TRPC3和TRPC6分子在类精神分裂症小鼠模型中的表达

目的建立苯环利定诱导的类精神分裂症小鼠模型,进一步用来观察TRPC3、TRPC6蛋白在大脑的分布和表达变化。方法将24只8周龄健康雄性C57BL/6小鼠分为PCP(phencyclidine,苯环利定)组(n=12)及对照组(n=12),实验样本适应环境7天,从第2周开始连续皮下注射PCP(注射用量1.5 mg/kg/d,注射体积4 m L/kg/d)。第三周为药物洗脱期。第四周用免疫组化检测TRPC3、TRPC6蛋白在脑的分布和表达变化。结果 (1)免疫组化检测结果进一步显示,在海马CA1、CA2、CA3区,PCP组TRPC3阳性细胞平均光密度比对照组十分明显地增加,差异有统计学意义(P0.01),PCP组TRPC3阳性细胞面积比对照组十分明显地上升,差异有统计学意义(P0.01)。在前额叶和顶叶PCP组TRPC3阳性细胞平均光密度值十分明显地高于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。但在小脑无十分明显地变化。前额叶、顶叶和小脑PCP组TRPC3阳性细胞面积十分明显地小于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。(2)免疫组化检测结果进一步显示,在海马CA1、CA2、CA3区,PCP组的TRPC6阳性细胞平均光密度值十分明显地高于对照组,差异有统计学意义(CA1和CA2区P0.01,CA3区P0.05)。在海马CA1区PCP组的TRPC6阳性细胞面积十分明显地大于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。然而在海马CA2区和CA3区,PCP组的TRPC6阳性细胞面积稍微高于或低于对照组,差异没有统计学意义(P0.05)。在前额叶和顶叶PCP组TRPC6阳性细胞平均光密度对照组显著增大,差异有统计学意义(P0.01)。但在小脑没有十分明显地变化(P0.05)。在前额叶、小脑PCP组TRPC6阳性细胞面积十分明显地低于对照组,差异有统计学意义(前额叶P0.01,小脑P0.05)。顶叶阳性细胞面积对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论在类精神分裂症小鼠模型中,TRPC3和TRPC6在脑中分布和表达均有所变化,这意味着它们在上述模型中具有潜在的靶标可能。     

TRPC3、TRPC6通道与心血管疾病的研究进展

随着我国人口老龄化的不断加剧,心血管疾病患病率及死亡率仍处于上升阶段[1].经典瞬时受体电位C亚族(canonical transient receptor potential,TRPC)3、6通道是哺乳动物TRPC通道的核心成员.近年来的研究[2]表明,尽管TRPC3、TRPC6通道在人体组织普遍表达,但它们以高度特异的方式控制心血管系统的功能.本文就TRPC3、TRPC6通道及其与心血管疾病的研究进展作一综述.     

波动和恒定的葡萄糖浓度对大鼠肾小球系膜细胞TRPC6和TRPC1表达的影响

目的 研究波动和恒定的葡萄糖浓度对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)瞬时受体势TRPC6和TRPC1表达的影响,探讨糖尿病肾病的发病机制.方法 将体外培养的各组系膜细胞分别在波动和恒定葡萄糖浓度中分别培养24、48、72 h后,进行细胞学形态结构观察,MTT法测定细胞存活率,RT-PCR检测细胞TRPC6和TRPC1特异性条带灰度的表达情况.结果 波动血糖组在TRPC6基因的表达较恒定高糖组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 波动葡萄糖浓度对GMC的损伤以及促进细胞凋亡方面较恒定葡糖糖浓度更严重,是导致糖尿病肾病发生和发展的原因之一.     

TRPC的激活机制研究现状

TRPC是TRP超家族中的一员,是一类对Ca2＋通透的非选择性阳离子通道蛋白。TRPC通道可被各种化学性和物理性刺激（如神经递质、激素、温度和机械刺激等）所激活,激活机制相当复杂,一般认为是通过PKC-PLC-IP3或PKC-PLC-DAG途径激活,参与受体介导的Ca2＋内流。也有证据表明,它可直接被钙库排空所激活,参与SOCE（store-operated calcium entry）。本文对TRPC激活机制的研究现状做一综述。     

实时定量PCR检测镉对人肝癌细胞SMMC-7721中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的影响

