RNA干扰靶向Survivin促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的研究

目的针对凋亡抑制因子Survivin应用RNA干扰技术（RNA interference,RNA）i抑制膀胱癌细胞株BIU-87细胞内源性Survivin基因的表达进而促进膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡.方法构建重组质粒pshRNA-survivin1、pshRNA-surv-ivin2和pshRNA-survivin 3并转染BIU-87细胞株,应用免疫组化法检测细胞中Survivin蛋白的表达,通过噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞生长增殖抑制率,利用流式细胞术检测细胞凋亡率.结果重组质粒转染BIU-87细胞后,Survivin蛋白表达明显下调,细胞凋亡率显著增加,细胞生长明显受抑.结论膀胱癌细胞高表达Survivin,RNA干扰特异性抑制Survivin表达,可以促进膀胱癌细胞凋亡和增殖活性明显下降.     

百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU-87生长的影响及其机制。方法百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU-87及预处理NF-κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU-87生长,并明显诱导细胞凋亡;预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU-87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调。结论百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现。     

杨梅素诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡机制研究

目的:研究杨梅素(Myricetin)诱导膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的机制.方法:培养人膀胱癌细胞株BIU-87,加入不同浓度杨梅素干扰,在倒置显微镜下观察细胞形态学变化;并利用MTT及Hoechst 33258染色法检测杨梅素对膀胱癌细胞株BIU-87凋亡的影响;后用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变,免疫印迹法检测survivin和caspase-3的表达情况.结果:杨梅素能诱导BIU-87细胞凋亡,并明显抑制survivin的转录和表达,同时对caspase-3有上调作用.结论:杨梅素能诱导膀胱癌细胞BIU-87凋亡,其机制与抑制survivin表达,上调caspase-3表达有关.     

改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌BIU-87细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的 探讨应用改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞后,对肿瘤细胞的抑制效应,及对Bcl-2和Survivin表达的影响,为以后对改良型TAT-VP3融合蛋白的进一步研究提供实验基础.方法 运用MTT比色法检测BIU-87细胞的生长抑制率.利用不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞,24 h,48 h,72 h,运用实时荧光定量酶链聚合反应(QPCR)检测Bcl-2和Survivin mRNA的表达变化.运用不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞,24 h后蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测Bcl-2和Survivin蛋白的表达情况.结果 改良型TAT-VP3融合蛋白干预膀胱癌BIU-87细胞后,肿瘤细胞凋亡率与时间和剂量呈依赖关系(P＜0.05),Bcl-2和Survivin mRNA表达与时间和药物剂量呈依赖关系.不同浓度的改良型TAT-VP3融合蛋白作用24 h后,Bcl-2和Survivin蛋白表达与药物剂量呈依赖关系.结论 改良型TAT-VP3融合蛋白对膀胱癌BIU-87细胞具有一定的抑制作用,并对凋亡相关因子(Bcl-2和Survivin)的表达有影响.     

二氢青蒿素对结肠癌细胞系SW480增殖凋亡的影响

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对结肠癌细胞系SW480的增殖、凋亡的作用,初步探讨其机制。方法:采用结肠癌细胞SW480为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对细胞作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,普通光镜观察细胞形态的变化,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,免疫细胞化学检测凋亡抑制蛋白Survivin及效应蛋白Caspase-3表达情况。结果:DHA对SW480细胞增殖有抑制作用且呈浓度和时间依赖性。普通光镜下观察SW480呈典型的凋亡形态学改变。流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大G0/G1期比例而逐渐增高,S期比例降低,Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显浓度依赖性升高。免疫细胞化学结果示DHA作用48 h后Survivin表达减弱,而Caspase-3表达增强,呈剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制结肠癌细胞生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,可能与抑制Survivin蛋白表达,促使Caspase-3表达增强有关。     

小檗胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗胺(BBM)对K562细胞增殖及凋亡的影响及其可能机制.方法:K562细胞分为5组,前4组为实验组,分别加入终浓度为0.8、8.0、40.0、80.0 mg/L的BBM,对照组加入等量RPMI 1640,分别作用不同时间后,采用MTT法检测BBM对K562细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测各组Caspase-3蛋白和Survivin蛋白的表达.结果:BBM能呈时间剂量依赖性地抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡;免疫细胞化学结果显示BBM作用24 h后K562细胞Caspase-3蛋白表达升高,Survivin蛋白表达降低(P均＜0.05).结论:BBM能抑制K562细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能与Caspase-3蛋白的表达增高及Survivin蛋白的表达降低有关.     

