梅毒螺旋体比较基因组学研究进展

梅毒螺旋体(Tp)是一种可以引起慢性和持续性梅毒感染的病原体。比较基因组学通过对不同个体基因组数据进行比较分析,揭示不同个体之间的相似性和差异性。本文通过比较Tp不同菌株以及Tp和其他致病性螺旋体之间的基因组数据,探讨Tp的致病机制。     

问号钩端螺旋体赖株溶血素基因LA0202的溶血机制

 目的 对问号钩端螺旋体赖株溶血素基因LA0202的溶血机制进行研究。方法 纯化重组蛋白LA0202并制备多克隆抗体;Western blot验证重组蛋白在问号钩端螺旋体培养过程中的表达;并进行重组蛋白LA0202溶血活性影响因素实验。结果 Western blot显示LA0202在钩体培养过程中可以表达,加入二价金属阳离子对重组蛋白溶血活性亦无明显激活作用,加入蛋白酶抑制剂对溶血活性无明显抑制作用,高温条件致使溶血活性丧失,加入渗透压保护剂PEG6000能抑制溶血活性。结论 问号钩端螺旋体赖株溶血素基因LA0202为在钩体生长过程中表达的一成孔蛋白类溶血素。     

梅毒螺旋体Hsp40蛋白的生物信息学分析及基因克隆

目的分析梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)Hsp40蛋白的生物学特性并克隆其基因。方法通过GenBank查到Hsp40蛋白的序列,利用生物信息学软件分析其生物学特性。根据Tp Hsp40基因序列设计特异性引物,利用PCR扩增Hsp40基因,并把该DNA片段连接到pMD19-T载体,转化大肠杆菌后挑取阳性克隆采用PCR和DNA测序进行验证。结果 Tp Hsp40基因能够编码374个氨基酸的蛋白质,其分子量为40.1 k Da,无信号肽,呈亲水性。Swissmodel预测得到Tp Hsp40的三级结构与嗜热杆菌(Thermus thermophilus)Hsp40结构最接近。从Tp基因组中扩增得到1125 bp的Tp Hsp40基因并将其连接到pMD19-T载体。结论本文预测了梅毒螺旋体毒力因子Hsp40蛋白的结构和克隆得到Tp Hsp40基因。     

问号钩端螺旋体赖株溶血素基因LA0202的溶血机制

目的对问号钩端螺旋体赖株溶血素基因LA0202的溶血机制进行研究。方法纯化重组蛋白LA0202并制备多克隆抗体;Westernblot验证重组蛋白在问号钩端螺旋体培养过程中的表达;并进行重组蛋白LA0202溶血活性影响因素实验。结果Westernblot显示LA0202在钩体培养过程中可以表达,加入二价金属阳离子对重组蛋白溶血活性亦无明显激活作用,加入蛋白酶抑制剂对溶血活性无明显抑制作用,高温条件致使溶血活性丧失,加入渗透压保护剂PEG6000能抑制溶血活性。结论问号钩端螺旋体赖株溶血基因LA0202为在钩体生长过程中表达的一成孔蛋白类溶血素。     

梅毒螺旋体外膜蛋白功能的研究进展

梅毒是一种严重影响人类健康的慢性传播性疾病,是由梅毒螺旋体感染所引起。梅毒螺旋体外膜蛋白(Omp)是一类具有关键性功能的蛋白。Omp在梅毒螺旋体的免疫原性、黏附宿主细胞以及转运营养物质等方面具有非常重要的作用。本文就梅毒螺旋体主要外膜蛋白的结构、功能等特性做一综述。     

梅毒螺旋体0751基因的克隆、表达及鉴定

目的 构建梅毒螺旋体0751基因的原核表达质粒,诱导重组蛋白表达及进行免疫学鉴定.方法 以梅毒螺旋体基因组DNA为模板,PCR扩增梅毒螺旋体0751基因,构建其重组原核表达载体,并采用Western-blot方法初步鉴定该蛋白的特异性.结果 成功扩增出梅毒螺旋体0751基因,该基因在大肠杆菌表达系统中得到表达,并且特异性识别梅毒患者血清.结论 在大肠杆菌中成功表达梅毒螺旋体0751基因,为梅毒螺旋体的诊断提供了新的特异性抗原.     

