性病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性lgM的酶联捕获技术,并分析性病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM（μ链特异性）抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶（HRP）标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测688例性病患者及450名健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行比较。结果性病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为274例（39.8%,酶标抗体法）和262例（38.1%,酶标抗原法）,与正常对照组（0.89%）存在显著性差异（P〈0.05）。酶标抗体法与酶抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时无显著性差异（P〉0.05）,阳性符合率95.6%,且不受类风湿因子（RF）的影响。结论酶联捕获HCMVpp65特异性lgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

IgM特异性激活补体Clq类循环免疫复合物的检测

目的：建立检测IgM特异性激活Clq类循环免疫复合物（IgG/Clq-TCIC）的捕捉法ELISA。方法：以羊IgM抗人Clq为包被抗体，HRP－羊抗人IgM为检测抗体，采用捕捉法ELISA检测IgM/Clq-TCIC,并通过阻断试验、替代试验、重复性试验进行方法学论证。结果：最佳包被浓度为15μg/ml，标本稀释度为1：75，酶标抗体浓度为1：800。结论：本法敏感度高、特异性强、重复性好，对研究经典途径激活补体类循环免疫复合物具有重要意义。     

建立甲型肝炎病毒IgM抗体的斑点免疫渗滤试验检测方法

目的：建立斑点免疫渗滤试验检测甲型肝炎病毒IgM抗体的实验方法．方法：用抗人IgMμ链包被硝酸纤维素膜，捕获血清中的IgM抗体，以甲肝抗原为桥，连接胶体金标记的抗HAV IgG，阳性反应有红色斑点出现．并通过比较不同试剂用量条件下的检测结果的符合率确定试剂最佳用量．结果：与国际公认的金标准相比，本检测方法的灵敏度为93．5％，特异度为98．0％，符合率为95．8％．结论：本检测方法较灵敏特异，成本低廉，较适合于筛检和流行病学调查．     

聚合酶链反应测定巨细胞病毒在移植术后的临床价值

目的用聚合酶链反应（PCR）诊断移植受着术后巨细胞病毒（CMV）的感染状况，建立一种新的快速诊断巨细胞病毒感染的方法并初步用于移植爱着。方法应用酶链免疫吸附法（ELISA）及PCR法分别测定230例移植术患者血清中巨细胞抗体（CMV-Ab）及巨细胞抗原（CMV-Ag）。结果ELISA法测得IgG和IgM阳性率分别为99.35％和15．42％，而PCR测得抗原阳性率为9．45％，两组在统计学上无显著性差异（P〉0．05）。结论移植术后存在不同程度的CMV感染，临床上应用PCR技术检测对早期诊断移植术后受者CMV感染具有重要意义。     

抗入■链单克隆抗体(McAb)的研制及临床应用

抗μ链是临床诊断及实验研究的重要试剂之一,广泛应用于肾组织 IgM 定位及各种细菌、病毒性感染早期特异性 IgM 抗体的检测。提取及纯化μ链,并免疫动物,制备抗μ链多克隆抗体。生产过程繁杂,我们从巨球蛋白血症患者血清中提纯了 IgM、免疫BAIB/C 小鼠后,成功地建立了分泌抗μ链的杂交瘤细菌株。所获抗μ链 McAb 效价高(腹水 McAb 琼脂双扩散效价可达1:28)、稳定性好(液氮中保存1年以上效价不变)、     

分泌抗人IgMμ链McAb杂交瘤细胞株的建立

本文从正常人（HBSAg阴性）血清中分离纯化人IgM，以此作为抗原免疫BALB／C小鼠，根据kohler和Milstein杂交瘤细胞建株原理，采用本室建立的常规方法，将免疫脾细胞和小鼠SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，建立了分泌抗人IgMμ链单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过间接ELISA双向琼脂扩散试验及封闭试验等方法证实，所分泌的抗体为抗人IgMμ链McAb，其中3A4、3D32株杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代，均能分泌高效价抗体，且为IgG1亚类。本实验结果为抗人IgM鼠队嵌合抗体基因的构建奠定了基础。     

检测肺炎荚膜多糖IgG抗体ELISA方法的建立

对抗原的包被浓度，缓冲液及包被条件进行了选择和优化，建立了检测肺炎荚膜多糖抗体浓度的间接ELISA法，用该ELISA系统比较了不同包被的（CPS，CPS－Tyr,mHSA)在不同酶标测定板中的包被效果。结果表明，单独的多糖对酶标测定板有较强的吸附性，板孔间检测结果均一性良好（CV＝1．24％），同其它结合物包被一样，足以区别保护和非保护性抗体浓度，能够较好地评价结合疫苗在动物和人体内诱导的抗体水平。     