目的：观察氯化镉（CdCl₂）处理后人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4 mRNA表达的改变,在mRNA水平探讨镉对肝癌细胞钙通道的影响。方法：以人肝癌细胞株SMMC-7721为研究模型,细胞暴露于氯化镉终浓度为0、5、10、20、30及40 μmol·L^-1的培养液中24 h。采用SYBR荧光实时定量PCR法检测TRPC1和TRPC4 mRNA表达,相对定量采用比较CT值法。结果：随着剂量的增加,TRPC1 mRNA表达有降低的趋势,除20 μmol·L^-1组外,各组mRNA表达均高于对照组（P<0.01）;TRPC4 mRNA表达有先增高后降低的趋势,5、10和30 μmol·L^-1组mRNA表达均高于对照组（P<0.01）。2个基因均在低剂量（5和10 μmol·L^-1）组表达增加幅度较大（P<0.01）。结论：低剂量镉可显著增加人肝癌SMMC-7721细胞中TRPC1和TRPC4的表达,镉可在mRNA水平对SMMC-7721细胞钙通道产生影响。     

类精神分裂症小鼠视觉恐惧模型建立及TRPC3、TRPC6在脑的表达

目的建立基于图形视觉的条件性恐惧实验范式,探究类精神分裂症小鼠在视觉恐惧建立和消退过程中僵直度的变化并考察瞬时感受器电位C离子通道3(Transient receptor potential canonical channel,TRPC3)、TRPC6在脑内的表达变化。方法将48只C57小鼠随机分为正常对照组、空白对照组、苯环利定(Phencyclidine,PCP)组、苯环利定+氯氮平(Clozapine,CLZ)组,每组12只,后二组小鼠皮下注射苯环利定建立类精神分裂症小鼠模型,其中苯环利定+氯氮平组给予氯氮平治疗,然后空白对照组、苯环利定+氯氮平组、苯环利定组小鼠在改装后superFcs型条件性恐惧实验系统进行视觉恐惧训练,并在随后的四天恐惧消退期内每日给予视觉刺激,记录僵直度变化;条件性恐惧三组及正常对照组小鼠行全脑切片用于免疫组化染色以检测TRPC3、TRPC6在脑的表达。结果(1)在恐惧训练期(Day1),苯环利定+氯氮平组的僵直度显著大于空白对照组和苯环利定组(P0.05),而苯环利定组僵直度大于空白对照组,差异无显著意义(P0.05),苯环利定+氯氮平组与苯环利定组相比无显著意义(P0.05)。三组实验小鼠的僵直度在测试期第1天(Day2)较训练期(Day1)均增大,尤其是苯环利定+氯氮平组和苯环利定组均显著增大(均P0.05);之后在测试期第2,3,4天(Day3-5)三组实验小鼠僵直度逐渐减小,苯环利定组与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),苯环利定+氯氮平组在测试期第2、3与前一天比较均有显著性差异(均P0.05),而空白对照与前一天比较均无显著性差异(均P0.05)。(2)免疫组化结果显示与正常对照组相比,苯环利定+氯氮平组、苯环利定组、空白对照组TRPC3阳性细胞面积百分比在海马CA2区明显减小,差异有统计学意义(P0.05)。在前额叶与苯环利定组相比苯环利定+氯氮平组明显减小,差异有统计学意义(P0.05);苯环利定+氯氮平组与空白对照组相比明显减小,差异有统计学意义(P0.05);小脑苯环利定组与正常对照组相比明显增大,差异有统计学意义(P0.05);在小脑中与苯环利定组相比,苯环利定+氯氮平组TRPC3阳性细胞面积百分比明显减小,差异有显著性(P0.05)。TRPC3在海马其余各区、顶叶无明显变化(P0.05)。TRPC6阳性细胞面积百分比在前额叶、小脑、海马分布和表达无明显变化(P0.05),与苯环利定+氯氮平组相比,苯环利定组和正常对照组TRPC6阳性细胞面积百分比在顶叶明显减小,差异有统计学意义(P0.05);在顶叶与正常对照组相比空白对照组TRPC6阳性细胞面积百分比明显增大,差异有统计学意义(P0.05)。结论本研究成功建立了基于图形视觉的条件性恐惧实验范式。类精神分裂症小鼠易产生视觉条件性恐惧,消退较快;氯氮平治疗对恐惧消退的影响不显著。TRPC3、TRPC6在脑内不同区域分布和表达差异,提示可能参与类精神分裂症小鼠视觉恐惧活动过程。     

