BinaxNOW 疟原虫检测试剂卡临床应用效果观察

目的评价美国Inverness medical professional diagnostics公司生产的疟原虫检测试剂卡的临床应用效果。方法以镜检方法作为金标准比较BinaxNOW疟原虫检测试剂卡临床应用效果。结果 400份样本用镜检方法和BinaxNOW疟原虫检测试剂卡诊断,镜检法检出阳性138份,其中恶性疟77份、间日疟61份;疟原虫检测试剂卡检出阳性139例,其中恶性疟71份,间日疟68份。试剂卡检测疟疾的敏感度为98.55%,特异度为98.85%,检测恶性疟的灵敏度为87.01%、特异度为98.76%,检测间日疟的敏感度为93.44%、特异度为96.76%。存在交叉反应。结论BinaxNOW疟原虫检测试剂卡诊断疟疾敏感性与特异性高,操作简单,结果显示直观、快速,适合边远疟区无镜检能力的个体、乡村医生开展疟疾筛查。     

BinaxNOW(R)疟原虫检测试剂卡临床应用效果观察

目的 评价美国Inverness medical professional diagnostics公司生产的疟原虫检测试剂卡的临床应用效果.方法 以镜检方法作为金标准比较BinaxNOV 疟原虫检测试剂卡临床应用效果.结果 400份样本用镜检方法和BinaxNOW 疟原虫检测试剂卡诊断,镜检法检出阳性138份.其中恶性疟77份、间日疟61份;疟原虫检测试剂卡捡出阳性139例,其中恶性疟71份,间日疟68份.试剂卡检测疟疾的敏感度为98.55%,特异度为98.85%,检测恶性疟的灵敏度为87.01%、特异度为98.76%,检测间日疟的敏感度为93.44%、特异度为96.76%.存在交叉反应.结论 BinaxNOW 疟原虫检测试剂卡诊断疟疾敏感性与特异性高,操作简单,结果显示直观、快速,适合边远疟区无镜检能力的个体、乡村医生开展疟疾筛查.     

两种试剂盒快速检测疟原虫的比较

目的寻找更适合基层和贫困疟区的敏感、特异、快速、廉价的检测疟原虫的方法，比较两种恶性疟金标免疫层析试剂盒的敏感性和特异性。方法采用ACON试剂盒和Paracheck试剂盒对镜检确认的134例疟疾病人血样进行平行检验。结果ACON试剂盒和Paracheck试剂盒分别检测恶性疟84例，阳性均为84例，符合率均为100％；检测间日疟30例，均为阴性，特异性均为100％；检测恶性疟和间日疟混合感染20例，阳性分别为19例，18例，敏感性分别为95％和90％。结论ACON试剂盒胶体金法具有与Paracheck试剂盒ICT法相同的敏感性和特异性，具有操作快速、简便、直观的特点，并且价格便宜，更适合在基层和疟疾贫困地区推广应用。     

OptiMAL疟疾快速诊断试纸条的现场应用评价

目的 评价检测疟原虫乳酸脱氢酶快速诊断试纸条产品OptiMAL现场应用效果。方法 以疟原虫镜栓诊断为标准，用OptiMAL试纸条检测疟区门诊发热病人中的疟疾病人。结果 检测间日疟的敏感度为59％（95％CI：0．4754—0．6983），特异度为95％（95％CI：0．9268～0．97）；检测恶性疟的敏感度为60％（95％CI：0．2307～0．8824），特异度为99％（95％CI：0．9803—0．9985）。出现1例间日疟交叉反应。结论 快速诊断试纸条能够在基层简易、快捷的用来诊断间日疟和恶性疟。     

艾康恶性疟/间日疟免疫层析检测试剂盒效果评价

目的 评价艾康恶性疟／间日疟（P．f／P．v）胶体金免疫层析检测试剂盒诊断疟疾效果。方法 以镜检法为金标准。采用盲法实验室测试疟痰阳性和阴性血样。结果 共测试331例血样，其中疟痰血样121倒。对疟疾的灵敏性和特异性分别为92．56％和98．57％，与镜检符合率为96．38％；其中恶性疟的灵敏性和特异性分别为1130．00％和98．57％，重复性为100．00％；对间日疟的灵敏性和特异性分别为86．96％和100．00％，恶性疟和间日疟之间无交叉反应。结论 艾康P．f．／P．v肢体金免疫层析检测试剂盒诊断疟痰具有快速、简便、准确、直观以及不需要特殊仪器优点，能同时诊断单纯恶性疟和单纯间日疟，但不能鉴别诊断混合感染。     

