丹参对缺血心肌细胞离子通道的作用

目的丹参系传统的活血化瘀中药,有抗心肌缺血、抗血小板、抗血栓形成、调血脂、抗氧化及抗动脉粥样斑块形成等作用.但是其对缺血心室肌细胞的直接作用目前尚不清楚.该实验旨在通过模拟心肌细胞的缺血环境,采用全细胞膜片钳技术,观察丹参对缺血心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙电流(ICa-L)、ATP敏感性钾血流(IK(ATP))以及瞬时外向钾电流(Ito的影响,从而进一步阐明其对缺血心肌细胞保护作用的机制.方法采用酶解加机械分离的方法,取得具有正常生理活性的耐钙心室肌细胞,通过、N2饱和的去除葡萄糖的细胞外液灌流,另加入20 mmol/L的乳酸,模拟缺血环境,应用全细胞膜片钳技术观察丹参对缺血心室肌细胞AP、ICa-L、IK(ATP)以及It.的影响.结果①丹参可明显缩短正常及缺血心室肌细胞的动作电位时程(APD),对动作电位幅值(APA)、静息膜电位(RP)以及O期最大除极速率(Vmax)均无明显影响.②丹参可明显抑制正常及缺血心室肌细胞的ICa-L,并且对缺血细胞的ICa-L的抑制作用没有对正常细胞强.③丹参能够增加缺血引起的IK(ATP),具有ATP敏感性通道的开放作用.④丹参能够增加缺血心室肌细胞的Ito,促进早期复极.结论①丹参能够缩短心室肌细胞的动作电位,主要是由于对ICa-L的抑制,因此,丹参阻Ca2+内流,减轻钙超载,减少ATP的分解,降低异常物质在细胞内的堆积,对缺血心肌有保护作用.②丹参能够减少缺血心室肌细胞APD的不均一性以及缓解此时出现的钙超载现象,因而可能减少因折返或自律性增高所导致的心律失常的发生.③丹参具有ATP敏感性钾通道的开放作用,能够增加缺血心室肌细胞的Ito,两者的临床意义有待于进一步探讨.     

黄芩苷对大鼠心室肌细胞动作电位的影响

目的从电生理角度探讨黄芩苷抗心律失常的可能机制。方法采用膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞动作电位(AP)和内向整流钾电流(IK1),观察黄芩苷对AP和IK1的影响。结果 0.01和1.00 mmol·L-1黄芩苷可缩短动作电位时程(APD),分别使APD50从(64.5±10.8)ms缩短至(51.8±8.2)和(36.2±12.9)ms(P<0.05);使APD90从(145.7±10.4)ms缩短至(128.9±12.7)和(91.6±15.5)ms(P<0.05),而对静息膜电位、动作电位幅度和APD20无显著影响(P>0.05)。0.001、0.010、0.100、1.000 mmol·L-1黄芩苷对IK1抑制率分别为(13.8±0.7)%、(26.9±1.3)%、(38.1±1.1)%和(40.9±1.4)%,均高于加药前(0.0±0.0)%(P<0.05)。结论黄芩苷可能通过抑制IK1来缩短动作电位时程,发挥抗心律失常作用。     

福辛普利对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位及其离子通道的影响

目的 观察福辛普利预处理对缺氧复氧豚鼠心室肌细胞动作电位(AP)、L-型钙通道电流(ICa-L)和ATP敏感钾通道电流(IK-ATP)的影响,探讨其抗再灌注性心律失常的电生理机制.方法 采用全细胞电流钳和膜片钳技术分别记录AP和ICa-L,IK-ATP.结果 缺氧复氧使心室肌细胞AP时程(APD50,APD90)缩短;ICa-L峰值降低,I-V曲线上移,激活曲线右移,半数激活电压(V1/2)增大,失活曲线左移,失活V1/2减低;ATP敏感钾通道由正常关闭状态到完全开放.与缺氧复氧组相比,福辛普利预处理使APD50,APD90相对延长;ICa-L峰值增加,I-Ⅴ曲线上移幅度减小,激活曲线左移,失活曲线右移,激活与失活V1/2均接近正常,ATP敏感钾通道进一步开放,电流明显增加.结论 福辛普利预处理能显著改善缺氧复氧状态下L-钙通道的抑制状态,促进动作电位参数的恢复,减少有效不应期的离散度及折返形成;通过药物预适应机制,进一步开放ATP敏感钾通道,增加ATP敏感钾电流,而发挥抗再灌注心律失常的作用.     

