应用组织芯片技术对胃癌组织中cyclin E和p21WAF1蛋白表达观察的体会

目的:探讨使用组织芯片技术,观察细胞周期的调控因子cyclin E和p21WAF1在胃癌组织中的表达的方法.方法:以124例为观察研究对象,自制组织芯片,使用S-P法观察单克隆抗体cyclin E(MAB-0019)、p21WAF1(MAB-0235)在胃癌组织中的表达情况.对其中11例使用常规制片方法进行了对照免疫组化染色.结果:制成组织芯片2块,各含63块组织芯片,所制切片质量较满意,制片组织块完好率为95.2 %～98.4 %.所制成的组织芯片进行免疫组织化学染色,与采用常规制片方法进行免疫组化染色片对比,阳性率、阳性表达强度结果基本一致.结论:使用自制组织芯片进行cyclin E、p21WAF1免疫组化染色分析,效果良好,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组化染色和实验分析的良好前景.     

应用组织芯片技术对胃癌组织中cyclinE和p21~(WAF1)蛋白表达观察的体会

目的 :探讨使用组织芯片技术 ,观察细胞周期的调控因子 cyclin E和 p2 1WAF1在胃癌组织中的表达的方法。方法 :以 12 4例为观察研究对象 ,自制组织芯片 ,使用 S- P法观察单克隆抗体 cyclin E(MAB- 0 0 19)、p2 1WAF 1 (MAB-0 2 35 )在胃癌组织中的表达情况。对其中 11例使用常规制片方法进行了对照免疫组化染色。结果 :制成组织芯片 2块 ,各含 6 3块组织芯片 ,所制切片质量较满意 ,制片组织块完好率为 95 .2 %～ 98.4 %。所制成的组织芯片进行免疫组织化学染色 ,与采用常规制片方法进行免疫组化染色片对比 ,阳性率、阳性表达强度结果基本一致。结论 :使用自制组织芯片进行 cyclin E、p2 1WAF1 免疫组化染色分析 ,效果良好 ,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组化染色和实验分析的良好前景。     

组织芯片技术在胃癌p53蛋白表达研究中的应用

目的探讨组织芯片免疫组化标记结果的可靠性，研究p53表达与胃癌临床病理特征及预后的相关性。方法将100例无术前放化疗史的胃癌手术标本和30例对照组胃粘膜制成组织芯片后，用免疫组化方法分别在组织芯片和常规切片上检测p53蛋白的表达，比较其差异；用TUNEL法进行细胞凋亡指数检测。对随访14个月至13年的47例作生存分析。结果共获得2个组织芯片蜡块。p53检测在常规切片和组织芯片同为阳性或同为阴性者占98％，不一致者占2％。p53表达在胃癌不同组织学分化、UICC分期和血管／神经侵犯、淋巴结转移中均有差异，但无统计学意义（P〉0．05）。p53表达与细胞渊亡指数呈负相关，但差异无统计学意义（P〉0。05）。随访结果生存分析显示，p53表达与预后无关，UICC分期具有独立的预后意义。结论组织芯片和常规切片免疫组化结果有较好的一致性。组织芯片技术是病理学研究中的高效、快速工具。p53表达与胃癌预后无显著相关性，UICC分期仍然是胃癌的独立预后指标。     

组织芯片和常规制片检测乳腺癌相关癌基因产物的比较

目的:探讨不同规格组织芯片在乳腺癌相关基因产物检测中的应用价值。方法:采用微波修复免疫组织化学SP法和组织芯片技术,检测ER、PR、nm23、Her2、p53在31例乳腺癌组织中的表达,并与常规病理学方法进行比较分析。结果:不同规格组织芯相比较,免疫组化结果几乎完全一致。常规制片免疫组化阴性,而组织芯片免疫组化阳性者包括ER2例、PR1例;常规制片免疫组化阳性,而组织芯片免疫组化阴性者包括nm23、Her2各1例。部分病例常规制片免疫组化和组织芯片免疫组化阳性表达强度略有不同。结论:组织芯片的免疫组化结果与常规制片免疫组化比较,经统计学处理,差异无显著性(P>0.05)。组织芯片技术有良好应用价值和广阔发展前景。     