光动力作用对膀胱癌细胞线粒体相关调控蛋白Bcl-2/Bax表达的影响

目的探讨激光活化BPD-MA光动力诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制.方法应用免疫组织化学染色检测激光活化BPD-MA光动力作用后人膀胱癌细胞BIU-87线粒体相关调控蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果激光活化BPD-MA光动力作用后膀胱癌细胞线粒体相关调控蛋白Bcl-2表达显著低于对照组(P<0.05),而Bax蛋白表达水平无明显改变(P>0.05),但Bax/Bcl-2 比值较对照组明显上升(P<0.05).结论激光活化BPD-MA光动力作用后人膀胱癌细胞BIU-87线粒体相关调控蛋白Bcl-2表达水平的下降、Bax/Bcl-2比值的上升.激光活化BPD-MA光动力作用可能通过调控线粒体相关调控蛋白Bcl-2和Bax蛋白表达水平诱导人膀胱癌细胞株BIU-87发生凋亡.     

榄香烯联合热疗诱导膀胱癌BIU-87细胞凋亡及对p-Akt表达的影响

目的探讨榄香烯联合热疗诱导人膀胱癌细胞株-87（BIU-87）膀胱癌细胞凋亡及对磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）蛋白表达的影响。方法采用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察不同浓度榄香烯与热疗单独或联合对BIU-87膀胱癌细胞作用结果;Westernblotting检测榄香烯（40mg／L）与热疗单独或联合作用于人BIU膀胱癌细胞24h后p-Akt蛋白的表达。结果榄香烯联合热疗处理后BIU-87细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变,不同浓度的榄香烯组、热疗组和榄香烯联合热疗组作用于人BIU-87膀胱癌细胞24h均可使细胞凋亡率增加,但榄香烯联合热疗组的作用显著强于前两者;凋亡率增加的同时下调了p-Akt蛋白的表达。结论榄香烯联合热疗可诱导人BIU-87膀胱癌细胞凋亡,且过程中下调了p-Akt蛋白的表达。     

木犀草素联合卡介苗治疗膀胱癌的协同效应及其机制

目的：研究木犀草素(Luteolin,Lu)联合卡介苗(bacillus calmette-guerin,BCG)抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖
的作用及其机制。方法：体外培养膀胱癌BIU-87细胞株,分别用不同浓度的Lu(20,40,60,80,100,160 μmol/L)
单独及联合BCG(100,200 mg/L)处理BIU-87细胞,作用6,12,24,48 h。采用Hoechst 33258核荧光染色观察细胞形
态学变化,MTT法检测Lu和BCG对BIU-87细胞增殖的抑制作用和半数抑制率IC50,流式细胞术分析肿瘤细胞的凋
亡及细胞周期,比色法测定caspase-3蛋白活性,Western印迹分析磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun
N-terminal kinases,P-JNK)的表达。结果：Hoechst 33258核荧光染色提示Lu可诱导细胞凋亡,并增强BCG诱导的细
胞凋亡。MTT法检测显示Lu及BCG对BIU-87细胞增殖均有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;Lu与BCG联合
作用对BIU-87细胞的增殖抑制具有显著的协同效应(P<0.05)。流式细胞术提示Lu及BCG均诱导细胞周期阻滞及细
胞凋亡,并具有明显的协同增敏效应(P<0.05)。Lu及BCG均可上调caspase-3活性及P-JNK表达水平,二者联合作用
明显增强(P<0.05)。结论：Lu与BCG均可抑制BIU-87细胞增殖,诱导细胞凋亡,并呈浓度依赖性,二者具有明显
的协同增敏作用;Caspase-3蛋白活化及JNK的激活是其可能的分子机制,Lu可作为BCG免疫治疗的有效增敏剂用
于对膀胱肿瘤的治疗。     

瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞Survivin表达的影响

目的研究瑞香狼毒水提取物对人膀胱癌T24细胞的抑制作用及生存素(Survivin)表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物处理T24细胞,分别用MTT法检测膀胱癌细胞抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫细胞化学检测药物作用后细胞中Survivin蛋白的表达。结果瑞香狼毒水提取物干预细胞后,①膀胱癌T24细胞增殖受到抑制,抑制效应呈剂量依赖性并随时间的延长逐渐升高;②瑞香狼毒水提取物可以促进膀胱癌T24细胞的凋亡;③膀胱癌T24细胞中的Survivin蛋白表达下降。结论瑞香狼毒水提取物可以通过下调Survivin蛋白的表达从而抑制膀胱癌T24细胞增殖,促进其凋亡,并具有浓度和时间依赖性。