普罗帕酮对豚鼠左心室流出道自律细胞与心室肌细胞电生理效应影响

目的:探讨普罗帕酮对心脏左心室流出道自律细胞与心室肌细胞电生理效应的影响。方法:应用常规的玻璃微电极细胞内记录技术,观察普罗帕酮对豚鼠左心室流出道自律细胞与心室肌细胞动作电位0相幅值(APA),最大除极速率(Vm ax),动作电位时程(APD),50%复极化时间(D50),90%复极化时间(D90)以及左心室流出道自律细胞最大除极速率(Vm ax)与自发电活动频率(HR)。结果:①用0.5μm o l/L的普罗帕酮灌流后与正常对照组相比左心室流出道自律细胞自发电活动频率(HR)显著下降(P<0.01);②用1μm o l/L的普罗帕酮灌流后与正常对照组相比左心室流出道自律细胞动作电位0幅值(APA)下降(P<0.05),动作电位时程(APD)及50%复极化时间(D50)升高(P<0.05),自发电活动频率(HR)显著下降(P<0.01);用1μm o l/L的普罗帕酮灌流对心室肌细胞的电生理效应影响并不明显。③用5μm o l/L的普罗帕酮灌流后左心室流出道自律细胞电生理活动减弱或消失;用5μm o l/L的普罗帕酮灌流后与正常对照组相比对心室肌细胞动作电位0幅值(APA)下降(P<0.05),动作电位时程(APD)及50%复极化时间(D50)升高(P<0.05)。④用10μm o l/L的普罗帕酮灌流后与正常对照组相比对心室肌细胞动作电位0幅值(APA)下降(P<0.05),动作电位时程(APD)明显升高(P<0.01),50%复极化时间(D50)及90%复极化时间(D90)升高(P<0.05)。结论:普罗帕酮能抑制左心室流出道自律细胞与心室肌细胞的动作电位0幅值,延长动作电位时程;使左心室流出道自律细胞自发电活动频率下降。     

头孢拉定对正常及缺血模型兔浦肯野纤维细胞动作电位的影响

目的：观察不同浓度头孢拉定对正常状态和缺血状态兔浦肯野纤维细胞动作电位的影响。方法：采用标准微电极技术,观察不同浓度头孢拉定对正常钾台氏液灌流和模拟缺血液灌流的离体兔浦肯野纤维标本动作电位电生理参数0期去极化幅值（APA）、最大除极速率（Vmax）、90％动作电位时程（APD90）及有效不应期（ERP）的影响。结果：（1）模拟缺血液灌流,APA、APD90、ERP以及Vmax均呈下降趋势。（2）正常钾台氏液中加入不同浓度头孢拉定灌流,APA呈增大趋势,在药物浓度为10mmol／L时变化有统计学意义。随着药物浓度增大,APD90呈现明显的缩短趋势,ERP也缩短,故ERP相对延长。Vmax值也有较为明显的变化,从药物浓度为0．03mmol／L时开始呈增大趋势,具有浓度依赖性。（3）模拟缺血液中加入不同浓度的头孢拉定对标本灌流,APA先明显上升,至浓度增大到10mmol／L时略有下降趋势,但仍明显大于正常值,并且变化差异有统计学意义（P〈0．05）。APD90随着浓度的增大进行性缩短,而ERP随浓度增加略缩短,ERP相对延长,并且延长程度与单独给药比较更为显著。Vmax在药物浓度为0．01～0．3mmol／L时明显增大,药物浓度增大到1mmol／L后,略微下降。结论：在头孢拉定的作用下,浦肯野细胞动作电位易发生平台期抬高以及ERP的相对延长,平台期抬高的现象在单独给药时更显著,而ERP的相对延长在缺血给药时更明显。     

