应用合成的SARS病毒S蛋白重叠肽筛选B细胞表位

目的筛选SARS病毒S蛋白的B细胞表位。方法使用SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,获得SARS病毒S蛋白的免疫血清。人工合成包含169条部分氨基酸序列重叠的SARS-CoV S蛋白的多肽库。将多肽片段包被ELISA板,利用免疫小鼠血清,通过抗体结合试验来筛选SARS病毒S蛋白的线性B细胞表位。并将筛选结果与使用B细胞表位分析软件预测的结果进行比较。结果使用重叠肽合成法筛选到SARS-CoV蛋白两条多肽片段S335-352和S442-458,能与免疫动物血清特异性结合,与使用Bcipep数据库预测B细胞表位的结果相一致。结论鉴定了两个新的SARS病毒S蛋白B细胞表位。     

梅毒螺旋体溶血素生物信息学分析

目的本研究旨在对梅毒螺旋体(Tp)的5种溶血素进行进一步的生物信息学分析,为后续研究溶血素家族蛋白在Tp致病过程中的致病机制提供依据。 方法通过使用NCBI、BLAST、CDD、BioEdit、ExPASy、SignalP、TMHMM、MEGA、PSORTb 3.0、ABCpred等生物信息学分析方法分析梅毒螺旋体溶血素家族蛋白的一般性质、信号肽、糖基化、磷酸化位点、亚细胞位置、二级结构、功能结构域及抗原表位。 结果预测了Tp中5个溶血素家族蛋白一般性质,Tp1037功能结构域不同于其余4种,Tp0028含有1个信号肽,Tp0027含有1个糖基化位点,Tp0027和Tp1037有多个跨膜结构域,5个溶血素家族蛋白均含有多个磷酸化位点和B细胞、T细胞表位。 结论Tp含有5个溶血素家族蛋白基因,提示Tp入侵宿主时这些基因产物极有可能通过其膜成孔毒性损伤靶细胞,从而致病。     

肺炎链球菌表面粘附素A蛋白抗原表位的预测筛选及确定

[目的]确定肺炎链球菌表面粘附素A(PsaA)蛋白抗原的B细胞、CD4 T细胞和CD8 T细胞表位.[方法]通过生物信息学方法预测肺炎链球菌PsaA蛋白分子小鼠B细胞线性表位、MHC-Ⅰ结合肽(CD8 T细胞表位)及MHC-Ⅱ结合肽(CD4 T细胞表位)并人工合成相应肽段;克隆重组质粒BL21/pET/PsaA并得到纯化的rPsaA蛋白用以免疫小鼠;分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选B细胞表位;分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的T细胞候选表位肽段体外共培养,取上清进行双夹心ELISA检测IFN-γ的量进行初步筛选.用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测,确定PsaA蛋白分子T细胞表位.[结果]分析PsaA蛋白分子的B细胞表位及MHC-Ⅰ结合肽、MHC-Ⅱ结合肽;得到候选B细胞表位肽10条,MHC-Ⅰ结合肽21条,MHC-Ⅱ结合肽7条,并进行了人工合成.利用分子生物学技术获得了rPsaA蛋白并成功免疫了小鼠.间接ELISA结果显示:肽段PB2、PB6,PB7与rPsaA免疫小鼠的血清发生反应,其OD450nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高;双夹心ELISA结果初步提示:肽段PⅠ 10、PⅠ 14、PⅠ 17、PⅠ 18、PⅠ21以及肽段PⅡ2、PⅡ5、PⅡ6刺激免疫小鼠细胞产生的IFN-γ量比相应的对照小鼠显著升高.细胞流式结果进一步确定:经肽段PⅡ2、PⅡ5刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD4双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高;经肽段PⅠ 14、PⅠ 17、PⅠ21刺激后,免疫小鼠细胞中IFN-γ和CD8双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高.[结论]确定了肺炎链球菌PsaA蛋白分子的3个B细胞线性表位;2个CD4 T细胞表位;3个CD8 T细胞表位.     

肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞表位的预测、筛选及确定

目的确定肺炎链球菌自溶酶(LytA)蛋白B细胞线性表位。方法通过生物信息学方法预测肺炎链球菌LytA蛋白分子的B细胞表位并人工合成相应肽段;经克隆、表达、纯化等步骤得到纯化的重组LytA(rLytA)蛋白用以免疫小鼠并进行Westen blot鉴定;取免疫组小鼠和对照组小鼠血清分别与人工合成的候选B细胞表位肽段进行间接ELISA检测,筛选出B细胞表位。结果利用多种方法分析LytA蛋白分子的B细胞表位,经整理得到11条候选肽段,命名为LB1到LB11,并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了rLytA蛋白并成功地免疫了小鼠,间接ELISA结果显示:肽段LB3、LB5、LB6、LB7、LB11与rLytA免疫小鼠的血清发生反应,其OD 450 nm读数比相应的阴性对照小鼠显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论确定了肺炎链球菌LytA蛋白分子5个B细胞线性表位的位置和序列。     

