氧化苦参碱对细胞共培养体系中酪氨酸酶及黑素的影响

目的探讨氧化苦参碱对人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞并及人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系，利用四甲基偶氮唑蓝（MTr）还原法测定细胞活力，采用酶学方法测定酪氨酸酶活性，475nm比色法测定黑素含量。结果100μmol／L、500μmol／L和1000μmol／L氧化苦参碱对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用，500μmol／L及1000μmol／L氧化苦参碱与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论氧化苦参碱对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

木犀草素在细胞共培养体系中对酪氨酸酶及黑素的影响

目的研究木犀草素对人表皮共培养体系（黑素细胞与角质形成细胞）酪氨酸酶活性及黑素生成的影响。方法培养人表皮黑素细胞和人表皮黑素细胞与角质形成细胞共培养体系,利用四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法测定细胞活力,490nm比色法测定酪氨酸酶活性,475nm比色法测定黑素含量。结果 0.5μmol/L、0.75μmol/L和1μmol/L木犀草素对于黑素细胞及共培养细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性增强作用,0.75μmol/L及1μmol/L木犀草素与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）。结论木犀草素对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性增强作用。     

熊果苷对体外培养的人黑素细胞的作用

目的 研究熊果苷对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应。方法 利用碱性成纤维细胞生长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑素细胞培养系,MTT法测定熊果苷对黑素细胞活力的影响,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,比色法测定黑素含量,并与曲酸及维生素C磷酸酯的结果比较。结果 熊果苷对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制,可显减少黑素生成量,对黑素细胞活力影响很小。结论 熊果苷对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成有显抑制作用,且细胞毒性很低。     

壬二酸对人黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成功能的影响

目的 建立体外培养的正常人表皮黑素细胞系，检测壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞黑素合成的影响。方法 体外人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B．。细胞培养，TRP-1染色观察壬二酸作用后，细胞形态的变化；测定壬二酸对人表皮黑素细胞和鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活性及黑素含量变化观察壬二酸的脱色素作用。结果 壬二酸作用于人表皮黑素细胞后，可见细胞树突明显减少；壬二酸作用于B16细胞后，细胞形态无明显改变。壬二酸抑制人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性，细胞黑素合成减少，而且具有浓度依赖性。结论 壬二酸对体外培养的人表皮黑素细胞和鼠黑素瘤B16细胞的酪氨酸酶活性及黑素生成都有抑制作用，可临床应用于治疗色素性疾病。     

小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的促进作用

目的 研究小分子化合物I942对黑素细胞黑素合成的作用及相关机制。方法 采用多巴染色法对正常人永生化黑素细胞系PIG1进行鉴定,用不同浓度的小分子化合物I942处理黑素细胞PIG1。用CCK-8法检测小分子化合物I942对细胞活力的影响,用氢氧化钠裂解法检测细胞中黑素含量,用多巴氧化反应法检测细胞中酪氨酸酶活性,用qRT-PCR检测细胞中黑素合成相关蛋白小眼畸形相关转录因子（MITF）、酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TRP1）、酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）mRNA的表达量,用蛋白质印迹法检测TYR、TRP2的蛋白表达情况。结果 在0～50 μmol/L的浓度范围内,小分子化合物I942对黑素细胞PIG1细胞活力的影响差异无统计学意义（P>0.05）。小分子化合物I942可增加黑素细胞PIG1中黑素含量（P<0.01）,升高细胞内酪氨酸酶活性（P<0.01）。使用小分子化合物I942处理后,黑素细胞PIG1中MITF、TYR、TRP1、TRP2 mRNA表达均上升（P<0.01,P<0.05）,TYR、TRP2蛋白表达无明显变化。结论 小分子化合物I942在对细胞活力无明显抑制作用的基础上,可通过升高酪氨酸酶活性增加黑素细胞PIG1中黑素含量,同时黑素合成相关蛋白MITF、TYR、TRP1、TRP2的mRNA表达也升高。     

正常人角质形成细胞和黑素细胞体外共培养体系的建立

目的体外建立正常人表皮角质形成细胞和黑素细胞直接接触的共培养体系。方法分别培养角质形成细胞和黑素细胞,体外建立角质形成细胞和黑素细胞直接接触的共培养模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、紫外分光光度计检测、左旋多巴(L-Dopa)染色、免疫组织化学染色及透射电镜观察对共培养体系中的黑素细胞和角质形成细胞进行生物学鉴定。结果单独培养时,角质形成细胞呈圆形、"铺路石样"生长,黑素细胞呈两极或多级树突状生长;角质形成细胞和黑素细胞按一定比例混合培养后,2种细胞均迅速增殖,黑素细胞树突多为3～5个,与数十个角质形成细胞呈团块状生长,形成类似黑素单元的结构。共培养体系中的黑素细胞和角质形成细胞具备正常的生物学功能。结论角质形成细胞和黑素细胞直接接触的共培养体系为黑素细胞提供了更接近生理状态的体外研究模型。     

