1,2,4--三甲氧基的合成

对苯二酚经氧化、乙酰化、甲基化反应合成1,2,4-三甲氧基苯.甲基化的收率为78.5%,总收率为71.6%.     

2-(4-甲氧基苯基)-6-甲氧基苯并噻吩的合成

目的合成目的产物2-（4-甲氧基苯基）-6-甲氧基苯并噻吩。方法以3-甲氧基苯硫酚和对甲氧基-苯乙酮为原料经溴化、烃基化、环合重排排制得目标产物。结果此法操作简便并得到高收率的标题化合物。结论改进的合成路线适合于工业化生产。     

7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基异黄酮的全合成

目的:化学全合成金雀异黄素衍生物7-二氟甲氧基-5,4′-二甲氧基异黄酮。方法:以间苯三酚和对甲氧基苯乙腈为原料,经Hoesch反应、増碳环合反应得到异黄酮母核,再经二氟甲醚化、甲醚化得到目标产物。结果:目标化合物及中间体的结构均经核磁共振氢谱确证,总收率15.6%。结论:该合成路线较短,操作简单,成本较低,适合工业化生产。     

合成邻甲氧基肉桂酸的两步法新工艺

以邻甲氧基苯甲醛（OMD）为原料,与丙酮进行Claisen Schmidt缩合反应形成中间体邻甲氧基苄叉丙酮（OMT）,OMT再与NaClO发生卤仿反应得到邻甲氧基肉桂酸（OMA）。优选的工艺条件是：缩合反应中丙酮与OMD的物质的量之比为2.5,反应温度为20～30 ℃,反应时间为6 h;卤仿反应温度为20～30 ℃,反应时间为8 h。经φ=30%乙醇水溶液重结晶后,OMA的总收率按OMD计为81%,气相色谱测得OMA纯度为99.2％。     

N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐合成工艺改进

目的：简便高效地合成N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。方法：以5-甲氧基色胺为原料,依次经过取代,成盐反应,合成了N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。结果：合成总收率达到了76%,经红外光谱、核磁共振氢谱分析确证目标化合物结构。结论：本合成方法具有较高的实用性和可操作性,适合于大量制备N,N-二烯丙基-5-甲氧基色胺盐酸盐。     

AdipostatinA的简易合成

目的用简易方法合成AdipostatinA。方法以3，5-二甲氧基溴苯为原料，经金属化、偶联、脱甲基化反应制得AdipostatinA。结果成功地合成了AdipostatinA，总收率为64％。目标化合物的结构经核磁共振氢谱及元素分析确证。结论本法合成步骤短，反应条件温和，收率较高。     

HIV病毒抑制剂中间体Olivetol的简易合成

目的用简易方法合成Olivetol。方法以3,5-二甲氧基溴苯为原料,经金属化、耦联、脱甲基化反应制得Olivetol。结果成功地合成了Olivetol,总收率为63.1%;目标化合物的结构经核磁共振氢谱及元素分析确证。结论本法合成步骤短,反应条件温和,收率较高。     

天然产物5,7-二甲氧基木犀草素的合成

5,7-二甲氧基木犀草素是中药枳椇中一种黄酮类主要化合物之一。本文以芦丁为原料,经水解还原得到木犀草素,再经羟基保护、醚化及脱保护基等反应合成了5,7-二甲氧基木犀草素,总收率为7.9%。其结构经1HNMR和13C NMR表征。     

5,6-二甲氧基吲哚的合成工艺改进

对5，6-二甲氧基吲哚的合成工艺进行了改进。以3，4-二甲氧基苯甲醛为起始原料，经过烷基化、硝化、环合反应，合成5，6-二甲氧基吲哚。该方法简单，原料易得，收率为28．4％，适合于工业生产。     

2-巯基-5-甲氧基-1H-苯并咪唑的合成

目的合成奥美拉唑中间体2-巯基-5-甲氧基-1H-苯并咪唑。方法以4-甲氧基-2-硝基苯胺为原料,经锌粉还原后,再与乙基黄原酸钾环缩合制得2-巯基-5-甲氧基-1H-苯并咪唑。结果收率80%。结论该方法简单易行,适合工业化生产。     

