Bax参与KATP通道对神经元损伤的保护作用

目的 探讨ATP敏感性钾通道(KATP)介导对缺氧海马神经元损伤保护作用的分子机制.方法 原代培养7d后,对神经元进行缺氧(5% CO2和95% N2),同时分别给予神经元KATP通道的阻断剂甲糖宁(100 μmol/L)KATP通道的激动剂二氮嗪(100 μmol/L),MTT法检测细胞活性,RT-PCR检测Bax的mRNA表达水平.结果 单纯缺氧组,缺氧 二氮嗪组和缺氧 甲糖宁组的细胞存活率分别是(75.7±2.8)%(萨7)、(55.7 2.5)%(n=6)和(81.1±2.4)%(n=6),各加药组与单纯缺氧组比较有显著性差异(P＜0.01).缺氧 二氮嗪组中Bax的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比明显下降(n=5)(P＜0.01),在缺氧 甲糖宁组中Bax的mRNA表达水平相对于单纯缺氧组高表达(n=5)(P＜0.05);而在常氧时各用药组中细胞存活率以及Bax的mRNA表达水平与对照组相比都均无显著性差异.结论 Bax参与KATP通道对神经元损伤的保护作用.     

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的 观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制.方法 以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320 μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h.MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达.结果 神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低.醋酸铜低浓度诱导组(0～80 μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P＜0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01).醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显.结论 Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用.神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关.     

布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞的作用及其机制

目的 探讨布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton,s tyrosine kinase,BTK)抑制剂依鲁替尼(ibrutinib)和AVL-292单药及联合蛋白酶体抑制剂硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞系H929和RPMI8226的作用及其机制.方法 用不同浓度的依鲁替尼、AVL-292单药以及联合硼替佐米处理H929、RPMI8226细胞.采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测药物处理前后细胞内BTK信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平.结果 依鲁替尼和AVL-292均可抑制H929、RPMI8226细胞增殖,其抑制作用呈浓度依赖性,依鲁替尼对H929、RPMI8226细胞48 h的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC50)分别为(10.41±3.29) μmol/L和(51.65±13.58) μmol/L,AVL-292对H929、RPMI8226细胞48 h的IC50分别为(7.77±2.99) μmol/L和(6.44±1.06) μmol/L.不同浓度的依鲁替尼(5、10 μmol/L)和AVL-292(5、10 μmol/L)分别与不同浓度的硼替佐米(5、10、20、50 nmol/L)联合应用对H929、RPMI8226细胞增殖的抑制率均高于相应浓度单药组(P＜0.05,P＜0.01),不同组合的协同系数R均＞1.0.10 μmol/L依鲁替尼、10 μmol/L AVL-292和20 nmol/L硼替佐米单独作用48 h后,H929细胞的凋亡率分别为(15.12±1.59)％、(18.23±6.38)％和(10.71±1.62)％,均高于对照组[(6.46±1.18)％;P＜0.05,P＜0.01];RPMI8226细胞的凋亡率分别为(9.29±1.44)％、(15.01±4.99)％和(7.58±1.13)％,10 μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292单药组与对照组[(5.54±1.61)％]比较差异均有统计学意义(P＜0.05);10μmol/L依鲁替尼和10 μmol/L AVL-292分别与20 nmol/L硼替佐米联合后,H929细胞凋亡率分别为(40.31±3.94)％和(51.55±6.39)％,RPMI8226细胞凋亡率分别为(31.86±1.93)％和(43.23±4.03)％,均高于相应单药组(P＜0.01).10 μmol/L依鲁替尼单药和10 μmol/L AVL-292单药作用24 h后,H929细胞内BTK、NF-κB p65、Akt和ERK的磷酸化水平及Bcl-XL蛋白表达水平均较对照组降低(P＜0.05),cleaved caspase-3表达水平均较对照组升高(P＜0.01);两药分别联合20 nmol/L硼替佐米后,对上述蛋白的调节作用均较相应单药组增强(P＜0.05,P＜0.01).结论 BTK抑制剂依鲁替尼和AVL-292对多发性骨髓瘤细胞系H929、RPMI8226有增殖抑制和凋亡诱导作用,并与蛋白酶体抑制剂硼替佐米有协同作用,其机制可能与抑制细胞内BTK活性及下游NF-κB、Akt、ERK信号通路活性,下调抗凋亡蛋白Bcl-xL表达、激活caspase-3依赖的凋亡途径有关.     

