内质网应激在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达

目的探讨内质网应激(ERS)在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达以及小剂量衣霉素(TM)预处理对缺血再灌注损伤心肌的影响。方法 SD大鼠30只随机分为三组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、衣霉素处理+IR组(TM+IR组),每组10只。Sham组单纯开胸,不结扎冠状动脉;IR组开胸,结扎前降支30 min,再灌注2 h;TM+IR组TM腹腔注射0.6 mg/kg,30 min后结扎前降支30 min,再灌注2 h。于开胸后,心肌再灌注2 h抽血,检测肌钙蛋白I(c Tn I)含量,透射电镜观察再灌注2 h心肌的超微结构,检测再灌注2 h心肌的GRP78 mRNA及蛋白表达。结果 IR组和TM+IR组在再灌注2 h时,c Tn I水平均明显上升;IR组心肌超微结构损伤最严重,TM+IR组次之。再灌注2 h后,GRP78 mRNA及蛋白,IR组及TM+IR组明显升高。结论 MIRI可诱导ERS,小剂量TM预处理可减轻MIRI。     

葛根素穴位注射对盐酸布比卡因所致大鼠心脏毒性的影响

目的观察穴位注射葛根素对盐酸布比卡因所致大鼠心脏毒性的保护作用。方法将40只SD雄性大鼠随机分为空白组(I组)、模型组(Ⅱ组)、葛根素注射液预防组(Ⅲ组)、葛根素注射液治疗组(Ⅳ组),每组10只。I组大鼠于股静脉泵入生理盐水2 mg/(kg·min),其余各组大鼠按相同方法泵入盐酸布比卡因注射液制作模型。I组大鼠于双侧内关穴注射生理盐水各0.1 m L,Ⅱ组和Ⅳ组出现心律失常时分别注射等量生理盐水和葛根素注射液,Ⅲ组在泵入盐酸布比卡因前30 min注射等量葛根素注射液。记录给局麻药后大鼠出现心律失常、心脏骤停的时间及相应的局麻药剂量,取心肌组织检测Na~+-K~+-ATP酶和乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组大鼠出现心律失常、心脏骤停时间明显延迟,对应的盐酸布比卡因累积剂量增大,大鼠心肌组织中Na~+-K~+-ATP酶活性明显升高,LDH活性显著降低,差异有统计意义(P0.05或P0.01);但Ⅲ组在延迟心律失常、心脏骤停时间,升高Na~+-K~+-ATP酶活性,降低LDH活性方面更显著,差异均有统计意义(P0.05)。结论穴位注射葛根素能够减轻盐酸布比卡因的心脏毒性,其机制可能与增加心肌Na~+-K~+-ATP酶活性、降低心肌LDH活性有关。     

胸交感神经阻滞对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨胸交感神经阻滞(TSNB)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用。方法将30只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、心肌缺血再灌注(I/R)组和TSNB组,每组10只。TSNB组、I/R组大鼠结扎左冠状动脉前降支前分别向硬膜外隙给予体积分数0.5%罗哌卡因0.125 m L·kg-1和等量生理盐水,假手术组大鼠给予心脏左冠状动脉前降支穿线,但不结扎,穿线前硬膜外隙给予生理盐水0.125 m L·kg-1;TSNB组和I/R组大鼠均给予心脏左冠状动脉前降支穿线并结扎,40 min后解开结扎线复灌注120 min。记录各组大鼠开胸前(T_0)、缺血前(T_1)、缺血20 min(_2)、缺血40 min(T_3)、再灌注120 min(T_4)时的心率(HR)、平均动脉压(MAP),以及T0、T2~T4时血清肌钙蛋白I(cTnI)水平。再灌注120 min时2,3,5-氯三苯四唑(TTC)染色计算大鼠心肌梗死面积。Western blot法检测大鼠心肌组织自噬相关蛋白Beclin-1表达水平。结果与组内T0时及假手术组同时间点比较,T2~T4时I/R组和TSNB组大鼠HR、MAP显著降低(P<0.05);与I/R组同时间点比较,T_2~T_4时TSNB组大鼠HR、MAP显著升高(P<0.05)。与T0时比较,T2~T4时I/R组和TSNB组大鼠血清cTnI水平显著升高(P<0.01);与假手术组同时间点比较,T_2~T_4时I/R组和TSNB组大鼠血清cTnI水平显著升高(P<0.01);T2~T3时,I/R组大鼠血清cTnI水平与TSNB组比较差异无统计学意义(P>0.05),T_4时I/R组大鼠血清c Tn I水平较TSNB组显著升高(P<0.01)。与I/R组比较,TSNB组大鼠心肌梗死区和心肌缺血危险区的百分比显著降低(P<0.01),假手术组大鼠无心肌梗死。与假手术组比较,I/R组大鼠心肌组织中Beclin-1表达显著增高(P<0.01);与I/R组比较,TSNB组大鼠心肌组织中Beclin-1水平显著降低(P<0.01)。结论胸交感神经阻滞能够减轻大鼠MIRI,其机制可能与下调心肌组织自噬因子Beclin-1表达及冠状动脉扩张有关。     

