基于NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路探讨加味三妙丸防治痛风性关节炎的作用及机制

[目的]基于Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎性体轴和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,探讨加味三妙丸(modified Sanmiao pill,MSMP)对THP-1细胞痛风炎症模型的抗炎作用及机制。[方法]通过尿酸钠(monosodium urate,MSU)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同诱导建立THP-1细胞痛风炎症模型。以MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌水平,Western blot检测NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路中相关蛋白表达情况。[结果]MSU与LPS联用可诱导THP-1细胞产生典型痛风炎症。与空白组比较,模型组THP-1细胞分泌IL-1β水平显著升高(P＜0.01);NLRP3炎性体轴相关蛋白NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、磷酸化NF-κB p65(phospho-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of NF-κB α,p-IκBα)、磷酸化IκB激酶α(phospho-inhibitor of NF-κB kinase α,p-IKKα)及上游调节蛋白髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达明显上调(P＜0.01)。与模型组比较,MSMP具有较强的抗炎效果,对NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路两条路径相关蛋白的异常表达均具有明显的调控作用,不同剂量的MSMP显著降低IL-1β的分泌(P＜0.01),明显下调NLRP3、ASC、caspase-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-IKKα及MyD88、TLR2、TLR4等蛋白的表达,且具有剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01)。[结论] MSMP在痛风炎症细胞模型上表现出较强的抗痛风性关节炎作用,其机制与调控NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路相关蛋白的表达密切相关。     

NLRP3/NF-κB通路在慢性前列腺炎的变化和意义

为探讨慢性前列腺炎患者中核苷酸结合寡聚化结构域 (NOD)样受体家族3 (NLRP3)炎症小体介导的核因子κB(NF-κB)信号通路的表达及变化。采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清中NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 (Caspase 1)、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB的表达。采用Real-Time PCR检测患者血清中NLRP3、人细胞凋亡相关斑点样蛋白 (PYCARD)、Caspase 1、NF-κB mRNA表达。与健康对照组相比,慢性前列腺炎患者血清炎性因子NLRP3、TLR4和NF-κB含量显著升高,L-Iβ、IL-18、TNF-α和Caspase 1含量显著增高,NLRP3、PYCARD、Caspase 1、NF-κB mRNA含量显著增高。说明检测患者血清中NLRP3/NF-κB信号通路有利于了解患者慢性前列腺炎状态并协助前列腺炎患者的疾病监测。     

NLRP3炎性体信号通路在急性痛风性关节炎患者中的变化研究

目的探讨NLRP3炎性体信号通路在急性痛风性关节炎患者中的变化。方法选取来我院就诊的360例患者作为研究对象。设置3个实验,分别为蛋白质免疫印迹实验、酶联免疫吸附测定实验和关节滑膜免疫组化实验。每个实验设6组对照实验(正常组,模型组,秋水仙碱阳性药组及GT低、中、高剂量组),每组20例患者。取样观察患者关节滑膜组织,检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体的表达,分析测定平均积分吸光度(IA)。结果治疗前后对比发现GT中、高剂量组的NLRP3的表达水平降低(P0.05),GT各组IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB表达均明显降低(P0.05)。结论使用GT和秋水仙碱治疗急性痛风性关节炎时可能会降低NLRP3炎性体信号通路中炎性因子的表达,对患者体内的NF-κB的活化和IL-1β分化成熟也会有一定的影响。     

