Wistar鼠单侧隐睾模型复制方法探讨

选择Ｗｉｓｔａｒ雄性幼鼠,采用４种手术方法复制单侧隐睾模型。现将实验结果报告如下,并对复制隐睾模型的有关问题进行讨论。１材料和方法Ｗｉｓｔａｒ鼠种由南京医科大学动物中心提供。雌鼠２０只,雄鼠５只;日龄９０ｄ时交配、繁殖。在３个月期间繁殖５０胎,其中２...     

睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞凋亡与eNOS表达的影响

目的 探讨睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞发育与凋亡的影响.方法 22日龄 SD 雄性大鼠复制左侧隐睾模型.实验随机分为假手术组、隐睾组和隐睾固定术组,每组10 只.建立左侧隐睾模型,隐睾固定术组于建立左侧隐睾模型后14 d行隐睾下降固定术.以生物素-dUTP/ 酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡数目,用免疫组化SABC法检测eNOS 基因表达.结果 与假手术组相比,隐睾组和隐睾固定术组隐睾侧睾丸发生生精细胞凋亡的数目显著增加(P＜0.01).与隐睾组相比,睾丸固定术后生殖细胞凋亡明显减少(P＜0.01).隐睾组睾丸退化的生精细胞胞浆中eNOS 基因表达明显增强.结论 隐睾大鼠生殖细胞凋亡增多,睾丸固定术可降低生精细胞的凋亡水平.eNOS表达与生精细胞凋亡有密切关系.     

大鼠隐睾固定后生殖细胞发育凋亡与iNOS基因表达

目的 :研究大鼠隐睾固定后生殖细胞的发育和凋亡 ;探讨诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)基因表达与生殖细胞发育和凋亡的关系。方法 :SD雄性大鼠 ,日龄 2 2d时复制双侧隐睾模型 ,术后 14d复制隐睾固定模型。用生物素 dUTP 酶标亲和素测定法检测生殖细胞凋亡 ;用免疫组化SP法检测iNOS基因表达。结果 :与对照组相比 ,隐睾组发生凋亡的生殖细胞数显著增加 (P <0 .0 1) ,隐睾固定组发生凋亡的生殖细胞数无显著变化 (P >0 .0 5 )。发生凋亡的生殖细胞胞浆中iNOS基因表达明显增强。结论 :手术建立的隐睾生殖细胞凋亡增加。隐睾固定后生殖细胞凋亡减少。iNOS基因表达与生殖细胞发育和凋亡关系密切     

Wistar鼠单侧隐睾对侧已降睾丸细胞DNA分析

选择Ｗｉｓｔａｒ雄性幼鼠２６只，日龄１４天时复制单侧隐睾模型。于日龄２８、５０和１００天时杀死，取两侧睾丸。取日龄配对的对照组和模拟组比较。应用流式细胞分析仪测定睾丸细胞ＤＮＡ及倍体细胞群。结果单侧隐睾各日龄组对侧已降睾丸细胞ＤＮＡ含量有显著异常并随日龄增长而加重，提示生殖细胞发育受阻。     

大鼠陷睾生殖细胞凋亡与总抗氧化能力,bcl—2蛋白表达的关系

目的 探讨总抗氧化能力和ｂｃｌ－２蛋白表达对大鼠隐睾生殖细胞发育、凋亡的影响。方法 ＳＤ雄性大鼠，日龄２２天时复制单侧隐睾模型，用生物素ｄＵＴＰ／酶标亲和 测定法检测睾丸生殖细胞凋亡；用化学比色法测定总抗氧化能力；用免疫组织化学ＳＰ法检测ｂｃｌ－２蛋白要术后第７天，与对侧正常睾丸相比，隐睾侧睾丸的重量显著减轻，其发生凋亡的生殖细胞显著加，总抗氧化能力降低，ｂｃｌ－２蛋白表达降低。结论 手术诱导的隐     