混合血清法在HFRS血清流行病学调查中的应用

目的：建立一种简单，经济可行的肾综合征出血热（HFRS）血清流行病学调查方法。方法：采用捕获ELISA技术，应用单盲随机控制的流行病学方法研究。对照组：随机抽取HFRS抗体阴性标本280份；实验组：将280份阴性血清按完全随机化原则分为9－10人一组，同时将20份阳性标本随机混入某组，包被抗体为羊抗人IgM和羊抗人IgG酶标记物为HRP－抗HFRS.McAb(IF4)。结果：以逐个检验法为对照，混合血清法约登指数不低于0.98,kappa值为0．97（P＜0．05）。结论：本次实验在大规模HFRS流行病学调查中，采用混合血清法筛选优点是准确性高，简便特异性强，费用低廉。     

捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体的建立及应用

目的建立一种捕获法检测嗜肺军团茵IgM抗体的方法。方法用羊抗人IgM抗体包被微孔板,选择辣根过氧化物酶标记的兔抗嗜肺军团茵抗体和培养的嗜肺军团茵抗原最适浓度,以西班牙VIR—CELL公司PNEUMOSLIDE—M间接免疫荧光试剂盒为参照,优化样品稀释液和酶结合物稀释液的最佳配方。结果酶结合物工作浓度1／2000、抗原浓度1／1000为最适浓度,在样品稀释液中加入20％羊血清,在酶结合物稀释液中加入20％兔血清可以消除因使用多克隆抗体而引起的假阳性,假阳性率降低3．24％。建立的IgM捕获法与西班牙V1RCELL公司间接免疫荧光法的阳性符合率为93．26％（83／89）,阴性符合率为93．67％（326／348）,与其他呼吸道病原体lgM抗体没有显著交叉反应,不受类风湿因子的干扰。结论建立的捕获法检测嗜肺军团菌IgM抗体方法操作方便,与商品化间接免疫荧光试剂盒有较高的符合率,具有临床诊断价值。     

糖尿病患者血清HCMV pp65特异性IgM表达水平

目的建立检测人HCMV pp65特异性IgM的酶联捕获技术,来分析糖尿病患者HCMV感染状态。方法利用抗人IgM(μ链特异性)抗体包被固相载体,采用辣根过氧化物酶(HRP)标记HCMV pp65单克隆抗体或HCMV pp65抗原,建立抗体捕获HCMV pp65特异性IgM酶联免疫技术。用该法检测727例糖尿病患者及230例健康献血员血清样本,并与HCMV-pp65抗原表达水平进行了比较。结果糖尿病患者血清HCMV pp65-IgM阳性分别为81例(11.14%,酶标抗体法)和78例(10.73%,酶标抗原法),与健康组(0.87%)相比存在统计学差异(P<0.05)。酶标抗体法与酶标抗原法在抗体捕获HCMV pp65特异性IgM检测时不存在显著性差异(P>0.05),且不受RF因子的影响。HCMV pp65-IgM与HCMV pp65蛋白表达呈现良好的相关性。结论酶联捕获HCMV pp65特异性IgM法具有简便、快速、特异和敏感等特点,可诊断HCMV活动性感染。     

ELISA检测脐血中巨细胞病毒IgM抗体诊断先天性巨细胞...

Cytomegalovirus IgM (CMV IgM) antibodies of 582 cord sera from 6 hospitals in Chengdu were detected by direct ELISA and indirect ELISA. Twenty-seven cases with CMV IgM antibody positive were detected from 582 cord sera. Twenty-five and 15 cases were found to have CMV IgM antibody by direct ELISA and indirect ELISA, respectively (P greater than 0.05). Indirect ELISA for detection CMV IgM antibody was only interfered by high concentration of CMV IgG and rheumatoid factor. Children with CMV IgM antibody positive were followed-up to 5-6 months. Hearing loss was detected by impedance audiology in only 2 cases. But the other physical and mental examinations were normal. The result showed that the prevalence of congenital CMV infection is 4.6% in our study and direct ELISA method is more specific and sensitive than indirect ELISA method to detect CMV IgM antibody in cord serum.     