急性传染性非典型肺炎病毒M蛋白片段抗原性鉴定及其B细胞表位分析

目的:鉴定原核表达的重组急性传染性非典型肺炎(SARS)病毒M蛋白N端1～43氨基酸(aa)的抗原性,并筛选其B细胞表位。方法:GlutathioneSepharose4B亲合层析柱纯化M融合蛋白,用SARS患者恢复期血清分别通过间接ELISA方法和Westernblot鉴定M蛋白片段的抗原性。为了定位B细胞表位,进一步将M蛋白片段截短为部分重叠的2段表达,分别表达含M蛋白N端1～28aa、16～43aa的融合蛋白,通过Westernblot检测B细胞表位所在位置。结果:获得了纯化的M融合蛋白;间接ELISA和Westernblot结果均证实,M蛋白片段有很强的抗原性;并进一步明确B细胞表位位于M蛋白N端1～15aa片段中。结论:原核表达的SARS病毒M蛋白片段N端1～15aa含有一个很强的B细胞表位,这将有助于SARS诊断试剂的研制,也可为多肽疫苗的研制提供帮助。     

梅毒螺旋体感染阳性患者C反应蛋白的变化

目的:通过检测梅毒螺旋体阳性患者血清炎症因子C反应蛋白(CRP)的含量探讨其与梅毒螺旋体感染的关系.方法:梅毒螺旋体抗体检测用酶联法定性测定,梅毒螺旋体血清学半定量试验用凝集法测定,血清C反应蛋白用特种蛋白仪测定.结果:梅毒螺旋体阳性患者治疗前与治疗后C反应蛋白浓度差异有统计学意义.结论:C反应蛋白含量与梅毒螺旋体感染的严重程度密切相关.     

FSHR胞外区抗原的二级结构预测和B细胞表位预测

目的:分析卵泡刺激素受体(Follicle stimulating hormone receptor,FSHR)胞外区蛋白的二级结构,在线预测FSHR胞外区潜在的B细胞表位.方法:利用DNAStar Protein软件对FSHR胞外区蛋白的二级结构和表面特性进行分析,联合在线B细胞表位预测,预测FSHR胞外区蛋白可能的抗原表位.合成预测的B细胞表位肽,对其抗原性进行鉴定.结果:FSHR胞外区蛋白可能的抗原表位区域为17～34、4244、116～122、142～147、179～193、239～241、266～270、279～282、288～307.选择4个区域合成肽段表位区域能与免疫抗血清发生抗原特异性反应.结论:应用多参数成功预测了FSHR胞外区蛋白抗原的B细胞表位.     

猴B病毒囊膜蛋白gD的B细胞表位预测及鉴定

目的鉴定猴B病毒囊膜蛋白gD的抗原表位。方法利用生物信息学分析猴B病毒囊膜蛋白gD的二级结构、亲水性、表面可及性、抗原性指数以及柔韧性,得到可能的表位肽段;再利用合成肽与B病毒阳性血清进行ELlSA验证,评价表位肽段的特异性和敏感性。结果在异D蛋白上预测得到7个表位肽段;ELISA测定结果显示,4个肽段（序列分别为^46 LPPLEQKTD^54、^106 RGAPEATRSDA^126、^291291PELAPEERGTSRFPGD＾３０６和＾３６１AVYLVRRRGR＾３７０可与B病毒阳性血清发生免疫学反应,敏感性在40％～70％之间。结论B病毒gD蛋白上至少存在4个线性化表位。     

Tp-19(s)-IgM-ELISA诊断早期先天梅毒

目的　通过梅毒几种检测方法的比较 ,寻找一种诊断早期先天梅毒的方法。方法　用梅毒甲苯胺红不加热血清实验 (TRUST)、梅毒螺旋体颗粒凝集实验 (TPPA)和梅毒螺旋体 19(s) IgM酶联免疫吸附法 [Tp 19(s) IgM ELISA]对 6例血清快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)阳性新生儿 (其母亲已在怀孕时被确诊为不同病期梅毒 )的血清进行检测。结果　 6例新生儿中有 4例TRUST、TPPA、Tp 19(s) IgM阳性 ;另 2例TRUST、TPPA均阳性 ,但Tp 19(s) IgM阴性。前 4例新生儿确诊为早期先天梅毒 ,后面 2例排除早期先天梅毒。结论　特异性IgM检测应该作为早期先天梅毒确诊的实验诊断方法。     

羊脑多肽的氨基酸含量分析

目的 :了解羊脑多肽中的氨基酸含量。方法 :取 10mg羊脑多肽用 6mol LHCl水解过夜 ,蒸干。取 10 μl行自动氨基酸分析仪分析。结果 :羊脑多肽中各类氨基酸的质量分数 (w % )为 :Asp 8.2 1,Thr 2 .5 3,Ser 2 .41,Glu12 .6 4,Gly 2 .96 ,Ala 3.83,Cys 0 .6 3,Val 3.74,Met1.11,Ile 2 .5 7,Leu 5 .35 ,Tyr 2 .0 8,Phe 2 .93,Lys 5 .13,His 1.90 ,Arg3.48,Pro 2 .5 6。结论 :羊脑多肽含有丰富的Glu ,Asp ,Leu和Lys,尤其是Glu和Asp的含量是蛋氨酸含量的 7～ 12倍。     

Treponema pallidum-specific antibody expression for the diagnosis of different stages of syphilis

Background Tp15,Tp17,Tp45,and Tp47 are outer-membrane proteins found in Treponema pallidum,the etiologic agent of syphilis.These proteins are potent antigens and are potential markers for the serologic...     

