二甲双胍通过抑制内质网应激诱导的细胞凋亡改善结肠炎黏膜上皮屏障损伤

目的：探讨二甲双胍对溃疡性结肠炎黏膜上皮屏障损伤的作用及具体机制。方法：用人结肠癌细胞系Caco-2与人单核细胞系THP-1构建结肠炎体外细胞共培养模型,用1?mmol/L二甲双胍作用24?h后,运用流式细胞术检测肠上皮细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白和内质网应激相关蛋白的表达水平。结果：与模型对照组比较,二甲双胍组细胞凋亡率从（14.22±2.34）%下降至（9.88±0.61）%（t=3.119,P<0.05）,紧密连接蛋白1和密封蛋白1相对表达量增加（t=5.172和3.546,均P<0.05）,内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白（GRP）78和内质网应激诱导的凋亡相关分子C/EBP同源蛋白（CHOP）、胱天蛋白酶（caspase）-12的蛋白表达水平下降（均P<0.05）,蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）和真核生物起始因子2α（eIF2α）的磷酸化水平下降（均P<0.05）。结论：二甲双胍可以通过减轻结肠炎肠上皮细胞的细胞凋亡和增加紧密连接蛋白的表达改善结肠炎肠黏膜上皮屏障损伤,其分子机制可能与抑制内质网应激诱导的细胞凋亡途径有关。     

人宫颈癌HeLa细胞氧化损伤中溶酶体与线粒体损伤的时间顺序及其意义

目的: 探讨溶酶体及线粒体死亡途径在氧化应激诱导HeLa细胞凋亡过程中的时间顺序及其意义,阐明溶酶体膜通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中的重要作用。方法：以对数生长期人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,利用维生素K3（VK3）复制氧化应激模型,实验分为对照组、VK3 1 h、VK3 3 h、VK3 6 h和VK3 12 h作用组。MTT 法检测各组细胞生存率;′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧（ROS）水平,吖啶橙（AO）染色观察溶酶体膜通透性,罗丹明123染色检测线粒体膜电势(ΔΨm),Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-3活化片段的表达。结果：与对照组比较,VK3 6和12 h组HeLa细胞生存率降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,VK3 6和12 h组HeLa细胞内caspase-3活化片段表达水平增加（P<0.05）。DCFH-DA染色,VK3作用1、3及6 h
,HeLa细胞内绿色荧光增强。AO染色,VK3 3　h 和6 h组可见HeLa细胞的溶酶体内红色颗粒状荧光减弱,细胞浆绿色荧光增强。罗丹明123染色,VK3 6 h组可见HeLa细胞浆内红色荧光强度明显降低(提示ΔΨm下降)。结论：氧化损伤能够诱导溶酶体及线粒体死亡途径,并且溶酶体的变化先于线粒体,提示溶酶体通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中具有重要作用。
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汉黄芩苷对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤及P38和ERK1/2表达的影响

目的 探讨汉黄芩苷（Wog）对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤及P38和ERK1/2表达的影响。方法 培养心肌细胞H9c2构建缺氧复氧模型（A/R）,给予Wog低、中、高剂量（12.5、25、50 μM）处理24h,采用CCK8检测48 h后细胞活力,Hochest染色检测细胞凋亡,ELISA检测细胞上清液中心肌损伤标记物［肌酸激酶（CK）,肌酸激酶同工酶（CK MB）、肌红蛋白（Mb）］和炎性细胞因子［白介素6（IL-6）、白介素1β（IL-1β）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）］的含量,生化试剂盒检测氧化应激指标［超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及乳酸脱氢酶（LDH）］的含量,Western blot检测相关蛋白［B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关x蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、Caspase-9］、丝裂原活化蛋白激酶P38及细胞外调节激酶（ERK1/2）的表达。 结果 低、中、高剂量Wog处理缺氧复氧模型细胞H9c2,细胞存活率、Bcl-2及SOD的表达显著升高,凋亡率、Bax、Caspase-3、Caspase-9、CK、CK-MB、Mb、IL-6、IL-1β、iNOS、MDA、LDH、P38及ERK1/2的表达显著降低（均P＜0.05）。 结论 汉黄芩苷可通过改善炎症反应和氧化应激损伤,减少心肌细胞的凋亡,对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤具有一定的保护作用,可能与下调P38、ERK1/2磷酸化有关。     

三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨PNS抗神经元缺氧,复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC）,采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型,采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化,采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达;PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达;PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性,有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax的表达,抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响*