伊布利特对低钾诱发豚鼠心律失常的电生理效应

目的:探讨伊布利特对低钾性左心室流出道慢反应自律细胞电生理的影响。方法:应用常规玻璃微电极细胞内记录技术,观察正常灌流液、低钾灌流液、低钾+伊布利特(0.01mg/ml)灌流液对豚鼠左心室流出道慢反应自律细胞最大舒张电位(MDP),动作电位0相幅值(APA),50%复极化时间(APD50),90%复极化时间(APD90),4相自动去极速度(Vmax),自发放电频率(RPF)的影响。结果:与正常对照组相比,低钾灌流液组左心室流出道慢反应自律细胞20min后APD50、APD90均明显缩短(P<0.05);APA、Vmax、RPF显著变快(P<0.01),并出现心律不齐;在低钾灌流液组中加入伊布利特可明显延缓APD50、APD90(P<0.05);并使APA缩短、Vmax、RPF逐渐变慢(P<0.01),稳定20min后,RPF基本恢复正常的节律。结论:低钾可明显影响豚鼠左心室流出道慢反应自律细胞电活动,使其自律性发生改变,而伊布利特能拮抗低钾诱发的心律失常,降低诱发所导致的自发放电频率的升高,提示伊布利特对治疗低钾性左心室流出道慢反应自律细胞异常电生理所诱发的心律失常有显著疗效。     

辅酶Q10对异丙肾上腺素诱发的心肌缺血的保护作用

目的探讨辅酶Q10对心肌缺血的保护作用.方法采用高效液相色谱法测定全血中ATP、ADP的含量和电生理检测不同组别的动作电位幅度、超射值、静息电位值、最大除极速度和动作电位时程.结果辅酶Q10组ATP、ADP含量显著高于异丙肾组;辅酶Q10对改善心肌细胞复极有作用,与损伤组相比,可使动作电位(APD)缩短,并以APD50、APD90缩短尤为明显.结论辅酶Q10对心肌细胞有一定的的保护作用.     

参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位和部分离子通道的影响

目的 探讨参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞(PVC)动作电位和某些离子通道的影响,对治疗心房颤动的可能机制.方法 采用全细胞膜片钳技术的电流钳记录动作电位和电压钳制记录兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位、L-型钙离子通道电流(LCa-L)、内向整流钾电流(IK1)和瞬时外向钾电流(ITo),并观察不同浓度参松养心干粉提取液对动作电位和各离子通道电流的影响.结果 参松养心干粉提取液明显延长PVC动作电位时程(APD),APD90基础状态下(187±49)ms,在浓度5 mg/ml时延长至(286±76)ms(P<0.05),在浓度10 mg/ml时延长至(312±82)ms(P<0.05);参松养心胶囊干粉提取液对PVC的LCa-L、IK1,和ITo电流呈浓度依赖性抑制作用.结论 参松养心胶囊干粉通过对肺静脉多个离子通道的作用,可能对心房颤动起到治疗作用.     

一种筛选抗心律失常药物新模型的建立

目的　建立一种细胞水平的心律失常模型 ,以用于抗心律失常药物的筛选和评价。方法　酶解法分离单个大鼠心室肌细胞 ,在细胞水平给予传统诱发心律失常药物乌头碱 ,应用膜片钳技术观察记录应用乌头碱后心肌动作电位时程 (APD)、钠电流(INa)、L 型钙电流 (ICa L)、内向整流钾电流 (IK1 )及瞬时外向钾电流 (Ito)的变化。结果　应用乌头碱 1μmol·L- 1 使大鼠单个心室肌细胞 90 %复极化动作电位时程 (APD90 )从给药前的 (15 0 .2 3± 7.0 2 )ms延长至 (2 36 .0 3± 2 3.2 2 )ms(n =8,P <0 .0 1)。应用奎尼丁 10 μmol·L- 1 后动作电位…     