基于NF-κB/IκBα信号通路探讨“通经利浊”针法对急性痛风性关节炎大鼠保护作用的机制研究

目的本研究旨在探讨"通经利浊"针法对急性痛风性关节炎大鼠潜在的保护机制。方法模型组通过注射单钠尿酸盐(MSU)诱发大鼠急性痛风性关节炎。治疗组对大鼠进行"通经利浊"针法针刺治疗7 d,对照组口服秋水仙碱(1 mg/kg)给药7 d。结果实验结果表明,注射MSU可显著提高血清促炎细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,应用"通经利浊"针法针刺治疗效果显著逆转(P0.05);通过组织病理学检查,进一步明确了"通经利浊"针法的疗效,并对其保护作用机制进行了研究,结果表明"通经利浊"针法针刺抑制了MSU诱导的核因子κB(NF-κB)通路的激活。MSU诱发后,"通经利浊"针法针刺显著抑制了NF-κB p65的活化和蛋白κB-α(IκBα)的降解。结论 "通经利浊"针法针刺可能通过抑制NF-κB/IκBα信号通路的激活从而起到对MSU诱发的急性痛风性关节炎的保护作用。     

基于NF-κB/NLRP3信号轴探讨大血藤对CIA大鼠的治疗作用及机制

目的  考察大血藤对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠的症状改善作用和机制。 方法   建立大鼠CIA模型,持续观察大鼠体质量、关节肿胀度、关节炎指数,ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平;Western blot法检测大鼠关节滑膜RANKL、p-IκB-α、NF-κB/p65、p-NF-κB/p65、NLRP3、Caspase-1表达。 结果   模型组大鼠自第2周出现体质量增长的趋势明显减缓(P < 0.01),而关节炎指数和关节肿胀度均显著增加(P < 0.05),大鼠关节有红肿进而不能负重状态,而大血藤能显著改善CIA大鼠相关症状,表现为降低足肿胀、关节炎指数评分以及改善体质量数据。与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平以及关节滑膜RANKL、p-IκB-α、NF-κB/p65、p-NF-κB/p65、NLRP3、Caspase-1表达显著升高(P < 0.01), 而大血藤中、高剂量组上述指标较模型组显著降低(P < 0.05, P < 0.01)。 结论   大血藤能改善CIA大鼠的炎症反应,延缓病理进展,其机制可能与降低促炎因子的释放及抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。      

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.     

基于STAT-3/NF-κB/ICAM-1通路探讨丹皮酚缓解小鼠结肠炎相关性结直肠癌的作用机制

目的 从STAT-3/NF-κB/ICAM-1信号通路探讨丹皮酚缓解小鼠结肠“炎—癌转化”的机制。方法 构建结肠“炎—癌转化”小鼠模型,ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、白细胞介素1β（interleukin-1β,IL-1β）和白细胞介素10（interleukin-10,IL-10）水平,Western blot法和免疫组织化学染色法检测小鼠结肠组织内信号转导及转录激活因子3（signal transdncers and activators of transduction-3,STAT-3）、核因子-κB（nuclear factor κB,NF-κB）p65和细胞间黏附分子1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）蛋白表达水平。结果 光学显微镜下可见丹皮酚治疗组小鼠结肠的炎症细胞浸润、腺体紊乱等病变明显减轻。丹皮酚可显著降低肿瘤数量、肿瘤质量及脾脏指数（P<0.05）,显著降低模型小鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平（P＜0.05）,显著升高血清IL-10水平（P＜0.05）,显著降低小鼠结肠STAT-3、NF-κB p65和ICAM-1的表达水平（P＜0.05）,其中以丹皮酚中剂量组的作用为优（P＜0.05）。结论 丹皮酚能有效缓解小鼠溃疡性结肠炎的炎症反应,其作用机制与调节STAT-3/NF-κB/ICAM-1信号通路有关。     