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨PNS抗神经元缺氧,复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC）,采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型,采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化,采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达;PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达;PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性,有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax的表达,抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

miR-6216对缺氧/复氧H9C2心肌细胞损伤的影响

目的 探讨miR-6216对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌细胞损伤的影响。方法 体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9C2,构建H/R（2 h/4 h）模型。实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测miR 6216的表达水平;细胞计数试剂盒（CCK 8）检测细胞存活;平板形成实验检测细胞克隆形成能力;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印记（Western blot）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病 2（Bcl 2）、Bcl 2相关X蛋白（Bax）的表达水平。将miR 6216抑制物（anti miR 6216）、miR 6216模拟物（miR 6216 mimics）分别转染H9C2,将缺氧/复氧处理后,采用上述方法检测以上指标变化。结果 缺氧/复氧诱导后H9C2细胞miR 6216的表达水平显著升高,细胞存活率和克隆能力显著降低,MDA含量和LDH活性显著升高,Cyclin D1和Bcl 2的表达显著降低,P21和Bax的表达水平显著升高,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）。抑制miR 6216可显著提高H9C2细胞存活率和克隆形成能力,降低MDA含量和LDH活性,促进Cyclin D1和Bcl 2的表达,抑制P21和Bax的表达,抑制缺氧复氧诱导的细胞凋亡（P ＜0.05）。过表达miR 6216可显著抑制细胞存活和克隆形成能力,升高MDA含量和LDH活性,抑制Cyclin D1和Bcl 2的表达,促进P21和Bax的表达,加剧缺氧复氧诱导的细胞凋亡（P ＜0.05）。结论 miR-6216在缺氧/复氧诱导的心肌细胞中表达上调,抑制miR 6216表达可减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。     

EGCG对低氧诱导下胃癌SGC-7901细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对低氧培养下人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将人胃癌细胞株SGC7901进行传代培养,并采用氯化钴（CoCl2）建立低氧模型,实验设空白对照组（常氧组）、低氧对照组及低氧加不同浓度的EGCG组.分别采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting检测细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子-A（VEGF-A）的表达.结果 低氧条件下,低浓度EGCG短时间内（24 h）对SGC7901细胞生长无明显抑制作用（P〉0.05）;但随着浓度的升高和作用时间的延长,EGCG可抑制低氧SGC7901细胞的增殖（P〈0.01）,100 μg/mL EGCG作用72 h后,其抑制率可达（76.3±2.9）%.流式细胞仪检测显示,EGCG在低氧环境下可呈时间-剂量依赖性地诱导胃癌细胞凋亡（P〈0.05或P〈0.01）.EGCG可明显抑制低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,并下调VEGF-A mRNA表达（P〈0.05或P〈0.01）,但对HIF-1α mRNA的转录无明显影响（P〉0.05）.结论 低氧条件下,EGCG可抑制胃癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调低氧诱导的HIF-1α和VEGF-A的表达有关.     

维生素D受体对低氧下结肠细胞屏障蛋白的作用

目的 探究低氧环境对结肠细胞DLD-1屏障蛋白影响及补偿机制。方法 将DLD-1分别给予低氧(l% O₂)、维生素D(100 nmol/L)及低氧联合维生素D处理48 h。Western blot法检测各组细胞中紧密连接蛋白封闭小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白、Claudin-1和上皮细胞钙黏蛋白及维生素D受体(VDR)的表达情况。采用慢病毒包装的方法建立DLD-1的VDR稳转敲降细胞系及对照,给予低氧处理后,检测上述蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,DLD-1低氧处理48 h后紧密连接结构蛋白闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达均增加(P均<0.001),低氧+维生素D联合处理组较单独维生素D处理组除闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达增加外,ZO-1及上皮细胞钙黏蛋白表达也明显增加(P均<0.001)。VDR敲降细胞系低氧处理后,ZO-1(P<0.001)、闭锁蛋白(P<0.05)、Claudin-1(P<0.01)及上皮细胞钙黏蛋白(P<0.001)表达均显著降低。结论 VDR对于低氧状态下结肠细胞系DLD-1肠上皮屏障蛋白表达有调节作用,提示VDR通路可能为低氧环境下保护肠黏膜屏障的另一重要机制。     

