检测胎盘组织弓形虫速殖子的动态入侵。结果在孕10、12d,感染组胎盘重量与对照组比较无明显差别。而在孕14、16、18d,感染组的胎盘重量明显低于对照组(P0.01)。随着感染时间的延长,胎盘组织切片可见有大量淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞浸润,绒毛血管减少,显示有炎症表现;滋养层细胞破坏明显,可见凋亡小体形成。感染组小鼠在孕10d未检测到虫体,感染孕12d偶见虫体。孕14、16、18d虫体数目明显增多(P0.01),虫体主要位于滋养层细胞内、细胞间质和血管中,并有假包囊形成。结论孕期弓形虫感染可影响胎盘生长,胎盘出现炎症反应和凋亡等病理损害。虫体可侵入胎盘组织细胞间质和血管中,并侵入滋养层细胞内增殖,跨越胎盘屏障传播给胎儿。     

小鼠过继转移致敏小肠IEL抗弓形虫感染

目的研究分离自弓形虫RH株速殖子经口感染小鼠后不同时间点的小肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocyte,IEL)过继转移抗弓形虫感染作用,探讨其作用机制。方法BALB/c鼠经口感染弓形虫速殖子5×104个/只或未感染,作为供体提供IEL。同品系受体鼠分为实验组(IEL7组、IEL9组、IEL11组、IEL13组和IEL15组)和对照组(IEL0组),每组6只小鼠。受体鼠经尾静脉分别接受分离自供体鼠经速殖子感染后第7、9、11、13、15天的致敏IEL或未致敏的IEL3×105/0.2ml只。各组小鼠过继转移后第4天,用弓形虫速殖子灌胃攻击,攻击后第13天分离纯化脑、肺、脾组织弓形虫速殖子并计数,测定肠液IgA含量。结果致敏IEL过继免疫可使受体鼠脑、肺、脾组织内弓形虫速殖子数显著减少,接受感染后第13天IEL的小鼠组织内速殖子数减少最为显著(P<0.01)脑、肺和脾组织内速殖子数比对照组分别减少81.13%,58.43%和70.97%。致敏IEL过继转移使肠道IgA水平升高,IEL11组和IEL13组显著高于IEL0组(P<0.01)。结论致敏IEL过继转移能上调肠道黏膜的免疫应答,导致黏膜特异性IgA分泌增加,诱导黏膜抗体的保护性免疫应答。IEL的这种保护作用具有致敏的时间依赖性,感染后第13天分离的致敏IEL对弓形虫感染具有最大的保护作用。     

弓形虫PRU株感染妊娠期小鼠动物模型的建立

目的：探讨建立弓形虫生殖毒性妊娠期小鼠动物模型的方法。方法：将妊娠期ICR小鼠随机分为孕早期感染组、孕晚期感染组及相应对照组,孕早期和孕晚期感染组小鼠再分别分为3小组,分别以灌胃方式感染弓形虫PRU株包囊10、20及40个,对照组灌胃生理盐水,观察各组小鼠不良妊娠结局及产仔数量。结果：弓形虫PRU株感染数量为10个包囊时,孕早期感染组孕鼠的死亡率为36.36%,出现阴道流血、流产、早产等现象,不良妊娠结局高达85.71%,与对照组比较差异有统计学意义（ P<0.05）;感染20包囊和40包囊时,孕早期感染组孕鼠的死亡率高达50%和100%;孕晚期感染组孕鼠在妊娠期发病不明显,产仔鼠数量较对照组减少,但差异无统计学意义（ P>0.05）;结论：用10个PRU株包囊灌胃能建立妊娠期弓形虫感染小鼠动物模型,为研究弓形虫PRU株所致生殖毒性奠定基础。     

弓形虫慢性感染鼠形成包囊的实验研究

目的分别采用弓形虫Fukaya株速殖子和包囊感染小鼠,观察其脑内成囊情况,以期寻求一个稳定、易建立的慢性感染动物模型,为研究弓形虫的致病机理提供一个良好的实验工具.方法用弓形虫Fukaya株速殖子4×104个和包囊5～10个经腹腔感染昆明小鼠,给适量药物使之形成慢性感染,统计小鼠的死亡率、脑内包囊数和成囊率.结果感染弓形虫速殖子组小鼠的死亡率为30%,脑内包囊数约为15个,成囊率为42.9%;感染弓形虫包囊组小鼠的死亡率、脑内包囊数、成囊率分别为0、40个和100%.接种包囊比速殖子小鼠死亡率低,脑内包囊数多,成囊率高.结论接种虫体感染阶段(包囊或速殖子)是影响成囊的重要因素,感染包囊小鼠脑内易成囊.     