PDH调控的糖代谢途径对缺氧后复氧的大鼠肥大心肌细胞凋亡的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶(pyruvate dehydrogenase, PDH)介导糖代谢途径对缺血再灌注肥大心肌细胞凋亡的影响.方法应用血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, Ang Ⅱ) 去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大,采用[3H]-Leu掺入法和测定细胞表面积来鉴定心肌细胞肥大;通过体外培养心肌细胞的缺氧复氧模拟缺血再灌注模型;分别以二氯乙酸(dichloroacetate, DCA)和抗阿霉素A(Antimycin A)干预并采用同位素液闪记数法测定PDH活性;流式细胞术测定细胞caspase-3表达; TUNEL检测细凋亡率.结果①AngⅡ 0.1 μmol/L NE 1 μmol/L使心肌细胞体积增大49.73%,[3H]-Leu掺入量增加115.17%, P<0.05.② DCA和Antimycin A分别增强和抑制PDH活性,呈量效关系,而无明显时间依赖性.③ DCA各组100 μmol/L,1 000 μmol/L,10 000 μmol/L均能抑制caspase-3表达和降低细胞凋亡率,出现量效反应和时间依赖性.④ Antimycin A各组0.1 μmol/L,1 μmol/L,10 μmol/L均增强caspase-3表达和增加凋亡率,也出现量效反应和时间依赖性.结论 caspase-3表达和细胞凋亡率与PDH活性呈反向变化,PDH介导的糖代谢途径参与了缺氧后复氧的肥大心肌细胞的凋亡过程.     

丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究

目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺 6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.     

丁苯酞拮抗Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡的保护机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡线粒体的保护作用及其机制.方法 用0.1、1、10 μmol/L NBP预处理4h,Aβ1-42 10 μmoVL作用24h后,用MTT比色法检测细胞存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光法染色观察细胞形态、计算凋亡细胞比率,Western blot定量检测Bcl-2、Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、Cytc等线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平.结果 Aβ1-42作用24h后细胞存活率显著下降,神经元凋亡率显著增加,MDA含量和LDH活性明显增高,SOD活性下降,Bax、Capsase-3、Cleaved easpase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).NBP预处理可以使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,MDA含量和LDH活性下降、SOD活性增高(P＜0.05),NBP预处理可以拮抗Aβ1-42引起的Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).结论 NBP可以减少Aβ1-42引起氧化损伤,通过线粒体凋亡途径抑制神经元凋亡.     

硫化氢对尼古丁诱导的人支气管上皮细胞内质网应激及细胞凋亡的影响

目的 探讨硫化氢对尼古丁诱导的人支气管上皮细胞内质网应激及细胞凋亡的影响.方法 应用尼古丁诱导人支气管上皮细胞16HBE细胞来模拟香烟烟雾引起的细胞凋亡模型.浓度梯度分组为对照组与5、10、20、40、80 μmol/L尼古丁组,均处理72 h;时间梯度分组为对照组与尼古丁24、48、72 h组,除对照组以外尼古丁浓度均为40 μmol/L.应用Western印迹法检测尼古丁不同浓度和不同作用时间对16HBE细胞凋亡指标CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达的影响.为观察硫化氢对尼古丁诱导的内质网应激相关凋亡的作用,16HBE细胞分为对照组、40 μmol/L尼古丁组、100 μmol/L硫氢化钠+40 μmol/L尼古丁组、200 μmol/L硫氢化钠+40 μmol/L尼古丁组、400 μmol/L硫氢化钠+40 μmol/L尼古丁组、10 mmol/L牛磺酸+40 μmol/L尼古丁组,硫氢化钠或牛磺酸均需预孵育30 min后加入尼古丁处理72 h.应用Western印迹法检测16HBE细胞中内质网应激指标GRP78以及内质网应激相关凋亡指标剪切型兔抗半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12和CHOP蛋白表达情况,应用Hoechst 33258染色观察和分析16HBE细胞核凋亡形态学改变,计算细胞的凋亡指数.结果 尼古丁可浓度依赖性和时间依赖性地上调16HBE细胞CHOP的表达,40 μmol/L尼古丁组的CHOP与GAPDH的平均吸光度值比值显著高于对照组(1.04±0.32比0.30±0.17,P＜0.05).200 μmol/L硫氢化钠+40μmol/L尼古丁组的GRP78与β-肌动蛋白平均吸光度值比值(0.59 ±0.19比1.00±0.08)、剪切型caspase-12与caspase-12前体平均吸光度比值[0.06(0.01,6.06)比20.30(12.79,23.78)]、CHOP与β-肌动蛋白平均吸光度比值(0.18±0.10比0.53±0.09)均显著低于40 μmol/L尼古丁组(均P＜0.05).200 μmol/L硫氢化钠+40 μmol/L尼古丁组的凋亡指数(3.04±1.83比16.60 ±3.32)与10 mmol/L牛磺酸+40 μmol/L尼古丁组的凋亡指数(4.08±2.04比16.60 ±3.32)均显著低于40 μmol/L尼古丁组(均P＜0.01).结论 硫化氢可显著抑制尼古丁引起的人支气管上皮细胞凋亡,其机制与硫化氢缓解内质网应激,尤其是下调支气管上皮细胞中内质网应激相关凋亡指标CHOP、剪切型caspase-12有关.     