小檗碱对小鼠痛风性关节炎模型中NLRP3/TLRs的调控作用

目的：探究小檗碱对痛风性关节炎小鼠NLRP3/TLRs信号通路的调控作用。方法：C57BL/6小鼠随机均分为6组,分别为正常对照组,模型组,秋水仙碱组（阳性对照,0.65 mg/kg）,小檗碱高、中、低剂量组（150、100、50 mg/kg）,造模给药7 d,每天测定小鼠踝关节肿胀度,观察治疗作用;同时,采用ELISA法测定血清白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、白细胞介素-6（inter－leukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及干扰素-α（interferon-α,IFN-α）表达水平。进一步采用RT-PCR、Western blot分别检测关节滑膜组织中NLRP3/TLRs关键靶点基因及蛋白的表达。结果：关节肿胀度结果显示,小檗碱高、中、低剂量组（分别为18.35%、21.35%、25.35%）和秋水仙碱组（15.35%）与模型组（31.34%）比较明显降低,差异具有统计学意义（F=11.240,P=0.005）。且各剂量小檗碱治疗后,小鼠踝关节滑膜组织中炎性细胞浸润及水肿现象明显减轻。ELISA结果显示,与模型组比较,小檗碱各组小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-α表达水平均明显下降（IL-2：F=5.690,P=0.005;IL-6：F=10.370,P=0.009;TNF-α：F=15.240,P=0.002;IFN-α：F=4.520,P=0.02）。RT-PCR及Western blot结果显示,小檗碱高、中、低剂量组的小鼠滑膜组织NLRP3、TLR3、TLR7、MyD88及NF-?资B p65的基因和蛋白表达均明显降低（P<0.05）。结论：小檗碱能缓解小鼠痛风性关节炎,其机制可能与下调炎症因子水平,抑制NLRP3/TLRs信号通路有关。     

甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用

目的 探讨甘草酸对MRL/lpr小鼠狼疮肾炎是否具有保护作用及其机制.方法 MRL/lpr狼疮小鼠随机分为MRL/lpr组、MRL/lpr+地塞米松(1.5 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(20 mg/kg)组,MRL/lpr+甘草酸(40 mg/kg)组,每组10只;野生型正常对照组C57BL/6小鼠10只.采用ELISA法检测各组小鼠血清中尿酸(UA)与肌酐(Cr)含量,各组小鼠血清及肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子水平;采用HE染色法检测肾脏病理改变;采用Western blot技术检测各组小鼠脾脏NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、NF-κB、p-IκBα、IκBα蛋白的表达.结果 甘草酸能显著降低血清尿酸、肌酐含量;减少血清及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子表达,改善肾脏病理改变;并能显著抑制NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、p-NF-κB、p-IκBα表达.结论 甘草酸对MRL/lpr狼疮小鼠肾脏起到保护作用.     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方改善CSE诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制

目的：基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨参芪调肾方（SQTS）改善香烟烟雾提取物（Cigarette smoking extract, CSE）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）炎症反应的作用机制。方法：以MH-S细胞为研究对象，通过CCK-8法分析SQTS对MH-S细胞的安全性及药效浓度；随后MH-S分为空白组、模型组（8%CSE）和SQTS低、中、高剂量组（40、80、160 mg/L）。ELISA检测细胞上清TNF-α、IL-1β和IL-6含量；DCFH-DA荧光探针法检测细胞中ROS水平；Westernblot检测TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白的表达，使用TLR4抑制剂TAK-242验证SQTS在TLR4/NF-κB/NLRP3通路上的作用。结果：与空白组比较，CSE组细胞活力降低，炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量增加（P<0.05）,ROS荧光表达水平显著升高（P<0.01）,TLR4/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达明显增加（P<0.05）；与模型组比较，参芪调肾方各剂量组细胞活力升高，以上各指标表达水平均有所降低（P&l...     

丹酚酸B对急性脑缺血小鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨丹酚酸B对急性脑缺血小鼠的抗炎作用及Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路的影响。方法:建立小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型。造模后阳性组(尼莫地平30μg/kg)、丹酚酸B低剂量组(丹酚酸B 11.25 mg/kg)、丹酚酸B高剂量组(丹酚酸B 22.5 mg/kg)分别尾静脉注射给药1次,模型组和假手术组给予同等体积的生理盐水。造模后6 h,分别采用酶联免疫吸附法测定脑组织中IL-1β及TNF-α的含量,采用实时定量PCR法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65 mRNA的表达,采用Western blot法检测缺血侧脑皮层TLR4、NF-κBp65蛋白的表达。结果:与模型组比较,丹酚酸B高、低剂量组均能显著降低小鼠脑组织中IL-1β、TNF-α含量(P0.01,P0.05);丹酚酸B高、低剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4 mRNA、NF-κBp65 mRNA表达显著降低(P0.01,P0.05);丹酚酸B高剂量组小鼠缺血侧脑皮层TLR4、NF-κB蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:丹酚酸B可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低TLR4和NF-κB相关基因蛋白的表达,减少炎症因子IL-lβ和TNF-α的含量,进而发挥抗脑缺血的作用。     