艾康疟原虫检测试剂盒现场应用效果观察

目的评价国产艾康疟原虫(pf/pv)检测试剂盒现场应用效果。方法以镜检方法作为金标准比较艾康疟原虫检测试剂盒现场应用效果。结果336例样本均用镜检方法和艾康疟原虫试剂盒诊断,镜检阳性155例,阴性181例;试剂盒诊断阳性156例,阴性180例,试剂盒诊断疟疾的灵敏度为99.4%,特异度为98.9%。试剂盒诊断间日疟的灵敏度为98.8%、特异度为100.0%;试剂盒诊断恶性疟的灵敏度为100.0%、特异性为99.3%。未发现交叉反应。结论艾康试剂盒诊断疟原虫敏感性与特异性均高,且一次能测出单纯恶性疟或单纯间日疟的感染,操作简单,结果显示直观、快速,在常温下保存稳定,适合疟疾流行区的基层单位使用。     

快速胶体金免疫层析法在疟原虫感染诊断中的应用

目的探讨快速胶体金免疫层析法(GICA)在疟原虫感染诊断中的应用价值。方法以传统的血涂片法为金标准,以抗疟药治疗有效性作为回顾性诊断依据,分析GICA在疟原虫感染诊断中的特异性、敏感性。结果检测发热病人334例,其中间日疟特异性达94.16%,敏感性达75%;恶性疟特异性98%,敏感性81%。结论GICA敏感性、特异性较高,具有较高的可靠性,且方便快捷适于现场应用。     

疟疾快速诊断试剂盒的研制及应用

目的：建立一种快速、敏感、简便的疟疾诊断方法。方法：应用快速电泳法和快速薄层色谱法检测疟原虫乳酸脱氢酶（LDH－P）诊断疟疾，并将两检测系统制成试剂盒。检测体外培养的恶性疟原虫不同分离株和疟疾病人全血中的LDH－P，为临床安全用药提供依据。结果：应用快速电泳法和快速薄层色谱法检测体外培养的恶性疟原虫感染红细胞的敏感度分别为10－100个原虫／μl血和25－150个原虫／μl血；检测病人血样的阳性率分别为90．00％和80．00％，检测30份间日疟病人血样的阳性率分别为83．33％和76．67％；检测40份疟区非疟疾血样、非疟区40份健康人及30份其他寄生虫病人血样，仅快速电泳法检测出1份疟区非疟疾血样为阳性。结论：应用快速电泳法试剂盒和快速薄层色谱法试剂盒诊断疟疾，敏感、特异、简便快速，在临床及现场具有很好的应用前景。     

疟原虫胶体碳试纸条的研制

目的建立一种简单、灵敏的疟疾诊断方法,并能对疟原虫感染进行定量分析。方法运用双抗体夹心免疫层析法,胶体碳标记间日疟原虫乳酸脱氢酶(Pv-LDH)和恶性疟原虫富组氨酸蛋白Ⅱ(Pf-HRP2)特异抗体,与疟原虫相应抗原结合,胶体碳抗原抗体复合物被NC膜上包被的疟原虫特异性抗体捕获并显色。曲线拟合疟原虫抗原浓度与对应的检测带灰度值,选取相关系数最高的拟合方程式。检测不同贮存条件的试纸条灵敏度稳定性,确定最佳保存条件。检测疟疾病人及健康人全血,判断试纸条与镜检法相比较的特异性、敏感性、符合率。结果成功制作了间日疟原虫和恶性疟原虫胶体碳标记特异抗体试纸条,灵敏度分别为5、2.5 ng/ml;检测线性范围分别为5~500 ng/ml、2.5~500 ng/ml。检测带灰度值与疟原虫抗原浓度呈正相关,可对疟原虫感染定量分析。4℃保存6个月后,灵敏度基本不变。与镜检法比较,试纸条的敏感性、特异性、符合率在95%以上。结论疟原虫胶体碳试条操作简便、快速,敏感性和特异性高,适合疟疾的快速定量诊断。     