Aβ1-42诱导下大鼠海马细胞胰岛素受体表达的变化

目的 检测大鼠海马细胞在Aβ1-42诱导下胰岛素受体表达水平的变化,从而在受体水平探讨中枢胰岛素信号紊乩及阿尔茨海默病发病的分子机制.方法 体外培养原代海马神经细胞,经不同浓度Aβ1-42处理,流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR和Western印迹法检测胰岛素受体的表达.结果 原代培养的细胞在第7天时发育成熟,鉴定为海马神经细胞;经Aβ1-42(0～150μmol/L)处理后,30 μmol/L以上处理组的早期凋亡率(32.4%,36.1%,51.0%,53.6%)较对照组(13.4%)呈浓度依赖型增高.PCR结果显示,30 μmol/L(2.56±0.19)和60 μmol/L(3.44±0.23)处理组的胰岛素受体水平较对照组(设为1)明显增高(P＜0.01),100 μmol/L组(0.74±0.15)则较对照组降低(P＜0.01).Western结果与PCR结果趋势相同,30和60 μmol/L处理组的蛋白水平为1.27±0.13,1.82±0.10(P＜0.01),100 μmol/L组为0.82±0.08(P＜0.05).结论 Aβ1-42诱导大鼠海马细胞胰岛素受体的表达发生改变,致使其出现功能缺陷,提示可能为中枢胰岛素抵抗的原因.     

PGE2对HuH7细胞Survivin表达影响的研究

目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7 Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性.方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Western blot检测Survivin蛋白表达.结果:5 μmol/L PGE2处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P＜0.01);5 μmol/L EP1、5μmol/L EP3、5 μmol/L EP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P＜0.01),76.68%(P＜0.01),70.01%(P＜0.01),而5 μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L EP1,10 μmol/L EP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P＜0.01),28.36%(P＜0.05),而10 μmol/L EP2受体抑制剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P＜0.01).结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关.     

抗氧化剂改善冻融人精子氧化应激性DNA损伤的研究

目的 探讨抗坏血酸盐、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)对冻融人精子氧化应激性DNA损伤的可能保护作用.方法 30份健康可生育男性精液分别添加改良人精子冷冻保护液,依所添加的抗氧化剂及终浓度分6组;检测各组冻融前后常规精子参数,精子核DNA完整性以及冻融后活性氧(ROS)水平.结果 (1)冻融后抗坏血酸盐300 μmol/L组与CAT 200 U、400 U组a+b级精子下降少于对照组(均P＜0.05),精子活率复苏率、ROS水平则分别高于和低于对照组(67%±14%、68%±14%、69%±15%vs 59%±10%,均P＜0.05;30±13、30±11、30±11 vs 37±17,均P＜0.05).(2)添加抗坏血酸盐300 μmol/L组,CAT 200 U、400 U组的彗星细胞尾部DNA百分比及Olive尾矩与冷冻前相比,差异无统计学意义(P＞0.05);但分别低于对照组(41%±4%、40%±7%、40%±6%vs 46%±6%,均P＜0.01;7.7±1.2、7.5±1.6、7.8±1.9 vs 10.1±3.1,均P＜0.01).其余试验组上述指标则明显高于冷冻前(均P＜0.01),而与对照组差异无统计学意义(P＞0.05).(3)冻融后各实验组a+b级精子与ROS水平有负相关性(P＜0.05或P＜0.01).除抗坏血酸盐600 μmol/L组外,其余试验组尾部DNA%、Olive尾矩则分别与其对应组ROS有显著正相关性(P＜0.05、P＜0.01).结论 在精液冷冻保护剂中添加一定浓度的抗坏血酸盐、CAT可减少冷冻产生的过量ROS,进而减轻后者对精子核DNA的氧化应激性损伤,从而提高冻融人精子质量.     