胃癌组织中p53蛋白、p21^WAF1／CIP1／SDI1表达的意义

采用S-P免疫组化技术，检测40例原发胃癌组织中p53与p21^WAF1/CIP1/SDI1蛋白的表达，应用PCR-SSCP技术对40例胃癌组织中p21^WAF1/CIP1/SDI1基因状态进行分析，对照10例正常胃组织标本，与胃癌临床生物学指标进行相关性分析。结果：p53、p21蛋白异常表研究室仅在胃癌组织中出现；p53与p21蛋白异常表达与胃癌患者肿瘤发生部位、浸润深度、淋巴结转移移、远处转移及组织分化程度等指标无统计学相关性（P＞0.05）；胃癌组织中，p53蛋白与p21蛋白表达间关系密切（P＜0.05)；40例胃癌组织中，p21基因PCR扩增片段进行单链构象多态性分析（SSCP），未发现异常条带。提示：p53与p21蛋白异常表达与胃癌发生有关，但与胃癌临床生物学行为之间未发现相关性；胃癌中，p21蛋白表达以依赖p53途径为主；40例胃癌标本PCR-SSCP检测，未发现p21基因突变；基因状态的完整，也为利用可激活p21基因的药物治疗p53蛋白失活的胃癌提供了重要的理论依据。     

乳腺癌ER、PR和CerbB-2免疫组化对照芯片制作及其应用

目的:应用组织芯片原理手工制作乳腺癌雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和原癌基因CerbB-2免疫组化对照芯片.方法:选取ER、PR、CerbB-2免疫组化表达水平为-、+、++和+++的乳腺癌标本和相应的组织蜡块,使用自制的组织芯片采样器和改良的简易组织芯片制作方法制成组织芯片蜡块,经过连续切片获得对照芯片,每张对照芯片包含4个组织芯点位,依次为阴性对照和3个等级表达阳性对照.将常规工作中测试片裱贴在对照芯片旁边,同时进行免疫组化EnVision染色.结果:乳腺癌ER、PR、CerbB-2免疫组化染色结果能明确地在对照芯片中找到参照,测试组织是否阳性有了明确的对照.结论:乳腺癌ER、PR、CerbB-2免疫组化染色中设立等级对照十分必要,手工自制对照芯片方法简单,实用性强.     

胃癌p21^WAF1基因表达与组蛋白乙酰化关系的初步研究

目的：探讨胃癌组织p21^WAF1基因表达与组蛋白乙酰化的关系。方法：利用RT—PCR对53例原发性胃癌的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜的p21^WAF1 mRNA表达进行分析；同时对其中p21^WAF1 mRNA表达失活或表达量不足癌旁和正常黏膜的1／2的7例患者进行乙酰化组蛋白免疫印迹分析。结果：①胃癌组织中的p21^WAF1表达率和表达值均显著低于正常胃黏膜和癌旁组织。②p21^WAF1表达水平在分化较好和分化较差的胃癌组织间差异没有显著性（P〉0．05），但在不同浸润深度及有／无淋巴结转移的胃癌组织中差异具有显著性（P〈0．05，P〈0．01）。③p21^WAF1 mRNA表达失活或表达量不足癌旁和正常黏膜的1／2的7例患者中有5例（5／7，71.43％）总染色质乙酰化组蛋白H3表达水平明显低于其相应的癌旁和正常黏膜，甚至在检测水平以下。结论：胃癌组织p21^WAF1的表达降低至少部分归因于组蛋白乙酰化水平的低下。     

