胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒的制备、体外释放及生物活性

目的 为了提高胸腺五肽口服的稳定性及生物利用度,制备胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒并考察其理化性质、体外释放及生物活性.方法 采用离子胶凝法制备胸腺五肽壳聚糖纳米粒并用Eudragit S100包衣制备pH-敏感纳米粒;透射电镜和环境扫描电镜观察纳米粒形态;粒度及表面电位分析仪测量纳米粒的粒径及Zeta电位;超速离心法测定载药纳米粒的包封率;动态透析法研究载药纳米粒的体外释放特性;模拟人工消化液考察纳米粒中胸腺五肽的生物稳定性;淋巴细胞增殖反应评价制剂的生物活性.结果 pH-敏感胸腺五肽壳聚糖纳米粒的平均粒径为(175.6±17)nm,Zeta电位为(28.44±0.5)mV,包封率为(76.70±2.6)%.胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒具有良好的pH依赖性:在0.1 mol·L-1 HCl溶液中累积释放24.65%,在pH 5.0 PBS溶液中累积释放41.01%,在pH 7.4 PBS溶液中累积释放81.44%.pH敏感壳聚糖纳米粒制剂中的胸腺五肽在人工胃液中稳定,在人工肠液中半衰期为15 min.淋巴细胞体外转化实验表明,胸腺五肽pH-敏感壳聚糖纳米粒保留了TP5的生物活性并且具有浓度依赖性.结论 pH-敏感壳聚糖纳米粒可能是口服胸腺五肽的良好载体.     

胸腺五肽纳米粒的制备及其处方优化

目的建立制备胸腺五肽纳米粒的方法并对其处方进行优化,为制备符合要求的压力定量吸入气雾剂奠定基础。方法将胸腺五肽、卵磷脂、乳糖溶于叔丁醇-水的混合溶剂中,冷冻干燥,将冻干产物用异丙醇混悬,离心除去多余的卵磷脂以得到纯药物纳米粒。采用星点设计-效应面法对其中水、卵磷脂、胸腺五肽的用量进行优化,因胸腺五肽的含量受此处方影响不显著,所以只选取纳米粒的粒径、粒径分布为结果考察指标。结果最优处方:水∶叔丁醇、卵磷脂∶叔丁醇、胸腺五肽∶水的比例分别为0.5(mL∶mL)、213.5(mg∶mL)、17.0(mg∶mL),即水的用量1.5 mL、卵磷脂的用量640.57 mg、胸腺五肽的用量25.57 mg、叔丁醇的用量3.0 mL。按此处方制备的纳米粒粒径在150 nm左右,多分散系数为0.1以下,含量均能保持在98%以上。结论采用该方法制备胸腺五肽纳米粒,质量佳,重现性好,方法简便,具有良好的应用前景。     

卵清蛋白模型疫苗/壳聚糖纳米粒鼻腔递送的研究

目的 研究壳聚糖纳米粒作为蛋白类疫苗的新载体,并评价其鼻腔给药后所产生的免疫效果.方法 使用离子胶凝法来制备亲水性壳聚糖纳米粒,选用卵清蛋白(OVA)为模型蛋白,考察其粒径、表面电位和蛋白包封率.并比较不同剂型鼻腔免疫BALB/c小鼠后产生的不同免疫效果.结果 壳聚糖载药纳米粒最佳粒径大约360 nm,表面电位为+40 mV,卵清蛋白的包封率可达到80%～90%.OVA/壳聚糖纳米粒鼻腔给药后能诱导更高更长期的体液免疫反应(IgG水平),和肌注高剂量卵清蛋白溶液产生的免疫效果相当;并且能诱导比可溶性抗原显著提高的黏膜免疫反应(IgA水平).结论 壳聚糖纳米粒制备方法温和,对蛋白等具有较高的包封率,鼻腔给药后能诱导较强的免疫反应,因此有望成为蛋白类疫苗鼻腔给药的新载体.     

褪黑素纳米粒的制备工艺研究

目的:制备褪黑素载药纳米粒并对其影响因素进行研究.方法:以聚乳酸、壳聚糖可生物降解材料为载体,明胶为分散剂,Span-80和Tween-80混合液为乳化剂,采用复乳-溶剂挥发法制备载药纳米粒,根据纳米粒的表面形态、粒径大小、分布、包封率、载药量选择最佳工艺条件,制备褪黑素纳米粒.结果:原子力显微镜观察纳米粒表面圆滑,分布均匀.正交设计效应曲线图直观分析和方差分析结果,均显示搅拌速度、溶剂挥发温度、聚乳酸与褪黑素投料比、壳聚糖浓度是影响制备工艺的主要因素.结论:在30 ℃;1 000 r/min搅拌速度;褪黑素与聚乳酸的质量比为1:3;Tween-80与Span-80体积比为5:1;壳聚糖质量分数为1%情况下,可制备成平均粒径在45.84 nm,包封率为38.33%,载药量为8.35%的褪黑素载药纳米粒.     