常用消毒剂及自来水对弓形虫速殖子活力的影响

目的了解常用消毒剂及自来水对弓形虫速殖子活力的影响。方法将各种消毒剂分别加入等体积含弓形虫速殖子的小鼠腹水中，在不同时间内观察虫体胎盘蓝（trypanblue）着色率及活动率，并将经消毒剂处理不同时间的速殖予接种昆明鼠，观察速殖子能否在接种鼠体内复苏繁殖，导致小鼠死亡。用类似方法观察自来水时速殖子的影响。结果除甲醛个速殖子在常用浓度的不同消毒剂中，lmin月台盘蓝着色率均为100％，活动率为0。经消毒剂处理1min的速殖子接种小鼠后，各组接种鼠（包括甲醛处理组）无一死亡。经自来水处理4h的速殖子接种小鼠后仍能在小鼠体内复苏繁殖，小鼠于接种1wk内全部死亡。结论弓形虫速殖子对常用消毒剂均很敏感；而在自来水中途殖子可保持感染力4h以上。     

大蒜素对弓形虫感染小鼠黏膜免疫应答的影响

目的通过测定弓形虫感染小鼠大蒜素治疗后黏膜部位SIgA含量,研究大蒜素在弓形虫感染免疫中所起作用。方法将雌性小鼠分成治疗组、感染组和对照组,用5×10~4个/只RH株弓形虫速殖子经口感染小鼠后大蒜素治疗,每天1次,于治疗后第0、2、4、6、8、10、12周断颈处死,冲洗上呼吸道、下呼吸道、肠道、阴道、子宫黏膜,夹心ELISA法测定SIgA抗体含量。结果在观察的时间段内,治疗组SIgA含量高于对照组和感染组,治疗后4、6、8周差异具有显著性(P0.05)。结论大蒜素治疗经口感染弓形虫速殖子小鼠,能提高黏膜(特别是消化道黏膜)SIgA抗体含量,保护机体抵御病原体感染。     

激光照射对弓形虫活力及免疫原性的作用

目的 观察激光照射对弓形虫活力及免疫原性的影响.方法 分别用经2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5,6.0 W/cm2光通量1 min激光照射的RH株弓形虫速殖子常规腹腔内感染BALB/c小鼠,观察存活小鼠体内弓形虫包囊的形成和抗体效价、弓形虫速殖子的活力及繁殖力.结果 4.5-6.0 W/cm2光通量激光照射后的虫体接种小鼠,小鼠全部存活,并能诱导IgG抗体的产生.此外,该光通量激光照射能使弓形虫的分裂繁殖及包囊形成抑制,活力明显减弱,死亡虫数增加.结论 激光照射能有效抑制弓形虫繁殖和分裂能力,照射后的虫体能有效诱导小鼠体液免疫应答.     

复方一枝蒿颗粒体外抗弓形虫RH株速殖子的超微结构观察

目的 探索复方一枝蒿颗粒体外对弓形虫RH株速殖子超微结构的影响。方法 收集弓形虫RH株速殖子感染72 h后的昆明（KM）小鼠腹腔冲洗液,加入复方一枝蒿颗粒水溶液使药物终浓度达到0.8 mg/mL,并以0.04 mg/mL剂量阿奇霉素作为阳性药物对照,同时设立空白对照组。置二氧化碳孵箱作用2 h,分别制备吉瑞氏复合染色涂片和透射电镜样本,比较观察各实验组弓形虫速殖子光镜下形态和透射电镜下超微结构。结果 空白对照组虫体符合弓形虫速殖子超微结构正常形态,而阳性药物对照组和复方一枝蒿颗粒作用组均显示着色较浅的异常形态虫体：虫体肿胀变形,两端钝圆。细胞质着色浅且偶见空泡,个别虫体细胞膜似有断裂缺如,胞膜不完整。透射电镜下可见阳性药物对照组和复方一枝蒿组弓形虫速殖子细胞质疏松并出现大量不规则空泡等异常形态,复方一枝蒿颗粒还可使弓形虫速殖子超微结构发生胞膜断裂、破损,核膜破损,致密颗粒增多等改变。结论 复方一枝蒿颗粒具有损伤弓形虫速殖子超微结构的直接作用。     

