前癃通对前列腺间质细胞Fibronectin和CollagenⅣ基因表达的影响

目的：观察前癃通对体外培养前列腺间质细胞Fibronectin与CollagenⅣ基因表达的影响,为中药复方治疗良性前列腺增生症提供实验依据。方法：15例前列腺增生症患者按门诊就诊号从中随机选取5位患者,给药前静脉采血、抗凝、离心,提取血浆作为空白组。再按门诊就诊号将所选15例患者随机平均分为前癃通高剂量组、中剂量组、低剂量组,高剂量组口服前癃通每次6粒,中剂量组每次3粒,低剂量组每次1．5粒,均为3次·d－1,连续服药7 d。末次服药2 h后,静脉采血、抗凝、离心提取含药血浆。免疫荧光检测鉴定间质细胞,实时荧光定量PCR技术检测4组间质细胞Fibronectin和Collagen Ⅳ基因表达。结果：前列腺间质细胞Fibronectin基因mRNA的相对表达量随药物剂量增加依次减少（高剂量组：0．446±0．029;中剂量组：0．713±0．045;低剂量组：1．027±0．044;空白组：1．043±0．051）,高剂量组、中剂量组与各组之间比较,差异均有显著统计学意义（P＜0．01）。前列腺间质细胞CollagenⅣ基因mRNA的相对表达量随药物剂量增加依次减少（高剂量组：0．247±0．005;中剂量组：0．258±0．008;低剂量组：0．484±0．040;空白组：0．518±0．052）,低剂量组与空白组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）;高剂量组与中剂量组比较,差异无统计学意义（P＞0．05）;其余各组之间比较,差异均有显著统计学意义（P＜0．01）。结论：前癃通可抑制体外培养前列腺间质细胞Fibronectin与CollagenⅣ基因表达。     

前癃通对大鼠前列腺增生组织中内皮生长因子表达的影响

目的 通过免疫组化、原位杂交等实验方法观察前癃通对大鼠前列腺增生组织中内皮生长因子(VEGF)表达的影响,从转录和翻译水平探讨其治疗的分子机制,促进前癃通治疗良性前列腺增生症中推广应用. 方法 60例SD大鼠分成空白对照组,模型组和前癃通低、中、高剂量组和癃闭舒组,采用免疫组化和原位杂交的方法观察各组大鼠前列腺增生组织中VEGF阳性表达情况(所有图像均采用MIAS图像分析系统观察分析). 结果 6组大鼠前列腺组织中VEGF平均灰度值、积分光密度、阳性细胞总面积比较,差异均有统计学意义(P<0.01).模型组显著高于空白对照组(P<0.01),前癃通低、中、高剂量组及癃闭舒组大鼠前列腺组织中VEGF各检测指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01),前癃通高剂量组灰度值、积分光密度、阳性细胞总面积均低于癃闭舒组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 前癃通可以降低大鼠前列腺组织中VEGF的阳性表达,高剂量较低剂量的影响更明显.     

前癃通胶囊对前列腺基质细胞Caspase-3表达的影响

目的：探讨前癃通胶囊对前列腺基质细胞Caspase-3表达的影响。方法：采用组织细胞培养法,对良性前列腺增生（BPH）患者的前列腺基质细胞进行体外培养;用免疫组织化学法检测前癃通对体外培养的前列腺基质细胞Caspase-3表达的影响。结果：模型组Caspase-3表达缺失,不同剂量的前癃通组对Caspase-3表达均明显增强,且对Caspase-3表达的增强作用表现出明显的量效关系（组间比较P〈0.01）。结论：前癃通胶囊能增强Caspase-3在体外培养BPH前列腺基质细胞中的表达,这可能是前癃通胶囊治疗前列腺增生症的作用机理。     

前癃通胶囊抑制良性前列腺增生基质细胞TGF-β1表达的体外实验研究

目的研究前癃通胶囊干预下,TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。方法:采用MTT比色法检测前癃通胶囊对体外培养良性前列腺增生前列腺基质细胞增殖的抑制作用;应用逆转录-多酶链反应(RT-PCR)技术,观察前癃通胶囊干预下TGF-β1mRNA在良性前列腺增生基质细胞中的表达的变化。结果 3种浓度的前癃通胶囊能抑制前列腺基质细胞的增殖,且随着时间的延长抑制作用增强,高浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有明显的抑制作用,与中浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);中浓度组在不同时段对前列腺基质细胞增殖有抑制作用,与低浓度组比,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。前列腺基质细胞中的TGF-β1mRNA表达随着前癃通胶囊(药液)浓度的增高呈现下降趋势。TGF-β1mRNA在高浓度组的表达最低,空白组的表达最高。高、中、低浓度组分别与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01);高、中浓度组与低浓度组比较TGF-β1mRNA的表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。结论前癃通胶囊对前列腺基质细胞的增殖有较强的抑制作用,能降低TGF-β1mR-NA在基质细胞中的表达。     

