miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的 研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制.方法 常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SK-OV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组和miR-122-5p mimic组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-122-5p和ADAM10 mRNA的表达水平;Western blot检测各组细胞ADAM10蛋白的表达水平;生物信息学预测miR-122-5p与ADAM10靶向匹配,采用双荧光素酶报告系统验证两者在SKOV-3细胞中的靶向关系.再将miR-122-5p mimic和ADAM10过表达质粒(pcDNA-ADAM10)分别或同时转染至SKOV-3细胞中,分为空白对照组(Blank组)、miR-122-5p mimic组、ADAM10过表达组(pc-ADAM10组)和miR-122-5p mimic+pc-ADAM10组,采用Transwell检测SKOV-3细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1和HEY1,EMT相关蛋白Snail、E-cadherin和N-cadherin的表达水平.结果 miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中miR-122-5p的表达水平较mimic NC组的升高(P<0.01),表明miR-122-5p mimic稳定转染至SKOV-3细胞.miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞中ADAM10 mRNA和蛋白的表达水平较mimic NC组的降低(P<0.01),双荧光素酶报告系统证实ADAM10是miR-122-5p靶基因.与Blank组比较,miR-122-5p mimic组SKOV-3细胞发生迁移和侵袭的数量降低(t=6.004,P<0.05;t=7.289,P<0.01),而pc-ADAM10组的升高(t=13.181,P<0.001;t=11.504,P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的Notch、HES1、HEY1、Snail和N-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),而pc-ADAM10组的上升(P<0.01);miR-122-5p mimic组细胞的E-cadheirn蛋白表达水平上升(P<0.01),而pc-ADAM10组的下降(P<0.01).与pc-AD-AM10组比较,miR-122-5p mimic+pc-ADAM10能减弱pc-ADAM10的促EMT作用,且下调Notch信号通路活性.结论 miR-122-5p通过阻断Notch信号通路抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的EMT,其机制可能与miR-122-5p靶向抑制AD-AM10的表达有关.     

HOST2 lncRNA靶向结合miR-211干预卵巢癌细胞转移的机制研究

目的〖KG*2〗探讨HOST2 lncRNA靶向结合miR-211干预卵巢癌细胞转移的机制。 〖HTH〗方法〖KG*2〗实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测7种卵巢癌细胞系中HOST2 lncRNA及miR-211表达水平,选取其中差异表达最高卵巢癌细胞作为候选细胞系;双荧光素酶报告基因实验检测卵巢癌细胞中HOST2 lncRNA与miR-211间靶向相关性。将细胞分为转染无序HOST2 lncRNA及miR-211对照物的对照组、转染HOST2 lncRNA过表达载体的HOST2组、共转染HOST2 lncRNA与miR-211 mimic的（HOST2+miR-211）组。细胞划痕实验、Transwell小室实验及裸鼠腹腔移植瘤实验分别检测HOST2 lncRNA靶向miR-211对卵巢癌细胞体内外转移能力的影响;Western Blot检测卵巢癌细胞内转移相关蛋白的表达变化。 〖HTH〗结果〖KG*2〗HOST2 lncRNA在7种卵巢癌细胞中显著高表达,miR-211在7种卵巢癌细胞中显著低表达,二者表达存在显著负相关关系,其中SKOV3细胞中HOST2 lncRNA及miR-211表达差异最高（P＜0.01）。双荧光素酶报告实验显示野生型HOST2报告基因质粒共转染miR-211 mimic后SKOV3细胞内荧光素酶活性较对照组受到显著抑制;过表达HOST2 lncRNA促进细胞划痕愈合、体外侵袭和迁移及裸鼠体内腹腔移植瘤的转移,反之共转染miR-211 mimic后抑制过表达HOST2 lncRNA促进的细胞体内外的转移;Western Blot结果显示过表达HOST2 lncRNA显著提高细胞内SOX4、Snail1及N-cadherin蛋白表达,下调E-cadherin蛋白表达,反之共转染miR-211 mimic后逆转上述蛋白表达变化（P＜0.01）。 〖HTH〗结论〖KG*2〗HOST2 lncRNA可能通过作为内源竞争RNA竞争性结合miR-211促进卵巢癌细胞体内外的转移。     