组织因子小干扰RNA壳聚糖纳米粒的制备及其特征

目的 探讨壳聚糖-组织因子小干扰RNA(TFsiRNA)纳米粒制备方法并研究其特性.方法 采用三聚磷酸钠(TPP)离子胶凝法分别制备包封型和吸附型壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒.检测纳米粒平均粒径和Zeta电位、载药率,并分析血清稳定性、体外生物活性及其细胞毒性.结果 两种纳米粒粒径均小于550 nm,粒径大小主要取决于壳聚糖类型、分子量及其浓度.酸碱度、壳聚糖TPP质量比也影响粒径大小.包封型纳米粒siRNA载药率为100%.壳聚糖-TPP-TFsiRNA纳米粒中的siRNA在5%血清中孵育24 h开始降解,60 h完全降解;50%血清孵育6 h保持完整,48 h完全降解.结论 壳聚糖纳米粒可能成为有效的siRNA转运载体.     

重组水蛭素-2鼻腔给药纳米粒制备工艺研究

目的 优选重组水蛭素-2（rHV2）鼻腔给药纳米粒最佳制备工艺。方法 采用壳聚糖与三聚磷酸钠复凝聚法,以包封率、载药量等为评价指标,以单因素考察和正交试验设计,对壳聚糖黏附纳米粒制备过程中有关影响因素及工艺参数进行优化。结果 壳聚糖的类型、壳聚糖溶液的pH值、壳聚糖与多聚磷酸钠的最终质量比以及搅拌速率对rHV2纳米粒的包封率和载药量均有较显著影响;优选工艺的包封率可达到70%以上,载药量＞8%。结论 经优选的工艺稳定可靠,可用于rHV2鼻腔给药纳米粒的制备。     

甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒的制备及特性研究

目的:制备具有肝细胞靶向的甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性。方法:采用离子凝胶法制备阿霉素壳聚糖纳米粒,再以高碘酸盐氧化法制备甘草酸表面修饰阿霉素壳聚糖纳米粒。激光透射电子显微镜观察纳米粒的形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径。RP-HPLC法间接测定纳米粒中甘草酸结合率和阿霉素包封率,并初步研究体外甘草酸的结合稳定性和阿霉素释药特性。结果:电镜显示纳米粒呈类球形,平均粒径为179.5 nm,甘草酸结合率达到80%以上,在释放介质中,12 h的甘草酸结合率仍保持(65.2±3.4)%;纳米粒中阿霉素包封率达90%以上,体外释药缓慢,无明显的"突释"现象,72 h的累计释放百分率为(28±4.6)%。结论:本方法制备的甘草酸表面修饰阿霉素纳米粒工艺简单,包封率高,且甘草酸表面结合稳定,有望提高阿霉素的肝细胞靶向性。     

去甲基斑蝥素-壳聚糖纳米粒的表征和体外释放研究

目的研制粒径小于200 nm的去甲基斑蝥素-壳聚糖纳米粒,并对其质量进行评价,对其结构、体外释放性能进行研究。方法以低相对分子质量的壳聚糖为载体,通过离子诱导法,制备去甲基斑蝥素-壳聚糖纳米粒,并考察纳米粒的形态、粒径、药物包封率、载药量、回收率、表面氨基以及体外释放特征。同时,采用红外光谱(IR)、X-射线衍射技术(XRD)和差示扫描量热法(DSC)对其结构进行了表征。结果制备的去甲基斑蝥素-壳聚糖纳米粒粒径小(131±11)nm、大小分布均匀(多分散指数PDI 0.183),外观呈球形,药物包封率45.12%,载药量7.3%,回收率99.62%,且70 min后体外释药完全。IR、XRD与DSC分析表明,壳聚糖已发生交联并形成了新的物相。结论低相对分子质量的壳聚糖有望成为制备载药纳米粒的优良材料。     

壳聚糖微／纳米粒在定向给药系统中的应用研究

目的：介绍壳聚糖微／纳米粒在新型定向给药系统中的应用,为发展安全高效的壳聚糖微／纳米粒定向给药系统提供参考。方法：综合近年来出版的有关文献,对壳聚糖基本性质,定位给药于各组织部位进行了探讨。结果：壳聚糖微／纳米粒可应用于脑、眼、鼻、口、肺、胃、小肠、结肠等器官靶向给药。结论：壳聚糖微／纳米粒作为一种新型药用辅料,在定位给药系统中已经得到了开发和应用。     

