孕激素受体靶向聚乳酸-羟基乙酸-超顺磁性氧化铁分子探针的制备及其性能

目的：探讨载孕激素受体（PR）靶向聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）-超顺磁性氧化铁（SPIO）及全氟己烷（PFP）分子探针（PR-s-PFP/PLGA）的构建方法及其对乳腺癌细胞体外靶向结合的可行性。方法：制备s-PFP/PLGA纳米颗粒,检测s-PFP/PLGA纳米颗粒的直径和平均电位。细胞毒性实验不同浓度s-PFP/PLGA条件下检测各组细胞相对增殖率（RGR）。观察不同浓度s-PFP/PLGA纳米颗粒的体外磁共振成像（MRI）、体外光声成像和体外超声成像,高强度聚焦超声（HIFU）检测s-PFP/PLGA纳米颗粒辐照后回声强度值。采用碳二亚胺法制备PR-s-PFP/PLGA探针,体外培养高表达PR的乳腺癌细胞株T-47d,将DiO绿色荧光标记的T-47d细胞分为靶向显像剂组、非靶向组和空白对照组,观察探针与各组细胞的结合情况。结果：透射电镜下s-PFP/PLGA呈球形,SPIO颗粒均匀分布在外壳上,平均粒径为（738.5±181.2） nm,平均电位为（-15.8±5.7） mV,并检测到明显光声信号。体外超声显像中s-PFP/PLGA纳米颗粒呈点状高回声,HIFU辐照后其回声强度值增大。s-PFP/PLGA纳米颗粒在T1加权图像上的信号得到增强。在激光扫描共聚焦显微镜下,靶向显像剂组被T-47d细胞吞噬的s-PFP/PLGA纳米颗粒发出红色荧光。结论：PR-SPIO-PLGA具有优良的理化性质及稳定性,生物安全性好,肿瘤靶向结合能力强。     

壳聚糖纳米微粒荧光探针的制备及特性研究

目的 制备出壳聚糖纳米微粒荧光探针,对其物理特性进行研究,并观察其靶向性及细胞毒性.方法 使用离子交联法制备出壳聚糖纳米微粒荧光探针(chitosan-nanoparticles-fluorescein isothiocyanate,CS-NP-FITC).Zeta粒径分析仪观察其粒径及表面电位情况;扫描电镜观察其形态特点;接着用靶向转化生子因子βⅡ型受体(TGF-β receptor Ⅱ,TβRⅡ)的核酸适配子S58标记CS-NP-FITC,作用于人Tenon's囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs),观察其靶向结合特异性受体的情况;用LDH释放实验检测其细胞毒性.结果 制备出的壳聚糖纳米微粒荧光探针CS-NP-FITC的平均粒径为274.6 nm,平均表面电位为+24.3 mV,扫描电镜下可观察到呈球形的微粒,分布均匀;激光共聚焦显微镜下观察到适配子S58标记的CS-NP-FITC能够与TβRⅡ特异性结合;LDH释放试验证实CS-NP-FITC的使用浓度在0.18～18 mg/mL时,细胞毒性很小,具有良好的生物相容性.结论 壳聚糖纳米微粒荧光探针CS-NP-FITC经适当的适配子或抗体标记后具有靶向结合特异性受体的能力,且细胞毒性小,具有应用于生物成像中的潜力.     

乳腺癌转移演进的关键分子ALDH2体外可视化研究

目的：分析乙醛脱氢酶2(ALDH2)靶向脂质体纳米探针ALDH2-Cy7@LP-FA在细胞水平的成像能力和靶向性能。方法：研究制备荧光探针ALDH2-Cy7@LP-FA,通过粒径分析、紫外吸收和荧光发射光谱对其进行表征。利用Western印迹和免疫组化检测ALDH2在乳腺癌组织和细胞系的表达情况。以ALDH2高表达的乳腺癌细胞BT474、MDA-MB-231作为实验组,ALDH2低表达的MCF-10A作为对照组,通过流式细胞术及共聚焦荧光显微镜,观察探针的亚细胞器共定位及成像效果。采用CCK8法分析探针的细胞毒性和生物相容性,为体内成像提供实验依据。结果：脂质体探针ALDH2-Cy7@LP-FA粒径均一分布[（155±2）nm],脂质体的包载使得标记抗体的紫外吸收和荧光发射分别发生了4 nm和5 nm的蓝移,脂质体的包载实现了抗体纳米化。ALDH2蛋白在BT474细胞系中表达最高,在MCF-10A表达最低（t=29.123,P<0.001）。体外摄取及成像效果显示,ALDH2-Cy7@LP-FA可特异性靶向线粒体中的ALDH2,对BT474细胞的结合亲和力高于231细胞,对MCF...     