丹参水提物对缺血—再灌注心律失常大鼠的保护作用及机制

目的探讨丹参水提物对大鼠在体心肌缺血—再灌注性心律失常的保护作用及其机制。方法36只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、模型组(I/R)和丹参水提物组(1/R+DS)。I/R+DS组给予丹参水提物(1g/kg)腹腔注射预处理7 d,Sham组和I/R组给予等量生理盐水,复制大鼠缺血—再灌注心律失常模型,动态II导联心电图监测缺血15 min和再灌注5 min内室性早搏(PVBs)次数,室性心动过速(VT)出现时间、持续时间,心室颤动(VF)的发生率和大鼠病死率。伊文思蓝与红四氮唑(TTC)染色观察左心室梗死面积,蛋白免疫印迹(Weslern b1ot)法检测心室缺血区缝隙链接蛋白43(Cx43)含量的变化。结果与I/R组比较,I/R+DS缺血期和再灌期的PVBs次数减少(P<0.01),缺血期VT持续时间缩短(P<0.01),但VT首次出现的时间无明显差异,VF的发生率和大鼠病死率降低,但差异亦无统计学意义(P>0.05);左心室梗死面积缩小(P<0.01);心室缺血区磷酸化Cx43(P-Cx43)升高(P<0.05)结论丹参水提物能明显改善大鼠心肌缺血,降低大鼠在体心肌缺血—再灌注致命性室性心律失常的发生率,其机制可能是通过抑制心室缺血区P-Cx43的降低。     

去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血/再灌注心肌的延迟保护作用

目的　研究去甲肾上腺素是否对大鼠心肌具有缺血预处理后的延迟保护作用。方法　 4 0只大鼠随机分为 3组。正常对照组 (NC ,n =13) :冠脉前降支下穿线 ,不结扎 ,旷置 10 5min ;单纯缺血 /再灌注组(I/R ,n =13) :冠脉前降支结扎 4 5min ,再灌注 6 0min ;去甲肾上腺素预处理组 (NEPC ,n =14) :腹腔注射去甲肾上腺素 ,2 4h后操作同I/R组。以心电图 (ECG)、心肌梗塞范围及心肌组织丙二醛 (MDA)含量为观察指标。结果　与I/R组相比 ,NEPC组显著缩小I/R后的心肌梗塞范围 (P <0 .0 1) ;减小了ECG的ST段上移幅度并降低了室性心律失常的发生率 (P <0 .0 1) ;心肌MDA含量明显降低 (P <0 .0 1) ,减轻了自由基对心肌的损害。结论　去甲肾上腺素对大鼠缺血心肌有延迟保护作用     