MDM2、p53和p21WAF1/CIP1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：探讨MDM2在胃癌中的表达情况以及MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SABC法检测94例胃癌MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白的表达情况，并对三者之间的关系及其与胃癌临床病理特征的关系进行统计分析。结果：94例胃癌中未发现有MDM2的表达。p53及p21^WAF1/CIP1的阳性表达率分别为56.38%（53／94）和41.49%（39／94），阳性表达位于癌细胞核。在癌旁不典型增生灶中，p53有3例，p21^WAF1/CIP1有5例阳生，癌旁正常黏膜均为阴性。p53和p21^WAF1/CIP1两者的阳性表达率之间无显著相关性。在性别、年龄、部位、浸润深度、局产淋巴结转移及组织学类型等临床病理指标中，p53或p21^WAF1/CIP1的阳性表达率的差异均无统计学意义。结论：MDM2在胃癌的发展中不起重要作用，而在胃癌发展中起主要作用的是抑癌基因p53的突变。p21^WAF1/CIP、在胃癌中可能是以不依赖p53的途径增高，说明癌细胞增生已不受G1期检查点的控制。     

p27、cyclin E、Rb蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨p27、cyclin E和Rb蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系.方法:用免疫组化技术(SP法)对10例非瘤病变患者的正常胃黏膜和40例胃癌和癌旁黏膜标本进行染色,分析p27、cyclin E和Rb蛋白表达及其与预后的关系.结果:p27、cyclin E和Rb蛋白在正常胃黏膜与瘤旁黏膜表达差异无统计学意义;p27在胃癌中表达降低,cyclin E蛋白在胃癌中表达增高,呈过度表达,Rb组间差异无统计学意义.p27、cyclin E和Rb蛋白表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、预后等胃癌病理参数之间具有相关性.结论:p27、cyclin E和Rb蛋白异常表达与胃癌的发生、发展有关,并可能作为胃癌预后的指标.     

运用组织芯片技术研究cyclin E在鼻咽癌中的表达及其意义

目的 运用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中细胞周期调控因子cyclin E的表达及其意义。方法 采用组织芯片技术制作50例鼻咽癌组织芯片，同时用SP免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织芯片cyclin E的表达。结果 50例鼻咽癌中，cyclin E阳性16例，强阳性8例，阳性率为48％，有颈淋巴结转移的鼻咽癌cyclin E阳性表达显著高于无颈淋巴结转移的鼻咽癌（P〈0．01）。结论 cyclin E在鼻咽癌中高表达，且与鼻咽癌颈淋巴结转移密切相关，cyclin E可能作为生物标志物预测鼻咽癌预后。     

组织芯片技术对乳腺导管内癌伴浸润癌FISH检测的探讨

目的：探讨应用组织芯片技术对乳腺导管内癌伴浸润癌组织精确选择浸润性导管癌组织制成组织芯片,进行免疫组化染色,并应用荧光原位杂交技术（FISH）检测乳腺癌HER-2基因.方法：应用组织芯片技术对乳腺导管内癌伴浸润癌组织20例及4例HER-2扩增和无扩增对照制成5个组织芯片蜡块,制片进行HE和HER-2免疫染色,并用FISH检测HER-2基因状态.结果：用组织芯片进行免疫组化和FISH染色组织芯片利用率为86％、75.33％,20例乳腺癌组织HER-2扩增7例,扩增率35％.结论：应用组织芯片技术对乳腺导管内癌伴浸润癌的标本进行免疫组化及HER-2基因检测是可行、有效的.     

胃粘膜疾病组织芯片制作及13种细胞周期调控因子的检测

探讨制作胃粘膜疾病组织芯片的方法学及组织芯片技术的优缺点。方法： 采取免疫组织化学技术检测胃粘膜疾病组织芯片中13种细胞周期调控因子(Ubipuitim、Pln、P16、P27、P53、P57、chclin A、chclin B、chclin D1、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6）表达情况。结果： 肠型胃癌中，Ubipuitin的表达高于慢性浅表性胃炎和肠化生，P16、P27的表达低于慢性浅表性胃炎和肠化生，P2l、P57的表达低于慢性浅表性胃炎，P53的表达高于慢性浅表性胃炎、肠化生和异型增生，cyclin A、cyclin B、cyclinl Dl、cyclin E、CDK2、CDK4、CDK6的表达高于慢性浅表性胃炎和肠化生。结论： 采用病变组织芯片方法检测可在最短的时间内获取病变组织13种细胞周期调控因子的表达情况，且节约研究经费、降低劳动量，具有重要的科研和应用价值。     