miR-384增加乳腺癌MCF-7细胞多西他赛敏感性

【摘要】 目的 探讨miR-384对乳腺癌MCF-7细胞多西他赛（DOC）敏感性的影响。 方法 乳腺癌MCF-7细胞分成Control组（空白对照）、miR-NC组(转染模拟物阴性对照）、miR-384组(转染miR-384模拟物）、miR-NC+DOC组（转染模拟物阴性对照,DOC处理）、miR-384+DOC组（转染miR-384模拟物,DOC处理）,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡。在线靶基因预测软件预测性别决定区Y框蛋白4(SOX4)可能是miR-384的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western blot测定细胞中SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4和miR-384模拟物共转染,以DOC处理,检测SOX4对上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结果 与miR-NC组比较,miR-384组和miR-NC+DOC组细胞中miR-384表达水平升高,细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。与miR-NC+DOC组比较,miR-384+DOC组细胞增殖和克隆能力降低,细胞凋亡率升高（均P＜0.05）。miR-384靶向抑制SOX4蛋白表达。pcDNA3.1-SOX4能够逆转上调miR-384联合DOC对乳腺癌MCF-7细胞增殖、克隆和凋亡的影响。 结论 miR-384靶向调控SOX4,增加乳腺癌MCF-7细胞DOC敏感性。     

NCOA5通过调控上皮间质转化促进卵巢癌细胞的侵袭转移能力

目的 研究核受体共激活因子5 (NCOA5)对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的作用及分子机制。方法 常规培养卵巢癌细胞株SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和正常卵巢上皮细胞系IOSE80,Western blot检测各细胞中NCOA5蛋白的表达水平。选取高表达NCOA5的卵巢癌细胞SKOV-3 和A2780,各分为si-NC组、si-NCOA5组,并分别转染NC siRNA和NCOA5 siRNA。Boyden实验检测各组细胞侵袭能力,Transwell实验检测各组细胞转移能力,Western blot检测各组细胞上皮间质转（EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达水平。结果 Western blot结果显示NCOA5在卵巢癌细胞中的表达显著上调(P<0.05)。在SKOV-3和A2780细胞中干扰NCOA5的表达均显著抑制卵巢癌细胞侵袭和转移能力 (P<0.05),并促进EMT相关蛋白E-cadherin的表达,抑制细胞中EMT相关蛋白N-cadherin、vimentin和Slug蛋白的表达(P<0.05)。结论 NCOA5促进卵巢癌侵袭转移能力,具有作为卵巢癌新型预后生物标志物和治疗分子靶点的潜力。     

卵巢癌SOX4介导TGF-β1诱导的上皮间质转化对侵袭转移能力的影响

目的 探讨SOX4(SRY-related HMG-box4)在卵巢癌中的表达、调控及其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导卵巢癌上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)能力的影响。方法 通过对TCGA、GEO等数据库中卵巢癌样本表达谱数据进行分析,探讨SOX4在卵巢癌中的表达情况,及其与EMT相关标志物的相关性。利用shRNA技术敲降卵巢癌SKOV3细胞系中SOX4的表达;利用Western blotting和qRT-PCR技术检测SOX4敲降对上皮标志物ZO1及间质标志物Vimentin和Slug表达的影响;利用Transwell技术检测SOX4敲降对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响;使用TGF-β1(10 ng/mL)处理SKOV3细胞72 h,然后通过 Western blotting 和qRT-PCR技术,检测TGF-β1对SOX4表达的调控情况,以及SOX4敲除对TGF-β1诱导EMT能力的影响。结果 SOX4在卵巢癌中的表达显著上调,并与EMT间质标志物呈显著正相关;敲除SOX4可显著下调卵巢癌SKOV3细胞的EMT水平及其侵袭转移能力;TGF-β1可显著上调卵巢癌SKOV3细胞中SOX4的表达水平,而SOX4敲除可显著抑制TGF-β1诱导卵巢癌EMT的能力。结论 SOX4在卵巢癌中表达上调,通过激活EMT促进其侵袭转移能力;并且,作为TGF-β1下游靶蛋白,SOX4介导了TGF-β1对卵巢癌EMT的诱导过程。因此,SOX4是一个干预卵巢癌转移的重要靶点。     

