地骨皮提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降血糖作用机制探讨

目的:研究地骨皮提取物(CLE)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并对其降血糖的作用机制进行探讨。方法:提取大鼠小肠中α-葡萄糖苷酶,采用葡萄糖试剂盒测定酶活力;通过体外抑制实验和离体器官实验测定反应体系中葡萄糖浓度和淀粉光密度值,分别计算药物对蔗糖酶和淀粉酶的抑制率;以底物浓度的倒数作为横坐标,以反映速率的倒数作为纵坐标,双倒数作图判断CLE对α-葡萄糖苷酶抑制作用类型。结果:大鼠小肠酶活力值为77.4个活力单位;与正常对照比较,CLE低、中、高剂量组对蔗糖酶的抑制率明显增加(P<0.05,P<0.05,P<0.01);与正常对照比较,CLE低、中、高剂量组对淀粉酶抑制率明显增加(P<0.01,P<0.01,P<0.01);抑制曲线实验表明,最大反应速度随CLE浓度的变化而变化,但米氏常数Km不变。结论:CLE对α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用。     

芦丁对大鼠体内外葡萄糖苷酶活性的影响

目的探讨芦丁对大鼠α-葡萄糖苷酶活性的影响。方法体内试验：将30只SD大鼠随机分为对照组,芦丁组和阳性对照阿卡波糖组,一次性灌胃给药测定其餐后60min血糖值的变化。体外实验：将芦丁和阿卡波糖加入到大鼠小肠提取的酶液中,以麦芽糖为底物,用氧化酶法测定葡萄糖的生成量,确定芦丁对α-葡萄糖苷酶的影响。结果芦丁显著降低大鼠餐后60min血糖水平,与对照组比较,差异具有统计学意义（P〈0.01）,体外实验显示,随着芦丁浓度的增加,吸光度值逐渐减小,其α-葡萄糖苷酶的抑制率逐渐增加。结论芦丁体内外对α-葡萄糖苷酶活性有较强的抑制作用。     

分心木总黄酮体外抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制作用研究

目的:研究分心木总黄酮体外抗氧化活性及对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用,并对其酶动力学进行分析。方法:采用FRAP法、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和羟基(OH-)自由基的方法,对分心木总黄酮的抗氧化活性进行评价;采用体外α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制模型,测定分心木总黄酮对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的抑制作用,通过酶促动力学与Lineweaver-Burk曲线推断分心木总黄酮对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制类型。结果:分心木总黄酮总抗氧化的FRAP值为37.52 mg-1,清除自由基的能力随着质量浓度的增大而增强,对DPPH和OH-自由基的半数抑制浓度(IC50)分别为29.47和20.89 ug·m L-1,对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的IC50分别为817.60和1109.00μg·m L-1,对二者的抑制作用表现为可逆抑制,其作用为竞争性抑制。结论:分心木总黄酮具有较好的抗氧化活性和较强的α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制活性,具有开发成治疗糖尿病药物的价值。     

不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用研究

目的研究不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。方法选用果实生长期为30d、50d、90d的罗汉果皂苷提取物,在α-葡萄糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)作为底物的反应体系中筛选出具有良好抑制作用的罗汉果提取物,并观察罗汉果皂苷对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用与剂量正相关,50d罗汉果皂苷提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于30d和90d罗汉果皂苷。经酶动力学研究发现,50d罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属于混合型抑制。50d罗汉果皂苷在0.05~50μg/ml范围内对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性呈现先促进后抑制的趋势。浓度为5.0μg/ml和10.0μg/ml时的罗汉果皂苷能一定程度上抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。结论生长期50d的罗汉果皂苷类提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于其他生长期(30d、90d)的罗汉果皂苷提取物,能在体外剂量依赖性地直接抑制α-葡萄糖苷酶的催化活性,并抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。     