热休克蛋白70-2基因在大鼠隐睾中的表达及意义

目的 :探讨Hsp70 2基因表达在大鼠隐睾生精细胞中的作用。方法 :采用 2 2日龄Sprague Dawley雄性大鼠复制单侧隐睾模型 ,运用免疫组织化学SP法检测Hsp70 2和cdc2 基因在大鼠隐睾侧和对侧睾丸组织中的表达 ;运用生物素 dUTP 酶标亲和素测定法检测睾丸生精细胞凋亡。结果 :术后第 7d ,与对侧睾丸相比 ,隐睾侧Hsp70 2表达下降显著 (P <0 .0 1) ,cdc2 表达无显著性变化 (P >0 .0 5 ) ,生精细胞凋亡显著性增加 (P <0 .0 1)。术后第 14d ,隐睾侧生精细胞少见 ,Hsp70 2和cdc2 表达呈阴性。结论 :隐睾可以引起生精细胞发育停止和凋亡增加 ,这可能与Hsp70 2表达下降或不表达有关     

大鼠隐睾生殖细胞凋亡与总抗氧化能力、bcl-2蛋白表达的关系

目的探讨总抗氧化能力和bcl-2蛋白表达对大鼠隐睾生殖细胞发育、凋亡的影响。方法SD雄性大鼠,日龄22天时复制单侧隐睾模型。用生物素-dUTP／酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡;用化学比色法测定总抗氧化能力;用免疫组织化学SP法检测bcl-2蛋白表达。结果术后第7天,与对侧正常睾丸相比,隐睾侧睾丸的重量显著减轻(P<0．01),其发生凋亡的生殖细胞显著增加(P<0．01),总抗氧化能力降低(P<0．01),bcl-2蛋白表达降低(P<0．01)。结论手术诱导的隐睾生殖细胞凋亡增加,且与睾丸组织中总抗氧化能力和bcl-2蛋白表达降低有关。     

隐睾动物模型的建立及LHRH对其睾丸组织结构和超微结构的影响

为了评价促黄体生成素释放激素对隐睾睾丸的组织学影响，用新生家犬制成隐睾动物模型，结果表明：隐睾模型的睾丸组织结构和超微结构与自然隐睾犬睾丸的变化一致。     

隐睾动物模型的建立及LHRH对其睾丸组织结构和超微结构的影响

为了评价促黄体生成素释放激素（ＬＨＲＨ）对隐睾睾丸的组织学影响，用新生家犬制成隐睾动物模型，结果表明：隐睾模型的睾丸组织结构和超微结构与自然隐睾犬睾丸的变化一致，并与人类隐睾的变化相似，单侧隐睾对侧睾丸未发生交感性改变，低剂量的ＬＨＲＨ可使隐睾睾丸生精细胞数量增加从而提高其生育力，而对正常睾丸无有害影响。     

视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的 作用及其机制研究

目的 探讨视黄酸对隐睾生精细胞增殖分化及减数分裂的作用及其机制。方法 将30 只SD 孕 鼠随机分为3 组,每组10 只,取子代雄鼠进行研究。对照组常规饲养不给任何药物或试剂;模型组采用雄激 素拮抗剂氟他胺（Flu）复制隐睾大鼠模型;干预组在模型组基础上,在子代雄鼠生精细胞发育时期予以视黄 酸干预。采用TUNEL 法检测生精细胞的凋亡,免疫组织化学法观察睾丸组织中c-Kit、Stra8、Scp3 蛋白的 表达,qRT-PCR 检测睾丸组织中Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 的表达,Western blotting 检测睾丸组织中Stra8、 Scp3、c-Kit 和PLZF 蛋白的表达。结果 免疫组织化学结果显示,对照组和干预组中可见大量精子细胞排列 整齐;而模型组睾丸各级生精细胞数目减少、排列紊乱,且曲细精管管腔缩窄。TUNEL 检测结果显示,与对 照组和干预组比较,模型组可见大量生精细胞凋亡。对照组和干预组凋亡指数低于模型组（P <0.05）。对照 组和干预组Stra8、c-Kit、Scp3 mRNA 和蛋白相对表达量高于模型组（P <0.05）。对照组和干预组PLZF 蛋 白相对表达量高于模型组（P <0.05）。结论 视黄酸促进生精细胞发育的作用机制可能与调控隐睾生精细胞 增殖分化及减数分裂有关,可一定程度上恢复隐睾大鼠的生殖功能。     

