激活素A在实验性肝纤维化中的表达

目的 研究激活素（activin,ACT)A在大鼠实验性肝纤维化中的表达,分析其在肝纤维化形成中的作用。方法 24只雄性SD大鼠随机分成模型组（n=12)和正常对照组（n=12),模型组皮下注射四氯化碳7周制备肝纤维化模型,分别采用免疫组化法和半定量RT－PCR检测正常及纤维化大鼠肝组织ACTA蛋白及mRNA的表达。结果 正常肝脏ACT轻度表达,分布在肝小叶中央静脉周围的肝细胞,肝纤维化时ACTA蛋4及mRNA转录明显增加（P＜0．01）,主要分布在纤维间隔、汇管区及中央静脉等纤维化区域周围的肝细胞。结论 ACT可能参与了肝纤维化的形成。     

肝纤维化大鼠Bcl-2、Bax的表达及活血渗湿方对其的作用

目的 :研究Bcl 2、Bax蛋白在CCL4诱导肝纤维化模型大鼠肝组织中的表达以及活血渗湿方对其的作用。方法 :用四氯化碳(CCl4)诱导形成大鼠肝纤维化模型 ,使用活血渗湿方(10g·kg-1d -1生药量灌胃)对该模型肝纤维化大鼠治疗12周 ,设正常对照组、模型对照组和复方鳖甲软肝片阳性对照组 ,用免疫组织化学法(Envition法)检测各组大鼠肝组织Bcl 2、Bax的表达情况。结果 :Bcl 2在正常对照组大鼠肝细胞浆和肝窦呈低水平表达 ,在模型对照组大鼠肝组织分布广泛 ,主要表达在汇管区、纤维间隔、肝窦和肝细胞膜 ,中央静脉和肝细胞浆也有一定表达 ,表达的量明显高于正常对照组(P<0 01)。Bax在正常对照组大鼠的中央静脉及其周围的肝窦呈低水平表达 ,在模型对照组大鼠肝组织主要表达在肝细胞浆 ,其还表达在肝窦、纤维间隔和肝细胞膜中 ,胆管上皮细胞偶见表达 ,表达的量也明显高于正常对照组(P<0 01)。活血渗湿方治疗组大鼠肝组织Bcl 2的表达明显低于模型对照组(P<0 01) ,活血渗湿方治疗组大鼠肝组织Bax的表达也明显低于模型对照组(P<0 05),Bax/Bcl 2无明显差异 ,活血渗湿方对纤维间隔Bax的表达无明显作用 ,能降低Bcl 2的表达 ,调高Bax/Bcl 2。结论 :肝纤维化时Bcl 2和Bax表达加强 ,活血渗湿方能够促进纤维间隔中肝细胞的凋     

Caspase12在ERS介导的肝细胞凋亡中的作用

目的：探讨Caspase12在肝纤维化内质网应激（ERS）介导的肝细胞凋亡中的作用.方法：雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照4周、8周组和肝纤维化模型4周、8周组,每组各10只.肝纤维化组按0.3ml/100g体重的剂量皮下注射40％ CCl4植物油溶液,每隔3天注射一次,造模时间分别为4周和8周;对照组大鼠皮下注射等量植物油溶液.采用TUNEL法检测肝组织中肝细胞凋亡情况;免疫组化检测肝组织中Caspase12蛋白的表达变化;Real-time PCR检测肝组织中Caspase12 mRNA的表达变化.结果：免疫组化及Real-time PCR检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中Caspase12蛋白及mRNA的表达与正常4周组比较无显著差异;随着肝纤维化程度的加重,肝纤维化8周时大鼠肝组织中Caspase12蛋白及mRNA的表达显著增加;同时TUNEL法检测发现肝纤维化大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组显著增加.结论：Caspase12可能参与了肝纤维化时ERS介导的肝细胞凋亡过程.     