银杏叶提取物对家兔心室肌细胞瞬时外向钾电流和动作电位的影响

目的:探讨银杏叶提取物(Egb761)对家兔心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和动作电位的作用,揭示其抗心肌缺血及缺血引起的心律失常的离子机制。方法:酶解法分离家兔的心室肌细胞。全细胞膜片钳技术记录心肌细胞的Ito和动作电位及其被Egb761作用后的变化。结果:①在电压钳制方式下,60μg/L Egb761作用心室肌细胞5 min后,各个钳制电位下的Ito均明显增大,在钳制电位为+50 mV时,Egb761使Ito的电流密度由对照组的(7.59±0.19)pA/pF增加到(11.18±0.89)pA/pF(P<0.01,n=8),Egb761还使Ito的I-V曲线比对照组Ito的I-V明显抬高,但I-V曲线方向没有发生改变,表明Egb761引起了心肌细胞Ito的明显外流。②在电流钳制下,对照组心室肌细胞动作电位都具有从0期到4期的动作电位形态,60μg/L Egb761使心肌细胞动作电位形态呈三角形尖锥锋形,动作电位时程(APD)明显缩短,其复极化50%时程(APD50)和复极化90%时程(APD90)分别由(83.6±4.3)ms缩短为(51.3±3.2)ms和由(168.7±4.1)ms缩短为(93.8±4.4)ms(分别与对照组相比,P<0.01,n=8),尽管Egb761使动作电位幅度(APA)和静息电位(RP)降低,但与对照组相比,没有显著性差异(P>0.05)。结论:Egb761可使心室肌细胞Ito显著增加和APD明显缩短,从而减轻心肌缺血时细胞内阳离子超载对心肌造成的损伤和心肌缺血引起的心律失常的发生,以及增加心脏泵血功能。     

肾上腺髓质素对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响

目的 研究肾上腺髓质素(ADM)对脓毒性休克大鼠心肌细胞外向钾电流的影响.方法 成年大鼠腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg/kg)4 h后,分离心室肌细胞.用全细胞膜片钳的方法 记录瞬时外向钾电流(I_(to)),稳态钾电流(I_(ss))和ATP敏感钾电流(I_(K,ATP)).结果 LPS处理对I_(to)和I_(ss)无影响.休克心肌细胞I_(K,ATP)密度[(2.66 ± 0.56)pA/pF(n=12)]较正常心肌细胞值[(0.27 ± 0.08)pA/pF(n=14)]明显增加(P＜0.01).ADM受体拮抗剂ADM-(22-52)可使增加的I_(K,ATP)得到明显的恢复[(0.69 ± 0.21)pA/pF(n=11),P＜0.01 vs LPS 组].而ADM-(22-52)与100 μmol/L氨基胍联合处理几乎可完全取消I_(K,ATP)的增加.结论 脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)被激活.ADM 与NO共同参与了脓毒性休克大鼠心肌细胞I_(K,ATP)的激活.     

离子通道阻断剂对家兔左心室流出道的电生理效应

目的:研究左心室流出道自律性及其电生理特性。方法:本实验利用常规的玻璃微电极细胞内记录技术,观察了常规离子通道阻断剂对离体家兔左心室流出道慢反应自律细胞的电生理特性的影响,重点探讨了该部位自律细胞的0期、4期去极离子流。结果:1用1.2mmol/L河豚毒(TTX)使动作电位幅值(APA)、0期最大除极速率(Vmax)与给药前相比明显减小(P<0.05),舒张期除极速率(VDD)和自发放电频率(RPF)均明显减慢(P<0.01);2用0.5μmol/L维拉帕米(VER)灌流后APA、Vmax、最大舒张电位(MDP)绝对值、VDD、RPF均明显下降,复极90%时间(APD90)延长(P<0.05);3用120μmol/L氯化镍(NiCl2)灌流,VDD明显下降,APA、Vmax、RPF也显著降低;4给予2mmol/L4-氨基吡啶(4-AP)后VDD明显增快,MDP绝对值、APA、Vmax显著下降,APD90明显延长(P<0.05);5给予1.5mmol/L氯化铯(CsCl)后VDD及RPF均明显变慢(P<0.05)。结论:1Ca2+流为兔左心室流出道自律细胞0期去极主要离子流,并有少量Na+内流参与;24期自动除极以K+外流衰减为主,另外,ICa-T、ICa-L及If在起搏电流中也起一定作用。     