梅毒重组抗原酶联免疫吸附试验与快速血浆反应素试验的比较研究

目的 比较传统的快速血浆反应素试验（RPR）与重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速试验的敏感性和特异性。方法 选择249例性传播疾病中心门诊患者,签署知情同意书后采集其静脉血,取血清进行梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）、RPR试验和重组抗原的酶联免疫吸附试验并对结果进行比较。结果 以TPHA结果为标准,重组抗原的酶联免疫吸附试验血清敏感性为100％,特异性为98．4％。RPR试验血清敏感性为65．1％,特异性为98．4％。结论 以重组梅毒螺旋体抗原为基础的试验方法与RPR试验相比,具有更高的敏感性。     

梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd在Hela细胞中的表达及鉴定

目的 构建梅毒螺旋体（Tp）外膜蛋白甘油磷酸二酯磷酸二酯酶基因（Gpd）的真核表达载体peDNA3．1（＋）-Gpd，鉴定其在Hela细胞的表达，为开展TpDNA疫苗动物实验打下基础。方法 用PCR从TpNichols株基因组中扩增Gpd基因，构建真核表达重组质粒pcDNA3．1（＋）-Gpd，脂质体介导转染入Hela细胞，以免疫组化及跳tern-blot检测在Hela细胞中的表达。结果 双酶切及DNA测序显示重组质粒含有1059bp的目的基因片段，读码框架正确，无突变。该重组质粒在Hela细胞能有效表达分子量为41kDa的目的蛋白，重组蛋白能-9梅毒螺旋体阳性血清反应。结论 构建的质粒peD-NA3．1（＋）-Gpd成功地在体外真核细胞中表达。     

猪骨蛋白的氨基酸含量分析

目的:分析探讨猪骨蛋白的氨基酸的组成与含量。方法:猪骨蛋白经6N的盐酸水解,随后用日立850-Ⅱ型自动氨基酸分析仪分析。结果:猪骨蛋白中17种天然氨基酸的含量(W／W)为:Asp 4.75,Thr 1.49,Ser 2.10,Glu 8.61,Gly 17.65,Ala 7.34,Cys 0.28,Val 2.21,Met 0.57,Ile 1.06,Leu 2.69,Tyr 0.61,Phe 1.86,Lys3.00,His 0.64,Arg 6.27,Pro 11.58。结论:猪骨蛋白中含有多种氨基酸,其中Gly、Pro、Glu、Ala、Arg、Asp等6种氨基酸是猪骨蛋白中存在的主要氨基酸。     

梅毒螺旋体Tp0993重组蛋白的表达及鉴定

目的表达、鉴定梅毒螺旋体（Tp）重组蛋白Tp0993（rTp0993）,为进一步评价其在梅毒血清学诊断中的意义奠定基础。方法 PCR扩增去除信号肽核苷酸序列的Tp0993基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0933并诱导表达蛋白;Ni-NTA法纯化重组蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性。结果成功构建了原核重组体pET-28a/Tp0993,经诱导表达了一分子量大约为40 Ku的重组蛋白;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论 rTp0993有较好的抗原性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的作用奠定了基础。     

牛淑会为并列第一作者.梅毒螺旋体重组蛋白Tp0608的表达与鉴定

目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0608(rTp0608)并鉴定其抗原性,为深入探讨其在梅毒血清学诊断中的价值奠定基础。方法PCR扩增Tp0608全长基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608,转化宿主菌诱导表达rTp0608,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,SDS-PAGE分析蛋白表达形式与纯度,Western blot鉴定rTp0608的抗原性。结果原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0608在宿主菌内经诱导表达了分子量大约为38 kDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>95%;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论PET-28a（+）表达载体高效表达了rTp0608,该重组抗原有良好的抗原性。     

梅毒感染患者多系统的临床表现

梅毒是由梅毒螺旋体(Tp)感染所引起的慢性、系统性传播疾病,感染早期(一期梅毒)主要表现为皮肤黏膜的损伤,未经治疗进一步发展可导致眼、骨骼、心血管等多系统多脏器损害,可严重危害身体健康。本文对梅毒感染所引起的多系统的临床表现、病理改变及鉴别诊断等进行了全面的综述,为进行梅毒螺旋体感染的诊断、预防及致病机制研究提供参考和依据。     

梅毒螺旋体比较基因组学研究进展

梅毒螺旋体(Tp)是一种可以引起慢性和持续性梅毒感染的病原体。比较基因组学通过对不同个体基因组数据进行比较分析,揭示不同个体之间的相似性和差异性。本文通过比较Tp不同菌株以及Tp和其他致病性螺旋体之间的基因组数据,探讨Tp的致病机制。