特异性梅毒螺旋体确认试验与梅毒快速血浆反应素诊断比较检测

目的检测特异性梅毒螺旋体确认试验和梅毒快速血浆反应素诊断试验的敏感性和特异性对临床的诊断意义。方法应用梅毒螺旋体抗体诊断试剂,采用明胶颗粒凝聚法进行检测。结果本研究共检测54例I期梅毒血清,明胶颗粒凝集试验阳性49例,阳性率为90.7%(49/54),与顾伟鸣[2]报道的96.3%结果相近。TPPA对I期梅毒灵敏度高于梅毒快速血浆反应素诊断试验,硬下疳溃破1～4 d与5～10 d间两种方法的检出率,与硬下疳破溃>10 d比较差异性有显著性(P<0.05)。结论明胶颗粒凝集试验其敏感性和特异性均高于梅毒快速血浆反应素诊断试验。     

母婴感染梅毒螺旋体血清学分析

目的：分析梅毒抗体阳性待产妇及其新生儿的梅毒血清学检测结果,为新生儿梅毒的防治提供参考。方法：对131例梅毒抗体阳性的待产妇及其新生儿使用梅毒快速血浆反应素（RPR）试验和螺旋体抗体明胶颗粒凝集（TPPA）试验进行检测,比较母婴RPR的滴度。结果：131例梅毒抗体阳性的待产妇RPR滴度阳性88例,阴性43例;131例新生儿RPR滴度阳性48例,阴性83例。母婴梅毒滴度等级相关系数为0．857,呈显著正相关关系（P〈0．01）。结论：梅毒抗体阳性的待产妇RPR滴度越高,新生儿RPR滴度阳性率也越高。临床上对梅毒抗体阳性的产妇应联合检测母婴的RPR和TPPA试验。     

聚合酶链反应检测梅毒螺旋体

近年来，梅毒的发病人数逐年增多。由于其危害性极大，已越来越受到人们的重视。我们从１９９７年２～８月开始对４２例临床诊断为一期梅毒的患者做聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测，现报告如下。１临床资料１１一般资料：患病组：４２例患者均为我科门诊病人。男１６例，女...     

梅毒螺旋体血清学调查结果分析

目的了解本地区梅毒感染的流行病学情况,并对TRUST、TP-ELISA和TPPA三种检测梅毒螺旋体的方法进行临床应用评价,为预防和控制梅毒蔓延提供科学依据。方法对2006年1月～2008年12月前来本院就诊的5000份患者血清标本进行TRUST、TP-ELISA或TPPA梅毒螺旋体血清学检测,并结合流行病学史及临床表现,进行梅毒流行病学调查。随机抽取上述梅毒阳性患者血清样本120份与健康体检者血清样品130份,对每份标本同时进行TRUST、TP-ELISA和TPPA检测,评价其敏感性和特异性。结果2006～2008年度梅毒阳性率分别为2.9%,4.3%和7.7%;一期梅毒分别为57.9%、71.9%和62.3%,二期梅毒分别为32.6%、23.4%和30.3%,三期梅毒分别为1.8%、1.5%和2.0%,隐性梅毒分别为7.7%、3.2%和5.4%;梅毒患者中女性多于男性,男女比例为0.68:1,年龄分布主要在青壮年,文化程度主要以低素质为主,职业分布以服务业和打工者为主。TRUST、TP-ELISA和TPPA的敏感性分别为73.6%、89.5%和63.5%,特异性分别为89.4%、96.0%和100%。结论梅毒感染呈逐年上升趋势,防治措施亟待进一步加强。3种方法中TP-ELISA法敏感性最高,TPPA特异性最高。ELISA方法存在假阳性和假阴性结果,对于ELISA阳性的标本和在灰区的标本应做TPPA进行确认。而TRUST主要在判断患者病情和疗效方面有重要价值。     