组织芯片的研制及效果

目的:探讨研制组织芯片的方法以及在免疫组化中的应用.方法:选取乳腺良性增生及乳腺导管癌组织共82例,常规切片,HE染色下确定穿刺部位,每例穿取1.0 mm组织柱1条制备82点阵组织芯片,常规HE染色和免疫组化染色.以P53为观察指标,比较组织芯片与常规石蜡切片免疫组化染色表达情况.结果:研制的82位点组织芯片,组织排列整齐,HE染色及免疫组化染色后组织形态可观察率达100.00%,与常规石蜡切片染色结果具有高度一致性.结论:组织芯片是一种简单、经济、易于推广的技术方法.     

组织芯片研制的几点体会

目的：进行组织芯片制作可行性探讨，为快速、规范、简便、经济地进行各项科研工作提供一种新的技术方法。方法：制作出组织芯片蜡块，进行HE、免疫组织化学和荧光原位杂交(nSH)染色，对组织芯片免疫组化与普通免疫组化的结果进行比较。结果：各种染色切片上的组织芯基本符合观察需要，芯片免疫组化结果与普通免疫组化结果在统计学上无显著性差异。结论：组织芯片的研制具有高通量、经济节约、减少实验误差的特点，是科研工作中的一种新方法。     

ΔNp63、p21^WAF1及MDM2基因蛋白在鼻咽癌组织表达的研究

目的：探讨鼻咽癌组织中ΔNp63、p21^WAF1和MDM2蛋白的表达及意义。方法：采用免疫组化方法研究ΔNp63、p21^WAF1和MDM2蛋白在60例鼻咽癌活检组织的表达，60例鼻咽癌的组织类型包括角化性鳞癌3例；非角化性癌57例，其中含未分化癌12例。结果：60例鼻咽癌抗△Np63染色成不同程度阳性反应，表现为细胞核棕黄色。其中角化性鳞癌呈弱阳性表达，癌巢周边基底样细胞阳性略呈环状分布，或弥散分布；非角化性癌多呈强阳性反应，染色深，呈弥漫或片状分布，癌旁粘膜及正常鼻咽粘膜仅基底层和上基层细胞呈阳性表达。p21^WAF1在鼻咽癌、癌旁上皮及正常粘膜上皮的阳性率分别为26％、15％、7％，在三组的表达无显性差异；MDM2在鼻咽癌、癌旁上皮及正常粘膜上皮的阳性率分别为19％、5％、4％，在癌组和非癌组表达有显性差异。结论：△Np63蛋白在鼻咽非角化性癌中高表达，表明与细胞恶性增生密切相关，可能在癌细胞多相性退分化中起作用，是鼻咽非角化性癌有价值的诊断指标。MDM2在鼻咽癌组的表达显高于对照组，起癌基因作用。ΔNp63和MDM2均抑制p53转录活性，使NPC中p53虽然无突变却缺乏失活。p53活性低则不能上调p2l啪，Gl关卡失去功能，形同虚设。ΔNp63及MDM2高表达和p21^WAF1低表达使NPC逃避p53生长抑制。     

应用组织芯片技术检测胃癌组织中PTEN、Survivin和p21ras蛋白的表达

目的 利用组织芯片技术观察胃癌组织Survivin蛋白、PTEN蛋白和p21ras蛋白的表达，探讨三者的相互关系及三者与胃癌病理学指标的相关性。方法 收集江汉大学附属医院1988～2003年行胃癌根治性手术切除的、有完整病理学检查资料的标本140例。构建胃癌组织芯片，采用免疫组织化学法检测PTEN蛋白（17A）、Survivin蛋白和p21ras蛋白（F132）在胃癌组织中的表达情况。结果 构建420点和288点组织芯片2枚，140例胃癌中有118例符合分析要求（组织芯片利用率为84．3％）。PTEN阳性率为76．3％（90／118），Survivin阳性率为52．5％（62／118），p21ras阳性率为78．8％（93／118）。PTEN与患者年龄，肿瘤浸润深度、组织学分型相关（均P〈0.05）。Survivin与UICC淋巴结分期、组织学分型相关（均P〈0．05）。p21ras与年龄相关（P〈0．05）。PTEN与Survivin、PTEN与p21ras、Survivin与p21ras均呈正相关（均P〈0.05）。Cox回归模型多因素分析，UICC淋巴结分期与预后相关（P〈0．05）。结论 PTEN蛋白表达是推测进展期胃癌的分子标志物。Survivin蛋白表达是推测胃癌淋巴结转移及转移程度的分子标志物。PTEN及Survivin蛋白表达与胃癌组织学分型有关。PTEN及p21ras蛋白表达与胃癌患者年龄有关。PTEN蛋白、Survivin蛋白及p21ras蛋白在胃癌中呈正相关关系。UICC胃癌淋巴结分期是重要的预后指标。     