α-细辛醚、β-细辛醚改善Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤及机制

目的：探究α-细辛醚、β-细辛醚对β淀粉样蛋白活性片段Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及相关作用机制。方法：采用Aβ_25-35诱导PC12细胞建立Aβ毒性损伤细胞模型。将PC12细胞分为空白对照组、模型对照组、α-细辛醚组（0.5、1.0、1.5?μg/mL）、β-细辛醚组（6.3、12.5、25.0?μg/mL）、血管活性肠肽（VIP）组,并设VIP拮抗剂对照。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素（IL）-1、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α,氧化因子诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）和凋亡因子caspase-3、p53水平;蛋白质印迹法检测细胞c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）蛋白表达。结果：与模型对照组比较,α-细辛醚组、β-细辛醚组和VIP组细胞存活率增加,细胞凋亡率下降,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平下降,IL-10水平升高,氧化因子iNOS和NO水平下降,c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38MAPK蛋白表达减少（均P<0.05）。VIP拮抗剂干预后,β-细辛醚组细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平升高,IL-10水平下降,氧化因子iNOS和NO水平升高,JNK、p38MAPK蛋白表达增加（均P<0.05）;α-细辛醚组无显著变化（均P>0.05）。结论：α-细辛醚、β-细辛醚对Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型具有保护作用,β-细辛醚可通过促进VIP的分泌,调控JNK/MAPK通路从而抑制炎症因子、氧化因子水平,改善PC12细胞凋亡;α-细辛醚作用机制与VIP分泌水平无明显联系。     

G蛋白偶联受体17在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用

目的: 探讨G蛋白偶联受体17（GPR17）在视网膜神经节细胞缺氧损伤中的作用。方法: 采用氯化钴（400 μmol/L）诱导RGC-5细胞化学缺氧损伤,观察GPR17的表达及GPR17配体的作用,并通过小干扰RNA（siRNA）降低GPR17的表达深入研究GPR17在细胞缺氧损伤中的作用。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测GPR17 mRNA相对表达量。结果: 氯化钴处理后,细胞中GPR17 mRNA相对表达量由0.26±0.08上调至0.36±0.05（P < 0.01）。与未经GPR17配体预处理的缺氧细胞比较,GPR17激动剂尿苷5'-二磷酸二钠盐、尿苷5'-二磷酸葡萄糖二钠盐、LTD4预处理细胞的存活率分别降低了29.6%、31.8%、33.9%（均P < 0.01）;而其拮抗剂坎格雷洛预处理细胞的存活率升高了33.2%（P < 0.01）。GPR17 siRNA处理可以抑制缺氧导致的GPR17 mRNA表达上调（P < 0.01）,减少缺氧导致的细胞凋亡[未加siRNA、NC siRNA和GPR17 siRNA组细胞的凋亡率分别为（39.73±2.06）%,（42.50±3.64）%和（24.98±2.16）%,P < 0.01]。结论: GPR17介导了RGC-5细胞的缺氧损伤,抑制GPR17表达可减轻缺氧损伤。     

红景天苷对急进高原大鼠肺组织的保护作用

目的：研究红景天苷对急进高原大鼠肺组织的保护作用及机制。 方法：Wistar雄性大鼠36只,随机分为空白对照组、模型对照组、红景天胶囊组以及红景天苷小 （14?mg/kg）、中 （28?mg/kg）、大 （56?mg/kg）剂量组,每组6只。除空白对照组外,其他各组预防性灌胃给药5?d后急进海拔 4010?m的高原实地建立低压性缺氧模型,检测大鼠血气指标,酶联免疫吸附试验测定血清炎症因子水平,试剂盒测定肺组织氧化应激指标,苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,蛋白质印迹法检测肺组织中闭合蛋白的表达量。 结果：与空白对照组比较,模型对照组动脉血氧饱和度（SaO ₂）、动脉血氧分压（PaO ₂）、血液酸碱度、标准碳酸氢盐（SBC）和实际碳酸氢盐水平显著下降,血红蛋白水平显著上升（均 P<0.05）;肥大细胞蛋白酶（MCP）1、白介素（IL）-6和IL-1β含量显著增加,γ干扰素含量显著减少（均P<0.01）;肺组织中谷胱甘肽和总超氧化物歧化酶含量显著下降,丙二醛含量显著增加（均P<0.01）。红景天胶囊和红景天苷各剂量组SaO₂、血液酸碱度、血红蛋白、SBC和实际碳酸氢盐较模型对照组均有一定改善;炎症因子和氧化应激指标较模型对照组均有不同程度改善,其中红景天苷组MCP-1、IL-6改善情况优于红景天胶囊组。红景天胶囊和红景天苷小、中、大剂量组肺组织缺氧损伤改善,细胞壁逐渐变薄,肺泡壁逐渐完整。模型对照组闭合蛋白含量较空白对照组减少（ P<0.05）,而红景天苷大剂量组闭合蛋白含量较模型对照组显著增加（P<0.01）。结论：红景天苷可改善大鼠由于缺氧所致的血气指标失调、缺氧症状和酸碱平衡紊乱、炎症因子失调,改善肺组织损伤、氧化应激损伤等,对急进高原大鼠肺组织损伤具有保护作用,且改善效果总体优于红景天胶囊。     

山茱萸果核提取物耐疲劳和耐缺氧作用研究

目的 观察山茱萸果核提取物对小鼠常温耐疲劳实验和常压耐缺氧实验的影响.方法 通过化学方法 对山茱萸果核的化学成分进行提取.动物随机分组,用山茱萸果核提取物进行小鼠常温抗疲劳实验和常压耐缺氧实验.结果 抗疲劳实验显示山茱萸果核水提物高剂量组与对照组相比可明显延长小鼠游泳时间(P＜0 05),与果肉组相比无统计学差异;耐缺...     