TRPC1对人肾癌细胞A498增殖和迁移的影响

目的探讨瞬时受体电位C1(TRPC1)对人肾癌细胞A498细胞增殖和迁移的影响。方法利用荧光定量PCR检测人肾癌细胞A498、786-O和GRC-1中TRPC1的表达水平。设计并合成靶向TRPC1的特异性sh RNA,通过脂质体转染法转染TRPC1表达最高的人肾癌细胞A498以构建稳定低表达TRPC1细胞株,通过免疫印迹法和荧光定量PCR来验证sh RNA的干扰效率;通过MTT比色法检测干扰后细胞的增殖能力;通过Transwell小室测细胞迁移情况;免疫印迹法检测PI3K和AKT的表达水平。结果在3株肾癌细胞中A498的TRPC1表达量最高;特异性靶向TRPC1的sh RNA能够有效下调A498细胞中TRPC1的表达;特异性sh RNA干扰组细胞较其他两组细胞增殖显著减慢(F=42.31,P0.01);A498/sh RNA组的迁移细胞数显著低于A498组和A498/Con组(F=24.52,P0.01);A498/sh RNA组细胞的PI3K和AKT蛋白的表达较A498组和A498/Con组显著下调。结论采用RNA干扰技术能够有效沉默A498细胞的TRPC1基因,并致使其细胞增殖能力下降以及细胞迁移能力减弱,其中可能的机制为通过调节细胞因子PI3K来调控人肾癌细胞的增殖和迁移。提示TRPC1在肾癌的发生发展中起着较为重要作用,TRPC1可能成为治疗肾癌的新靶点。     

Calcineurin和TRPC6参与ET－1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:探讨Calcineurin和瞬时感受器电位6(TRPC6)的相互作用以及对内皮素-1(ET－1)诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖的影响?方法:以 ET－1刺激肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)检测Calcineurin活性以及TRPC6的表达;分别于ET－1刺激前给予Calcineurin特异性抑制剂环孢素A(CsA)和TRPC6 siRNA处理,测定Calcineurin活性?TRPC6的表达以及细胞的增殖情况;采用Calcineurin活性检测试剂盒检测其活性,Western blot和RT－PCR检测TRPC6的表达,MTT法检测PASMCs的增殖?结果:ET－1可激活原代培养的PASMCs中Calcineurin的活性,上调TRPC6的表达;CsA和TRPC6 siRNA可以分别降低TRPC6表达和Calcineurin活性;也可以抑制ET－1 刺激的 PASMCs增殖?结论:Calcineurin与TRPC6参与ET－1诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖并相互影响?     

TRPC6对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖、侵袭和凋亡能力的影响

目的 研究经典型瞬时受体电位6（transient receptor potential canonical 6,TRPC6）对大鼠肺动脉平滑肌细胞（rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs）增殖、侵袭和凋亡能力的影响. 方法 以RPASMCs为研究对象,构建TRPC6的siRNA以及过表达载体,转入细胞后采用MTT法、Transwell小室法、流式细胞法观察其对RPASMCs增殖、侵袭及凋亡能力的影响. 结果 增殖实验结果表明TRPC6过表达组可促进RPASMCs增殖,其OD值为1.13 ±0.09,TRPC6-siRNA组则可抑制RPASMCs增殖,其OD值为0.42 ±0.03;细胞侵袭结果表明TRPC6过表达组可促进RPASMCs侵袭,穿膜细胞数为108±7,TRPC6-siRNA组则可抑制RPASMCs侵袭,穿膜细胞数为38 ±3;流式细胞仪检测发现TRPC6对PASMCs凋亡几乎无影响.结论 TRPC6可显著促进RPASMCs的增殖和侵袭,在肺动脉高压的发生和发展中起着重要作用,对进一步研究TRPC6在肺动脉高压中的作用及机制奠定了基础.     

老年慢性心力衰竭患者血清TRPC1和PCSK9的表达及临床意义

目的 探讨老年慢性心力衰竭患者血清瞬时受体电位通道1(TRPC1)和前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的表达及临床意义。方法 选取2020年10月至2022年6月期间诊治的老年慢性心力衰竭患者共计80例为观察组，另选取同期健康体检者共计50例为对照组。对比观察组与对照组以及不同心功能分级患者各项生化指标水平，并分析各生化指标之间的相关性，采用多因素logistic回归分析老年慢性心力衰竭患者死亡的危险因素。比较未发生不良心血管事件组和发生不良心血管事件组患者血清TRPC1、PCSK9水平。结果 观察组血清TRPC1、PCSK9、脑钠肽N端前体蛋白、左心室舒张末期内径均高于对照组，左心室射血分数低于对照组(P<0.05)。心功能Ⅳ级患者血清TRPC1、PCSK9、脑钠肽N端前体蛋白、左心室舒张末期内径均高于心功能Ⅲ级和心功能Ⅱ级患者，且心功能Ⅲ级患者各项指标高于心功能Ⅱ级患者(P<0.05),心功能Ⅳ级患者左心室射血分数低于心功能Ⅲ级和心功能Ⅱ级患者，且心功能Ⅲ级患者低于心功能Ⅱ级患者(P<0.05)。老年慢性心力衰竭患者血清TRPC1和PCSK9与脑钠肽N端前体蛋...     