WP1130通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解小鼠的感染性休克

目的 探究小分子化合物WP1130抑制NLRP3炎症小体活化并缓解感染性休克的作用机制。方法 细胞生物学水平：WP1130预处理小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）或人THP-1细胞后,利用多种NLRP3炎症小体活化剂（Nigericin、ATP、MSU、胞内LPS转染）活化NLRP3炎症小体,使用poly A:T活化AIM2炎症小体,通过Western blot和ELISA检测细胞培养上清中caspase-1和IL-1β的分泌水平,确定WP1130对NLRP3炎症小体的抑制效果及其特异性。利用激光共聚焦显微镜观察Nigericin诱导的线粒体损伤情况,探究WP1130是否影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号。动物水平：将SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组（Control组）、感染性休克组（LPS组）、WP1130治疗组（WP1130+LPS组）,ELISA检测小鼠血清和腹腔液中IL-1β、TNF-α的分泌水平。结果 WP1130可剂量依赖性的抑制多种激动剂诱导的NLRP3炎症小体活化（P<0.05）,但对非炎症小体相关炎性因子IL-6、TNF-α的分泌无显著影响（P>0.05）。此外,WP1130对AIM2炎症小体的活化无显著影响（P>0.05）。机制研究表明,WP1130并不影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号线粒体损伤。动物实验结果表明,相较感染性休克组（LPS组）,WP1130治疗组（WP1130+LPS组）小鼠血清和腹腔液中IL-1β的水平显著降低（P<0.05）,而TNF-α的分泌水平无统计学差异（P>0.05）。结论 WP1130能够特异性抑制NLRP3炎症小体活化并缓解LPS诱导的小鼠感染性休克。     

抑制IL-17A表达对脓毒血症小鼠急性肾脏损伤的影响

目的探究人参皂苷对狼疮性肾炎(LN)小鼠肾损伤及核因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路的影响。方法将60只红斑狼仓小鼠随机均分为模型组、人参皂苷低、中、高剂量组、醋酸泼尼松组,另取12只C57BL/6小鼠为对照组。检测各组小鼠一般情况、肾功能指标;HE染色检测肾组织病理形态改变;免疫荧光染色检测肾组织IgG免疫复合物沉积;酶联免疫吸附法检测血清抗核抗体(ANA)、抗双链DNA(dsDNA)抗体含量及炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;Western blotting检测肾组织NF-κB/NLRP3通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠精神萎靡、反应迟钝、活动减少、食欲减退、毛色暗淡,体质量明显减轻,肾组织发生明显病理损伤,24 h尿蛋白、血清肌酐(Cr)、ANA、抗dsDNA抗体、IL-1β及IFN-γ含量、肾组织IgG免疫荧光强度及NF-κB、NLRP3蛋白表达水平明显升高(P＜0.05)。与模型组比较,人参皂苷低、中、高剂量组及醋酸泼尼松组小鼠以上观察指标均得到明显改善,且人参皂苷各组指标随剂量递增而改善更明显(P＜0.05)。结论人参皂苷可下调NF-κB/NLRP3通路蛋白表达,抑制LN小鼠肾组织炎症反应,减轻IgG免疫复合物沉积,改善其肾功能。     