银杏内酯A、B对高胆固醇诱导的PC12细胞胆固醇代谢的影响

[目的] 基于体外血脑屏障(BBB)环境, 观察高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇的代谢情况及银杏内酯A、B对其的影响。[方法] 利用Transwell装置共培养星形胶质细胞和脑微血管内皮细胞建立体外BBB, 并与PC12细胞共培养。在Transwell 内皮细胞侧添加40 μmol/L胆固醇, 并分别给予30 μmol/L 银杏内酯A和25 μmol/L 银杏内酯B进行干预。干预结束后, 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术, 检测胆固醇代谢关键酶低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)及胆固醇24S-羟化酶基因(CYP46)在mRNA水平的表达。[结果] 高胆固醇环境下, LRP-1表达下调(P<0.01), ACAT 及ABCA1表达上调(P<0.05), CYP46的表达有上调趋势;药物干预后, 除LRP-1有不同程度的升高(P<0.05), 其余各指标均无明显变化。[结论] GKA、B对高胆固醇环境下PC12细胞胆固醇代谢关键酶LRP-1的表达有一定影响。     

大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型的建立

[目的]建立大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型。[方法]采用原代培养脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养方法建立血脑屏障体外模型。[结果]星形胶质细胞与脑微血管内皮细胞共培养可提高血脑屏障特异性酶——γ-谷胺酰胺转肽酶、碱性磷酸酶的表达,提高脑微血管内皮细胞跨细胞间电阻。[结论]成功建立脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型,而且较单层内皮细胞模型更接近在体状态。     

H2O2对体外正常人黑素细胞和角质形成细胞共培养模型中黑素合成功能的影响

 目的 探讨不同浓度H2O2对黑素细胞(melanocyte,MC)和角质形成细胞(keratinocyte,KC)共培养体系的细胞增殖、黑素合成及酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)表达的影响。方法 培养原代人表皮MC和KC,建立共培养模型。采用MTT法测定细胞增殖,NaOH法测定细胞黑素含量,实时PCR方法观察TYR基因的表达。结果 KC和MC以3∶1浓度混合时,可形成稳定共培养模型。高浓度H2O2作用下,共培养细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),TYR基因表达显著降低(P<0.05);低浓度H2O2(<0.1 mmol/L)作用下,细胞增殖受到轻度抑制,TYR基因表达增高(P<0.05)。结论 H2O2对MC与KC共培养体系的作用复杂,对黑素合成功能可呈现双向作用。     

肿瘤坏死因子-α对人表皮黑素细胞增殖及黑素合成的影响研究

目的建立正常人表皮黑素细胞体外培养体系,观察不同浓度肿瘤坏死因子α对体外培养正常人黑素细胞的细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定不同浓度肿瘤坏死因子-α对黑素细胞增值的影响,NaOH裂解法测定黑素生成量,流式细胞仪检测黑素细胞的凋亡率。结果肿瘤坏死因子α对黑素细胞活力有抑制作用,能使细胞增殖能力降低,黑素合成减少,增加黑素细胞的凋亡率。结论肿瘤坏死因子-α对体外培养的黑素细胞增殖及黑素生成都有抑制作用,这为临床应用肿瘤坏死因子α治疗色素性疾病提供了实验依据。     

菟丝子、骨碎补提取物体外对酪氨酸酶活性的影响

[目的]考察菟丝子、骨碎补提取物体外对酪氨酸酶活性的影响。[方法]采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测菟丝子、骨碎补对酪氨酸酶的激活率。[结果]菟丝子、骨碎补提取物对酪氨酸酶活性具有激活作用。[结论]菟丝子、骨碎补提取物能够激活酪氨酸酶活性,为其外用治疗白癜风提供了药学依据。     