吡格列酮下调DC-SIGN蛋白表达抑制树突状细胞黏附和迁移

目的 探讨吡格列酮(Pio)调节树突状细胞(DC)黏附和迁移功能的可能机制.方法 体外培养人外周血单核细胞来源的DC和人脐静脉内皮细胞,使用不同浓度的Pio及加过氧化物酶体增殖物活化受体-γ拮抗剂(GW9662)干预DC 24 h,Western印迹和免疫荧光试验检测Pio对表达DC特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)的影响,细胞黏附试验检测Pio对DC黏附功能的作用,细胞迁移试验检测Pio对DC迁移功能的作用.结果 (1)Pio呈浓度依赖性下调DC-SIGN蛋白的表达,在Pio 1.0 μmol/L时DC-SIGN蛋白表达量明显减少(0.96 ±0.09,对照1.25±0.23,均P＜0.05),Pio 10 μmol/L时减少更明显(0.80 ±0.08,均P＜0.01),GW9662干预组(1.10±0.12,均P＜0.01)蛋白表达量增加;(2)在Pio 1.0 μmol/L时DC黏附和迁移降低(10.8%±2.0%和24.6%±0.5%,均P＜0.05),Pio 10 μmol/L时降低更明显(7.6%±1.5%和23.4%±3.0%,均P＜0.01),GW9662干预组DC黏附和迁移增加(12.1%±1.9%和26.8%±0.8%),经抗DC-SIGN抗体作用后DC黏附和迁移较对照降低(5.7%±0.9%和23.2%±2.9%,均P＜0.01).结论 Pio能通过激活过氧化物酶体增殖物活化受体-γ,下调DC-SIGN蛋白表达,从而抑制DC的黏附和迁移功能.     

替拉扎明联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂对人卵巢癌细胞的抑制作用

目的研究替拉扎明（TPZ）联合磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂（LY294002）对人卵巢癌细胞株的体外抑制作用。方法乏氧及空气条件下,TPZ单用及联合LY294002在不同药物浓度下分别作用于人卵巢癌细胞株H08910PM和OVCAR-3,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法评价其抑癌效果。结果在乏氧及空气条件下单独使用TPZ对H08910PM的IC50分别为40．6μmol／L和53．0μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为65．9μmol／L和97．4μmol／L;乏氧及空气条件下TPZ联用LY294002,对H08910PM的IC50分别为22．7μmol／L和31．5μmol／L,对OVCAR-3的IC50分别为49.1μmol／L和51．0μmol／L。结论TPZ对人卵巢癌细胞株有抑制作用,抑癌效果在乏氧条件下高于空气条件（P〈0．01）;LY294002对TPZ有协同作用,与TPZ单独用药相比,二者联用显著降低了TPZ对癌细胞的IC50（P〈0．01）。     