三脚风炉水提物对痛风性关节炎大鼠NLRP3炎性体及炎症因子的影响

[目的]研究畲药三脚风炉水提物(Primpinellae diversifoliae water extracts,PDW)对痛风性关节炎大鼠Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrindomain containing 3,NLRP3)炎性体、炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL~(-1)β)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探讨PDW抗痛风性关节炎的作用机制。[方法]24只雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、美洛昔康组和PDW组。大鼠右踝关节皮下注射尿酸钠晶体制作急性痛风性关节炎模型,观察致炎前后踝关节肿胀度变化;Real-time PCR检测大鼠右踝关节组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-l(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)的m RNA表达;ELISA法测定大鼠血清中炎症因子IL~(-1)β和TNF-α的含量。[结果]与模型组比较,PDW给药后5、24、48h能明显抑制痛风鼠踝关节肿胀,差异有统计学意义(P0.001);PDW给药后,大鼠踝关节局部组织的NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.001,P0.01,P0.01);大鼠血清中IL~(-1)β和TNF-α的含量显著下调,差异有统计学意义(P0.001,P0.01)。[结论]PDW具有一定的抗痛风性关节炎的作用,可能通过调节NLRP3炎性体表达,抑制炎症因子IL~(-1)β和TNF-α的分泌而发挥作用。     

益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎大鼠NF-κB信号通路相关因子表达的影响

目的探讨益气活血解毒中药对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠炎症细胞因子及NF-κB信号通路关键因子表达的影响。方法以牛Ⅱ型胶原尾根及背部多点注射制作CIA大鼠模型,以免疫抑制剂来氟米特为阳性对照药物,益气活血解毒中药干预,病理切片HE染色,观察大鼠足跖关节的病理改变,细胞因子芯片检测CIA大鼠血清中炎症细胞因子的含量,real-time PCR检测NF-κB信号通路中关键因子的基因表达改变。结果益气活血解毒中药可以明显抑制关节滑膜组织增生,缓解炎性渗出,缩小纤维素样坏死区范围,并显著降低CIA大鼠外周血血清中肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1β、IL-5、IL-6、IL-10的含量,NF-κB mRNA表达与模型组相比均显著下降(P0.01或P0.05),NF-k B抑制蛋白激酶mRNA表达有下降趋势,统计学分析差异无显著性。结论益气活血解毒中药可以通过干预与类风湿关节炎(RA)相关的炎症细胞因子和NF-κB信号通路相关因子的表达,抑制病变组织的炎症反应,修复炎症所导致的关节损伤,达到治疗RA的目的,这是益气活血解毒中药干预RA免疫炎症反应的关键作用机制之一。     

姜黄素通过长链非编码 RNA NNT-AS1降低 LPS 诱导的支气管上皮细胞炎症因子表达

摘要:目的 探究姜黄素(curcumin)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人支气管上皮细胞炎症损伤的作用。 方法 收集慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmoriarydisease,COPD)患者(n=30)和健康人(n=30)血液样本, 分离血清,ELISA 法检测血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)的含量;培养人支气管上皮细 胞 BEAS-2B,并将细胞分成3组:空白对照组、LPS处理组(10μg/mL)、LPS+Curcumin(5μmol/L)处理组,ELISA 检测 细胞上清中炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和 TGF-β的含量,CCK-8法和 EdU 实验检测各组细胞增殖能力,实时定量 PCR(qRT-PCR)和 Westernblot分别检测各组细胞lncRNANNT-AS1和 NF-κB信号通路相关因子 NF-κBp65、IκBα的 表达。结果 COPD患者血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和 TGF-β含量显著升高(均P<0.01);LPS处理显著增强BEAS-2B 细胞增殖能力(P<0.01);LPS处理组细胞上清中的炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和 TGF-β含量显著升高(均 P< 0.01);同时,LPS组细胞中lncRNA NNT-AS1和 NF-κBp65的表达显著升高(均 P<0.01),IκBα的表达水平显著降低 (P<0.01);而上述的这些变化在姜黄素处理后均得到显著缓解。结论 姜黄素能够通过调节lncRNA NNT-AS1/NFκB信号通路缓解 LPS诱导的支气管上皮细胞增殖和炎症因子的合成释放。     

谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用

目的 探讨谷氨酰胺对克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症的抑制作用及机制.方法 将36只SD大鼠随机分为3组,正常组、模型组、谷氨酰胺组,通过气管滴入克雷伯杆菌建立大鼠肺炎模型,谷氨酰胺组在造模前1d即腹腔注射10 mL/kg谷氨酰胺,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续给药7d,大鼠脱颈处死,取肺组织及血清进行检测.称量记录右肺湿重及干重(W/D),HE染色检测肺组织病理形态,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肺组织匀浆及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)含量,RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)p65和NF-κ:B抑制蛋白(IκBα) mRNA表达,Western blot检测NF-κB p6和IκBα蛋白表达.结果 与模型组比较,谷氨酰胺组能降低W/D比值5.98±0.29 vs.4.32±0.33(P＜0.05)],减轻肺组织充血水肿、炎性细胞浸润,改善肺组织形态,抑制血清和肺组织匀浆中TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌(P＜0.05),并抑制NF-κB p65和kBα磷酸化水平(P＜0.05).结论 谷氨酰胺能抑制克雷伯杆菌引起的大鼠肺炎炎症,与抑制NF-κB信号通路有关.     

基于NF-κB信号通路探究狼疮定对红斑狼疮MRL/lpr小鼠炎症反应的调节作用

[目的] 研究狼疮定对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)MRL/lpr小鼠炎症反应的影响，并分析其对核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路的调节作用。[方法] 将12只MRL/lpr小鼠随机分为模型组(6只)、干预组(6只)，另选取C57BL/6小鼠6只为对照组。干预组灌胃给予0.1 mL/10 g狼疮定浓缩液，对照组、模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液，所有动物均干预8周。给药前后分别测定血清炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、α-干扰素(interferon-α，IFN-α)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB抑制蛋白α(NF-κB inhibitor ɑ，IκBα)、NF-κB抑制蛋白α p50(NF-κB inhibitor ɑ p50，IκBαp50)、NF-κB抑制蛋白α p65(NF-κB inhibitor ɑ p65，IκBαp65)表达水平，采用扩增阻碍突变系统-聚合酶链式反应(amplification refractory mutation system Real time fluorescence-quantitative polymerase chain reaction，ARMS-q PCR)检测NF-κB信号通路相关mRNA表达情况。通过苏木精-伊红染色检测肾组织损伤情况，采用免疫印迹法检测肾组织中炎性因子表达水平。[结果] 与对照组比较，模型组血清炎性因子IL-6、IFN-α、TNF-α、NF-κB信号通路相关蛋白(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平、NF-κB信号通路相关mRNA(IκBα、IκBαp50、IκBαp65)水平均显著升高(P<0.05)，肾组织中IL-6、IFN-α、TNF-α表达水平升高(P<0.05)。模型组小鼠肾组织损伤明显，主要表现为肾小管扩张，肾小球硬化，结构严重破坏，且肾小球、肾小管周围出现明显的炎症反应。干预后，MRL/lpr小鼠血清各指标水平均出现明显降低(P<0.05)，肾组织炎性损伤较模型组减轻。[结论] 狼疮定可抑制MRL/lpr小鼠炎症反应，从而减轻炎性肾损伤，其作用机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用

目的:观察NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法:以小鼠肾小管上皮细胞为研究对象,高糖处理24 h后,采用real-time PCR法检测细胞表型标志分子(E钙粘素和α-SMA)和NLRP3炎症小体mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β含量.采用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950探讨NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞ETM中的作用.结果:高糖处理24 h可降低小鼠肾小管上皮细胞E钙粘素mRNA表达,上调α-SMA mRNA表达;同时上调NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1 mRNA表达,以及IL-1β分泌;抑制NLRP3炎症小体可部分逆转高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT.结论:高糖应激可能通过激活NLRP3炎症小体促进IL-1β分泌诱导肾小管上皮细胞发生EMT.