内质网应激标志性蛋白Caspase-12在四氯化碳诱导大鼠肝纤维化逆转恢复模型中的作用研究

目的：探讨内质网应激( ERS)标志性蛋白天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶12( Caspase-12)在大鼠肝纤维化形成与逆转恢复病程中的作用。方法建立四氯化碳( CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型,苏木精-伊红染色和Masson胶原纤维染色观察肝脏病理组织学改变;免疫组化法检测肝组织肝纤维化标志性蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及钙激活蛋白酶( Calpain)的表达;Western blot检测不同时期肝脏组织中 Calpain、Cleaved-Caspase-12和 Cleaved-Caspase-3蛋白表达变化。结果肝脏病理组织学检测提示肝纤维化逆转恢复模型成功。免疫组化结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织中α-SMA和Calpain抗原阳性细胞明显增多、着色明显加深,且多分布在肝实质肝细胞区域。逆转恢复期,α-SMA抗原表达阳性细胞与模型组比较逐渐下降。Calpain抗原表达阳性细胞主要分布在肝脏的小叶中央静脉、汇管区、肝窦间隙等部位。 Western blot结果显示,模型组肝脏 Calpain、Cleaved-Caspase-12和 Cleaved-Caspase-3蛋白的表达与正常组相比显著升高。与模型组相比,逆转恢复2、4和8周组肝组织Calpain、Cleaved-Caspase-12和Cleaved-Caspase-3蛋白的表达降低,但仍高于正常组。结论 ERS标志性蛋白Caspase-12诱导的细胞凋亡存在于大鼠肝纤维化病程中,可能与肝纤维化的发生、发展和恢复逆转密切相关。     

大鼠肝纤维化组织中BMP-2的动态表达和意义

目的探讨大鼠肝纤维化组织中骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)的表达趋势及意义。方法用皮下注射四氯化碳构建大鼠肝纤维化模型,造模后4周、8周、12周分别检测血清层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)的变化,采用HE及Masson染色光学显微镜下观察肝组织损伤情况,采用Real-Time PCR、免疫组织化学和Western印迹检测各组大鼠肝组织中BMP-2的表达。采用单因素方差分析进行多组均数间的比较。结果肝纤维化模型组血清LN、HA明显升高。在对照组和肝纤维化模型组中BMP-2 mRNA均有表达。模型组4周时BMP-2 mRNA表达与对照组无显著差异(P0.05),模型组8周、12周较对照组显著下降(P均0.05)。与模型组4周相比,模型组BMP-2 mRNA的表达在8周、12周显著下降(P均0.05),12周达最低。免疫组织化学证实,BMP-2在肝纤维化模型组较对照组大鼠肝组织中表达减少。在对照组和肝纤维化模型组中BMP-2蛋白均有表达。模型组4周时BMP-2蛋白表达与对照组无显著差异(P0.05),模型组8周、12周较对照组显著下降(P均0.05)。与模型组4周相比,模型组BMP-2蛋白的表达在8周、12周显著下降(P均0.05),12周达最低。结论 BMP-2在正常SD大鼠肝脏有表达,随着肝纤维化进展,表达减少,提示BMP-2参与肝纤维化的发生、发展过程。     

丹参对大鼠肝组织Bcl-2表达的影响及意义

目的 探讨丹参对大鼠肝组织Bcl-2基因表达的影响和对肝纤维化的作用及其机制.方法 利用CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型.将30只SD大鼠按随机数字表法分成纤维化模型组(A组,n=15)和丹参干预组(B组,n=15).用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏Bcl-2的表达,常规HE和网状纤维染色检测肝组织标本.结果 大鼠肝纤维化模型成功建立.丹参干预组纤维化程度、肝细胞脂肪变性及肝组织炎症较纤维化模型组显著减轻.丹参干预组和纤维化模型组Bcl-2基因表达量分别为(0.84±0.02)%、(1.03±0.03)%.丹参干预组Bcl-2 基因的表达显著低于纤维化模型组(P＜0.01).结论 丹参能够阻断CCl4诱导的肝纤维化和减少肝脂肪变性.其机制不仅直接通过抗炎作用,也可能通过调节Bcl-2基因表达从而阻断肝纤维化.     