TRPC对脂多糖诱导的星形胶质细胞TNF-α和NO分泌的影响

目的 探讨TRPC对脂多糖诱导的星形胶质细胞TNF-α和NO分泌的影响.方法 通过摇床筛选法纯化大鼠大脑皮层星形胶质细胞,用免疫荧光法鉴定其纯度.细胞培养至80%左右融合时加入0.5 μg/mL 脂多糖(LPS)后用维持液分别培养0、2、6、12、24和48 h,检测TNF-α和NO分泌情况,观察TRPC阻断剂 2-A...     

基于CiteSpace的TRPC6的研究现状及热点分析

目的 分析国内关于瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 (TRPC6)的中文研究现状及热点。方法 应用CiteSpace软件对中国学术期刊网络出版总库(CNKI)中以“TRPC6”为主题的中文文献进行可视化分析,分析内容包括发文量、高频关键词、期刊、发文作者、硏究热点及发展趋势等。检索日期截止于2022年4月27日。结果 共纳入556篇中文文献,发文量总体呈上升趋势;关键词共现、聚类分析显示,“足细胞”、“基因”、“凋亡”、“增殖”、“钙离子”、“慢性低氧”是主要研究领域;国内中文文献中对于TRPC6今后的研究趋势可能是“基因突变”、“儿童”和“机制”。国内有3个主要团队进行TRPC6的相关研究,团队内部合作紧密,但团队间缺少合作;在266个发文机构中,吉林农业大学中药材学院发文最多。结论 “基因突变”、“儿童”、“机制”是近年来TRPC6研究的主要趋势和热点。目前,该领域的重点是研究TRPC6相关的基因突变引起的疾病和致病机制,特别是肾病综合征、恶性肿瘤及儿童疾病。笔者分析发现,各个研究团队之间合作较少,期望未来各大团队能够紧密合作,加速TRPC6研究的进展。     

TRPC3参与电磁辐射致培养的海马神经元凋亡

目的 研究电磁辐射后,瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与诱导海马神经元凋亡.方法 以65 mW/cm2电磁波辐照原代培养的新生24 h以内Wistar大鼠海马神经元20 min,以未接受电磁波辐照的神经元为对照组,将TRPC3-siRNA和对照寡核苷酸转染神经元后分别设立为辐照+TRPC3-siRNA干扰组和辐照+ TRPC3假干扰组.采用实时定量RT-PCR法及蛋白质免疫印迹法检测TRPC3 mRNA和蛋白水平的表达,电磁辐射后用CCK8试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察胞内游离钙的变化.结果 电磁辐射可明显增加神经元中TRPC3 mRNA和蛋白表达,细胞存活率为(58.8±3.6)％,凋亡率为(30.2±2.6)％,与对照组有显著差异(P＜0.05);辐照+ TRPC3干扰组细胞存活率为(86.3±4.1)％,凋亡率为(9.2±0.6)％,与辐照组有显著差异(P＜0.05);辐射+ TRPC3假干扰组与辐射组无明显差异(P＞0.05).辐照后胞内游离钙浓度显著升高,而TRPC3干扰后可以部分抑制其升高.结论 TRPC3表达增加所介导的细胞内游离钙升高可能是电磁辐射致海马神经元凋亡的原因之一.     

足细胞TRPC6与糖尿病肾病相关的研究进展

糖尿病在全球范围内越来越普遍。糖尿病肾病(DN)是糖尿病最常见的并发症,可导致终末期肾脏疾病的发生,最终需要透析或移植肾脏,是一个日益严重的健康问题。瞬时受体电位阳离子通道亚型6(TRPC6)是新近发现的足细胞裂孔膜蛋白,其基因的突变及表达改变可引起蛋白尿的发生,而蛋白尿的出现又可加重肾小球损害,形成恶性循环。故对TRPC6的进一步研究对DN的诊治有一定意义。     