α-葡萄糖苷酶抑制剂Radicamine A的初步研究

目的探讨RadicamineA对α-葡萄糖苷酶的抑制作用和对小肠葡萄糖吸收的影响。方法建立α-葡萄糖苷酶抑制模型,采用α-葡萄糖苷酶抑制实验测定RadicamineA对α-葡萄糖苷酶的抑制作用;采用体外小肠外翻肠囊模型来测定RadicamineA对小肠葡萄糖吸收的抑制作用。结果RadicamineA对α-葡萄糖苷酶抑制作用呈剂量依赖性,其IC50为2.27mg/L,与拜糖平对α-葡萄糖苷酶抑制作用相比较无显著性差异;且RadicamineA能明显抑制小肠对葡萄糖的吸收(P<0.01),也呈剂量依赖性,其IC50为0.10mg/ml。与拜糖平对小肠葡萄糖吸收的抑制作用相比较无显著性差异(P>0.05)。结论RadicamineA能显著抑制小肠葡萄糖的吸收,有望成为一种治疗糖尿病的药物。     

应用α-葡萄糖苷酶抑制剂高通量筛选模型筛选降血糖中药

目的 建立筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外高通量筛选模型,并对30味常用清热解表中药进行筛选.方法 应用大鼠小肠上段提取的α-葡萄糖苷酶,以蔗糖作为底物,通过测定反应体系中葡萄糖的生成量来检测α-葡萄糖苷酶的活性.通过优化酶促反应条件,建立检测α-葡萄糖苷酶活性的比色测定法及其抑制剂体外筛选的方法,并对30味中药共72个样品进行高通量筛选.结果 阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制活性与文献报道相近;筛选发现鸭跖草、山慈菇和桑叶等3味中药的不同极性提取物对α-葡萄糖苷酶有可重复的抑制作用.结论 应用比色法建立的筛选模型可进行α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选及中药相关活性物质的发现.     

三白草提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性

目的:对三白草提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性进行研究.方法:通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对三白草提取物进行活性筛选,并对提取物浓度与抑制活性关系进行研究.结果:三白草提取物均有较好的α-葡萄糖酶抑制作用,其中以三白草乙酸乙酯部位的活性最好(IC50=122.7 mg/L),其次为石油醚部位和正丁醇部位(IC50=...     

锦鸡儿生物活性研究

目的考察锦鸡儿生物活性。方法采用清除DPPH自由基、ABTS自由基和FRAP法对锦鸡儿体外总抗氧化活性进行评价,并同时测定了体外α-葡萄糖苷酶抑制活性和体外抗凝血活性。结果锦鸡儿具有一定的体外抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶活性和体外抗凝血活性,其中以乙酸乙酯部位抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性最强。结论锦鸡儿具有潜在的抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶活性。     

黄柏碱对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用

目的 研究黄柏碱对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用、作用类型和分子机制。方法 建立α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选模型,测定黄柏碱对α-葡萄糖苷酶的抑制率,并采用动力学方法研究黄柏碱的酶抑制作用类型。采用同源模建的方法构建酿酒酵母α-葡萄糖苷酶的三维结构,并运用分子对接技术分析黄柏碱抑制α-葡萄糖苷酶的分子作用机制。结果 黄柏碱对α-葡萄糖苷酶的半数抑制浓度（IC₅₀）为126.36 mg/L,且抑制率随浓度增加而增加。酶动力学结果显示,黄柏碱浓度增大,反应速率降低,V_max、K_m变小。分子对接结果显示,黄柏碱与α-葡萄糖苷酶位点5的结合能最低且其最好的对接构象结合能为-31.4 kJ/mol。黄柏碱与α-葡萄糖苷酶分子中的LYS15、SER295、HIS258等氨基酸残基形成氢键,与残基ALA289形成疏水相互作用以及与残基GLU10形成π-阴离子相互作用。结论 黄柏碱是α-葡萄糖苷酶的可逆性反竞争性抑制剂,氢键、疏水作用和π-阴离子相互作用是黄柏碱与α-葡萄糖苷酶分子间的主要作用力。      