高糖通过PI3K-Akt信号途径抑制内皮细胞迁移和增殖及血管发生改变

目的观察高糖对内皮细胞迁移、增殖和血管发生改变及PI3K-Akt信号途径的影响。方法不同浓度(5、15、30mmol/L)D-葡萄糖处理后,用体外“伤口愈合”实验、细胞增殖试剂盒和缺乏生长因子的Matrigel胶观察内皮细胞迁移、增殖和血管发生情况,并用免疫沉淀和Western印迹检测p85/PI3K、磷酸化PI3K、Akt、磷酸化Akt(苏氨酸308)和磷酸化GSK3β的表达变化。观察加入PI3K抑制剂——LY294002后,内皮细胞的迁移、增殖和血管发生的变化。结果与5mmol/LD-葡萄糖组(细胞迁移数为100个/μm2±23个/μm2,增殖细胞数为59128个/孔±7415个/孔)相比,15mmol/L和30mmol/LD-葡萄糖组内皮细胞迁移明显降低(77个/μm2±18个/μm2和46个/μm2±18个/μm2,均P<0·01)、细胞增殖(33144个/孔±9082个/孔和11625个/孔±4196个/孔,均P<0·01)和血管发生改变(包括血管床面积、平均血管长度、毛细血管数和血管分支点数)及磷酸化PI3K、磷酸化Akt(苏氨酸308)和磷酸化GSK3β的表达(均P<0·05或P<0·01),且随葡萄糖浓度增高抑制作用增强(均P<0·05或P<0·01)。0·1、1和10μmol/L的LY294002抑制内皮细胞迁移(细胞迁移率分别为68μm2±16μm2、36μm2±12μm2和13μm2±3μm2,均P<0·01)、增殖(增殖细胞数分别为42560个/孔±4213个/孔、17688个/孔±7198个/孔和5704个/孔±558个/孔,均P<0·01)和血管发生水平(均P<0·05或P<0·01),且随LY294002浓度增高抑制作用增强(均P<0·05)。结论高糖可能通过PI3K-Akt信号途径抑制内皮细胞的迁移、增殖和血管发生变化。     

EFFECTS OF GLIBENCLAMIDE, GLIMEPIRIDE, AND GLICLAZIDE ON ISCHEMIC PRECONDITIONING IN RAT HEART

Objective To compare the influence of different sulfonylureas on the myocardial protection effect of ischemic preconditioning (IPC) in isolated rat hearts, and ATP-sensitive potassium channel current (IKATP) of rat ventricular myocytes. Methods Isolated Langendorff perfused rat hearts were randomly assigned to five groups: (1) control group, (2) IPC group, (3) IPC glibenclamide (GLB, 10 μmol/L) group, (4) IPC glimepiride (GLM, 10 μmol/L) group, (5) IPC gliclazide (GLC, 50 μmol/L) group. IPC was defined as 3 cycles of 5-minute zero-flow global ischemia followed by 5-minute reperfusion. The haemodynamic parameters and the infarct size of each isolated heart were recorded. And the sarcolemmal IKATP of dissociated ventricular myocytes reperfused with 10 μmol/L GLB, 1 μmol/L GLM, and 1 μmol/L GLC was recorded with single-pipette whole-cell voltage clamp under simulated ischemic condition. Results The infarct sizes of rat hearts in IPC (23.7%±1.3%), IPC GLM (24.6%±1.0%), and IPC GLC (33.1%±1.3%) groups were all significantly smaller than that in control group (43.3%±1.8%; P<0.01, n=6). The infarct size of rat hearts in IPC GLB group (40.4%±1.4%) was significantly larger than that in IPC group (P<0.01, n=6). Under simulated ischemic condition, GLB (10 μmol/L) decreased IKATP from 20.65±7.80 to 9.09±0.10 pA/pF (P<0.01, n=6), GLM (1 μmol/L) did not significantly inhibit IKATP (n=6), and GLC (1 μmol/L) decreased IKATP from 16.73±0.97 to 11.18±3.56 pA/pF(P<0.05, n=6). Conclusions GLM has less effect on myocardial protection of IPC than GLB and GLC. Blockage of sarcolemmal ATP-sensitive potassium channels in myocardium might play an important role in diminishing IPC-induced protection of GLM, GLB, and GLC.     

急性低压低氧对大鼠胃排空和小肠推进运动的影响

目的观察低压低氧对胃排空和小肠运动的作用,为阐明飞行因素对胃肠动力的影响提供理论依据。方法应用同位素~(99)Tc~m-SC 测定胃排空,炭末法测定小肠推进率。8组大鼠(每组10只)分别在低压舱海平面、模拟升至3000 m 和5000 m 高空停留30 min,测定大鼠胃排空率和小肠推进运动,并给予促动力药物莫沙比利观察对高空状态胃肠动力的影响。各组分别抽取动脉血测定血浆胃动素和一氧化氮的浓度。结果在模拟5000 m 高度状态,大鼠胃排空率和小肠推进率分别为41％±10％和37％±8％,明显低于地面组(分别为62％±12％和6l％±13％,均 P<0.01);模拟3000 m 高度对大鼠胃排空和小肠推进率无明显影响;口服莫沙比利组在5000 m 高度的胃排空率明显高于5000 m 对照组(55％±12％ vs 40％±10％,P<0.05),而对小肠推进率无明显影响;模拟5000 m 高度时大鼠血浆胃动素浓度明显低于地面组(88 pg/ml±19 pg/ml vs 123 pg/ml±28 pg/ml,P<0.01),而血浆一氧化氮浓度则明显高于地面组(106 μmol/L±24 μmol/L vs 80 μmol/L±18 μmol/L,P<0.01)。结论急性低压低氧抑制了胃排空和小肠推进运动,促动力药物莫沙比利可以减轻低压低氧抑制胃排空的作用。血浆胃动素浓度降低而一氧化氮浓度升高可能是低压低氧条件下胃肠动力减弱的主要机制。     

