血红素及原卟啉Ⅸ的制备

用动物血粉或全血在含卤化物的碱性甲醇中分离出血红素和蛋白质.从血红素转变为原卟啉IX及其二钠盐,取得收率高、纯度好的结果.     

霍乱肠毒素的纯化与鉴定

本法纯化的肠毒素有下列特点:1.纯化毒素与粗制毒素对抗血清呈现单一线条,并与标准抗血清完全融合。2.经免疫电泳、等电点聚焦电泳等方法测定其结果与美国制备肠毒素一致。3.本法所纯化的毒素与自然类毒素未分开,其家兔兰斑试验为IBD/0.002μg,回收率达35%,且杀弧菌抑制试验为阴性。     

冷盐沉淀同步分离dsRNA病毒基因组和结构多肽的方法

目的 :探索一条既能获得dsRNA病毒全基因组 ,又能同时获得该病毒完整结构多肽的方法。方法 :将分别感染了蓝舌病毒 (BTV)和人轮状病毒 (HRV)的培养细胞分别破碎以释出病毒后 ,结合应用差速离心和蔗糖梯度离心技术 ,获得了这两种病毒的纯化粒子 ;再用 1%的SDS裂解病毒 ,0 .2 5mol/L的KCl沉淀其结构蛋白 ,而病毒基因组悬于上清。结果 :所沉淀的蛋白用PBS(pH 7.8)适当稀释后 ,即可用作抗原 ;上清用酚∶仿抽提 1次后 ,即可用于核酸分子生物学研究。结论 :此方法为一套既能有效同步分离dsRNA病毒核酸和结构多肽等活性生物大分子 ,又能节约实验材料和时间的有效方法。     

合欢皮的脂溶性成分

目的：研究合欢皮（ＣｏｒｔｅｘＡｌｂｉｚｉａ）的化学成分及其生物活性。方法：用色谱法和光谱解析方法对树皮的亲脂性化学成分进行分离和结构测定。结果：共得６个化合物：（１）１（２９羟基二十九碳酸）甘油酯,（２）１（２４羟基二十四碳酸）甘油酯,（３）乙酸Δ１２乌苏烯３β醇酯,（４）二十二碳酸乙酯,（５）β谷甾醇,（６）α菠甾醇３ＯβＤ葡萄糖甙。结论：化合物（１）为新化合物,（２）为首次以单体形式获得,（３）为首次从合欢属植物中获得的乌苏烷型三萜,（４）为首次从合欢属植物中获得。     

人巨细胞病毒蚀斑实验条件的优化及在抗病毒物质活性测定中的应用

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）的蚀斑形成实验最适工作条件,建立稳定易行的HCMV蚀斑技术,用于HC-MV的定量测定及体外抗病毒物质活性测定的研究。方法HCMV病毒悬液接种至人胚成纤维细胞（HF）单层,37℃吸附1h,分别用含0.463‰、0.925‰NaHCO3及0.5%、1%DMSO琼脂糖覆盖,1周后加盖第2层;2周后用0.5%结晶紫染色5min,计数、计算pfu/ml,采用PCR法对蚀斑培养物进行鉴定;分别用患者血清及HCMVAD169株兔免疫血清进行蚀斑抑制实验,计算中和抗体滴度;蚀斑减少实验测定不同浓度更昔洛韦（GCV）的抗HCMV活性。结果HCMV对照孔在5d出斑,蚀斑为圆形、实心、不透明状;两种浓度NaHCO3对蚀斑形成数量、大小有明显影响且病毒滴度差异有显著性（P〈0.05）。在含0.463‰NaHCO3培养孔内,出斑时间提前至3d;但不同浓度的DMSO对蚀斑数量、大小以及病毒滴度的影响差异无显著性（P〉0.05）。HCMV患者血清及HCMVAD169株兔免疫血清均可以抑制蚀斑形成。利用蚀斑减少实验测定GCV抗HCMV活性,可在7d内获得结果。结论HCMV蚀斑形成实验条件经优化后,可以方便稳定地对HCMV进行定量测定以及抗病毒活性物质的筛选和评价。     

复方氯唑沙宗片中氯唑沙宗与对乙酰氨基酚含量测定

目的 研究复方氯唑沙宗片剂中氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的含量测定方法。方法 采用双波长倍增差示法。结果 氯唑沙宗和对乙酰氨基酚的平均回收率与相对标准偏差分别为９９．５％、０．８２％、１００．６％,０．６６％（ｎ＝５）。结论 本法不经分离可同时测定两组分的含量。     