过表达miR-607通过下调TRPC5表达抑制肝细胞癌的生长和转移

目的 研究miR-607异常表达在肝细胞癌（HCC）中的临床意义及对肝癌细胞生长转移的影响。方法 荧光定量PCR检测45对HCC及癌旁组织中miR-607表达,分析miR-607表达与患者临床病理特征间的相关性。通过转染miR-607 mimics提高HCC细胞（Huh-7和HCCLM3）内miR-607的表达水平。采用CCK-8、流式细胞仪、划痕愈合实验及transwell小室模型分别检测过表达miR-607对HCC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因系统检测miR-607是否与潜在靶点TRPC5的mRNA 3'-非翻译区直接结合。Western blot检测过表达miR-607对HCC细胞内TRPC5、CCND1、MMP2表达及Akt磷酸化的影响。结果 MiR-607在HCC组织及HCC细胞中的表达水平均降低（P<0.05）;miR-607低表达与肿瘤直径>5 cm、血管侵犯及较晚TNM分期（III+IV）密切相关（P<0.05）。过表达miR-607抑制HCC细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡（P<0.05）。双荧光素酶报告基因系统证实 miR-607 与 TRPC5 mRNA 3'-非翻译区直接结合（P<0.05）。过表达 miR-607 抑制HCC细胞内TRPC5、CCND1及MMP2表达并下调Akt的磷酸化水平（P<0.05）。结论 miR-607低表达与肝细胞癌恶性临床特征密切相关,miR-607可能通过下调TRPC5表达进而抑制Akt通路激活来发挥抗HCC生长转移作用。     

尿毒症对大鼠主动脉平滑肌 TRPC1通道表达的影响

目的：研究尿毒症对大鼠主动脉平滑肌细胞TRPC1通道表达的影响。方法应用Real－time PCR和Western blot检测尿毒症大鼠主动脉平滑肌细胞中TRPC1通道mRNA和蛋白的表达。结果（1）主动脉病理变化：假手术组动脉壁结构平整,内皮完整,动脉中膜平滑肌排列规则,尿毒症组大鼠主动脉壁局部增厚,平滑肌细胞增生。（2）血压变化：术前两组大鼠血压无明显差异,尿毒症组大鼠血压至少从术后第2周开始显著升高,两组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,且随术后时间的延长,尿毒症组血压逐步升高,与假手术组比较差异有统计学意义。（3）与假手术组相比,尿毒症组TRPC1通道mRNA的表达量显著增加（P＜0.05）,TRPC1通道蛋白的表达量约是假手术组的2.6倍（P＜0.05）。与假手术组相比,尿毒症组TRPC1通道mRNA和蛋白的表达量均显著增加（ P＞0.05）。结论 TRPC1表达异常可能是尿毒症大动脉硬化、血压升高的分子机制。     

TRPC3参与α-突触核蛋白引起的线粒体损伤

目的探讨经典型瞬时受体电位通道3(transient receptor potential canonical channel 3,TRPC3)是否参与α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)引起的线粒体损伤。方法在α-syn过表达原代培养神经元、α-syn转基因及敲除小鼠模型,利用免疫印迹和免疫荧光技术检测TRPC3和α-syn在线粒体内的定位和表达;在原代培养神经元,运用MTT和乳酸脱氢酶法检测细胞活力和受损情况,JC-1法检测线粒体膜电势,观察敲减TRPC3对α-syn过表达引起的线粒体损伤和细胞损伤的影响。结果 TRPC3和α-syn共同表达于线粒体,过表达α-syn增加TRPC3在线粒体的分布,敲除α-syn则下调TRPC3在线粒体的分布。敲减TRPC3明显减轻过表达α-syn引起的线粒体膜电势下降和细胞毒性。结论 TRPC3可能参与过表达α-syn引起的线粒体损伤。     

高糖对小鼠足细胞TRPC6表达的影响

【摘要】 目的 研究高糖对小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达的影响。方法 体外培养条件永生化小鼠足细胞，分为高渗对照组(甘露醇30mmol/L+葡萄糖5mmol/L)，正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15mmol/L、25mmol/L和35mmol/L)；高糖(葡萄糖25mmol/L)刺激足细胞，以刺激后0、12、24、48 h为时间观察点，光镜下观察足细胞形态变化，免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6表达及分布，RT PCR和Western Blot分别检测小鼠足细胞TRPC6 mRNA和蛋白的表达。结果 随着葡萄糖浓度的增加，光镜下足细胞胞体明显缩小，足突明显减少或消失，免疫细胞化学检测可见TRPC6主要表达于足细胞胞膜，沿足突分布明显增多，RT PCR和WB检测到TRPC6表达逐渐增加，以25mmol/L变化最明显。糖刺激足细胞后，与0h相比，随着刺激时间的延长，足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加（P＜005），在48h达到高峰，呈一定的时间依赖性。结论 高糖可导致足细胞形态学明显改变，引起细胞损伤，随着葡萄糖浓度增加和时间延长，均可导致足细胞TRPC6表达增加，呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。