肢体与心肌缺血后处理对兔急性心肌缺血再灌注损伤的对比研究

目的探讨在体状态下,肢体缺血后处理是否具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用,并探讨其机制。方法在新西兰大白兔心肌缺血再灌注模型,给予冠状动脉左前降支(LAD)30 m in缺血,180 m in再灌注。所有动物随机分为4组(每组10只):(1)对照组;(2)心肌缺血预处理组;(3)心肌缺血后处理组;(4)肢体缺血后处理组;在缺血前、后及再灌注结束后分别测定血浆磷酸肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)活性;实验结束后,测定心肌梗死面积并检测心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果心肌缺血预处理组、心肌缺血后处理组和肢体缺血后处理组心肌梗死面积分别为15.5%±1.7%、16.2%±2.0%、17.1%±1.7%,均明显低于对照组(31.5%±1.3%,P<0.01);再灌注3h末血浆CK活性,肢体缺血后处理组与对照组分别为18.0 IU/g±1.6 IU/g与45.6 IU/g±5.5IU/g(P<0.01);缺血预处理组、缺血后处理组和肢体缺血后处理组在再灌注3h末MDA活性分别为2.12μmol/m l±0.30μmol/m l、2.17μmol/m l±0.24μmol/m l和2.16μmol/m l±0.33μmol/m l,均明显低于对照组(3.49μmol/m l±0.32μmol/m l(P<0.01);心肌缺血预处理组、心肌缺血后处理组和肢体缺血后处理组中性粒细胞在缺血心肌的聚集程度,即组织MPO活性分别为1.43 U/100 g±0.32U/100 g、2.26 U/100 g±0.28 U/100 g和2.45 U/100 g±0.28 U/100 g,均较对照组(5.44 U/100 g±0.46 U/100 g)明显降低(P<0.01)。结论对于已经缺血的心肌,在再灌注前给予肢体短暂缺血再灌注处理具有与心肌缺血预处理相似的心肌保护作用。这种远隔器官缺血后处理心肌保护作用可能与减轻活性氧的损伤及抗氧化作用加强有关。     

氯胺酮对致敏原诱导哮喘模型大鼠的肺保护

目的观察氯胺酮对哮喘模型大鼠气道高反应性及炎症的影响。方法56只Brown Norway大鼠随机分成阴性对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和不同浓度氯胺酮雾化吸入预处理组（C组、D组和E组）及不同剂量氯胺酮腹腔用药预处理组（F和G组）。采用卵蛋白（OVA）辅以百日咳杆菌菌苗和氢氧化铝为佐剂注射致敏大鼠。雾化吸入10mg／ml OVA激发。氯胺酮预处理组大鼠在激发前分别给予12．5mg／ml、25mg／ml或50mg／ml浓度的氯胺酮雾化吸入或50μg/kg,100μg／kg剂量的氯胺酮腹腔注射。A组采用磷酸盐缓冲液替代OVA进行雾化吸入。最后1次激发后24h,测定气道反应性。并取肺组织作诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的基因和蛋白表达,一氧化氮（NO）生成量及病理组织学检测。结果（1）B组的呼气阻力（Re）增长百分率的剂量反应曲线向左上移位,而且PC100（Re增长达100％幅度时所需乙酰胆碱的激发剂量）,PC200及PC400值显著低于A组（分别为14．65±1．19vs32．28±1．43,15．17±1．19vs38．91±1．39及16．28±1．18vs56．53±1．38）差异有统计学意义（P〈0．01）。氯胺酮预处理组的Re剂量反应曲线向右下移位,而PC100,PC200及PC400值均明显高于B组（P〈0．05）。（2）B组可见明显的气道炎症性病理改变。氯胺酮治疗组炎症细胞浸润及上皮细胞损伤程度明显减轻,肺间质水肿改善。（3）B组iNOS基因表达与A组相比明显增强（1．00±0．07vs0．48±0．07,P〈0．01）。与B组相比,iNOS基因的表达在C组（0．65±0．07）,D组（0．58±0．09）,E组（0．56±1．00）及F组（0．66±0．06）均减低,差异有统计学意义（P〈0．05）。（4）与A组相比,B组iNOS蛋白表达（0．54±0．08）明显增强（P〈0．05）,而与B组相比,iNOS蛋白表达量在C组（0．20±0．03）,D组（0．18±0．03）及F组（0．21±0．04）均减低,差异有统计学意义（P〈0．05）。（5）B组肺组织NO产量[（0．39±0．04）μmol／g蛋白]显著高于A组（P〈0．01）。肺组织NO产量在C组[（0．19±0．03）μmol／g蛋白],D组[（0．17±0．03）μmol／g蛋白]及F组[0．16±0．04）μmol／g蛋白]明显低于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论氯胺酮明显抑制致敏原诱发的肺iNOS的高表达,降低NO的过度产生,从而减轻炎性损伤,抑制气道高反应性,对哮喘模型大鼠具有肺保护作用。     