p21^WAF1蛋白在乳腺癌的表达及意义

目的：了解乳腺癌中p21^WAF1蛋白表达及其意义。方法：应用免疫组化SP法检测82例乳腺癌及其配对癌旁乳腺组织、8例正常乳腺组织中p21^WAF1蛋白的表达，并分析其与病理特征、ER和PR的关系。结果：p21^WAF1蛋白乳腺癌的表达（41．5％）明显高于癌组织（2．4％）和正常乳腺组织（12．5％）（P＜0．05），无淋巴结转移组（54．5％）明显高于有淋巴结转移组（32．7％）（P＜0．05），与肿瘤组织学分级、ER和PR无相关（P＞0．05）。结论：p21^WAF1蛋白可作为判断肿瘤生物学行为的重要指标。     

p53、p16、p21^WAF1、C—ERBb—2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系

目的：分析p53、p16、p21^WAF1、C-ERBb-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系。方法：应用免疫组化LSAB法对42例星形细胞瘤中p53、p16、p21^WAF1、C-ERBb-2的表达进行观察，对其中25例随访资料的肿瘤患者存活因素进行分析。结果：p53的表达与肿瘤分化和预后密切相关（P＜0．01），高表达者预后差。p16、p21^WAF1在分化好的星形细胞瘤中表达较强，预后较好；C-ERBb-2在分化差的星形细胞瘤中表达较强，预后差。结论：p53能客观反映肿瘤的增殖速度、分化和恶性程度，可以作为判断肿瘤预后有价值的参考指标。星形细胞瘤也存在p21^WAF1、p16、C-ERBb-2基因异常，对分析肿瘤的形成和判断预后有一定价值。     

细胞周期蛋白E和p53在肾癌中的表达及其意义

目的：探讨细胞周期蛋白E及p53基因产物在肾癌组织中表达的意义和相互关系.方法：采用免疫组化方法观察46例肾癌与15例正常肾组织的p53和cyclin E的表达.结果：正常肾组织中p53和cyclin E无表达,肾癌组织中p53和cyclin E的阳性表达率分别为39.1%和34.8%（P＜0.01）,cyclin E的阳性表达与肾癌临床分期、病理分级和病理类型无关（P＞0.05）,p53的阳性表达与肾癌临床分期密切相关（P＜0.01）.p53和cyclin E在肾癌中的阳性表达具有显著相关性（P＜0.01）,临床分期的患者5年生存率明显低于阴性者（P＜0.05）.结论：p53在肾癌中的阳性表达与临床分期有关,p53和cyclin E在肾癌中的共同阳性表达可能是判断肾癌预后的指标之一.     

p73在人脑胶质瘤表达及与p53、p21表达的相关性

目的 研究p73、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白在人脑胶质瘤组织的表达，并对p73与p53、p21^WAF1/CIP1蛋白表达的相关性进行研究，探讨其在人脑胶质瘤发生、发展和恶性变中的可能作用。方法 应用免疫组织化学ABC法检测随机抽取的胶质瘤组织Ⅰ～Ⅲ级20例，Ⅲ、Ⅳ级各20例及正常脑组织11例(对照组)，检测p73蛋白表达；同时应用免疫组织化学SP法检测标本p53和p21^WAF1/CIP1蛋白表达。