微小RNA-495-3p在卵巢癌组织的表达及对卵巢癌细胞凋亡和增殖的影响

目的 观察微小RNA-495-3p(miR-495-3p)在卵巢癌组织和细胞株的表达,并探讨 miR-495-3p对卵巢癌BGC823细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测10例卵巢癌组织和癌旁组织miR-495-3p表达,并检测miR-495-3p在4种卵巢癌细胞株(A2780、SKOV-3、HO-8910、OC3)及正常卵巢上皮细胞IOSE80的表达。选取miR-495-3p表达水平最低的卵巢癌细胞瞬时转染miR-495-3p或miR-NC。qPCR法检测miR-495-3p表达。流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞计数试剂盒(CCK-8)法和平板克隆实验分别检测细胞活力和增殖能力。生物信息学软件microrna.org预测miR-495-3p的靶基因。qPCR和Western blot法检测miR-495-3p靶基因表达。采用荧光素酶报告基因实验验证miR-495-3p对靶基因核因子蛋白(NF90)的靶向作用。结果 卵巢癌组织miR-495-3p相对表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.01)。卵巢癌细胞株中miR-495-3p表达水平明显低于正常卵巢上皮细胞(P<0.05),SKOV-3细胞表达最低。与miR-NC组比较,转染 miR-495-3p能够明显诱导SKOV-3细胞凋亡(P<0.01),抑制SKOV-3细胞的活力和增殖能力(P<0.01),且NF90表达明显下调(P<0.01),miR-495-3p可与NF90-3′-非编码区(UTR)特异性结合,降低荧光值(P<0.01)。结论miR-495-3p在卵巢癌组织和细胞株呈低表达,上调miR-495-3p表达能够通过干扰NF90基因的表达诱导卵巢癌BGC-803细胞的凋亡和抑制细胞的增殖。     

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞，将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达；CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达；生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较，miR-34a mi...     

NK4基因转染对裸鼠人卵巢癌种植瘤生长的影响

目的 NK4不仅具有肝细胞生长因子(HGF)拮抗剂的作用,而且具有抗血管生成作用。该实验通过在人卵巢癌细胞SKOV-3中转染NK4cDNA片段,研究NK4在裸鼠体内对人卵巢癌的治疗作用。方法 NK4和荧光霉素(luciferase)表达质粒分别转染人卵巢癌细胞SKOV-3,稳定转染后,得到SKOV-3/NK4细胞和对照(SKOV-3/LUC)细胞。检测NK4在细胞培养基中的表达情况以及经不同培养基(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4培养基上清)培养后SKOV-3细胞中c-Met和磷酸化-c-Met的表达,检测三组肿瘤细胞(SKOV-3、SKOV-3/LUC和SKOV-3/NK4)体外生长速度,建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,比较三组肿瘤细胞在裸鼠体内的生长速度。结果在SKOV-3/NK4培养基中有NK4蛋白表达,对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞中无表达。磷酸化-c-Met在SKOV-3/NK4培养基培养的SKOV-3细胞中被抑制,而在对照(SKOV-3和SKOV-3/LUC)细胞培养基培养的SKOV-3细胞中正常表达。c-Met表达在各组无差别。三种细胞体外生长曲线差异无显著性(P>0.05)。一周后SKOV-3/NK4细胞接种的肿瘤生长缓慢,SKOV-3和SKOV-3/LUC细胞接种的肿瘤生长迅速,与SKOV-3/NK4组相比有统计学意义(P<0.05)。结论 NK4蛋白在SKOV-3/NK4细胞培养基中大量分泌,NK4能抑制人卵巢癌细胞c-Met受体磷酸化。在裸鼠体内NK4能抑制卵巢癌细胞生长,NK4可作为卵巢癌基因治疗的新方法。     

miR-223靶向NLRP3影响高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT发生的机制

目的:探讨miR-223对高糖诱导的肾小管上皮(renal tubule epithelia,NRK-52E)细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法:将体外培养的NRK-52E细胞分为对照组(5 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1 D-葡萄糖)、高糖+模拟物对照组(转染miR-223模拟物对照后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理)和高糖+模拟物组(转染miR-223模拟物后,30 mmol·L^-1 D-葡萄糖处理),采用RT-PCR检测各组细胞中miR-223、NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA的表达,Western blot检测NLRP3蛋白和EMT相关蛋白α-SMA、E-cadherin的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-223和NLRP3的靶向关系。另外,构建NLRP3过表达的NRK-52E细胞株,观察NLRP3过表达对miR-223过表达的NRK-52E细胞EMT进展的影响。结果:与对照组比较,高糖刺激后可引起miR-223和E-cadherin蛋白的表达降低,而NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白表达升高(P<0.05)。与高糖组比较,转染miR-223模拟物后高糖环境下NRK-52E细胞中miR-223和E-cadherin蛋白的表达水平显著升高,NLRP3、IL-1β和IL-18 mRNA以及NLRP3、α-SMA蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);但转染miR-223模拟物阴性对照后对高糖环境下的NRK-52E细胞无显著影响(P>0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实NLRP3是miR-223的靶基因。转染pcDNA3.1-NLRP3过表达质粒成功上调NLRP3表达后,miR-223过表达对EMT进程抑制作用得以部分逆转。结论:miR-223可通过靶向NLRP3抑制高糖诱导的NRK-52E细胞EMT的发生。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