双益方、组方单味中药及其有效成分对α-葡萄糖苷酶、二肽基肽酶-4抑制作用实验研究

目的:研究双益方、组方单味中药及其有效成分对α-葡萄糖苷酶、二肽基肽酶-4的抑制作用。方法:建立体外α-葡萄糖苷酶活性筛选模型,测定、计算各实验组对α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)抑制率和IC50值,检测各成分对α-glucosidase的抑制作用;建立二肽基肽酶4(DPP-4)抑制作用的体外筛选模型,研究双益方及其有效成分对DPP-4的抑制作用。结果:当双益方提取物浓度达到250μg·L-1时,对α-葡萄糖苷酶的抑制率为91.52%,其IC50值为(17.25±1.06)μg·L-1;双益方组方中药中,以黄芪对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较好,其IC50值为(7.68±0.32)μg·L-1;双益方有效成分中,以1-脱氧野尻霉素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较好,其IC50值为(0.85±0.04)μg·L-1,与阿卡波糖(0.39±0.02)μg·L-1较为接近;黄芪、山茱萸、黄连、葛根、桑白皮、佩兰、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、熊果酸、马钱苷、小檗碱对DPP-4抑制作用10%;1-脱氧野尻霉素、双益方提取物、黄芪甲苷、葛根素对DPP-4抑制作用10%。选择对DPP-4抑制率10%的双益方提取物、单味药及有效成分进行DPP-4抑制率复筛,对DPP-4抑制作用顺序为磷酸西格列汀1-脱氧野尻霉素双益方提取物黄芪甲苷葛根素。对DPP-4的IC50分别为:1-脱氧野尻霉素(18.78±1.08)μg·L-1,双益方提取物(74.52±3.24)μg·L-1,黄芪甲苷(50.24±2.22)μg·L-1,葛根素(100.24±4.25)μg·L-1。结论:抑制α-葡萄糖苷酶及DPP-4活性可能是该复方治疗2型糖尿病的作用机制。     

瘦素对单核细胞THP1分泌趋化因子的影响及其作用机制

目的：探讨瘦素促进单核细胞THP1分泌趋化因子的作用及其相关机制,为研究瘦素调节机体免疫功能提供依据。方法：采用RT-PCR法和流式细胞术检测 THP1细胞瘦素受体 (Ob-Rb和Ob-Rt) 表达。选取对数生长期THP1细胞,随机分为空白对照组和10、50、100及200 μg•L^-1瘦素组,采用Transwell实验检测各处理组穿膜细胞数。THP1细胞分为空白对照组和100 μg•L^-1瘦素组,采用Western blotting法检测信号通路关键分子p-AKT、 p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平。THP1细胞分为空白对照组、100 μg•L^-1瘦素组、100 μg•L^-1瘦素+DMSO组、100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L^-1 AG490组、100 μg?L-1瘦素+10 μmol•L^-1 LY294002组和100 μg•L^-1瘦素+10 mol•L^-1PD980590组,采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组细胞因子IL-8表达水平。结果：瘦素长受体Ob-Rb和短受体Ob-Rt在THP1细胞中均有高表达。与空白对照组比较,50、100和200 μg•L^-1瘦素组穿膜细胞数明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,100 μg•L^-1瘦素组THP1细胞中p-AKT、p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平明显升高 (P<0.05)。与空白对照组比较,50、100和200 μg•L^-1瘦素组THP1细胞中IL-8表达水平明显升高(P<0.05);与100 μg?L-1瘦素组比较,100 μg•L^-1瘦素+10 μmol•L^-1 LY294002组和100 μg?L-1瘦素+10 mol•L^-1 PD980590组THP1细胞中IL-8表达水平明显降低(P<0.05),而100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L^-1 AG490组IL-8表达水平变化不明显 (P>0.05)。结论：瘦素能促进单核细胞T
HP1分泌趋化因子,其机制可能与 PI3K/AKT和MAPK/ERK 1/2信号通路有关。     