生物素靶向显影探针Biotin-S-S-Rhodol对乳腺癌细胞的靶向显影作用

目的：对新型生物素靶向显影探针（Biotin-S-S-Rhodol,3a）的靶向显影性能进行分析。方法采用紫外吸收光谱和荧光光谱分析谷胱甘肽（GSH）处理后3a的光谱特性;采用不同浓度GSH处理3a,荧光光谱分析3a对GSH的敏感性;采用流式细胞术和荧光倒置显微镜观察生物素预处理前后MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞和Hs 578Bst细胞对3a的摄取率和靶向显影性能;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)初步分析3a对MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞和Hs 578Bst细胞的毒性。结果3a的最强吸收峰在510 nm处,在544 nm处荧光发射信号最强;荧光光谱结果显示随着GSH浓度（0~6 mmol/L）处理浓度提高,544 nm波长处的荧光强度升高;MDA-MB-231、MCF-7细胞对3a的摄取率明显高于Hs 578Bst细胞;3a能实现乳腺癌细胞专一性成像,成像清晰;2~20μmol/L 3a对人正常乳腺细胞无明显毒性,可在一定程度上抑制MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞存活。结论3a能通过生物素介导专一靶向乳腺癌细胞,成像清晰,对正常乳腺细胞毒性极低,有一定的抑制乳腺癌细胞存活作用。     

新型铈掺杂碳量子点的构建及其对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的: 制备具有高效光热消融功能的铈掺杂碳量子点并用于乳腺癌细胞的光热治疗。方法: 以草酸铈和甘氨酸为前驱物,通过微波水热碳化法制备铈掺杂的碳量子点（cerium doped carbon quantum dots, Ce-doped CDs）;利用高倍透射电镜表征其形貌;利用荧光光谱表征其荧光性能;利用近红外热成像仪表征其光热转换效能;采用4T1乳腺癌细胞体外验证Ce-doped CDs的光热杀伤效果。结果： 成功制备出形貌均一、粒径约为2.6 nm且生物相容性良好的Ce-doped CDs,其具有优越的荧光性能和光热转换效能。随着Ce-doped CDs浓度的增加,在特定近红外激光光（808 nm）照射下4T1乳腺癌细胞活性也随之降低,同时正常细胞比肿瘤细胞具有更强的光热耐受性。结论： 成功制备具有荧光性能和光热转换效能的铈掺杂碳量子点,制备的碳量子点可将近红外的光能转换成热能从而有效杀伤肿瘤细胞。     

靶向MPO的次氯酸荧光探针用于细胞成像

目的：合成靶向髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的次氯酸（hypochloric acid,HClO）荧光探针并评估其HClO示踪活性。方法：以硅罗丹明为荧光团合成SiRho-GABA-KYC,紫外分光光度计和荧光分光光度计检测其紫外光谱和荧光光谱以及pH稳定性和选择性,CCK-8法检测细胞毒性,用共聚焦显微镜进行细胞荧光成像。结果：合成了SiRho-GABA-KYC,对 HClO响应高,选择性好,细胞毒性小,可示踪HeLa细胞中HClO浓度的变化。结论：探针SiRho-GABA-KYC可用于检测HClO 浓度进而反映MPO催化活性。     

近红外量子点单克隆抗体荧光探针对U14头颈部移植鳞癌的原位可视化成像研究

目的：观察近红外荧光量子点（Near-infrared fluorescent quantum dots,NIRF-QDs）表皮生长因子受体单克隆抗体（Epi－dermal growth factor receptor monoclonal antibody,EGFR mAb）荧光探针对U14头颈部移植鳞癌的原位可视化成像情况。方法：将EGFR mAb偶联发射波长为800 nm的近红外荧光量子点（Quantum dot,QD800）制备近红外量子点表皮生长因子受体单克隆抗体荧光靶向探针（QD800-EGFR mAb）,将高表达表皮生长因子受体的U14鳞癌细胞和QD800-EGFR mAb共培养,观察QD800-EGFR mAb与U14细胞表达的EGFR结合情况;建立U14头颈部移植鳞癌裸鼠模型,通过尾静脉注射QD800-EGFR mAb,观察对U14头颈鳞癌活体原位可视化动态成像情况。结果：体外实验证明：QD800-EGFR mAb能与U14细胞表达的EGFR特异性结合;体内活体成像显示：QD800-EGFR mAb静脉注射后能对U14头颈部移植鳞癌进行清楚的原位可视化荧光成像,荧光成像一直持续到24 h,在1～6 h时间段内肿瘤成像最完整和信噪比最高。结论：基于以EGFR为靶点的NIRF-QDs技术对头颈部鳞癌的发生发展、原位可视化成像和个体化治疗具有独特的优势和发展前景。     