盐诱导激酶2对脑缺血再灌注大鼠脑组织能量代谢的影响

目的：探究盐诱导激酶2（SIK2）对脑缺血再灌注大鼠能量代谢相关物质表达的影响。方法：选用成年SD雄性大鼠（240~260?g）,参照改良Zea-Longa线栓法建立大鼠短暂性中动脉栓塞模型（MCAO）,在构建MCAO模型前8?d予以右侧脑室注射7?μL腺病毒使大鼠脑组织SIK2过表达,随后建立缺血2?h再灌注24?h模型。实验分为手术对照组、缺血对照组、缺血再灌注组、腺病毒空载组及SIK2过表达组。苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠神经细胞损伤的病理学改变;氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察大鼠脑组织梗死情况;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠脑组织中腺苷三磷酸（ATP）、腺苷二磷酸（ADP）的含量;荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测各组大鼠脑组织中SIK2及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达量。结果：与手术对照组比较,缺血对照组及缺血再灌注组SIK2表达减少,且缺血再灌注组较缺血对照组减少更明显（P<0.05）;与手术对照组和缺血对照组比较,缺血再灌注组病理损伤较重,梗死体积较大;与缺血再灌注组和腺病毒空载组比较,SIK2过表达组病理损伤较轻,梗死体积减少。与手术对照组比较,缺血对照组和缺血再灌注组HIF-1α表达均增加,其中缺血对照组增加更明显（均P<0.05）;SIK2过表达组HIF-1α表达比缺血再灌注组和腺病毒空载组均增多（均P<0.05）。与手术对照组比较,缺血对照组和缺血再灌注组ATP含量均减少,且缺血再灌注组较缺血对照组减少更为显著（P<0.05）;ADP含量在缺血对照组和缺血再灌注组均增多,且缺血再灌注组较缺血对照组明显增多（P<0.05）;与缺血再灌注组和腺病毒空载组比较,SIK2过表达组ATP含量增加（均P<0.05）,ADP含量减少（均P<0.05）。结论：SIK2可通过上调HIF-1α的表达,增加大鼠脑组织中ATP的含量,减少ADP含量,减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。     

红景天苷通过抑制凋亡相关蛋白的表达保护缺氧对培养神经干细胞的损伤

目的观察红景天苷对缺氧损伤成年大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）组织分离培养神经干细胞凋亡比例和Bax、Bcl-2、
caspase-3蛋白表达的影响。方法原代培养成年大鼠SVZ神经干细胞,不同浓度红景天苷预处理24 h 后,干细胞厌氧工作站缺
氧损伤48 h。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组细胞活力;显微镜下观察各组细胞形态;TUNEL染色和流式细胞仪检测细胞
凋亡情况;Western blot 检测细胞内Bax ,Bcl-2 和caspase-3蛋白的表达变化。结果红景天苷预处理可显著改善缺氧损伤后的
细胞生长状态和活力,降低缺氧引起的细胞凋亡率的升高（P<0.05）;拮抗缺氧损伤导致的细胞Bcl-2/Bax 蛋白比例的下降,降低
活化的caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。结论红景天苷通过抑制神经干细胞的凋亡,保护缺氧对神经干细胞的损伤,其机制可
能与调节凋亡相关基因Bax、Bcl-2和caspases-3的表达有关。
     

PC12细胞低压性缺氧损伤模型的建立

目的：构建PC12细胞低压性缺氧细胞模型。方法：将PC12细胞依据缺氧条件随机分为正常对照组、常压缺氧组、低压缺氧组;正常对照组以正常条件培养,常压缺氧组和低压缺氧组分别以常压缺氧和低压缺氧条件培养。通过考察氧气浓度、大气压力和低压缺氧时间,应用CCK-8法测定细胞活性,筛选低压缺氧的条件;显微镜下观察各组细胞形态、结构、数目,微板法检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量,流式细胞仪测定细胞凋亡比例和细胞周期。结果：在1%氧浓度和41?kPa低压缺氧环境下培养24h可建立低压性缺氧细胞模型。与正常对照组和常压缺氧组比较,低压缺氧组LDH活性及细胞MDA含量增加、SOD活性下降,细胞凋亡比例上升（均P<0.05）,细胞周期阻滞发生在G0/G1期。结论：建立了稳定可靠的低压性缺氧损伤PC12细胞模型,可用于高原低压性缺氧神经损伤的体外实验研究。     