miR-9和miR-210在卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞株中的表达及机制探讨

目的 检验miR-9和miR-210在卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP细胞株中的差异表达,观察其对卵巢癌细胞生物学功能的影响并探讨其作用机制,为卵巢癌的靶向治疗积累数据,提供参考方向。 方法 培养人正常卵巢上皮细胞株,卵巢癌SKOV-3和SKOV-3/DDP细胞株,RT-PCR(实时荧光定量聚合酶链反应)检验miR-9和miR-210在各细胞株中的表达差异;将miR-9mimics和miR-210mimics转染至卵巢癌SKOV-3及SKOV-3/DDP中,用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V/PI法测细胞凋亡,细胞划痕实验测细胞迁移能力的改变及细胞侵袭实验测细胞侵袭情况。 结果 miR-9在SKOV3及其耐药株SKOV-3/DDP中低表达,而miR-210在SKOV3及其耐药株SKOV-3/DDP中高表达;miR-9/miR-210过表达抑制3种细胞的增殖;miR-9/miR-210过表达促进细胞发生凋亡;miR-9/miR-210过表达导致3种细胞迁移和侵袭能力下降。 结论 miR-9/miR-210在卵巢癌细胞中起到抑癌基因的作用,过表达miR-9/miR-210能显著抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进肿瘤细胞的凋亡;miR-9/miR-210可以作为卵巢癌及复发性卵巢癌新的潜在治疗靶点。      

MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p（miR-30a-5p）对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照（Control组）。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素（N-cadherin）、α-连环蛋白（α-Catenin）和泛素水解酶22（USP22）表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Western blot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82（862.26~843.11）倍（P＜0.01）。30a-5p组侵袭细胞数量8.17（8.32~8.03）明显低于Control组（P＜0.01）。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因（P＜0.01）。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组（P＜0.01）。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,N-cadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。     

LncRNA SNHG15通过调控miRNA-451a促进乳腺癌细胞的上皮间质转化研究

目的:研究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因15(LncRNA SNHG15)与miRNA-451a对乳腺癌细胞的生物学活性的影响.方法:qRT-PCR法检测SNHG15、miRNA-451a及趋化因子受体4(CXCR4)在乳腺癌耐药细胞SKBR3-PR中的表达情况;细胞划痕实验检测干扰SNHG15及miRNA-45...     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测人卵巢上皮细胞HOSEpi C以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区(3’-UTR)的野生型(WT)和突变型(mut)荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果正常人卵巢上皮细胞HOSEpi C中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义(P <0. 05),选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义(P <0. 05)。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

IL-6通过调控miR-152/PIK3R3通路促进胃癌细胞的增殖和上皮-间质转化

目的：探索白细胞介素(interleukin,IL)-6在胃癌中的作用及相关的分子机制。方法：50 ng/mL IL-6刺激 胃癌细胞MGC-803后,利用MTT法检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移的变化,RT-qPCR实验检测E-钙黏蛋白 (E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、锌指转录因子Snail1和miR-152在mRNA水平的表达, Western印迹检测E-cadherin,N-cadherin,vimentin,Snail1在蛋白水平的表达;IL-6与miR-152模拟物(miR-152 mimics)单 独处理或者共同处理MGC-803细胞后,RT-qPCR检测PIK3R3在mRNA水平的表达,Western印迹检测PIK3R3、蛋白激 酶B(Akt)和磷酸化-Akt(p-Akt)在蛋白水平的表达。结果：外源性IL-6明显促进MGC-803细胞的增殖与迁移(P<0.05),降 低E-cadherin蛋白和mRNA和miR-152 mRNA的表达(P<0.01),增加N-cadherin,vimentin,Snail1,PIK3R3蛋白和mRNA及 p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。转染miR-152 mimics后明显降低了PIK3R3和p-Akt蛋白水平的表达(P<0.01)。同时,过表达miR-152 能够降低IL-6诱导的PIK3R3及p-Akt的表达水平(P<0.01)。各组中Akt的表达均无明显变化(P>0.05)。结论：IL-6可能是通过 下调miR-152表达,诱导PIK3R3表达,激活PI3K/Akt信号通路,从而促进胃癌细胞的增殖、迁移和上皮-间质转化。     

MiR-125b-5p 抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase（http://starbase. sysu.edu.cn/）生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、miR-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qPCR和Westem blot实验检测各组中miR-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果 RT-qPCR技术证实miR-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达（P<0.05）;选择SKOV3和HO8910细胞进行转染,过表达miR-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制（P<0.05）;Starbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-125b-5p 和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达miR-125b-5p组中miR-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）。过表达miR-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高（P<0.05）。Transwell实验显示过表达miR-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达miR-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论 miR-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。