聚乙二醇化壳聚糖纳米粒的制备及局部滴眼给药性能评价

目的 制备一种聚乙二醇修饰的壳聚糖纳米粒,评价其局部滴眼给药性能.方法 以伏立康唑为模型药物,采用离子交联法制备载药的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒,对其进行表征后,分别考察纳米粒的药物缓释能力、对眼表药物代谢动力学的影响及其角膜渗透性.结果 聚乙二醇化壳聚糖纳米粒粒径为(235±23)nm,Zeta电位为(+23.1±0.6) mV,载药量为11.16％,包封率为61.35％.纳米粒体外释放药物非常缓慢,可持续释药48 h;相比于伏立康唑水溶液,纳米粒的药物浓度-时间曲线下面积明显增加,药物半衰期延长,清除率减少,眼表药物平均滞留时间延长(P＜0.05).荧光标记的聚乙二醇化壳聚糖纳米粒可穿透角膜上皮逐渐向角膜基质渗透.结论 与药物水溶液相比,聚乙二醇化壳聚糖纳米粒能够有效减少眼表药物的流失,改善药物的生物利用度.     

溴吡斯的明N-三甲基壳聚糖包衣脂质体的研制及其体外释药研究

目的 研制溴吡斯的明(PB)的阳离子脂质体,并对其体外释药进行考察.方法 采用逆向蒸发法制备PB脂质体(PB-L),以N-三甲基壳聚糖(TMC60)为包衣材料对其进行包衣,制备阳离子型PB-L,并用正交设计法对其处方进行优化;对溴吡斯的明脂质体包衣前后的形态、粒径、Zeta电位及体外释药特性进行考察.结果 最优处方为卵...     

GC-MS结合化学计量学解析法分析臭冷杉针叶挥发油成分

目的 分析臭冷杉Abies nephrolepis针叶挥发油中化学成分。方法 利用GC-MS联用技术进行分离检测,通过直观推导式演进特征投影（HELP）法对重叠峰进行解析,并结合程序升温保留指数（PTRI）进行辅助定性分析,采用峰面积归一化法对各组分进行定量分析。结果 共分辨出72个色谱峰,鉴定了其中63个组分,占臭冷杉挥发油化学成分总量的99.31%,其主要成分为醋酸龙脑酯、龙脑、α-红没药醇、柠檬烯等。结论 HELP法结合PTRI能够提高质谱定性的准确性,更全面、准确地反映臭冷杉针叶挥发油的化学成分。     

鼻用氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备及其特性研究

目的: 以壳聚糖为载体材料,氟尿嘧啶为模型药物, 制备鼻腔给药脑靶向微球.方法: 以液体石蜡为油相,span-80为乳化剂,采用乳化化学交联技术制备氟尿嘧啶鼻用微球.正交实验设计优化制备工艺,动态透析法检测微球的体外释放特性及其影响因素.用微球吸水能力表示微球的溶胀度.测定纤毛输送速率来评价微球的黏膜粘附力.结果:所得微球形态良好,粒径分布较为均匀,平均粒径(43±4) μm,载药量38.5%±1.0%,包封率79.0%±1.8%.体外释放符合Higuichi方程Q=0.103 5t1/2 0.028 4 (r=0.996 5).壳聚糖微球具有良好的生物粘附性,可显著降低纤毛输送速率(P<0.01),有效地延长微球在鼻腔的滞留时间.结论:所优化的制备工艺稳定,包封率较高,适于鼻黏膜用氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备.壳聚糖是良好的鼻用制剂的载体材料,应用前景广阔.     

正交法制备羧甲基壳聚糖－纳米银纳米微球

目的:制备以纳米银为模型药物的羧甲基壳聚糖载药纳米微球,探索载药纳米微球的制备条件对粒径、包封率的影响,确定最佳制备工艺。方法:三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备载药纳米微球,测量药物的包封率及粒径。紫外分光光度法测定该制剂中纳米银释放情况。结果:通过正交实验设计,优化了制备工艺条件,其最佳条件是羧甲基壳聚糖浓度4.2 mg/mL,滴速为5 s/滴,纳米银投药量为20 mg（500 μL）。在此条件下进行实验,制备出的载药纳米微球的平均粒径为514.1 nm,多分散系数0.204,包封率61.67%。8 h内累计释放量达80%以上,方程拟合以一级动力学方程拟合效果最好。结论:该制备工艺简单、稳定,可制备出包封率高、粒径适宜的羧甲基壳聚糖-纳米银纳米微球。     