隐睾的手术治疗浅析（附60例报告）

自1988年10月至1996年8月，我院共收治隐睾患60例，均采用手术治疗。本组病例除2例恶变，5例明显萎缩或发育不良及5例青春期后已生育行隐睾切除，以及1例睾丸缺如外，余均行隐睾固定术。本对其中47例(60例次)行隐睾固定术的术后情况进行了比较。     

氨基胍对隐睾所致生精细胞凋亡中p53表达的影响

目的:通过研究氨基胍对隐睾生精细胞中p53表达的影响,探讨生精细胞凋亡的分子机制。方法:雄性SD大鼠随机分为假手术组、隐睾组、隐睾+氨基胍(Aminoguanidine,AG,iNOS抑制剂)组、隐睾+生理盐水组。后三组建立单侧隐睾模型,后两组术后分别于腹腔内注射AG和生理盐水,每天一次,定时定量。7天后处死所有大鼠,取双侧睾丸称湿重。手术侧睾丸H.E染色观察常规组织学及免疫组化检测p53的表达。结果:隐睾+AG组睾丸生精上皮较隐睾组及隐睾+生理盐水组排列有序,细胞层数厚,该组中p53表达弱于隐睾组。结论:AG可降低隐睾中p53的表达,抑制隐睾生精细胞的凋亡,提示NO可能通过增强隐睾生精细胞中p53的表达而促进生精细胞凋亡。     

356例小儿隐睾临床诊治分析

我们对我院2002年9月至2009年9月诊治的356例隐睾患儿的临床资料进行回顾性分析,探讨小儿隐睾的治疗方法。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾Bcl-2表达的影响

①目的研究一氧化氮合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡过程中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）表达的影响。②方法 42天龄雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型,随机分为隐睾组、隐睾＋L-NAME组、隐睾＋生理盐水（溶媒）组、假手术组,每组12只大鼠,隐睾＋L-NAME组和隐睾＋生理盐水组大鼠术后分别腹腔内注射L-NAME或生理盐水,每天1次,定时定量（50mg/Kg）,术后第7天分别采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组隐睾Bcl-2mRNA和蛋白表达的变化。③结果与假手术组睾丸相比,隐睾组、隐睾＋生理盐水组睾丸生精上皮和睾丸间质细胞内Bcl-2mRNA和蛋白表达降低,差异有显著性（P〈0.05）;而隐睾＋L-NAME组Bcl-2 mRNA和蛋白与假手术组睾丸无明显差别。④结论 L-NAME可通过调节Bcl-2的表达抑制热应激导致的生精细胞凋亡。     

绒毛膜促性激素治疗小儿隐睾临床疗效分析

隐睾是常见的小儿先天性异常.据报道有3.4%～5.8%的足月男婴和9.2%～30%的早产男婴发生隐睾[1].由于隐睾影响生育和引起睾丸恶变,愈来愈受到人们的重视.自Shapiro于1930年首次使用绒毛膜促性激素(HCG)治疗隐睾,内分泌治疗小儿隐睾已成为一种有效的保守治疗的方法.近年来我们在门诊用HCG治疗小儿隐睾15例,有效率53.3%,报告如下.     