网膜素-1对结肠癌干细胞增殖凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨网膜素-1(Omentin-l)对结肠癌干细胞增殖、凋亡的影响及其可能机制.方法 采用间接免疫磁珠法分选结肠癌干细胞,分别采用克隆球形成实验、分化实验和流式细胞术鉴定结肠癌干细胞.以结肠癌干细胞为研究对象,设立对照组、Omentin 1 组(1 μg/ml Omentin-1)、Omentin 2 组(2 μg/ml Omentin-1)、Omentin LY 组(1 μg/ml Omentin-1+ 50 μmol/L LY294002) 、 LY 组(50 μmol/L LY294002), CCK-8方法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时分别检测Omentin-1干预细胞0、1、6、24、48 h后细胞增殖变化.Western blot法检测对照组、Omentin 1组、 Omentin 2组丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)、磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)蛋白表达.结果 成功分选培养结肠癌干细胞,CD133 +结肠癌干细胞含量达80.3％ ;与对照组相比,其余4组吸光度(OD)值均下降,细胞凋亡率均上升(P<0. 05);与Omentin 1组相比,Omentin 2组OD值更低,细胞凋亡率高(P<0. 05);分别与Omentin 1组和LY组相比, Omentin LY 组 OD 值低,凋亡率高(P<0. 05) ; Omentin-1 对结肠癌干细胞的作用随时间延长,OD值呈逐渐下降趋势(P<0.05);与对照组相比,Omentin 1 组和 Omentin 2 组 pAkt/ Akt蛋白表达量均下降,其中Omentin 2组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论Omentin-1可抑制结肠癌干细胞增殖,促进其凋亡,与LY294002具有协同作用,其作用机制可能与抑制Akt通路有关.     

醛固酮对系膜细胞合成纤溶酶原激活剂抑制物-1的影响

目的 探讨醛固酮及阻断其受体后对系膜细胞生成纤溶酶原激活剂抑制物1（PAI-1）的影响。方法 醛固酮单独刺激大鼠系膜细胞24h以及采用螺内酯阻断后,用RT-PCR观察系膜细胞PA1-1mRNA的变化;用Western印迹方法检测细胞上清液中的PA1-1;采用ELISA方法测定细胞上清液中转化生长因子p1（TGF-β1）的含量;采用激光共聚焦检测系膜细胞内的活性氧（ROS）水平。观察不同浓度及不同作用时间的醛固酮刺激系膜细胞对PA1-1mRNA的影响。结果 醛固酮使系膜细胞PA1-1mRNA及蛋白表达明显升高,同时升高了TGF-β1的表达和细胞内的ROS水平。醛固酮使PA1-1mRNA表达呈剂量依赖性增加。100nmol／L醛固酮刺激系膜细胞4h后PA1-1mRNA表达才明显增加。加用螺内酯后使升高的PA1-1、TGF-β1表达以及细胞内ROS恢复到正常水平。结论醛固酮能独立促进大鼠系膜细胞分泌PA1-1的增加,同时醛固酮使TGF-β1表达以及细胞内ROS水平升高,而这些都是通过盐皮质激素受体介导的。