~1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化

目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。     

牙周炎患者龈下厌氧菌群的分离和鉴定

从24例正常人、34例成年人牙周炎和18例青少年牙周炎患者龈下分离和鉴定了23种共296株革兰氏阴性无芽胞厌氧菌。产黑色素类杆菌、牙龈类杆菌、伴放线嗜血杆菌、核梭杆菌、衣氏和梅氏放线菌是牙周炎患者龈下优势厌氧菌群。两类患者龈下韦荣氏球菌的检出率与正常人相似。实验结果还提示,牙周炎非为单一的病原体所引起,而是多种厌氧菌共同作用的结果。     

大鼠胰岛分离纯化实验研究

目的介绍一种大鼠胰岛分离纯化方法。方法SD大鼠和Wistar大鼠共10只,以0.05%Ⅴ型胶原酶胆管灌注,经消化后用葡聚糖(dextran)不连续密度梯度法纯化胰岛。DTZ和AO/PI染色检测纯度及活性。结果胰岛收获量为(930±168)个,Ⅴ型胶原酶灌注及不连续密度梯度法可获得纯度高、活性好胰岛。结论以0.05%的胶原酶胆管灌注消化的方法可得纯度高、活性良好的胰岛。     

补骨脂中补骨脂素的提取及纯化

目的 从中药材补骨脂中提取补骨脂素。方法 补骨脂经粉碎后用50%乙醇浸渍提取,浸提液进行浓缩沉淀,得到膏状物,膏状物用甲醇溶解,活性碳脱杂质,再除去溶剂,放置过夜析出晶体。甲醇洗去稠状物得黄色片状晶体,甲醇重结晶后得针状白色晶体。薄层分析、高效液相色谱分析其纯度。紫外吸收光谱、H1-NMR谱鉴定其结构。结果与结论晶体物得率0.147%,是一个单体,经过波谱分析确定其为补骨脂素。用本方法获取纯品补骨脂素比较简便的方法。     

人Leptin的高效表达、纯化及生物学活性研究

将人Leptin表达质粒pBV200-OB转化宿主菌E.coli JM109,热诱导获得目的蛋白的表达.经SDS-PAGE鉴定分析,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40%以上,且以包涵体的形式表达.通过包涵体分离,Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层析及Hypersil C18柱反相色谱纯化,获得纯度在95%以上,内毒素含量小于10EU/Mg的高纯度的重组人Leptin.Western-blot鉴定表明,纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异结合;蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致.纯化产物经复性处理,其分子中Cys96和Cys146形成二硫键.体内活性检测显示,纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB/c小鼠的进食和体重增长,提示其具有明显的生物学活性.     

银杏叶多糖提取、纯化及其含量的测定

目的:分析银杏叶中多糖的提取和纯化过程,并测定银杏叶中的多糖含量。方法:在实验研究过程中,根据提取的次数、固液比、时间等变化量的不同,研究粗多糖的纯化,并确定相应的条件因素,多糖含量的测定采用苯酚-硫酸法。结果:在本组实验中,获得的银杏叶粗多糖的得率是12.2%,经活性炭纯化后,多糖得率是9.8%。粗多糖中的多糖在测定提取中的含量是35.7%,多糖在纯化后的含量是43.3%,相对于标准含量,测定的多糖含量与其之间两者偏差不超过3.0%。结论:采用本组实验的研究方法可获得较好的纯化效果,且在实验测定过程中有较好的重现性。本组实验测得多糖在银杏叶中的含量为4.3%。     

猪后肢钢珠致伤后的早期反应

用猪观察了高速投射物所致单侧后肢严重粉碎性骨折和软组织伤后的早期全身反应。结果可见,血液动力学、血气、胸片、血清T_3、T_4、果糖二磷酸醛缩酶、纤维结合蛋白、肺泡灌洗液蛋白含量及病理光、电镜检查均有不同程度的变化。死亡动物变化更为明显。本文还对伤后RDS与创伤指数-创伤严重度记分(ISS)的关系进行了讨论。并指出亚临床型RDS值得关注。     