Puerarin逆转K562/AO2耐药的分子机制

目的:研究黄酮类化合物puerarin对K562/A02(人红白血病多药耐药细胞系)细胞耐药逆转作用的分子机制.方法:免疫荧光染色方法检测阿霉素(ADR)和puerarin对K562(人红白血病细胞系)和K562/A02两种细胞NF-кB活性的影响;免疫细胞化学染色方法检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的survivin表达的影响;流式细胞仪检测ADR和puerarin对K562和K562/A02的P-gP表达的影响.结果:经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞NF-кB的活性明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的NF-кB的活性明显低于只用ADR处理的K562细胞.经puerarin干预后的K562/A02细胞的NF-кB的活性明显低于未经puerarin干预的K562/A02细胞;经ADR处理后的K562细胞和K562/A02细胞的p-gP,survivin表达明显高于K562细胞空白对照组;经puerarin预处理后再加ADR处理的K562细胞中的p-gp,survivin表达明显低于未经pu-erarin预处理的K562细胞;经puerarin干预后的K562/A02细胞的p-gp,survivin表达明显低于未经puer-arin干预的K562/A02细胞.p-gp和survivin表达呈正相关.结论:NF-кB的活化使p-gp和survivin表达增多可能是K562细胞多药耐药形成的机制之一.Puerarin能预防和阻止K562细胞耐药形成,并能逆转K562/A02对ADR的耐药,其机制与抑制NF-кB活性及survivin和p-gp的表达有关.     

小鼠pMSV-Slfn5-GFP表达质粒构建及基因结构分析

目的 构建小鼠pMSV-Slfn5-GFP基因重组表达质粒及基因结构分析.方法 提取小鼠肝脏组织中总RNA,反转录为cDNA.PCR扩增小鼠Slfn5编码序列片段,并与pGEM-T Easy载体连接,连接产物转化到大肠埃希菌DH5α中.挑取阳性克隆提取质粒,经限制性内切酶H pα工和Xho Ⅰ双酶切鉴定.酶切鉴定正确的质粒送Macrogen USA测序.测序正确的质粒通过HindⅢ和XhoⅠ与pMSV-GFP连接,并命名为pMSV-Slfn5-GFP.通过UCSC(http://genome.ucsc.Edu/)分析小鼠Slfn5及其家族基因组结构,并通过NCBI确定Sgn5的蛋白结构域.结果 Slfn5全长基因序列克隆到表达载体pMSV-GFP中,酶切鉴定片段大小为2.65 kb.Slfn5的AAA_4蛋白结构域由phylogeny.fr确定了该结构在Slfn蛋白家族中的保守性.结论 成功构建了小鼠pMSV-Slfn5-GFP全长基因表达载体.     

台北国图馆藏《影北宋本伤寒论》作伪者考辨

<影北宋本伤寒论>是杨守敬出使日本所获得的一部手抄本.杨氏虽认为是影宋本,但已被确认是剪贴伪造的,有学者甚至认定是杨氏所伪造,并且推断了影抄本由杨氏伪造后,借由柯逢时刊印,而后转卖给张钧衡的过程.然而,经由对于杨氏生平、原件面貌、流传经过、所据底本以及杨氏是否有伪造动机、其它伪造案例、伪造之底本等问题进行全面性的考证及...     