谷胱甘肽包被的CdSe/CdS纳米粒子对前列腺癌细胞的荧光标记

目的：以谷胱甘肽（GSH）作为稳定剂,在水溶液中制备稳定的CdSe/CdS核/壳结构的纳米量子点。方法：将CdSe/CdS量子点与前列腺癌特异性抗原（PSA）连接,制备水溶性CdSe/CdS-IgG复合物探针,采用直接和间接两种方法对前列腺癌细胞进行标记成像。结果：用该探针对前列腺癌细胞成像清晰,与传统的异硫氰酸荧光素（FITC）相比,具有更强的荧光强度和光稳定性。结论：间接标记法利用一抗和二抗之间的结合降低了非特异性吸附,量子点探针在细胞表面呈现出明显的荧光信号。     

荧光量子点在纳米药物研究中的应用进展

量子点是一类新型无机纳米荧光探针,在长时间、多色的荧光成像和检测中具有突出优势.近年来发展起来的量子点标记技术推动了纳米药物在细胞、活体动物水平上的研究;基于量子点和荧光成像技术开发的集靶向、成像和治疗作用于一体的多功能纳米药物,有望应用于肿瘤诊断和治疗.本文从量子点作为纳米药物载体、量子点标记纳米药物载体、量子点荧光共振能量转移技术用于纳米药物释放研究以及多功能纳米药物开发这四个方面综述了荧光量子点技术用于纳米药物研究的最新进展,并讨论了该领域未来可能的发展方向.     

一种用于前列腺癌细胞体外检测生物导航纳米探针的制备

目的 制备一种用于对人前列腺癌PC3细胞进行体外检测的粒细胞靶向介导的磁性-荧光纳米探针.方法 制备以Fe3O4为核、表面包被siO2和异硫氰酸罗丹明的具有磁性且携带红色荧光的纳米材料,将其与正常人外周血粒细胞按不同比例混合,分别孵育不同时间以检测纳米材料对粒细胞的毒性.选择最佳比例将纳米材料和粒细胞体外结合,得到粒细胞靶向介导的磁性-荧光纳米探针;将PC3细胞与正常人全血细胞分别以不同比例混合,加入上述探针,于荧光显微镜下观察探针的靶向情况.结果 在实验所用的浓度和作用时间范围内,制备的纳米探针对粒细胞存活率无明显影响.镜下可见纳米探针在PC3细胞周围富集,形成“花瓣样”结构,而全血细胞周围无探针富集.结论 本研究制备的磁性-荧光纳米探针不会对粒细胞本身产生明显毒性,利用粒细胞对肿瘤细胞的生物靶向作用可使纳米探针有效地靶向检测肿瘤细胞.     

活性氧介导紫花牡荆素诱导卵巢癌HO-8910细胞调亡

目的:探讨紫花牡荆素(Casticin,CAS)诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡是否涉及活性氧生成和线粒体膜去极化。方法:体外培养HO-8910细胞。AnnexinⅤ/PI双染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针FCM检测细胞活性氧生成;Rh123探针FCM分析细胞线粒体跨膜电位。结果:CAS诱导HO-8910细胞凋亡率增高,呈剂量依赖性。CAS以浓度依赖方式增高HO-8910细胞内活性氧水平。CAS处理细胞的Rh123平均荧光强度显著降低,表明CAS具有诱导细胞线粒体膜去极化作用。N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)部分拮抗CAS诱导细胞凋亡,并能减弱CAS诱导活性氧生成和线粒体膜去极化作用。结论:CAS诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡作用机制可能与促进细胞活性氧生成介导的线粒体膜去极化相关。     