益肾通癃胶囊对良性前列腺增生大鼠模型COX-2及PGE2表达的影响

目的:观察益肾通癃胶囊对良性前列腺增生(BPH)模型大鼠前列腺组织内环氧合酶-2(COX-2)及前列腺素E_2(PGE_2)表达的影响,探究其治疗良性前列腺增生的作用机制。方法:将80只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、癃闭舒组、塞来昔布组,益肾通癃低、中、高剂量组,每组10只。空白组不做任何处理,假手术组切除双侧睾丸,其余各组采用双侧睾丸切除术联合经背皮下注射丙酸睾酮复制BPH大鼠模型。造模成功后,各组分别给予不同药物。给药12周后处死大鼠,称取前列腺湿重并计算前列腺指数(PI),采用荧光定量检测前列腺组织COX-2及PGE_2 mRNA表达,光镜下观察前列腺组织的炎症浸润情况。结果:假手术组大鼠前列腺湿重及PI与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05),其余组别大鼠前列腺湿重及PI与空白组比较均明显升高(P<0.05);与模型组比较,癃闭舒组、塞来昔布组、益肾通癃低、中、高剂量组大鼠前列腺湿重及PI指数均明显降低(P<0.05),尤以塞来昔布组及益肾通癃中剂量组降低最显著(P<0.01)。各组大鼠COX-2、PGE_2 mRNA表达:与空白组比较,假手术组大鼠前列腺组织COX-2、PGE_2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),其余组别大鼠前列腺组织COX-2、PGE_2 mRNA表达均明显升高(P<0.05);与模型组比较,癃闭舒组、塞来昔布组、益肾通癃低、中、高剂量组大鼠前列腺组织COX-2、PGE_2 mRNA表达均明显降低(P<0.05),尤以塞来昔布组及益肾通癃中剂量组降低最显著(P<0.01)。结论:益肾通癃胶囊可调节良性前列腺增生模型大鼠前列腺组织COX-2及PGE_2的表达,减少良性前列腺增生前列腺组织的炎症反应,从而达到治疗良性前列腺增生的作用。     

前癃通胶囊对人前列腺组织细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨前癃通胶囊对人前列腺组织细胞凋亡指数及细胞周期的影响。方法 1.采用组织细胞培养法,体外对良性前列腺增生BPH患者的前列腺组织块进行培养。2.采用TUNEL法和流式细胞术(FCM),检测前癃通对体外培养BPH患者前列腺组织细胞凋亡指数和细胞周期的影响。结果前癃通能促进细胞凋亡,对细胞凋亡的促进作用有明显的量效关系,差异有统计学意义(P<0.01)。同时前癃通胶囊使前列腺组织细胞的G0/G1期细胞数增加,对细胞周期的影响同样有出明显的量效关系。高、中剂量组与低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论前癃通对前列腺组织能促进细胞凋亡,同时使细胞周期发生G0/G1期阻滞,从而抑制前列腺增生。     

前癃通胶囊治疗良性前列腺增生症的临床观察

目的观察前癃通胶囊治疗良性前列腺增生症（BPH）的临床疗效。方法将80例BPH患者随机分为治疗组和对照组,分别给予前癃通胶囊和癃闭舒胶囊治疗,1个月为1个疗程,连续治疗3个疗程。观察治疗前后I-PSS评分、尿流率、前列腺体积、残余尿量等的变化。结果治疗组总疗效优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;各项指标改善亦优于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论前癃通胶囊是治疗良性前列腺增生症的有效药物,值得临床推荐使用。     

前癃通胶囊对前列腺基质细胞caspase-3 mRNA表达的影响

目的探讨前癃通胶囊对前列腺基质细胞caspase-3 mRNA表达的影响。方法采用组织细胞培养法,体外对良性前列腺增生(BPH)患者的前列腺基质细胞进行培养;用反转录-聚合酶链反应法检测前癃通胶囊对体外培养的前列腺基质细胞caspase-3 mRNA表达的影响。结果反转录-聚合酶链反应法显示不同剂量的前癃通组对caspase-3 mRNA表达均明显增强,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),且对caspase-3 mRNA表达的增强作用表现出明显的量效关系。结论前癃通胶囊能增强caspase-3 mRNA在体外培养BPH前列腺基质细胞中的表达,这可能是前癃通胶囊治疗前列腺增生症的机制。     