Comparison of CMV pp65 antigen and IgM antibody detection for early recognition of CMV primary infection and reactivation

Detection of Cytomegalovirus (CMV) pp65 antigen and CMV IgM antibody were compared for the early diagnosis of CMV primary infection or reactivation. Sixty seven immunocompromised patients were studied prospectively for the diagnosis of CMV primary infection or reactivation. CMV IgM antibody was detected in 19 (28.43%) of the 67 immunocompromised patients, whereas pp65 antigen was detected in 20 (29.8%). Among the 19 patients who were positive for both pp65 antigen and CMV IgM antibody, pp65 antigen was detected earlier in 10 of 19 patients. In the remaining 9 patients IgM antibody against CMV was detected simultaneously with the pp65 antigen. The pp65 antigen appeared on an average 16.37 days earlier than that of CMV IgM antibody.     

光激化学发光分析法定性检测血清CMV-IgM抗体

目的:建立一种基于光激化学发光分析（LiCA）技术定性检测血清CMV-IgM抗体的新方法。方法:利用CMV抗原包被的发光微球,生物素标记的鼠抗人IgM抗体以及链霉亲和素包被的感光微球共同构成完整的分析体系,优化反应缓冲液、抗原抗体工作浓度和待检血清稀释比例,并进行方法学评价和临床结果比对。结果:本方法的批内和批间变异系数为5.3%～6.1%和6.9%～9.8%,均小于10%;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100%,特异度为98.9%;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON检测结果符合率为95.0%。结论:成功建立了LiCA间接法反应模式定性检测CMV-IgM抗体的方法。该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,有潜在的临床应用前景。     

用间接免疫荧光法和PCR技术重新评价抗CMV－抗体检测的临床意义

为了正确评价临床常用的检测抗巨细胞病毒（ＣＭＶ）抗体的临床意义，用间接免疫荧光法（ＩＦＡ）和聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测了５０例急性黄疸型甲型肝炎患儿血白细胞中ＣＭＶ早期抗原（ＥＡ）和晚期抗原（ＬＡ）、血白细胞及尿沉渣ＣＭＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为５８％、２２％、６８％、６２％。同期检测抗ＣＭＶ－ＩｇＧ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ，并观察ＩｇＧ急性期／恢复期是否升高４倍以上（ＩｇＧ↑↑），阳性率分别为８６％、３４％及４６％。仅检测１次ＩｇＧ，１４％的患者会漏诊；动态监测ＩｇＧ，４３．９％的活动性ＣＭＶ感染者会漏判；仅检测１次ＩｇＭ，５８．５％的活动性ＣＭＶ感染者会漏判。７９％的ＩｇＧ阳性患者为活动性感染（ＥＡ、ＬＡ、ＩｇＧ↑↑或ＩｇＭ任何１项阳性）；原发性及继发性活动性ＣＭＶ感染者的ＩｇＧ↑↑、ＥＡ、ＩｇＭ阳性率分别为１００％、４２．９％、２８．６％和４７．０％、７６．５％、４４．１％，表明原发感染诊断主要依靠ＩｇＧ↑↑，而继发活动感染则需多种指标。同期检测了２２名健康ＣＭＶ感染儿童的上述指标，与之无显著差异。     

巨细胞病毒DNA早期抗原与巨细胞病毒-IgM、IgG滴度一致率的对比研究

目的 :正确认识巨细胞病毒 (CMV)DNA及CMV早期抗原 (EA)的病毒学意义及临床价值。方法 :检查 34例急性黄疸性肝炎患儿和 19例健康儿童的血白细胞CMV DNA、尿CMV DNA、血白细胞CMV EA ,并与其同时检测的CMV IgM、CMV IgG双份血清 (急性期 /恢复期 )滴度有 4倍以上升高 (IgG升高 )相比较。结果 :CMV DNA与CMV IgM及CMV IgG升高的一致率都低于 5 0 % ;CMV EA与CMV IgM的一致率为 6 6 .7% (肝炎患儿 )、6 8.4% (健康儿童 ) ,显著高于血CMV DNA( 37.7% ,P <0 .0 1)和 CMV DNA( 4 4.4% ,P <0 .0 5 )与CMV IgM的一致率 ,但CMV EA与CMV IgG升高无相关性 ;CMV DNA与CMV EA在肝炎患儿和健康儿童中的检出率无显著差异性。结论 :CMV DNA定性检查不适于做为CMV活动性感染的指标 ,而CMV EA更能反映CMV的活动性感染。联合开展CMV的多种抗原检查以及定量检查CMV 抗原和DNA可能是必要的     