整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型的建立

目的建立整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型,实时观察卵巢癌发展、转移的规律。方法将pEGFP-N1表达质粒转染入人卵巢癌细胞株HO-8910中,建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的卵巢癌细胞株pEGFP-N1/HO-8910,裸鼠皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞,利用肿瘤细胞表达EGFP的特点,借助整体荧光成像系统,并利用IPP5.0软件采集、分析卵巢癌细胞发出的荧光信号,实时观察卵巢癌细胞在裸鼠皮下的生长情况,利用卵巢癌外科原位手术移植方法建立卵巢癌原位及转移动物模型,应用病理学方法对卵巢癌原位及转移动物模型进行评价和鉴定。结果卵巢癌细胞pEGFP-N1/HO-8910稳定、高效表达EGFP。皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞后,可以在动物活体外实时观察肿瘤的皮下生长情况,并进行定量分析,利用外科原位移植的方法建立的卵巢癌原位动物模型,成功率达到100%。手术后2周,裸鼠卵巢原位成瘤未发现有转移情况,6周后处死的裸鼠中,有2只(33.3%)发生腹腔转移(癌灶转移到了肠管),在这2只裸鼠中有1只同时出现肝转移。通过病理学方法验证了可视化模型的可靠性。结论整体可视化卵巢癌动物原位及转移模型是研究卵巢癌发展及转移的可靠有效的观察模型。     

Gene expression profile differences in high and low metastatic human ovarian c ancer cell lines by gene chip

目的：用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO-8910PM和HO-8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法：按一步法分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢组织的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的高低转移人卵巢癌细胞及对照组织的mRNA逆转录合成以Cy5和Cy3标记的cDNA一链做探针,分别混合后在2张含有4096条双点人类全长基因的芯片上进行杂交。经洗片后用ScanArray3000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用ImaGene3.0软件对扫描图像进行数字化处理,计算机分析高低转移人卵巢癌细胞系之间及与正常卵巢上皮基因表达谱差异。结果：人卵巢癌细胞系HO-8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。高转移人卵巢癌细胞系HO-8910PM与母系HO-8910比较差异2倍以上共有165个基因,其中两株细胞系比较差异3倍以上共有21个基因。结论：两株人卵巢癌细胞系与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展及高转移特性有关。本实验说明利用基因芯片对基因表达谱的检测可以为人体卵巢癌的基因诊断、治疗和预防提供新的方向。     

二氢杨梅素诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡及机制研究

目的二氢杨梅素体外对人卵巢癌HO-8910细胞生长、凋亡的影响,及其作用机制的探讨。方法体外培养HO-8910细胞,以不同浓度(10、20、40 μmol/L)的二氢杨梅素作用于HO-8910细胞,MTT法及CCK-8法检测对细胞生长的抑制作用;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡情况;Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、ERK、p-ERK蛋白表达情况。结果MTT和CCK-8结果均显示二氢杨梅素可浓度依赖性地抑制HO-8910细胞的生长;流式细胞仪结果显示二氢杨梅素可浓度依赖性促进HO-8910细胞凋亡;Hoechst 33258荧光染色结果显示,二氢杨梅素作用后的HO-8910细胞呈现典型凋亡形态学改变;Western blotting结果显示二氢杨梅素可上调HO-8910细胞Caspase-3和Bax水平,下调Bcl-2、ERK、p-ERK水平(P < 0.05)。结论二氢杨梅素具有抗人卵巢癌HO-8910细胞活性的作用,并诱导其凋亡,其作用机制与调控ERK/MAPK信号通路有关。     

双氢青蒿素对卵巢癌生长的抑制作用及其机制的研究

目的研究双氢青蒿素对体内外卵巢癌生长的抑制作用及其机制。方法双氢青蒿素卵巢癌细胞株HO-8910PM 24h后,CCK-8法检测细胞增殖;ELISA法检测细胞凋亡;以DCFH-DA为荧光探针检测卵巢癌细胞内活性氧(reactiveoxygen species,ROS)水平;Western blotting检测卵巢癌细胞中keap1蛋白、胞核Nrf2蛋白的表达;建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,免疫组织化学法检测肿瘤组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxi-dase,GPX)的阳性表达。结果与对照组相比,双氢青蒿素可明显抑制体外卵巢癌细胞生长,并明显诱导细胞凋亡;双氢青蒿素可显著下调卵巢癌细胞胞核卵巢癌蛋白表达,而促进细胞内Keap1蛋白表达;化学显示法结果显示,双氢青蒿素使卵巢癌细胞SOD、GPX的活性明显降低;双氢青蒿素亦可明显降低卵巢癌肿瘤组织中SOD和GPX的阳性表达。结论双氢青蒿素可显著抑制卵巢癌细胞的生长,该作用可能通过Nrf2-Keap1信号通路来促进卵巢癌细胞内活性氧的产生,进一步促进细胞凋亡。     