儿茶酚胺对豚鼠左心室流出道自律性电活动的影响

目的:探讨儿茶酚胺( CA)对豚鼠左心室流出道自律细胞电生理特性的影响。方法:用标准玻璃微电极细胞内记录技术,观测去甲肾上腺素( NE)、肾上腺素( E)和异丙肾上腺素( Iso)对左心室流出道自发慢反应电位的影响。观测指标:MDP、APA、Vmax、VDD、APD50 和APD90 时间以及RPF。结果:1 1 0 0 μmol/ L NE灌流后,RPF和VDD加快( P<0 .0 5 ) ,APD50 缩短( P<0 .0 1 ) ;2 1 0 0 μmol/ L E可使RPF( P<0 .0 1 )和VDD( P<0 .0 5 )加快,APA显著增大( P<0 .0 1 ) ,APD50 ( P<0 .0 1 )和APD90 ( P<0 .0 5 )缩短;3 1 0 0 μmol/ L Iso可使RPF和VDD显著加快( P<0 .0 1 ) ,MDP绝对值和APA显著增大,Vmax加速,APD50 和APD90 缩短。结论:CA可提高左心室流出道组织的自律性     

多用途成年大鼠心室肌细胞分离方法

目的 建立稳定的可同时用于细胞培养和膜片钳实验的成年大鼠心室肌细胞的分离方法 .方法 应用Langendorff灌流.生物酶消化法分离耐钙心肌细胞.分别用左右心室肌做细胞培养和全细胞膜片钳研究.结果 左室心肌细胞数(3.7±0.6)× 10~6,杆状细胞得率(84.85±2.7)%.右室心肌细胞横纹清晰,折光率好,膜片钳实验时容易封接破膜,记录到典型的I_(Ca).L、I_(K1)、I_(to)、I_(Na)电流.结论 该方法 简单、节约、重复性好,改善了杆状细胞得率、细胞质量,左右心室肌细胞分别能很好地用于细胞培养和膜片钳实验.     

阿魏酸钠注射液治疗稳定性劳力型心绞痛疗效的观察

目的　观察阿魏酸钠注射液对稳定性劳力型心绞痛病人临床疗效、血液流变学的影响。方法　 6 8例病人分为阿魏酸钠组 36例和丹参组 32例 ,分别予阿魏酸钠注射液 2 0 0mg ,复方丹参注射液 2 0mlivgttqd共治疗 10d。结果　 2组均能提高疗效 ,降低血液流变学指标 ,与治疗前比较差异有非常显著意义 (P <0 .0 1)。总有效率阿魏酸钠为 83% ,丹参组为 75 % ,差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) ;阿魏酸钠组降低血液流变学作用较丹参组明显 ,差异有非常显著意义 (P <0 .0 1)。结论　阿魏酸钠注射液能够明显改善稳定性劳力型心绞痛疗效 ,血液微循环变化与复方丹参注射液相似     

复方丹参注射液对人外周血单个核细胞体外分泌TNF－α的影响

[摘要] 目的 探讨复方丹参注射液治疗强直性脊柱炎可能的作用机制。方法 将分离的正常人外周血单个核细胞分成5组,分别给予生理盐水、大剂量复方丹参、中剂量复方丹参、小剂量复方丹参和地塞米松;孵育48h后,提取细胞培养液上清夜,用放免法检测肿瘤坏死因子α的含量。 结果 大剂量复方丹参组和地塞米松组细胞培养液的上清液TNF-α含量明显低于生理盐水组(P<0.05),大剂量复方丹参组的TNF-α的含量水平明显低于中、小剂量复方丹参组(P<0.05)。 结论 抑制人PBMC分泌TNF-α可能是复方丹参注射液治疗AS的途径之一。     

复方丹参注射液联合奥曲肽治疗急性胰腺炎临床疗效分析

目的:探讨复方丹参注射液联合奥曲肽治疗急性胰腺炎的临床疗效。方法:选取收治的急性胰腺炎患者76例,随机平均分为两组,试验组患者在常规治疗的基础上使用奥曲肽联合复方丹参注射液治疗,对照组则在常规治疗的基础上仅加用奥曲肽治疗,对比临床疗效及恢复时间。结果:试验组显效12例,有效22例,无效4例,总有效率为89.5%;对照组显效11例,有效20例,无效7例,总有效率为81.6%。总有效率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。试验组的腹痛缓解时间、血淀粉酶恢复正常时间、尿淀粉酶恢复正常时间、住院时间与对照组对比,均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:复方丹参注射液联合奥曲肽注射液治疗急性胰腺炎,可缩短患者恢复时间,安全有效,值得推广。     