应用套式PCR技术检测我国西南部分疟区疟原虫的感染状况

目的 建立鉴别人体四种疟原虫的套式PCR技术，检测我国西南部分疟区疟原虫的感染情况。方法 选用两组疟原虫引物，扩增SSUrDNA特定片段，经琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色，紫外检测凝胶分析仪观察并摄像。结果 采用上述方法扩增出间日疟、恶性疟和三日疟分别为104bp、102bp和115bp特异片段。所检测的138份疟疾患者血样中，四川名山县95份均为间日疟单纯感染，筠连县37份中10份为与间日疟和/或恶性疟呈混合感染的三日疟，云南金平县的6份均为合并恶性疟的两种或两种以上疟原虫混合感染。结论 所建立的套式PCR检测系统具有敏感性高、特异性好和稳定可靠等优点，在疟疾诊断、虫种鉴别、混合感染的判定、大规模流行病学研究和疫情监控预测等方面具有实际应用价值。     

Evaluation of a rapid whole blood immunochromatographic assay for the diagnosis of Plasmodium falciparum and Plasmodium vivax malaria

OBJECTIVE: Microscopic examination of blood smears is the 'gold standard' for malaria diagnosis, but is labour intensive and requires skilled operators. Plasmodium vivax malaria accounts for up to 70% of infections in Sri Lanka. The objective of this study was to determine the effectiveness of an immunochromatographic test which can detect both the species of Plasmodium, P. vivax and P. falciparum, present in Sri Lanka. DESIGN: Prospective study from May 2001 to March 2002. SETTING AND METHODS: All persons above 5 years of age who presented to the Malaria Research Station, Kataragama or the Anti-malaria Clinic, Kurunegala, with a history of fever were recruited to the study. Thick and thin blood smears were examined for malarial parasites. The rapid diagnostic test (RDT), ICT Malaria P.f/P.v (AMRAD ICT, Australia) was performed simultaneously by an independent investigator. The severity of clinical disease of all patients was evaluated. RESULTS: The study sample comprised 328 individuals of whom 126 (38%) were infected, 102 with P. vivax (31.1%) and 24 with P. falciparum (7.3%). The RDT was found to be highly sensitive (100%) and specific (100%) for the diagnosis of P. falciparum when compared with field microscopy. The sensitivity for the diagnosis of P. vivax malaria was only 70%. When P. vivax parasitaemia was greater than 5000 parasites/microL the RDT was 96.2% sensitive. A significant association was noted between the band intensity on the dipstick and both peripheral blood parasitaemia (p < 0.001) and clinical severity of disease with P. vivax (p = 0.011). CONCLUSIONS: The ICT Malaria P.f/P.v test can be used in Sri Lanka in the absence of microscopists.     

Saving Private Ryan: The Indian Scenario (Rapid Diagnosis of Malaria at Regimental Aid Post)

Immunochromatography test (ICT) (Paracheck Pf) for diagnosis of Plasmodium falciparum (Pf) infection was compared with the conventional smear examination method. A total of 350 specimens of blood from cases of fever were investigated (falciparum malaria 220, vivax malaria 100, controls 30). Paracheck Pf ICT was found to have enormous advantages over smear examination due to its high degree of sensitivity, specificity, speed and ease of performance. Paracheck Pf ICT test kits are stable at room temperature. Regimental medical officers (RMOs) and nursing assistants with minimal training can safely practise Paracheck Pf ICT method. Introduction of this test method in the Armed Forces can facilitate early diagnosis and specific treatment of falciparum malaria even at far flung places. This will have enormous beneficial effect in reducing morbidity due to malaria and saving precious lives. In short as well as long term, it is a viable cost effective option.Key Words: Falciparum malaria, Pf HRP-2 antigen, Paracheck Pf ICT method, Rapid diagnosis of malaria     