染料木黄酮诱导人卵巢癌HO-8910细胞凋亡的实验研究

目的研究染料木黄酮对人HO-8910卵巢癌细胞的抑制效应和诱导凋亡作用,探讨其机制。方法将不同浓度的染料木黄酮作用于人HO-8910卵巢癌细胞,利用MTT法检测其有效作用浓度,分别采用瑞氏染色、TUNEL、流式细胞仪观察和检测HO-8910细胞凋亡情况。结果MTT法测得其IC50值为28.63 mg/L,浓度为8~128 mg/L的染料木黄酮具有诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡的作用,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论染料木黄酮具有抗卵巢癌作用,其重要作用机制之一是诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡。     

以慢病毒构建的GFP阳性卵巢肿瘤细胞中侧群细胞的分离和动物活体内示踪

 目的 通过慢病毒将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP)基因转入卵巢癌细胞中,研究慢病毒感染对细胞泵出Hoechst 33342能力的影响,追踪GFP(+)侧群（side population,SP）细胞在裸鼠体内的荧光表达和肿瘤成像。方法 选用人卵巢癌细胞株HO-8910PM,以慢病毒感染GFP基因至人卵巢癌细胞株HO-8910PM,摸索以Ubiquitin启动子构建的慢病毒颗粒对该细胞的最佳感染复数（multiplicity of infection,MOI)。以流式细胞仪分选表达GFP的卵巢癌细胞株,获得高纯度的GFP(+)HO-8910PM,检测GFP表达对Hoechst 33342染色的影响。再以流式细胞仪分选GFP(+)SP细胞,将分选的GFP(+)SP细胞注射入裸鼠皮下,观察GFP(+)SP细胞的致瘤能力,并在体内观测GFP(+)SP来源肿瘤的荧光成像。结果 Ubiquitin启动子构建的慢病毒感染不影响卵巢癌细胞拒染Hoechst 33342的能力,分选的GFP(+)SP细胞仍能在裸鼠体内形成表达GFP的肿瘤,成瘤能力和未感染细胞相比无显著变化,GFP阳性肿瘤在成像系统中可见荧光表达。结论 慢病毒感染不影响卵巢癌细胞拒染Hoechst 33342的能力,慢病毒感染后分选的GFP(+)SP细胞仍能在裸鼠体内形成表达GFP的肿瘤,成瘤能力和未感染细胞相比无显著变化,GFP标记可以作为研究卵巢癌细胞在动物活体内生物学行为的示踪标记。     

乙酰肝素酶基因表达对人卵巢癌细胞系侵袭转移能力的影响

目的:探讨乙酰肝素酶的基因表达,对卵巢癌细胞转移侵袭能力的影响。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞HO-8910和HO8910-PM的体外侵袭能力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交检测细胞乙酰肝素酶mRNA的表达情况;用MTT观察细胞生长能力的变化。结果:MTT检测结果显示卵巢癌细胞HO8910-PM细胞生长速度较快,而HO-8910细胞生长速度较慢。RP-PCR提示及原位杂交结果提示乙酰肝素酶在高转移性HO8910-PM细胞中表达强于转移性HO-8910细胞。Boyden小室体外侵袭实验表明,卵巢癌细胞HO8910-PM体外侵袭力较强,其穿膜细胞数为20.1±0.312,而HO-8910细胞体外侵袭力较弱,其穿膜细胞数为11.3±0.024。两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:乙酰肝素酶基因的表达,能促进瘤细胞的生长和转移能力。     

CXCL12/CXCR-4对卵巢癌高低转移细胞的作用机制探讨

目的探讨趋化因子CXCL12及其受体CXCR-4对人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910增殖、迁移作用的差异。方法采用流式细胞术分析HO-8910PM及HO-8910细胞中CD44、CD49e、E-cad-herin的表达差异;RT-PCR检测CXCR-4在HO-8910PM及HO-8910细胞中的转录水平差异;比较不同浓度CXCL12对HO-8910PM及HO-8910细胞增殖、迁移能力及对其表面相关黏附分子表达水平的影响。结果流式细胞术检测显示HO-8910PM及HO-8910细胞均表达CD44（97.6%vs 96.2%）,E-cadherin在前者不表达（6.5%）,后者高表达（92.5%）;CXCR-4在HO-8910PM中高表达（93.3%）,在HO-8910中不表达（5.7%）;CXCL12上调HO-8910PM中CD49e的表达（27.6%vs 83.2%,P〈0.05）,并且可促进细胞的增殖和移行。结论趋化因子CXCL12及其受体CX-CR-4在卵巢癌的增殖及侵袭转移中具有重要作用。