白附子提取物对胶质瘤细胞的生长抑制作用及其机制

目的：研究白附子提取物对体外培养的脑胶质瘤细胞生长的影响,初步探讨其抑制胶质瘤细胞生长的机制。方法：培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,分为空白对照组和不同剂量(8、40、200和1 000 μg/L)白附子提取物组,MTT法检测白附子提取物对SHG-44细胞生长的抑制作用,ELISA法检测细胞分泌Bax和caspase-3蛋白水平,Western blotting法检测细胞中caspase-3蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,24 h时200和1 000 μg/L白附子提取物组、48 h时8、40、200和1　000 μg/L白附子提取物组细胞的生长抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）;48 h时白附子提取物组细胞分泌Bax和caspase-3蛋白水平均呈上升趋势,40、200 和1 000 μg/L白附子提取物组与空白对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;不同剂量白附子提取物组SHG-44细胞caspase-3蛋白表达水平随白附子提取物剂量的增加呈上升趋势,与空白对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：白附子提取物通过上调Bax蛋白表达水平,使caspase-3表达水平增加,激活凋亡通路,抑制细胞生长。     

卵巢恶性肿瘤患者血浆游离DNA含量测定及临床意义

目的：检测卵巢恶性肿瘤患者血浆游离DNA的含量并探讨其临床应用价值。方法：采集30例卵巢恶性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤患者及20例健康妇女的外周血,以及卵巢恶性肿瘤患者术后1周和1个月的外周血,采用微量基因组提取试剂盒提取血浆DNA,双链DNA高敏试剂盒和荧光仪测定血浆DNA含量。结果：卵巢恶性肿瘤患者血浆DNA含量［(25.33±17.69)μg•L^-1］明显高于正常者［(7.60±3.87) μg•L^-1］和良性肿瘤患者［(10.28±4.80)μg•L^-1］(P<0.001),良性肿瘤患者的血浆DNA水平与正常者之间比较差异无显著性(P>0.05)。恶性卵巢瘤Ⅰ～Ⅱ期患者的血浆DNA含量［(15.83±5.30) μg•L^-1］明显高于正常对照组(P<0.01),Ⅲ～Ⅳ期患者的血浆DNA含量［(30.83±20.04) μg•L^-1］高于Ⅰ～Ⅱ期(P=0.005);有腹膜后淋巴结转移或远处转移者的血浆DNA含量［(35.43±21.08)μg•L^-1］较无转移者［(16.49±6.44)μg•L^-1］明显升高(P=0.006);手术后1周,卵巢恶性肿瘤患者的血浆DNA含量［(20.88±12.14) μg•L^-1］与手术前比较无明显差别(P>0.05),手术后1个月,卵巢恶性肿瘤患者的血浆DNA含量［(10.30±2.45) μg•L^-1］ 较手术前明显下降(P<0.001),基本恢复到正常水平;高血浆DNA含量组的累积生存率明显低于低血浆DNA含量组(P=0.027)。以正常对照者血浆DNA水平的95％可信区间上限15.70 μg•L^-1为临界值,其诊断的敏感性为63.30%,特异性为90.00%。结论：血浆DNA水平有可能成为辅助早期诊断卵巢恶性肿瘤、判断肿瘤侵袭转移情况和预测预后的指标之一。     

轮叶党参总皂苷对HepG-2细胞凋亡的作用

目的:探讨轮叶党参总皂苷(CLTS)对人肝癌HepG-2细胞的抑制作用,阐明其凋亡调控作用机制.方法:HepG-2细胞分为100、200、300、400、500、600mg·L-1CLTS处理组和对照组(未加CLTS),处理HepG-2细胞72 h后,采用MTT法检测细胞生长抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);HeP...     

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。     

尾加压素Ⅱ及其受体在大鼠肾成纤维细胞中的表达及银杏叶的干预作用

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠肾间质成纤维细胞尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体（GPR14）表达的影响和银杏叶(GBE）的干预作用。方法：体外培养大鼠肾成纤维细胞，以未处理细胞作为正常对照组，以AngⅡ作为刺激因素，分别加入终浓度为0、25、50、100和200 g•L^-1的GBE，RT-PCR检测各组细胞UⅡ及GPR14 mRNA表达，免疫印迹法检测各组细胞UⅡ及GPR14蛋白含量，ELISA法检测培养上清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）含量。结果： AngⅡ组UⅡ、GPR14表达量及培养上清中ColⅠ含量明显高于正常对照组（P<0.01），与AngⅡ刺激组比较，AngⅡ+GBE组UⅡ及GPR14的mRNA表达量下降（P<0.01），蛋白含量减少（P<0.01或P<0.05），培养上清中ColⅠ含量明显降低（P<0.01或P<0.05）。结论：GBE可抑制AngⅡ诱导的肾间质成纤维细胞UⅡ及受体mRNA表达，降低其蛋白含量，减少细胞外基质ColⅠ分泌。     