克癃胶囊对BPH肾虚血瘀证大鼠前列腺增生和性激素水平的影响

目的 探讨克癃胶囊对肾虚血瘀证大鼠前列腺增生(BPH)的影响及其对性激素水平的调节作用.方法 建立前列腺增生症肾虚血瘀证大鼠模型,观察空白组,模型组,保列治组,前癃通组,低、中、高剂量克癃组(以下简称克癃低组、克癃中组、克癃高组)大鼠前列腺和性激素水平的影响.结果 (1)保列治组、前癃通组、克癃高、中、低组大鼠前列腺湿质量、前列腺指数均显著低于模型组(P＜0.05).各组组织病理学变化有一定区别.(2)与模型组比较,前列治组、克癃低组血清T含量和E2含量无显著性差异(P＞0.05);前隆通组、克癃中组、克癃高组血清T含量降低(P＜0.05)、血清E2含量显著升高(P＜0.01);与前隆通组比较,克癃中组、克癃高组血清T和E2含量无显著性差异(P＞0.05).(3)与模型组比较,保列治组血清FSH和LH的含量无显著性差异(P＞0.05),前隆通组、克癃低、中、高组血清FSH和LH的含量降低(P＜0.05);与前隆通组比较,克癃低、中、高组血清FSH和LH的含量无显著性差异(P＞0.05).结论 克癃胶囊可显著抑制大鼠前列腺增生,且呈剂量依赖性关系.克癃胶囊可能通过同时降低T、E2、FSH和LH的水平,调节大鼠的性激素平衡,从而起到抑制前列腺增生的作用.     

通补消积饮对人肺腺癌A549细胞PCNA蛋白表达的影响

目的研究通补消积饮对A549细胞PCNA蛋白表达的影响,探讨通补消积饮治疗肺癌的作用机制。方法用Western-blot法检测通补消积饮对A549细胞PCNA蛋白表达的影响。结果通补消积饮低、中、高剂量组含药血清作用于A549细胞48 h后,PCNA蛋白相对表达量分别为（0.749±0.083）,（0.534±0.052）,（0.402±0.048）,通补消积饮各剂量组与空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,并表现出明显剂量依赖性。结论通补消积饮能明显抑制A549细胞PCNA蛋白的表达。     

体外非接触性共培养对MSC向软骨细胞诱导分化的实验观察

目的：探讨骨髓基质干细胞（MSCs）与软骨细胞体外非接触性共培养成软骨的可行性。方法：分离、培养、扩传兔MSCs及软骨细胞，MSCs以1×10^5个/ml接种于共培养板内孔，第1代软骨细胞以1×10^4个/ml接种于共培养板外空板。48h后将内孔插如外孔中，补充全培养基覆盖于MSC细胞层上。以相同密度MSC单独培养为空白对照，观察共培养7d和14d流式细胞仪观察MSC的Ⅱ型胶原蛋白变化情况。结果：实验空白组在7d和14d，Ⅱ型胶原蛋白均阴性表达，符合MSC特性。非接触共培养1周后，Ⅱ型胶原蛋白阳性表达，与空白对照比较，P〈0.01，具有统计学意义；非接触共培养2周后，Ⅱ型胶原蛋白也阳性表达，与空白对照比较，P〈0.01，同样具有统计学意义；实验14d组与实验7d组比较，P〈0.01，具有非常显著性差异。结论：软骨微环境在MSCs成软骨分化及体内软骨形成中具有重要作用，软骨细胞能有效地诱导MSCs向软骨细胞分化并促进MSCs体内软骨形成。     

天冰调督胶囊对激怒模拟肝郁证模型大鼠生长抑素的影响

目的观察天冰调督胶囊对大鼠进食量,血浆、胃窦和下丘脑生长抑素（SS）含量的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为6组,即：正常组、模型组、柴胡疏肝散组、吗丁啉组、天冰调督胶囊低剂量组、天冰调督胶囊高剂量组。以“夹尾激怒法”制作肝郁证模型,记录各组大鼠每日进食量,用放射免疫法测量大鼠血浆、胃窦及下丘脑SS含量。结果（1）大鼠进食量：造模期间,除正常组进食量较稳定外,其余各刺激组进食量均明显下降,与正常组有显著差异（P〈0．05）。治疗后,各治疗组与模型组相比,具有显著差异（P〈O．05）,其中天冰调督胶囊高剂量组与其他治疗组有显著差异（P〈0．05）。（2）SS含量：治疗后,与模型组相比,其他组SS含量均显著降低（P〈O．05）,差异具有统计学意义;其中天冰调督胶囊高刹量组与其他治疗组有显著差异（P〈O．05）,差异有统计学意义。结论天冰调督胶囊能显著改善大鼠进食量,降低大鼠血浆、胃窦及下丘脑SS含量,这可能是其治疗肝郁证的神经内分泌物质基础之一。     