槟榔提取物对口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变的发病机制。方法体外培养口腔黏膜下纤维性变患者和正常人口腔黏膜成纤维细胞,并用不同浓度的槟榔提取液进行干预,用MTT法检测FB的增殖状况。结果槟榔提取物在高于1×103ng/mL时对口腔黏膜FB的生长有抑制作用;体外培养的正常人FB与口腔黏膜下纤维性变患者FB的增殖能力没有显著差异。结论OSF的发病可能并非槟榔对FB的直接作用。     

microRNA-155在缺氧肺癌脑转移中的作用

  目的  明确缺氧与肺癌细胞释放microRNA-155的关系, 揭示肺癌脑转移的可能机制。  方法  建立人A549肺癌细胞缺氧模型，缺氧培养肺癌细胞0.5、2、4、8、12和24 h(并设同期常氧对照组)后，免疫荧光法和Western blot法测定肺癌细胞内热休克蛋白70 (hsp70)的表达水平；建立hsp70过表达的人肺癌细胞株A549/hsp70，实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定缺氧各时点A549细胞和A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量。构建体外血脑屏障模型，给予缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液后，辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)检测体外血脑屏障模型的通透性变化；自动细胞计数仪计数Transwell下室培养液中的A549肺癌细胞数。将缺氧不同时间点的A549肺癌细胞培养液经尾静脉注入Wistar大鼠体内，Western blot法测定紧密连接蛋白occludin在脑组织血脑屏障内皮细胞中的表达水平；伊文思兰检测动物血脑屏障通透性改变。  结果  肺癌细胞缺氧8 h时，肺癌细胞内hsp70和培养液内microRNA-155的表达均达最高水平(P < 0.05)。与A549细胞相比，缺氧2~24 h时，A549/hsp70细胞培养液内microRNA-155含量的增加更显著。缺氧8 h，血脑屏障通透性最大，透过血脑屏障模型的肺癌细胞数最多。在动物水平，给予缺氧8 h的肺癌细胞培养液后，动物脑组织血脑屏障内皮细胞的occludin表达最低，且此时实验动物的血脑屏障通透性亦最大。  结论  缺氧可引起肺癌细胞内hsp70生成增多，促进了microRNA-155的表达，进而导致血脑屏障occludin表达减少，血脑屏障通透性增大，最终引起肺癌细胞转移入脑。     

ALDH2通过线粒体融合与裂变减轻脂多糖诱导的脑微血管内皮细胞屏障的损伤

目的 观察乙醛脱氢酶2（ALDH2）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠脑微血管内皮细胞屏障的影响,并探讨线粒体融合与裂变在内皮屏障中的作用。方法 小鼠脑微血管内皮细胞分为3组：对照组：不给予任何处理;LPS损伤组（LPS）：1 μg/mL的LPS刺激24 h;LPS+ALDH2激动剂Alda-1组（LPS+Alda-1）：在LPS刺激前给予20 μmol/mL的Alda-1预处理1 h。CCK-8实验检测细胞活性;跨内皮细胞电阻和FITC-Dextran葡聚糖实验检测细胞通透性变化;试剂盒丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）测定氧化应激水平;超氧化物阴离子荧光探针检测细胞活性氧（ROS）的表达;Western blot检测细胞ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及线粒体融合蛋白Mfn2、OPA1和分裂蛋白Drp1、Fis1表达。结果 与对照组相比,LPS组跨内皮细胞电阻值降低、FITC-Dextran渗漏性增高,MDA含量升高、SOD活性下降,ROS荧光表达增强,ALDH2、紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、线粒体融合蛋白Mfn2和OPA1表达降低,而线粒体分裂蛋白Drp1和Fis1表达升高（P<0.05）。应用Alda-1干预后,可显著抑制LPS所致的内皮细胞膜通透性升高,减低ROS荧光表达,ALDH2、ZO-1、Occludin 、OPA1和Mfn2蛋白表达增高,而Drp1和Fis1蛋白表达降低（P<0.05）。结论 ALDH2通过抑制线粒体ROS的产生,减轻LPS诱导脑微血管内皮细胞屏障的损伤,其机制可能与促进线粒体融合及抑制线粒体裂变有关。