抗恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的研制与胶体金免疫层析方法的建立

OBJECTIVE: To prepare a monoclonal antibodies (mAbs) against glutamate dehydrogenase (GDH) of Plasmodium falciparum (FCC1/HN strain) and establish colloidal gold-immunochromatographic assay (GICA) for diagnosis of Plasmodium falciparum malaria. METHODS: Recombinant GDH was used to immunize Balb/C mice and the mAbs against GDH were prepared using hybridoma technique followed by identification of IgG isotype and its affinity. Protein-G affinity chromatography was employed to purify the antibodies, which were labeled with colloidal gold for establishment of GICA for Plasmodium falciparum detection. RESULTS: Six mAbs were obtained and identified as IgG1(kappa) of IgG isotypes with affinity constants (Kaff) ranging from 1 x 10(-8) to 2.8 x 10(-10). GICA had a sensitivity of 86.66%; and specificity of 96.43%; for Plasmodium falciparum detection compared with routine microscopic examination. CONCLUSION: The established GICA is rapid and accurate for Plasmodium falciparum detection with such potential utility as for instant diagnosis of Plasmodium falciparum malaria.     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的 建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果 筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗，利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条，以镜检和PCR法为对照，用GICA条检测门诊“四热”病人血样，评价其敏感性和特异性，并对其稳定性进行了初步研究。结果筛选出4株抗LDHpf单抗．间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应，而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western—blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准，CICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37％和86．67％．DICA与镜检法的符合率均为91．55％。结论GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高，无需特殊仪器设备，有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

广西三江侗族自治县2000～2007年疟疾监测分析

目的调查分析三江县疟疾年发病率控制在1/万以后,近8年疟疾病例的来源、疟原虫种类等流行病学监测效果。方法收集2000～2007年全县疟疾血检阳性病人资料统计分析。结果三江县8年来检出疟疾病人共111例,其中流动人口疟疾病人占89．2％,以间日疟病人为主,兼有恶性疟和混合感染的病人。当地感染病人仅占10．8％,均为间日疟。流动人口疟疾病人69．70％是在东南亚国家感染后输入本地。结论目前三江县疟区的性质发生了极明显的改变,疟疾病例以本地居民到外省特别是到东南亚国家感染疟疾输入到当地的为主。是今后疟疾监测的重点。     

抗恶性疟McAb的筛选与恶性疟免疫诊断研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA)对11株抗恶性疟McAbs和4株抗食蟹猴疟原虫McAbs进行了筛选,其中McAbs11G5、13A2、13A1可包被到硝酸纤维素膜(NcF)上作为捕获抗体,McAb14D9可用于胶体金探针的标记。此外,为增加胶体金的标记效果和胶体金标记McAb14D9探针的敏感性,还对McAb14D9的等电点(pI)进行了测定,其pI为6.35。同时用筛选出的最佳McAbs对10份恶性疟病人感染血和10份健康人血样品进行了检测,并对这几株McAbs的交叉反应性进行了测定,结果表明McAbs11G5、13A1与14D9夹心时,对云南株和安微株恶性疟原虫红内期抗原呈现交叉反应,而且McAb13A1与14D9夹心时还可以用于检测间日疟抗原。     

动物疟原虫与人疟原虫的交叉反应抗原

目的分析5种疟原虫（间日疟原虫、恶性疟原虫,食蟹猴疟原虫、伯氏症原虫,约氏疟原虫）中,可被间日疟、恶性疟病人血清识别的交及反应抗原。方法用50％、60％Percoll不连续梯度分离疟原虫感染红细胞,20mmolPBS被红细胞后,收集红内期原虫,以1％NP—40提取可溶性抗原。各种抗原经SDS—PAGE电泳后,转移至硝酸纤维膜上,分别用间日疟、恶性疾病人血清进行免疫识别。结果3神动物疟原虫红内期抗原中有多条蛋白区带可被间日疟或恶性疟病人血清识别。其中合蟹报疟原虫有14条蛋白带被间日疟病人血清识别,伯氏疟原虫有16条蛋白区带被恶性疟病人血清识别,分别多于其它疟原虫。间日疟病人血清可识别5种疟原虫共有的72kD蛋白,而恶性疟病人血清不识别该蛋白。结论人疟原虫和动物疟原虫之间有一系列支又反应抗原。会压滤疟原虫与间日疟原虫,伯氏疟原虫与恶性疟原虫之间抗原相似程度高于其它疟原虫。72kD．蛋白在间日疟无疾学诊断方面可能有实用价值。