ghrelin在缺血预处理抗大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨ghrelin在脑缺血预处理(IPC)保护海马神经元缺血再灌注损伤中的作用及其与线粒体解耦联蛋白-2(UCP2 )表达的关系.方法:采用四血管阻断法建立全脑缺血模型,将大鼠随机分为对照组(CON组,只进行假手术)、缺血再灌注组(I/R组,大鼠在电凝椎动脉24 h后接受8 min的致死性缺血及再灌注)、IPC+I/R组(大鼠先给予3 min的短暂IPC,灌注72 h后,再给予致死性脑缺血8 min及再灌注)、I/R+ghrelin组(I/R+G组,大鼠在8 min致死性缺血后立即腹腔注射ghrelin 0.4 mg/kg,1次/d,连续注射3 d),I/R+0.9%氯化钠溶液组(I/R+N组,以同体积0.9%氯化钠溶液替代I/R+G组中的ghrelin)、对照+0.9%氯化钠溶液组(CON+N组,在CON组的基础上每天腹腔注射与I/R+G组中ghrelin同体积的0.9%氯化钠溶液).应用酶联免疫吸附试验检侧缺血再灌注后血浆ghrelin水平.大鼠注射ghrelin后,应用苏木精-伊红(H-E)染色观察海马Cal区神经元的组织形态学变化,免疫组织化学法测定海马Cal区Bcl-2表达,反转录-聚合酶链反应检测海马UCP2 mRNA表达.结果:致死性缺血再灌24 h后,IPC+ I/R组血浆ghrelin水平较CON组和I/R组显著升高(P值均<0.01),并且持续72 h(P值均<0.01).注射ghrelin后,I/R+G组存活神经元数目显著多于I/R+N组(P<0.01),但显著少于CON + N组(P<0.01),I/R+G组海马CAI区UCP2 mRNA表达显著多于CON+ N组和I/R+N组(P值均<0.01).结论:IPC能促进ghrelin释放,并通过ghrelin上调海马CAI区神经元UCP2的表达,减轻缺血再灌注损伤.     

右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注心律失常的影响及机制研究

目的观察右美托咪定预处理对大鼠缺血再灌注心律失常的影响及机制。方法 2015年3-6月于武汉大学基础医学院选择30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(SO组)、缺血再灌注组(I/R组)、右美托咪定预处理组(DEX组)各10只。I/R组、DEX大鼠先结扎冠状动脉30 min引起心肌缺血,再松开结扎线给予心肌再灌注120min。SO组只带线不结扎,DEX组在缺血前2 h给予右美托咪定100μg/kg腹腔注射,I/R组给予等体积生理盐水。监测记录各组缺血再灌注心律失常的发生情况,以实时定量PCR法检测心肌组织L型钙通道(Cav1.2)、钠钙交换体(NCX)mRNA的水平。结果 SO组心律无明显变化,心律失常评分为0分。DEX组心律失常发生率低于I/R组,缺血30 min和再灌注120 min心律失常评分均低于I/R组(4.5±0.6 vs.2.1±0.4,3.7±0.5 vs.1.1±0.3,P均<0.05)。与SO组比较,I/R组、DEX组心肌组织Cav1.2和NCX的mRNA水平均升高,而DEX组较I/R组明显降低(P均<0.05)。结论右美托咪定预处理可减少缺血再灌注心律失常发生,与减少Cav1.2和NCX的mRNA水平,抑制钙超载有关。     

腺苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的:观察腺苷(Ado)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的保护作用,探讨其可能的作用机制。方法:健康Wistar大鼠36只,随机分成3组。假手术组:只穿线不结扎冠状动脉;腺苷组:于结扎前1min给予Ado(0.4ml/kg)左心室内注入;对照组:给予等量生理盐水左心室内注入。开胸结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注45min,制作大鼠MIRI模型。实验结束后检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;测量缺血前与再灌注45min后左心室收缩期峰压(LVSP)差值和左心室舒张期末压(LVEDP);HE染色观察心肌组织形态结构。结果:与对照组比较,腺苷组大鼠SOD活力提高(P<0.05)而MDA生成量减少(P<0.01),且LVSP差值及LVEDP均减小(P<0.05,P<0.01);与假手术组比较,对照组大鼠心肌组织SOD活力明显下降(P<0.05)而MDA生成量明显增高(P<0.01),且LVSP差值及LVEDP明显增高(P<0.05,P<0.01);对照组大鼠心肌纤维断裂坏死,大量炎性细胞浸润,而腺苷组无出血、坏死,有少量炎性细胞浸润。结论:心肌缺血再灌注可导致缺血心肌进一步损伤,Ado可通过抑制氧自由基的产生,减少炎性细胞的浸润,对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。     