奥曲肽联合复方丹参治疗急性胰腺炎63例疗效观察

目的观察奥曲肽联合复方丹参注射液治疗急性胰腺炎(AP)的疗效。方法将125例AP患者随机分为治疗组63例和观察组62例。对照组在常规禁食、胃肠减压等治疗的基础上,同时给予奥曲肽;观察组在对照组治疗基础上,予以复方丹参注射液。7 d为1个疗程,疗程结束后观察并比较两组患者的症状、腹部体征消失的时间,住院时间,血清淀粉酶恢复正常时间。结果观察组治疗后血清淀粉酶恢复正常时间均显著低于对照组(P<0.01),腹痛缓解时间、住院时间亦短于对照组(P<0.01)。结论复方丹参注射液联合奥曲肽能明显改善AP患者的临床症状和体征,疗效好,可缩短住院时间。     

丹参对大鼠离体肝脏血红素氧合酶-1表达的作用

目的：研究丹参在大鼠离体肝保存时对HO-1mRNA及蛋白的表达的作用。方法：模拟临床供肝保存,大鼠肝脏切取后置4℃保存液中。实验根据灌注保存液不同分为平衡液组(A 组)、丹参组（B组）、丹参＋抑制剂预处理组（C 组）,每组分别为24只动物,根据保存时间各组分为4个亚组（0、1、3、6h）,每亚组6只动物。术前24小时,A、B组用生理盐水腹腔注射预处理,C组用锌原朴啉腹腔注射预处理。以RT-PCR和免疫组化半定量检测HO-1mRNA及蛋白表达的情况,对各组大鼠肝组织行病理切片,观察形态学改变并评分,并作HO-1的与肝脏损伤评分相关分析。结果：(1) B组各亚组肝组织HO-1的mRNA及蛋白的表达水平明显较A、C两组高（p﹤0.05）;(2) 除0h亚组外,各组同时间点亚组比较,以B组肝组织损害最轻,保存时间最长, C组的肝组织损伤明显重于A、B两组;（3）HO-1的mRNA及蛋白的表达与肝脏损伤评分呈相关性。结论：大鼠离体肝脏保存时,丹参可以诱导HO-1过表达;丹参诱导HO-1的表达可能是丹参对肝脏保护作用机制。 关键词：丹参; 血红素氧合酶-1;器官保存     

复方丹参在肠缺血-再灌注损伤中保护作用的实验研究

目的 :探讨肠缺血再灌注 (ischemia- reperfusion,I/ R)过程中复方丹参对肠缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用肠系膜上动脉 (SMA)夹闭 1h后松夹造成缺血再灌注损伤作为动物模型。将 4 2只 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和复方丹参治疗组。假手术组分离 SMA但不夹闭。余各组分别于缺血即刻、缺血 1h和再灌注1h3个时点应用免疫组织化学的方法观察小肠 ICAM- 1表达 ,同时检测组织髓过氧化物酶活性和组织水含量等指标 ,并行苏木素 -伊红 (HE)染色于光镜下观察小肠组织病理形态学改变。结果 :免疫组织化学显示 ICAM- 1蛋白表达在缺血再灌注组肠缺血 1h及再灌注 1h组较假手术组、复方丹参治疗组增多 (P<0 .0 5 ) ,组织髓过氧化物酶活性同时升高 (P<0 .0 5 )。HE染色显示 ,I/ R损伤后 ,复方丹参治疗组肠屏障功能损伤较缺血再灌注组减轻。结论 :肠缺血再灌注时肠血管内皮细胞 ICAM- 1表达增加 ,由此介导的中性粒细胞在局部聚集、活化可能是肠粘膜上皮损伤和肠通透性增加的病理生理学基础。复方丹参通过抑制 ICAM- 1的表达对肠缺血再灌注损伤有保护作用。