三孔法腹腔镜下胆总管探查与T管引流术70例

目的探讨三孔法腹腔镜胆总管探查与T管引流术在临床上的应用价值。方法70例患者,采用三孔法腹腔镜胆总管探查与T管引流术：即腹腔镜下切开胆总管,通过加长的10mm穿刺器利用纤维胆道镜探查胆总管,合并利用体内冲击波胆道碎石机碎石,取出结石后,行胆总管T管引流。术后50天拔T管,经T管窦道纤维胆道镜探查肝内外胆道情况。结果70例手术成功,无中转开腹,手术时间103．4-36min,术后无胆汁渗漏及其他并发症发生。结论三孔法腹腔镜胆总管探查术操作安全、可靠,有临床应用价值。     

不同辅料炮制对淡豆豉中大豆异黄酮含量的影响

目的考察用不同辅料炮制淡豆豉对其大豆异黄酮含量的影响。方法采用发酵法制取淡豆豉样品,用HPLC色谱法测定样品中大豆异黄酮的含量。色谱柱为Hanbo（250 mm×4.6 mm,5μm）;流动相为甲醇∶水∶冰醋酸（40∶60∶0.5）;流速：1 m L/min;检测波长：260 nm。结果以大豆苷为考察指标时三者的差别不大,与青蒿、桑叶比较,淫羊藿和人参为辅料发酵的淡豆豉含量略低;以染料木苷为考察指标时,与青蒿、桑叶比较,淫羊藿为辅料发酵的淡豆豉含量略有升高,人参为辅料发酵的淡豆豉含量升高明显。结论炮制辅料不同,对淡豆豉中大豆异黄酮含量有一定影响,且人参为炮制辅料时影响较大。     

前列腺组织特异性启动子介导的TAT-EGFP的靶向表达

目的〓〖HTK〗构建由前列腺特异抗原（PSA）启动子介导、表达带有蛋白转导结构域序列（TAT）的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合蛋白pPSA-TAT-EGFP表达载体，使TAT所携带的目的蛋白能够在靶组织中高效表达，提高其特异性及表达效率。〖HTW〗方法〓〖HTK〗以pEGFP-1载体为模板，设计包含TAT序列的引物，PCR技术扩增含有酶切位点的小片段Sal I-TAT-EGFP-Not I，经胶回收纯化，连接到T克隆载体。双酶切及测序鉴定后，提取质粒、双酶切后胶回收得到目的小片段。 含有PSA启动子的pPSA-EGFP载体经Sal I和Not I双酶切后，胶回收含有PSA启动子序列的大片段。过夜连接目的小片段与PSA启动子大片段，得到pPSA-TAT-EGFP表达载体。转化、筛选阳性克隆后酶切与测序鉴定。将构建载体分别转染前列腺癌细胞和大肠癌细胞检测其表达情况。〖HTW〗结果〓〖HTK〗成功构建pPSA-TAT-EGFP表达载体。转染结果显示其能够在前列腺癌细胞中特异性表达。〖HTW〗结论〓〖HTK〗引入了PSA组织特异性启动子的TAT所携带的目的蛋白能够在前列腺癌组织中表达。     

B细胞淋巴瘤因子6高表达对大鼠肝细胞凋亡的抑制作用

[摘要] 目的：克隆大鼠B细胞淋巴瘤因子6（B-cell lymphoma 6 protein,Bcl6）基因,构建绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Bcl6,初步探讨大鼠Bcl6转录因子在大鼠肝细胞中的生物学作用。方法：首先提取大鼠肝脏总RNA,经反转录和巢式PCR扩增Bcl6编码区的CDS序列后,通过基因重组的方法构建并鉴定pEGFP-Bcl6重组质粒;然后利用脂质体转染法将重组质粒导入大鼠肝细胞BRL-3A中,利用实时定量PCR和蛋白印迹的方法检测其表达;最后应用流式细胞术分析转染融合表达质粒后肝细胞的凋亡及应用MTT法检测肝细胞的增殖情况。结果: 通过PCR法和测序法鉴定重组质粒pEGFP-Bcl6构建成功,通过实时定量PCR法和蛋白印迹法鉴定重组质粒瞬转成功,通过流式细胞术证实Bcl6具有抑制肝细胞凋亡的功能,通过MTT法证实Bcl6具有促进肝细胞增殖的功能。结论:成功克隆了大鼠Bcl6基因,构建了Bcl6绿色荧光蛋白表达载体,在大鼠肝细胞中初步证明Bcl6具有促进肝细胞增殖和抑制凋亡的功能。     