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

右归饮含药血清促进人血管内皮细胞增殖及抗氧化损伤的作用研究

[目的]观察右归饮含药血清促进人血管内皮细胞增殖及对氧化损伤的保护作用,探讨右归饮防治激素性股骨头坏死的作用机理。[方法]取对数生长期的人血管内皮细胞,分为空白组、模型组、药物I组、药物Ⅱ纽。模型组和药物I组以600μMH2O2：作用2h建立氧化损伤模型,空白组、药物Ⅱ组照常培养,2h后药物I组和药物Ⅱ组分别加入相同浓度右归饮含药血清,空白组和模型组则分别加入等量空白血清。各组干预24h后通过倒置相差数字成像显微镜观察细胞形态及密度、MTT比色法检测细胞OD值,并分别于24h、48h、72h通过Realtime-PCR测定空白组、模型组、药物I组细胞中血管内皮细胞生长抑制因子（vascular endothelial growth inhibitor,VEGI）的表达水平。[结果]与空白组相比,药物Ⅱ组细胞密度显著增高,形态完整,且OD值高于空白组（P〈O.001）;与模型组相比,用右归饮含药血清干预后,药物I组细胞密度增高,形态较为完整,OD值高于模型组（P〈0.01）;PCR结果显示药物I纽细胞的VEGI表达水平低于模型组（24h,48h,p〈0.01）。[结论]右归饮舍药血清能在一定程度上促进体外培养的人血管内皮细胞增殖,同时对细胞氧化损伤模型具有保护作用,其作用可能与下调VEGI基因表达有关。     

心乐胶囊对病毒性心肌炎模型小鼠TNF-α、TGF-β1mRNA表达的影响

目的：通过观察心乐胶囊对CVB3致病毒性心肌炎BABL/c小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达影响,探讨心乐胶囊治疗病毒性心肌炎的作用机制和疗效。方法：健康雄性BABL/c小鼠60只,随机数字表法分为6组：空白组、模型组、玉丹荣心丸组及心乐胶囊高、中、低剂量组,每组10只。利用原位杂交技术观察心乐胶囊对CVB3致病毒性心肌炎小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达影响。结果：与空白组比较,模型组小鼠心肌组织TNF-αmRNA表达增高,有显著差异（P〈0.05）,模型组小鼠心肌组织TGF-β1 mRNA表达增高,有显著差异（P〈0.01）;与模型组比较,玉丹荣心丸组、心乐胶囊各剂量组均可降低心肌组织TNF-αmRNA表达,有显著差异（P〈0.01）,玉丹荣心丸组、心乐胶囊各剂量组均可降低心肌组织TGF-β1 mRNA表达,有显著差异（P〈0.05）;与玉丹荣心丸组比较,心乐胶囊各剂量组均可使小鼠心肌组织TNF-α、TGF-β1 mRNA表达降低,有显著差异,其中以心乐胶囊高剂量组最为明显（P〈0.01）。结论：（1）心乐胶囊能够明显地降低病毒性心肌炎小鼠TNF-α、TGF-β1 mRNA表达。（2）心乐胶囊可以减轻心肌细胞炎症反应,抗心肌纤维化,保护心肌,减轻心肌的损伤。     

白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖影响的实验研究

目的：观察中药白附片含药血清对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法：取1月龄的SD大鼠膝关节关节软骨Ⅱ型胶原酶消化,建立软骨细胞体外培养体系,甲苯胺蓝染色鉴定后,取体外培养第3代软骨细胞随机分为6组,分别加入不同浓度空白血清（5％、10％、15％）,不同浓度白附片含药血清（5％、10％、15％）,继续培养24、48、72h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖的变化。结果：白附片含药血清组吸光度值（OD值）显著高于空白血清组,两组比较,差异有非常显著性意义（P＜0．01）。结论：白附片含药血清能有效促进大鼠膝关节软骨细胞的增殖。