非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法的建立

目的：建立适用于体外细胞模型的OATP1B1手性底物非索非那定柱前手性衍生化分析方法,为测定细胞中非索非那定对映体提供分析手段。方法：选择R-(+)-苯乙基异氰酸酯作为手性衍生化试剂,与非索非那定生成氨基甲酸酯衍生物,应用液相色谱-串联质谱法确定对映体衍生物色谱峰,通过反相高效液相色谱法实现对映体的分离分析。结果：在建立的手性分离条件下,成功实现非索非那定对映体分离分析,非索非那定两个对映体衍生物在25 ~100 ng/ml浓度范围内线性关系良好 (R²=0.9992, 0.9989),日内、日间精密度均小于10%。结论：本实验建立的非索非那定对映体柱前手性衍生化反相高效液相色谱分析方法灵敏、准确,可用于体外细胞模型中盐酸非索非那定立体选择性分析。     

南天竹总生物碱提取纯化工艺研究

目的:确定最佳的提取、纯化条件,为南天竹中总生物碱的开发和利用提供科学的理论依据。方法:在单因素基础上,利用L9(34)正交试验,以南天竹总生物碱得率为指标,优选回流提取工艺;通过静态和动态吸附实验,以吸附量和洗脱量为考察指标,分别比较7种不同型号的树脂对南天竹总生物碱的吸附和解吸性能;并以盐酸小檗碱为对照品,应用酸性染料比色法,通过测定南天竹总生物碱的含量,筛选纯化最佳工艺。结果:南天竹中总生物碱的最佳提取工艺条件为8倍量75%的乙醇回流提取3次,每次1h。HPD-722型树脂具有最佳的吸附及洗脱参数,其最佳纯化条件为:上样液总生物碱质量浓度为4mg·m L^-1,上样量35m L,上样流速2m L·min^-1,先以6倍体积的水洗去杂质,再以10倍体积的80%乙醇以1m L·min^-1的流速洗脱,得总生物碱含量达到70%以上。结论:该提取、纯化条件简单、可行,具有良好的应用前景。     

Ficoll及Percoll分离、纯化金黄地鼠肝细胞方法比较研究

目的建立经济有效的原代地鼠肝细胞分离纯化方法,并比较Ficoll及Percoll两种分离液分离出的肝细胞纯度及活性的差异。方法对传统的两步原位胶原酶灌流法进行简化,行肝脏原位灌流,离体后Ⅳ胶原酶进行消化;采用Ficoll及Percoll两种细胞分离液进行分离、纯化;纯化后于37℃5%CO2培养箱内孵育培养,0.4%台盼蓝拒染实验检测肝细胞的存活率。结果 Ficoll及Per-coll分离的地鼠肝细胞总数分别为（1.46±0.91）cells.g-1肝组织、（1.79±0.89）cells.g-1肝组织,即时分离的肝细胞活力和纯度相近,都大于95%,但后期二者差异较大,Percoll分离得的肝细胞活率较高,且细胞活性下降较缓慢。结论通过简化的门静脉原位灌流法和低浓度胶原酶离体消化,Per-coll或Ficoll分离液纯化,即时分离的肝细胞可保持良好的功能和活力,二者无显著差别,但从细胞培养的要求出发,Percoll优于Ficoll分离液。     

菏泽市农村饮食店餐具卫生状况调查

目的 进一步了解农村饮食店的餐具消毒情况,加强卫生监督管理工作。方法根据食品卫生国家标准颁布的《食(饮)具消毒卫生标准》,采用滤纸粘贴法,对427家饮食店的餐具进行采样检测并作统计分析。结果饮食店餐具卫生总合格率为45．3％,饭碗、汤盘合格率最高为53、3％,茶杯合格率最低为38．1％,冬春季相比,春季合格率高于冬季。结论餐具卫生合格率低,消毒监测工作有待于加强。     

气相色谱法测定血液中毒鼠强的含量

目的:对血液中的毒鼠强进行提取和检测.方法:采用酸水解及GC/FPD、GC/MS分析的方法,研究酸水解过程中的水解温度、水解强度等方面的影响,并对毒鼠强的GC/MS图谱进行解析,建立了一个定性准确、提取效率高、干扰少的毒鼠强提取分析方法.结果:毒鼠强工作曲线在0.01～0.2μm/μl之间呈线性关系,相关系数r=0.9999.与传统的液-液提取方法相比,血液样品毒鼠强的检出率提高1.69倍.结论:本方法可应用于生物样品中毒鼠强的提取和检测.     

兔轮状病毒的分离与鉴定

目的 从疑似病料中分离免轮状病毒。方法 从形态学、血清学、分子生物学等几个方面对其进行鉴定。结果 从几个方面鉴定的结果显示，疑似病料中含有兔轮状病毒(LaRV)病毒粒子。结论 本次实验成功地分离得到了LaRV病毒。