携带EGFP与rtTA双基因的逆转录病毒载体的构建及其在PA317细胞中的表达

目的 构建表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP-rtTA,并在PA317细胞中表达.方法 以质粒pEGFP-C1为模板进行PCR反应获得EGFP基因片段,定向插入逆转录病毒载体pLXSN,筛选出正确的重组逆转录病毒载体pLXSN-EGFP.PCR方法从pTet-on质粒中扩增出rtTA基因,酶切纯化后克隆于逆转 录病毒载体pLXSN-EGFP中,限制性内切酶酶切分析及PCR鉴定筛选出正确的重组载体pLXSN-EGFP-rtTA,脂质体介导转染PA317细胞,PCR方法检测PA317细胞内EGFP、rtTA基因,RT-PCR方法检测PA317细胞内rtTA基因的mRNA表达,荧光显微镜观察EGFP基因的表达情况.以NIH3T3细胞为靶细胞测定重组逆转录病毒滴度.结果 成功构建了表达EGFP、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体,转染PA317细胞后,RT-PCR方法可检测到rtTA基因的mRNA表达,荧光显微镜下可观察到EGFP基因表达所产生的绿色荧光,说明连接有EGFP和rtTA双基因的逆转录病毒载体在PA317细胞中可正常表达,转染pLXSN-EGFP-rtTA载体的PA317细胞可产生4.8x 104 CFU/ml病毒滴度的重组病毒.结论 成功构建表达EGFP、rtTA双基因的重组逆转录病毒载体,该载体可在PA317细胞内正常表达,获得较高滴度的病毒上清.     

免疫PCR法诊断梅毒螺旋体抗原和抗体的方法学研究

目的建立免疫PCR方法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法学,并比较两种方法学的敏感性、特异性和重复性。方法选择2011年我院梅毒血清学ELISA法检测者1520例并梅毒分期;建立免疫PCR法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法,然后对梅毒螺旋体血清学阳性标本10倍系列稀释,比较免疫PCR法敏感性;同时采用正常健康血清标本观察免疫PCR法特异性;最后采集梅毒阳性血液分装成两份标本,监测两种免疫PCR法试验批内和日间重复性。结果1520例患者中,梅毒患者136例。梅毒患者中女性占77．2％（105／136）．孕妇占19．1％（26／136）。梅毒分期以一期梅毒感染为主,与其他期比较具有统计学意义（P〈0．05）。IPCR-Ag法检测梅毒螺旋体抗原敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^6。IPCR-Ab法检测梅毒螺旋体抗体敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^5。两种免疫PCR法测检查正常健康人群梅毒螺旋体结果均为阴性。IPCR-Ab法试验批内CV为11．6l％,日间CV为18．12％;IPCR-Ag法试验批内CV为18．61％,日间CV为22．24％,两者相比具有统计学意义（P〈0．05）。结论免疫PCR法检测梅毒螺旋体具有高度的敏感性和特异性,但重复性较差。     

β-淀粉样肽激活小胶质细胞分泌TNFα的研究

目的研究β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞分泌TNFα的合适方案。方法分离纯化小胶质细胞,再以不同浓度可溶性β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞生存率,光学显微镜下观察不同时间点的细胞形态,同时以酶联免疫吸附法检测不同时间点小胶质细胞分泌TNFα的含量。结果细胞生存率试验结果显示β-淀粉样肽对小胶质细胞无明显的毒性作用。在浓度分别为0.1、1.0、10、50、100μmol/L时,β-淀粉样肽均可诱导激活小胶质细胞分泌TNFα,TNFα分泌量随β-淀粉样肽的浓度增加而升高,但在β-淀粉样肽浓度高于10μmol/L后TNFα分泌量的增加并不显著。β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞2h后开始分泌TNFα,24h达到高峰,此后逐渐下降。结论β-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞具有浓度及时间依赖性,以10μmol/Lβ-淀粉样肽诱导激活小胶质细胞24h是合适的激活方案。