阻断ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

目的:通过体外培养人胆管癌QBC939细胞系,阻断ErbB4受体,检测肿瘤生物学行为的改变,从而探讨人类第4表皮生长因子(ErbB4)受体介导人胆管细胞癌肿瘤生物学行为的分子机制.方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,然后利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值);根据IC50值选择使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化.分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化.结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,其IC50值为:49.14μmol/L;AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱.结论:在体外抑制ErbB4受体能使胆管癌肿瘤细胞生长、迁移、侵袭能力减弱;ErBb4在胆管癌的发生、发展中具有重要的作用,ErbB4可能成为胆管癌分子治疗的新靶点.     

三氧化二砷通过自噬作用抑制A549肺癌细胞的生长

目的探讨三氧化二砷对肺癌细胞生长的影响,揭示三氧化二砷抗癌作用的机制。方法培养人肺癌细胞A549,给予不同药物浓度三氧化二砷药物处理;利用CCK8检测三氧化二砷对A549细胞活力的影响;以自噬试剂盒观测细胞的自噬情况。结果 10、25、50和100μmol/L三氧化二砷明显抑制A549的细胞活力(P<0.05)。三氧化二砷处理后镜下见阳性自噬细胞增多,自噬率增加。结论 AS2O3可抑制A549肺癌细胞生长,这种效应可能通过诱导细胞自噬来发挥作用。     

氯喹对百草枯攻毒后A549细胞存活率与蛋白表达的影响

目的分析氯喹(CQ)对百草枯(PQ)攻毒后A549细胞存活率与蛋白表达影响。方法 A549细胞生存率受PQ影响情况采用MTS法检测,依据不同PQ攻毒含量将其分成对照组、0.1μmol/L组、1μmol/L组、10μmol/L组、30μmol/L组、100μmol/L组、300μmol/L组和1 000μmol/L组,在攻毒12 h后进行检测;使用不同浓度CQ、自噬抑制剂、坏死抑制剂和抗炎反应药对攻毒A549细胞进行解救,Western-blot法检测攻毒后A549细胞内LAMP-2、LC-3及LAMP-1表达情况。结果攻毒12 h后,对照组A549细胞生存率为100%,0.1μmol/L组为98.5%,1μmol/L组为98.0%,10μmol/L组为96.8%,30μmol/L组为98.4%,100μmol/L组为65.5%,300μmol/L组为52.9%,1 000μmol/L组为46.3%。CQ干预:浓度为0.3μmol/L干预后生存率为68.2%、1μmol/L干预后为72.5%、3μmol/L干预后为78.4%、10μmol/L干预后为85.9%、30μmol/L干预后为95.7%。CQ解救浓度为30μmol/L,解救后A549细胞内LAMP-2、LC-3及LAMP-1蛋白表达量均显著升高,和攻毒后对比差异有统计学意义(P0.05)。结论 CQ可明显缓解PQ攻毒后A549细胞生存率,其作用机制和稳定发生溶酶体膜或者上调自噬反应有关。     

槲皮素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究

目的:观察槲皮素对卵巢癌细胞株生长的影响,为寻找新的卵巢癌细胞的治疗药物提供实验依据.方法:运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比卵巢癌细胞株SKOV3在加入不同浓度槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.结果:加入不同浓度的槲皮素后,卵巢癌细胞株SKOV3在形态学和细胞活性方面均发生改变,表现为细胞坏死、细胞生长抑制率增加,且作用浓度为50μmol/L的最为显著.结论:实验证明槲皮素有抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用,具有时间依赖性,其最佳作用浓度为50μmol/L.     

紫草素诱导甲状腺髓样癌TT细胞自噬的实验研究

目的探讨紫草素能否诱导甲状腺髓样癌细胞发生自噬。方法采用透射电镜观察不同浓度紫草素对甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬的形态。利用Western-blot分析紫草素作用甲状腺髓样癌TT细胞后自噬标志物Beclin-l和LC3蛋白的表达,利用荧光显微镜观察自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的点状聚集情况。结果不同浓度紫草素作用24~72h对TT细胞均有自噬现象发生。2μg/m L、4μg/m L紫草素处理组作用24h后透射电镜观察TT细胞自噬的形态,发现TT细胞出现典型的自噬囊泡：双层膜包绕的圆形或椭圆形结构。紫草素处理自噬相关基因Beclin-l的表达明显低于空白对照组,参与自噬降解的p62表达水平下降,其下降水平与剂量呈相关性,自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显提高。将TT细胞转染GFP-LC3质粒24h后,用紫草素处理24h,于荧光显微镜下观察,处理组与空白对照组相比,胞浆上出现大量的LC3-Ⅱ点状聚集。结论紫草素能诱导甲状腺髓样癌TT细胞发生自噬,透射电镜下可见自噬体,荧光显微镜下可观察到自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ。紫草素诱导TT细胞自噬,可能与降低自噬抑制基因Beclinl表达水平相关。     