CCl_4肝纤维化大鼠功能性瘦素受体表达的动态变化

目的明确瘦素受体(OB-R)在正常和CCl4肝纤维化大鼠肝组织的表达,观察功能性瘦素受体(OB-Rb)表达在肝纤维化进程中的动态变化,以探讨瘦素在肝纤维化形成中的作用机制。方法建立大鼠CCl4肝纤维化模型,采用免疫组织化学方法观察瘦素受体在大鼠肝组织的表达及变化;采用RT-PCR方法观察大鼠肝组织OB-Rb mRNA表达的动态变化。结果正常肝组织可见OB-R在汇管区和血管周围间质细胞的胞质和胞膜有少量表达;OB-R在模型大鼠汇管区、小叶内窦周及纤维间隔的表达明显增加。正常肝组织表达OB-Rb mRNA,不同时间点其表达量差异无统计学意义;模型组造模4 d后,OB-Rb mRNA表达水平即开始增加,随着肝纤维化的形成,OB-Rb mRNA表达逐渐增强,其表达水平与肝纤维化分期呈正相关性(rs=0.804,P=0.000)。结论在大鼠CCl4肝纤维化形成过程中,功能性瘦素受体的表达在肝损伤早期即明显增加,并随纤维化程度加重而逐步升高,从而促进肝脏纤维化的发生。     

一贯煎对CCl4诱导肝纤维化大鼠肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:研究一贯煎对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝细胞凋亡及其调控基因表达的影响。方法:用50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)大鼠腹腔注射造模,每周2次,共9w。于造模3w和6w末,随机抽取正常及模型大鼠处死作动态观察。从第7w始模型大鼠随机分为模型对照组和药物干预组,药物干预组给予一贯煎灌胃,共计3w。9w末检测肝组织Fas、Bax、Bcl-xL、细胞色素(Cyt)C、Caspase-12、Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡情况。结果:①与正常组大鼠比较,3w、6w及9w时模型大鼠肝组织Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达逐渐升高(P<0.05,P<0.01)。与9w模型组比较,一贯煎组Fas、Bax和Caspase-12蛋白表达显著降低(P<0.01),而Cyt C和Bcl-xl蛋白表达在各组之间无显著差异(P>0.05)。②与正常组比较,造模3w时肝组织Caspase-3蛋白表达达到高峰(P<0.01),肝细胞凋亡数量亦达到高峰;6w、9w模型组大鼠Caspase-3蛋白表达和肝细胞凋亡较3w有降低的趋势。与9w模型组大鼠比较,一贯煎组大鼠Caspase-3蛋白表达显著降低,肝细胞凋亡显著减少。结论:一贯煎抑制CCl4诱导大鼠肝纤维化肝细胞凋亡的作用机制可能与干预Fas和内质网凋亡通路有关。     

护肝片对纤维化肝组织TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自模型复制之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921 mg/kg)或溶媒,每日1次,直至8,13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片.免疫组化S-P法检测大鼠肝组织TGF-β1蛋白的表达;原位杂交检测TGF-β1 mRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对TGF-β1蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组TGF-β1及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);且其蛋白和mRNA的表达相互间呈显著正相关(P<0.01).③护肝片显著抑制8,13周纤维化肝组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制TGF-β1的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

三甲益肝颗粒对肝纤维化大鼠Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达的抑制作用

目的研究三甲益肝颗粒(SJG)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化(HF)的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法健康SD大鼠50只分为3组:模型组(n=18)和SJG组(n=17)采用体积分数40%CCl4花生油溶液皮下注射,每周2次,诱导HF模型;同时,SJG组给予SJG灌胃,模型组给予蒸馏水灌胃,每天均1次;对照组(n=15)采用皮下注射生理盐水,每周2次,并给予蒸馏水灌胃,每天1次。分别于第6周末、第8周末取肝组织观察病理组织学变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原(Ⅰ-PC、Ⅲ-PC)mRNA的表达。结果与同期模型组相比,SJG组坏死、炎症反应及纤维化程度显著减轻(P<0.01);第6周末时胶原纤维集中在中央静脉和汇管区周围,少数汇管区纤维化扩大,形成细小、菲薄的纤维间隔,但小叶结构保留;第8周末时可见较宽的纤维间隔,但未形成假小叶。模型组Ⅰ-PC、Ⅲ-PC mRNA的表达较正常对照组显著增加(P<0.01),SJG组与模型组相比显著减少(P<0.01)。结论SJG能减轻中毒大鼠肝脏坏死及炎症,抑制Ⅰ-PC、Ⅲ-PC mRNA的表达,从而抑制HF。