20(S)-原人参二醇对体外培养siha细胞自噬的影响

目的：观察20(S)-原人参二醇（PPD）对人子宫颈癌siha细胞生长的抑制作用及其对自噬基因Beclin 1及MAP1-LC3转录和表达的影响，探讨PPD抑制siha细胞增殖的机制。方法：体外培养人宫颈癌siha细胞分为阴性对照组（乙醇）、阳性对照组（40 μmol·L^-1顺铂）及PPD 10、20和40 μg·L^-1组，分别用乙醇、顺铂和PPD处理细胞24、48、72和96h后，MTT法检测siha细胞增殖抑制率，RT-PCR、Western blotting及免疫细胞化学染色法观察各组siha细胞自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3的转录及蛋白表达情况。结果：与对照组比较，PPD 10、20和40 μg·L^-1组细胞增殖抑制率明显增加（P<0.05），且随时间延长和剂量的增加而逐渐提高，自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3的转录水平及蛋白表达水平明显上调（P<0.01）。结论：PPD可抑制体外培养siha细胞增殖，诱导siha细胞发生自噬。其机制可能与上调自噬相关基因Beclin 1及MAP1-LC3表达有关。     

红景天苷对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的抑制作用及其意义

目的：探讨红景天苷对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）增殖的抑制作用,阐明其控制类风湿关节炎（RA）的分子机制。方法：体外培养HFLS-RA,采用TNF-α及不同浓度红景天苷处理细胞,分为正常对照组（0.0μg·L^-1TNF-α）、模型对照组（10.0μg·L^-1TNF-α）及12.5、25.0、50.0、100.0μmol·L^-1红景天苷组（10.0μg·L^-1TNF-α＋相应浓度红景天苷）。MTT法检测HFLS-RA的增殖活力,ELISA法检测细胞上清液中β-catenin、基质金属蛋白酶7（MMP-7）和Cyclin-D1表达水平,Western blotting法检测细胞中β-catenin蛋白表达水平。结果：与正常对照组比较,模型对照组HFLS-RA增殖活力明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组HFLS-RA增殖活力降低（P<0.05）。与正常对照组比较,模型对照组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平虽降低,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50和100μmol·L^-1红景天苷组细胞上清液中β-catenin、MMP-7和Cyclin-D1表达水平明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,模型对照组细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）;12.5和25.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平虽低于模型对照组,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）;50.0和100.0μmol·L^-1红景天苷组细胞中β-catenin蛋白表达水平低于模型对照组（P<0.05）。结论：红景天苷可抑制HFLS-RA的增殖,其控制RA的机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关联。     

胡桃醌对肝癌HepG2细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨胡桃醌对肝癌HepG2细胞增殖的影响,阐明其可能的作用机制。方法:选取处于对数生长期的肝癌细胞株HepG2分为空白对照组和不同剂量(40、80、120、160和200μmol·L1)胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对HepG2细胞的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;在光学显微镜下观察细胞形态学变化;免疫化学法检测HepG2细胞中Caspase-3蛋白的表达;流式细胞术测定120μmol·L1胡桃醌对HepG2细胞凋亡周期的影响。结果:胡桃醌的IC50为139.8881μmol·L1。与空白对照组比较,各剂量胡桃醌组HepG2细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性。形态学观察,胡桃醌组细胞体积缩小,连接消失。120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞的生长周期发生变化,出现明显的G2/M期阻滞。免疫细胞化学染色,与空白对照组比较,120μmol·L1胡桃醌组HepG2细胞中Caspase-3蛋白表达明显增加。结论:胡桃醌能诱导HepG2细胞发生凋亡,其机制可能与Caspase通路相关。