梅毒螺旋体Tp0100蛋白的生物信息学分析及其抗氧化应激作用

目的分析梅毒螺旋体硫氧还蛋白Tp0100的生物学特性及其抗氧化应激作用。 方法利用NCBI、SignalP5.0、TMHMM等生物信息学软件分析Tp0100蛋白的基本理化性质、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构、三级结构、B细胞表位和与其他菌属的同源性。构建Tp0100原核表达体系,诱导表达重组蛋白Tp0100(rTp0100)。制备相应新西兰兔免疫血清,ELISA法检测特异性IgG抗体滴度。应用流式细胞仪和荧光显微镜检测rTp0100刺激巨噬细胞释放活性氧(ROS)水平。 结果Tp0100蛋白共有185个氨基酸,相对分子质量为20.5 kDa,有信号肽、磷酸化位点,无跨膜域,无糖基化位点。二级结构中氨基酸α螺旋有59个,延伸链44个,β转角21个,无规则卷曲61个;有2个连续的B细胞表位;Tp0100与淋病奈瑟菌硫氧还蛋白具有高度的同源性。成功构建重组质粒pET28a-Tp0100并获得高纯度的rTp0100。该蛋白免疫新西兰兔能够诱导产生高滴度特异性IgG抗体。rTp0100蛋白刺激能降低巨噬细胞内ROS水平。 结论Tp0100蛋白为亲水性蛋白,有B细胞表位;rTp0100具有良好的抗原性,可抑制巨噬细胞内ROS的产生。     

三种检测梅毒螺旋体血清学方法评估

目的 寻求一种敏感度和特异性高的方法用于输血前和临床诊断检查梅毒螺旋体抗原血清学试验。方法 应用TPPA、ELISA、TRUST等三种梅毒螺旋体血清学检测方法，对25例各期梅毒血清标本进行检测，对其敏感性及特异性进行比较。结果 25例梅毒血清标本，ELISA法和TPPA法检测阳性率为100％，TRUST法为93％；经稀释法检测，ELISA法较TPPA法敏感。对815例临床标本检测，ELISA方法与TPPA法的检出符合率为100％。结论 ELISA法操作简单，结果判断可标准化，特异性强，敏感性高；既可用于过筛试验，又可用于筛检阳性样本的确认。     

RpN47重组抗原的表达及其产物反应原性的初步鉴定

目的探讨梅毒螺旋体外膜蛋白（TpN47）重组抗原及其临床意义。方法采用PCR技术扩增TpN47重组抗原,再进行T-A克隆及测序,然后亚克隆至原核表达载体中,以亲和层析法纯化重组蛋白。将重组蛋白作为抗原制备酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒,对正常人血清200份、类风湿性关节炎（RA）阳性血清55份、系统性红斑狼疮（SLE）阳性血清34份及梅毒可疑患者阳性血清135份进行检测,其结果与梅毒血凝试验（TPHA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）的检测结果进行比较。结果成功地构建了pET32-TpN47重组表达载体,重组的TpN47蛋白在大肠杆菌BL21中得到稳定表达。对梅毒可疑阳性血清采用ELISA、TPHA、TRUST检出阳性率分别为81.48%、98.52%、71.11%;TRUST测出的8份可疑阳性样品及31份阴性样品TPHA检测结果均为阳性,而ELISA检测结果阳性19份。ELISA检测阳性率与TRUST和TPHA比较,差异均有统计学意义（均P〈0.01）。结论TpN47重组抗原具有较好的免疫反应活性,ELISA试剂特异性、敏感性次于TPHA,但明显高于TRUST。     