灯盏花素对肝癌细胞 HepG2 和结肠癌细胞 Caco2 的体外抗肿瘤活性筛选

观察灯盏花素对人肝癌细胞（HepG2）和人结肠癌细胞（Caco2）的体外增殖抑制影响。方法以不同浓度的灯盏花素分别处理 HepG2 和 Caco2 细胞 24、48和 72 h 后采用 MTT 法检测灯盏花素对 2 种细胞活力的影响,以半数抑制浓度（IC50）及治疗指数（TI）作为评价其抗肿瘤活性及安全性指标。结果 灯盏花素对 HepG2 表现高浓度抑制作用,浓度为 20 000μmol/L 时,对 HepG2 细胞 24、48和 72 h 的抑制率分别为37%、63%和 69%;对 Caco2 细胞呈浓度依赖性,浓度为 5 000μmol/L时,对 Caco2 细胞 24、48和 72 h 的抑制率分别为72%、95%和 92%。灯盏花素对 HepG2 24h的 IC50 值为 24320.5μmol/L;48h的 IC50 值为 30 667.7μmol/L;72 h 的 IC50 值为 15 586.1μmol/L。对 Caco2 细胞 24 h 的 IC50 值为 11 417.0μmol/L;48 h 的 IC50 值为832.2μmol/L;72 h 的 IC50 值为 1 369.2μmol/L。结论 灯盏花素对 HepG2 和 Caco2 细胞均有不同程度的抑制作用,对 Caco2 的抑制效果更明显。     

体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。     

木犀草素对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭迁移的影响及其机制

目的探讨木犀草素(luteolin,LUT)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭迁移的影响及其可能的机制。方法采用不同浓度的木犀草素(0、20、40μmol/L)与人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞共同培养,实验分为三组:空白对照组(加入等量的二甲基亚砜DMSO)、LUT 20μmol/L、LUT 40μmol/L。MTT法检测细胞的生存率,Transwell小室实验检测细胞侵袭、迁移能力,利用Western blotting和qRT-PCR分别检测细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、基质金属蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)的蛋白和MMP2、MMP9 mRNA表达的变化水平。结果与空白对照组相比,不同浓度的木犀草素对TPC-1细胞的增殖活性具有明显的抑制作用(均P 0. 05); LUT浓度为20μmol/L、40μmol/L组均明显抑制了TPC-1细胞的侵袭、迁移能力(均P 0. 05);与空白对照组相比,LUT作用于甲状腺乳头状癌细胞TPC-1后,p-AKT、MMP2、MMP9蛋白和mRNA的表达水平明显降低(均P 0. 05)。结论木犀草素可能通过PI3K/AKT这一信号通路抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞侵袭迁移能力,从而在甲状腺乳头状癌治疗及预后中发挥着重要的作用。     

积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖及自噬水平的影响

目的:观察积雪草酸对结肠癌HCT116细胞增殖和自噬水平的影响。方法:用10、30、60、90μmol/L的积雪草酸作用于结肠癌HCT116细胞24、48 h,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率;用MDC自噬特异性荧光染料观察自噬囊泡的形成情况;蛋白质印迹法检测30、60、90μmol/L的积雪草酸作用12 h和90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h的细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、p62、p-m TOR、p-4EBP1的表达。结果:积雪草酸90μmol/L对结肠癌HCT116细胞有明显抑制作用;30、60、90μmol/L积雪草酸均可以诱导结肠癌细胞发生自噬,90μmol/L积雪草酸作用4、8、12 h,自噬蛋白LC3-Ⅱ生成明显增加;90μmol/L积雪草酸与氯喹5μmol/L共同作用于癌细胞12 h,能促进自噬潮的产生;积雪草酸可抑制p-m TOR、p-4EBP1的表达。结论:积雪草酸能明显抑制结肠癌HCT116细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性地抑制m TOR-4EBP1通路来诱导自噬潮的产生。     

蝙蝠葛苏林碱调控Akt/mTOR信号通路对胶质瘤细胞增殖及自噬的影响

目的 探讨蝙蝠葛苏林碱（DAS）对胶质瘤U251和U87细胞生长与增殖的影响及其分子机制。方法用2.5、5.0和10.0μmol/L DAS(DAS组)、10.0μmol/L替莫唑胺（TMZ组）和空白对照（对照组）处理U251和U87细胞。采用CCK-8法检测DAS对细胞活力的影响,细胞集落形成和Edu实验检测DAS对细胞增殖的影响,流式细胞术检测DAS对细胞凋亡的影响,透射电镜观察自噬小体的形成,Western blotting检测DAS对胶质瘤细胞凋亡、自噬和Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果 CCK-8结果显示,与对照组比较,不同浓度DAS组胶质瘤细胞活力逐渐降低（P <0.05）,DAS组细胞活力低于TMZ组（P <0.05）。胶质瘤U251和U87细胞IC50分别为5.11μmol/L和6.35μmol/L。Edu和克隆结果显示,DAS能抑制胶质瘤细胞增殖,且随着药物浓度升高细胞增殖逐渐减少（P <0.05）。流式细胞术结果显示,DAS能诱导胶质瘤细胞凋亡,且随着药物浓度升高细胞凋亡增加（P <0.05）。DAS能增加胶质瘤细胞Bax、L...