氧化应激在BpV预处理糖尿病大鼠再灌注心肌缺血后处理敏感性恢复中的作用

目的:探讨氧化应激在第10号染色体上缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(Lipid phosphatase and tensin homolog on chromosome ten,PTEN)抑制剂BpV预处理糖尿病大鼠缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌缺血后处理(ischemic post-conditioning,IPO)敏感性恢复中的作用。方法:取健康雄性SD(Sprague Dawley)大鼠(体质量220~280 g),采用腹腔注射1%链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液(60 mg/kg)的方法制备1型糖尿病模型。将饲养8周的60只糖尿病大鼠随机分为假手术组(S组)、I/R组、IPO组、PTEN抑制剂+I/R组(BpV+I/R组)、BpV+IPO组。S组只穿线不结扎血管;I/R模型采用结扎左冠状动脉前降支30 min/再灌注120 min的方法建立;IPO组于再灌注前行3个循环的再灌注10 s/缺血10 s;BpV于缺血前1 h静脉注射1 mg/kg,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。分别干预后采集各组大鼠部分心肌组织标本,氯化三苯基四氮唑染色法检测心肌梗死面积(infarct size,IS),检测心肌15-异构前列腺素(15-F2t-isoprostance)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated-protein kinase B,p-Akt)和细胞色素c(cytochrome C,Cyt-c)的蛋白表达及电镜下观察心肌细胞的超微结构。结果:与S组相比,I/R组和IPO组心肌15-F2t-isoprostance和MDA含量显著升高,Cyt-c表达上调,线粒体损伤增加;I/R组与IPO组比较上述指标差异无统计学意义;与IPO组比较,BpV+IPO组心肌梗死面积百分比、心肌15-F2t-isoprostance和MDA含量显著降低,p-Akt表达上调,Cyt-c表达下调,线粒体损伤显著减轻。结论:BpV预处理可以恢复糖尿病缺血再灌注心肌对缺血后处理的敏感性,机制与激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路,抑制机体的脂质过氧化反应,减轻线粒体损伤有关。     

心肌缺血再灌注损伤大鼠胱硫醚β-合酶/硫化氢和血红素氧合酶-1/一氧化碳的相互作用

目的 研究胱硫醚母β-合酶(CBS)/硫化氢(H2S)体系和血红素氧合酶-1(HO-1)/一氧化碳(CO)体系在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的相互作用.方法 30只SD大鼠随机分为5组(n=6):对照组(C组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注+锌原卟啉(HO-1抑制剂)组(I/R+Z组)、心肌缺血再灌注+羟氨(CBS抑制剂)组(I/R+H组)、心肌缺血再灌注+锌原卟啉+羟氨组(I/R+Z+H组).I/R+Z组、I/R+H组和I/R+Z+H组夹闭左冠状动脉前30 min分别腹腔注射锌原卟啉45μmol/kg、5 mmol/L羟氨1 ml和5 mmol/L羟氨1 ml+锌原卟啉45μmol/kg,C组和I/R组腹腔注射等量生理盐水.缺血30 min再灌注2 h后处死大鼠取心肌组织,测定大鼠心肌组织中H2S、NO、GSH、MDA含量、SOD活性及CBS-mRNA和HO-1-mRNA表达的变化;电镜下观察心肌组织线粒体的变化.结果 与C组相比,I/R组H2S、CO和MDA含量增高,GSH含量和SOD活性降低,CBS-mRNA和HO-1-mRNA表达增高.与I/R组相比,I/R+Z组CO含量降低,H2S和GSH含量增高,CBS-mRNA表达增高,HO-1-mRNA表达降低;I/R+H组H2S和GSH含量降低,CO含量增高,CBS-mRNA的表达降低,HO-1-mRNA表达增高;I/R+Z+H组H2S、CO、GSH含量和SOD活性降低,MDA含量增高,CBS-mRNA和HO-1-mRNA的表达均降低;I/R+Z+H组大鼠心肌组织线粒体损伤加重(P<0.05).结论 CBS/H2S体系和HO-1/CO体系在大鼠心肌缺血再灌注损伤过程中有相互作用.