巢式PCR检测梅毒螺旋体DNA方法研究

目的建立一种血清梅毒螺旋体DNA提取及PCR鉴定方法。方法基于化学热裂解法和柱式核酸提取原理进行血清梅毒螺旋体DNA提取。根据文献筛选优化引物建立巢式PCR检测体系,并对实验方法的特异性、抗干扰性、检测梯度进行评价。结果建立的实验方法特异性好、抗干扰性强,对TRUST为1：8以上的标本检测全部为阳性。结论提取梅毒螺旋体DNA及PCR鉴定有助于梅毒的快速诊断,对于血液中梅毒螺旋体增殖能力判断具有重大潜在应用价值。     

三种方法联合检测避免梅毒诊断的假阳性结果

目的探讨用梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）联合梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）的方法避免TP-ELISA法筛查梅毒抗体的假阳性结果。方法用TP-ELISA法作为临床标本的梅毒筛查实验,对阳性标本进一步作TRUST和TPPA检测。结果 TP-ELlSA法检出114例梅毒阳性标本,TPPA确证阳性111例,阳性符合率为97.36%（111/114）;其中27例TRUST阳性,TPPA确证试验均为阳性,阳性符合率为100%;97例TRUST阴性,TPPA确证阳性94例,阴性3例,不符合率为2.64%。结论 TP-ELISA法筛查梅毒存在一定比例的假阳性结果,对TP-ELlSA法测出的阳性标本先做TRUST试验,再用TPPA确证,阳性结果报告梅毒抗体阳性,阴性结果报告梅毒抗体阴性,这样能有效避免单一TP-ELISA法的假阳性结果。     

梅毒螺旋体青霉素结合蛋白的克隆及表达

目的体外克隆并表达梅毒螺旋体青霉素结合蛋白，为制备预防性疫苗奠定基础。方法利用PCR反应及基因重组技术，扩增重编码青霉素结合蛋白的基因，构建重组质粒pETJKM／TpN47，IPTG诱导表达。结果PCR法扩增出了1350bp的目的片段，原核表达质粒pETJKM／TpN47酶切鉴定正确，测序结果与Gengbank上公布的基因序列完全一致，并可在大肠杆菌中高效表达。结论成功构建了人pETJKM／TpN47原核表达载体，高效表达了青霉素结合蛋白，为梅毒的预防性疫苗的制备以及进一步研究其血清学诊断试剂奠定了基础。     

梅毒螺旋体检测方法的临床评价

目的 探讨三种血清梅毒螺旋体检测方法的应用价值.方法 应用快速血浆反应素试验(RPR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)分别检测602份标本,其中61例确诊为梅毒感染.荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对RPR阳性标本进行检测.结果 ELISA法与TPPA法检测结果之间无显著性差异(P＞0.05),二者敏感性和特异性分别为95.1%、97.8%和91.8%、96.9%;RPR与ELISA法、TPPA法之间有显著性差异(P＜0.05);FQ-PCR法检测结果均为阴性.结论 ELISA法和TPPA法是较好的血清梅毒螺旋体的检测方法.FQ-PCR法检测的阳性率低.     

梅毒螺旋体重复蛋白K的克隆表达

目的体外克隆并表达梅毒螺旋体重复蛋白K，为制备预防性疫苗奠定基础。方法利用PCR反应及基因重组技术，扩增重复蛋白K编码基因，构建重组质粒pET28b（＋）／TprK，IPTG诱导表达。结果PCR法扩增出了1350bp的目的片段，原核表达质粒pET28b（＋）／TprK酶切鉴定正确，测序结果与Gengbank上公布的该基因序列完全一致，并可在大肠杆菌中高效表达。结论成功构建人pET28b（＋）／TprK原核表达载体，并能高效表达TprK蛋白，为梅毒的预防性疫苗的制备以及进一步研究其血清学诊断试剂奠定了基础。