L-NAME对大鼠生精细胞p53表达的影响

目的探讨NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）对隐睾下降固定术后生精细胞p53表达的影响。方法将75只雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型。术后12d将隐睾组大鼠随机分为假手术组,隐睾固定组、隐睾固定＋生理盐水组、隐睾固定＋L-NAME组,建立隐睾下降固定模型。术后分别于腹腔内注射生理盐水或L-NAME。术后第12d于腹腔内给药后2h大鼠尾部采血,取血清测定NO含量及NOS活性。术后第24d脱颈椎处死大鼠,TUNEL原位末端标记法检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡;免疫组化检测p53的表达。结果隐睾固定＋L-NAME组血清中NO浓度、NOS活性以及生精细胞凋亡率及p53的表达低于隐睾固定组和隐睾固定＋生理盐水组P〈0.05,差异有统计学意义假手术组最低,低于其它各组（P〈0.05）,差异有统计学意义。结论 L-NAME降低隐睾下降固定后NO的产生,降低p53的表达,减少生精细胞凋亡,提示NOS抑制剂能促进隐睾下降固定术后的睾丸提高生精能力。     

实验性大鼠隐睾中eNOS的表达与生精细胞凋亡

①目的 研究内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)的表达与实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的关系.②方法 通过手术建立单侧大鼠隐睾模型,术后第7天采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法及RT-PCR检测隐睾及对侧睾丸eNOS基因表达的变化.③结果 术后第7天隐睾侧重量明显减轻,生精细胞凋亡指数较对侧睾丸明显增加;RT-PCR显示隐睾中eNOS mRNA的表达较对侧睾丸增强;免疫组化显示对侧睾丸生精上皮内未见eNOS表达,隐睾侧睾丸生精上皮中有eNOS表达.④结论 隐睾生精细胞凋亡明显增加,eNOS参与介导生精细胞凋亡.     

L-NAME对大鼠生精细胞p53表达的影响

目的 探讨NOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对隐睾下降固定术后生精细胞p53表达的影响.方法 将75只雄性SD大鼠建立单侧隐睾模型.术后12d将隐睾组大鼠随机分为假手术组,隐睾固定组、隐睾固定+生理盐水组、隐睾固定+L-NAME组,建立隐睾下降固定模型.术后分别于腹腔内注射生理盐水或L-NAME.术后第12d于腹腔内给药后2h大鼠尾部采血,取血清测定NO含量及NOS活性.术后第24d脱颈椎处死大鼠,TUNEI原位末端标记法检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡;免疫组化检测p53的表达.结果 隐睾固定+L-NAME组血清中NO浓度、NOS活性以及生精细胞凋亡率及p53的表达低于隐睾固定组和隐睾固定+生理盐水组P＜0.05,差异有统计学意义假手术组最低,低于其它各组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论 L-NAME降低隐睾下降固定后NO的产生,降低p53的表达,减少生精细胞凋亡,提示NOS抑制剂能促进隐睾下降固定术后的睾丸提高生精能力.     

两种睾丸固定的疗效比较

隐睾症是常见的睾丸位置的先天性异常,睾丸固定术是治疗隐睾症的一种常用方法.我院自2004～2011年收治隐睾症78例,96个隐睾.在睾丸固定术中采用睾丸牵引固定法39例、48个隐睾,采用阴囊肉膜外窝法固定睾丸38例、47个隐睾.将两种睾丸固定法进行比较,报道如下.     

一种新的大鼠隐睾模型的建立

目的 改善大鼠隐睾模型的制作方法,提高隐睾模型的质量,并对新模型的稳定性进行研究.方法 28只大鼠随机分为对照组(ctrl)和模型组(modl)采用模拟失重大鼠模型,对大鼠进行3周尾部悬吊进行造模,随后模型组大鼠解悬吊恢复8周观察该模型的稳定性.结果 经过3周的尾部悬吊,模型组所有大鼠睾丸均滑入腹腔,同时和对照组相比,睾丸和附睾的重量出现极显著的降低(P＜0.01).HE染色发现对照组大鼠睾丸的生精小管结构排列紊乱,精原细胞消失,附睾尾中成熟精子消失.经过8周的恢复,大鼠的睾丸及附睾仍未恢复到正常水平(P＜0.01),HE染色显示其生精小管结构和精原细胞数量并未出现明显的改善.结论 尾吊法所建立的大鼠隐睾模型效果稳定,可以有效模拟大鼠隐睾时的睾丸温度变化情况,同时对大鼠的伤害较小,操作比较简单.