异基因造血干细胞移植受者CMV检测方法的比较

目的:比较异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后早期有效检测巨细胞病毒(CMV)激活感染的方法。方法:分别应用荧光定量PCR和ELISA试剂盒检测57名allo-HSCT受者642份标本的血浆DNA负荷量和血清IgM抗体。结果:IgM抗体和DNA定量的阳性检出率为35.51%(228/642)和13.08%(84/642),连续阳性病例和临床诊断的符合率分别为33.33%(9/24)和87.5%(21/24),IgM抗体阳性检出率明显低于DNA定量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:荧光定量PCR检测allo-HSCT受者CMV早期感染可靠、简便快速,值得临床推广使用。     

新型冠状病毒IgM-IgG抗体检测试剂盒的制备及对15例患者临床应用初试

目的 开发一种快速检测SARS-CoV-2病毒的IgM-IgG抗体的胶体金免疫层析检测试剂盒,并优化研发及应用策略,分析IgM-IgG抗体联合检测在新冠病毒检测中的临床应用价值。 方法 表达纯化SARS-CoV-2病毒S蛋白的RBD和NTD结构域,通过胶体金制备工艺包被抗原及多克隆抗体,制备IgM-IgG抗体检测试剂盒;收集15例阳性患者的血清进行抗体检测分析,计算试剂盒检测的阳性率,分析SARS-CoV-2抗体IgM-IgG对病毒响应的过程。 结果 在15例核酸RT-PCR检测阳性的患者血清样本中,IgM-IgG联合抗体检测的阳性率为73.33%,其中IgM阳性占总标本数的53.33%,IgG阳性占总标本数的60.00%;5例境外人员中有3例为抗体阳性;对患者的流行病学分析发现,病毒感染1周以上的患者共7例,抗体检测全部为阳性;抗体检测试剂盒的灵敏度73.33%,特异性95.00%。 结论 IgM-IgG联合抗体检测法具有快速、方便、易操作等特点,可以作为核酸检测的辅助手段对疑似患者(尤其是境外人员及无症状患者)进行初筛;且IgM-IgG的检测结果可以作为推测患者病毒感染过程的依据;快速检测IgM-IgG抗体将为COVID-19疾病的诊断和治疗提供帮助。     

酶联免疫吸附法检测IgM抗乙型肝炎核心抗原的方法学研究

对酶联免疫吸附法检测IgM抗乙型肝炎核心抗原(HBc)的影响因素进行了研究。实验结果指出:稀释液中兔血清含量是诸因素中最重要的因素。本文还对中性去污剂Tween20在阻断蛋白质非特异性吸附于反应板上的效果以及底物的最佳配方作了初步探讨。     

巨细胞病毒检测及在异基因造血干细胞移植中应用研究

目的:探讨检测巨细胞病毒(CMV)的方法学及在异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)中临床应用的价值.方法:以45例Allo-HSCT为研究对象,采集移植前供者、移植前后及恢复期受者的抗凝血标本,分别采用CMV-pp65单克隆抗体免疫组化法和ELISA法,检测CMV早期抗原和IgG、IgM抗体,并进行多点动态观察.结果:45例患者163份系列标本,CMV早期抗原阳性75份,是在移植后6～242天首次检出,平均70天;其中≤45天出现阳性者26例,占58%.术前供、受者CMV-IgG抗体均阳性,CMV-IgM抗体供、受者各1例阳性,其中受者持续阳性.术后45例中21例出现CMV-IgM抗体阳性,首次检出时间在14～234天,平均127天,比早期抗原检出时间推迟近2个月.45例中因CMV感染而致间质性肺炎25例,占55%.结论:异基因造血干细胞移植采用CMVpp55单克隆抗体免疫组化法检测巨细胞病毒感染,快捷、准确、灵敏,对患者的诊断、治疗和预后判断有重要意义,值得推广.     

用PCR检测乙型肝炎患者血清巨细胞病毒活动性感染

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测１２５例乙型肝炎患者血清中巨细胞病毒脱氧核糖核酸（ＣＭＶ－ＤＮＡ）诊断ＣＭＶ活动性感染、同时与酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测血清中ＣＭＶ－ＩｇＭ的结果相比较。结果显示：ＣＶＭ－ＤＮＡ阳性率为３２．８０％，同于ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率１５．０２％，各型肝炎中，急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为１９．０５％，３５．２９％。血清ＣＭＶ－ＤＮＡ阴性的乙