多西他赛纳米泡的制备和性质

目的：优化多西他赛（docetaxel,DTX）纳米泡处方和工艺,并考察其性质。方法用Langmuir膜天平筛选成膜材料单甲氧基聚乙二醇-聚（乳酸羟基乙酸）共聚物（mPEG-PLGA）与不同膜稳定剂的最佳比例。以沸点为29.5℃的全氟戊烷为有机相,采用注入法制备mPEG-PLGA包裹DTX的纳米胶束,加入全氟戊烷后可形成纳米乳。考察纳米乳的处方工艺、及其形成纳米泡的条件。采用MTT法考察DTX纳米泡的MCF-7细胞毒性。结果成膜材料最佳比例为mPEG-PLGA∶司盘20=10∶1（摩尔比）,形成的膜弹性好,可耐受温度和超声。DTX纳米泡有明显的温度和超声敏感性。随温度升高粒径逐渐增大;温度降低粒径减小。在超声作用下,纳米泡先发生合并,粒径变大,随后略有减小。DTX纳米泡有显著的MCF-7细胞毒作用,呈剂量依赖性。结论 DTX纳米泡有望成为肿瘤靶向超声触发释药新制剂。     

子宫内膜异位症患者T细胞亚群CD_4、CD_8的测定

目的 :通过检测子宫内膜异位症患者T淋巴细胞亚群 ,了解CD4 和CD8T细胞及其CD4 /CD8比值与正常对照之间的改变 ,探讨子宫内膜异位症的免疫病理变化。方法 :采用荧光激活细胞分析仪 (FACS) ,检测外周血T细胞亚群CD4 和CD8的比例及CD4 /CD8比值。结果 :子宫内膜异位症组外周血CD4 比例高于对照组 ,CD8比例低于对照组 ,CD4 /CD8比值高于对照组 ,各组间差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 :子宫内膜异位症患者免疫调节功能紊乱 ,辅助性T细胞功能增强而抑制性T细胞功能降低 ,淋巴细胞过度活化 ,使子宫内膜细胞脱落。     

1型糖尿病患者胰岛细胞抗体和T细胞亚群与胰岛功能的关系

目的：研究１型糖尿病患者血清胰岛细胞抗体（ＩＣＡ）和外周血Ｔ淋巴细胞亚群变化以及其与胰岛功能的相关性。方法：测定５３例１型糖尿病患者ＩＣＡ、外周血淋巴细胞亚群和血清Ｃ肽水平，结果：ＩＣＡ阳性率为５０．９％；１型糖尿病患者ＣＤ３和ＣＤ８均高于正常人，ＣＤ４低于正常人，但无统计学意义，ＣＤ４／ＣＤ比值明显低于正常人；ＩＣＡ阳性者ＣＤ７明显高于正常人，ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ８比值明显低于正常人；２１例病程     

氨茶碱／壳聚糖／β-环糊精肺吸入微球的工艺研究

目的：研究喷雾干燥法制备氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球的制备工艺。方法采用正交设计优化喷雾干燥法制备氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球的制备条件,考察氨茶碱在β-环糊精溶液中的溶解度以及氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球的载药量、包封率、产率、含水率和外观形态等特性。结果氨茶碱的溶解度随温度和β-环糊精溶液浓度的增加而增加;根据载药量氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球喷雾干燥的最佳工艺条件为A1 B3 C1 D3,即进口温度为150℃,进料速度为8ml/min,空气流量为400L/h,壳聚糖分子量为130万;氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球的载药量、包封率、产率和含水率分别为19．3％±0．5％,77．4％±0．6％,39．5％±1．0％,9．7％±0．7％;扫描电镜显示微球外观圆整,表面光滑或有少许皱褶;喷嘴直径为0．7mm时制得的微球粒径更小且较均一。结论采用正交设计优选了最佳制备工艺,其制得的氨茶碱/壳聚糖/β-环糊精微球具有较高的载药量、包封率、产率和较低的含水率,微球圆整,带少许皱褶,有望成为肺部吸入的理想药物载体。     

HIV感染者和AIDS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的　通过对艾滋病患者和HIV感染者外周血T淋巴细胞亚群的表达和绝对计数检测 ,研究细胞免疫情况。方法　利用白细胞分类计算和流式细胞分析法对 15例HIV感染者和 2 6例AIDS患者外周血淋巴细胞中CD3 + ,CD4+ ,CD8+ 的表达及绝对数进行检测。结果　AIDS患者组CD3 + 淋巴细胞数较正常值显著下降 (P <0 0 5 ) ;HIV感染组与艾滋病患者组的CD4+ T淋巴细胞数较正常组显著下降 (P <0 0 1) ;CD8+ T淋巴细胞数显著增高 (P <0 0 1) ;CD4+ /CD8+ 的比值显著倒置。结论　人类感染HIV后 ,外周血T淋巴细胞亚群发生显著变化 ,CD4+ 细胞绝对数和CD4+ /CD8+ 比值对于HIV感染的临床进展可以起到指示作用。