12种中药的水及乙醇提取液对酪氨酸酶抑制作用的比较

[目的]比较12种常用美白中药70%乙醇提液与水提液对酪氨酸酶活性的抑制能力。[方法]利用受试物抑制蘑菇酪氨酸酶催化底物(L-多巴)发生反应从而减少黑色素生成的原理,以维生素C作标准对照,用分光光度计测定反应液在475 nm的吸光度,通过吸光度比较各受试物对酪氨酸酶活性的抑制能力。[结果]12种中药均对无细胞系蘑菇酪氨酸酶活性有不同程度的抑制作用,其中甘草等5种中药的70%乙醇提物对酪氨酸酶的抑制作用强于其水提物的抑制作用;桑叶等7种中药的水提物对酪氨酸酶的抑制作用强于其醇提物的抑制作用。[结论]通过对比常用美白中药的醇、水提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用,筛选天然物作为纯天然美白化妆品原料,拥有广阔的发展前景。     

骨碎补外用对实验性豚鼠白癜风的影响*

[目的]探讨骨碎补外用对实验性白癜风豚鼠模型的治疗作用,为中国药典增补其"外用消风祛斑"的功能提供药效学参考依据。[方法]采用过氧化氢化学脱色法制备实验性白癜风豚鼠模型,观察受试药物对豚鼠皮肤黑色素形成及血液中酪氨酸酶(TYR)、胆碱酯酶(CHE)和单胺氧化酶(MAO)的影响。[结果]骨碎补外用能够使实验性白癜风模型有良好的治疗作用,与模型组相比,皮肤黑色素分布含量增加,血液中TYR活力增加、CHE活力增加、MAO活力降低。[结论]骨碎补外用对白癜风豚鼠模型有治疗作用。     

胃肠乐对幽门结扎胃溃疡胃黏膜EGF和EGFR的影响

[目的]探讨胃肠乐抗溃疡的机制及对胃黏膜细胞的保护作用.[方法]将48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、胃肠乐高剂量组、胃肠乐中剂量组、胃肠乐低剂量组、洛赛克组;用游标尺计算各组溃疡指数,采用免疫组织化学分析方法检测胃黏膜表皮生长因子(EGF)、表皮生长因子受体(EGFR)的表达及图像分析.[结果1胃肠乐高、中剂量组胃黏膜全层EGF、EGFR表达明显(其积分光密度值、平均灰度及阳性细胞占总面积的百分比与模型对照组相比有显著差异)(P＜0.05).[结论]胃肠乐抗溃疡,促进溃疡愈合的作用机制可能与其通过增加EGF、EGFR表达而起到胃黏膜细胞保护作用有关.     

杞黄颗粒对实验性脉络膜新生血管VEGF蛋白及其mRNA表达的影响

[目的]探讨杞黄颗粒对激光诱导脉络膜新生血管(CNV)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及其mRNA表达的影响。[方法]81只雄性棕色挪威(BN)大鼠,采用随机分组法,13只为空白对照组;68只造模,随机抽取3只验证CNV形成,剩余65只随机分为5组:杞黄颗粒A组(简称杞黄A组),杞黄颗粒B组(简称杞黄B组),雷珠单抗组,杞黄颗粒+雷珠单抗组(简称杞黄+雷珠组),模型组。除杞黄B组给药90 d,其余组给药60 d后检测VEGF蛋白含量和mRNA表达水平。[结果]造模第7天,CNV验证形成。用药60 d,杞黄+雷珠组与杞黄A组、模型组相比VEGF的蛋白含量也明显降低,均P0.05,具有统计学差异。杞黄B组与杞黄A组相比,VEGF蛋白含量降低降低,P0.05,具有统计学意义。用药60 d,空白对照组相比模型组,杞黄+雷珠组相比模型组VEGF mRNA均有明显降低,P0.05,具有统计学差异;杞黄B组相比杞黄A组的VEGF mRNA降低明显,P0.05,具有统计学意义。[结论]杞黄颗粒与雷珠单抗联合使用,对于VEGF的表达有明显的调节作用,能够减少CNV的形成,对湿性老年性黄斑变性(WAMD)有一定治疗意义。     

皮肤脱色剂研究方法

目的总结研究皮肤脱色剂的方法。方法简述色素沉着过程，回顾性分析皮肤脱色剂的研究。结果皮肤颜色主要取决于黑素的量和位置，黑素在黑素细胞特有的细胞器即黑素体内生成。成熟的黑素体从黑素细胞的树突转移到邻近的角质形成细胞进行有序降解，含有黑素颗粒的角质形成细胞随着表皮的更替而脱离皮肤，任一环节的障碍都可影响皮肤颜色。用于评估皮肤美白制剂有效性的方法包括生物化学分析、黑素细胞培养、表皮重建、动物模型、临床评估以及无创伤性仪器检测。结论评估皮肤脱色剂的效果，在不同层面需采用不同方法。