不同佐剂的复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

目的比较IFN-γ和蜂胶作为佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫攻击的能力,探索两种佐剂联合应用的效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4个组,每组15只,分别用20μg可溶性速殖子抗原(STAg)、20μgSTAg+40μg蜂胶、20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部存活小鼠,计算胸腺、脾指数,计数脑、肝组织速殖子。结果STAg+IFN-γ组、STAg+蜂胶+IFN-γ组胸腺、脾指数显著高于STAg组(P<0.05);组织内速殖子虫荷显著降低(P<0.01),STAg+IFN-γ组小鼠脑、肝组织减虫率分别为57.00%和79.06%;STAg+蜂胶+IFN-γ组小鼠脑、肝减虫率分别为68.30%和79.06%。STAg+蜂胶组小鼠胸腺、脾指数有升高趋势,组织内速殖子虫荷降低,但与STAg组比较差异无统计学意义。结论在抗弓形虫感染中,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ的佐剂效果优于蜂胶,IFN-γ、蜂胶+IFN-γ辅助...     

孕中期弓形虫感染对孕鼠血红系列及血清铁蛋白的影响

目的 探讨弓形虫感染对孕中期孕鼠血红系列及血清铁蛋白含量的影响.方法 孕中期BALB/c鼠随机分为染虫组和对照组,染虫组经腹腔接种纯化弓形虫速殖子100个/0.2 ml,对照组腹腔注射0.2 ml PBS.在孕10,12,14,16,18 d,摘眼球取血,进行孕鼠血红系列分析和血清铁蛋白(Ferr)含量测定.结果 ①染虫孕鼠全血红细胞(RBC)计数、血红蛋白(HGB)含量、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)与对照组均无差异(P＞0.05).②染虫孕鼠红细胞体积分布宽度(RDW)比对照组轻微增加,但无统计学意义(P＞0.05).③染虫孕鼠红细胞平均体积(MCV)在孕10,14 d与对照组比较无统计学差异(P＞0.05),在孕12,16,18 d显著减小(P＜0.05).④染虫孕鼠红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)在孕14,16,18 d显著降低(P＜0.01).⑤染虫孕鼠血清铁蛋白含量在孕16,18 d显著低于对照组(P＜0.01).结论 弓形虫感染可引起孕鼠MCV、MCHC及血清Ferr含量下降,孕鼠有轻度低铁血症.     

Protective effect of DNA- mediated immunization with a combination of SAG1 and IL- 2 gene adjuvant against infection of Toxoplasma gondii in mice

Objective To characterize the immune response induced by SAG1 encoding plasmid combined with IL- 2 gene adjuvant in mice and to assess the protective effect of this vaccination against toxoplasmosis. Methods Mice were co- injected intramuscularly with plasmid encoding Toxoplasma gondii SAG1 plus murine IL- 2 expression vector at a dose of 100 μg. Booster immunizations were employed 2 more times at 3- week interval. As controls, mice were inoculated with PBS or empty plasmid pcDNA3. Humoral and cellular responses were assayed using ELISA for the determination of Ab, Ab isotype and IFN- γ, as well as IL- 4. To detect the integration and dissemination of DNA in the injected mice, PCR and in situ hybridization were performed. All mice were then infected with highly virulent RH tachyzoites of Toxoplasma gondii intraperitoneally. Results Significant increases in specific IgG levels were observed in mice after immunization three times with SAG1 expression plasmid. With respect to the IgG isotype, co- inoculation of IL- 2 expression plasmid enhanced the level of IgG2a and the production of IFN- γ. Challenging mice by vaccinating with combined plasmids with RH tachyzoites resulted in prolonged survival. Conclusion Humoral and cytokine responses elicited by SAG1 DNA immunization can be modulated by co- inoculation with IL- 2 expression plasmid. The use of DNA vaccine in combination with an appropriate cytokine gene to prevent T. gondii infection warrants further investigation.