淫羊藿苷联合齐墩果酸对RAW264.7小鼠巨噬细胞迁移和M1极化的影响

【目的】探讨淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对RAW264.7巨噬细胞迁移及极化的影响,并探究雌激素受体在此过程中的作用。【方法】培养RAW264.7巨噬细胞,随机分为空白组[不加脂多糖(LPS)及药物]、LPS组(加入终浓度为20μg/L的LPS)、1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(终浓度1×10-3 mmol/L)+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780(终浓度1×10-3 mmol/L)+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组。应用Transwell小室迁移实验观察淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对LPS诱导的巨噬细胞迁移效应的影响;应用流式细胞术观察淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用对LPS诱导的巨噬细胞M1极化的抑制作用,并用雌激素受体阻断剂ICI183780观察雌激素受体在这个过程中的作用。【结果】Transwell小室迁移实验结果表明:与空白组比较,LPS组可显著促进RAW264.7巨噬细胞的迁移(P0.05);与LPS组比较,ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组均可显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的迁移(P0.05),且ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组作用优于ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组(P0.05)。流式细胞术检测结果显示:与空白组比较,LPS组CD11c+表达显著升高(P0.05),说明20μg/L的LPS可以刺激RAW264.7巨噬细胞,使其向M1极化;与LPS组比较,1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组可协同LPS作用于RAW264.7巨噬细胞,使其向M1极化(P0.05);与LPS组比较,ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组、ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组均可显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞向M1极化(P0.05),且ICI182780+3.0μmol/L淫羊藿苷+3.0μmol/L齐墩果酸组作用优于ICI182780+1.5μmol/L淫羊藿苷+1.5μmol/L齐墩果酸组(P0.05)。【结论】淫羊藿苷与齐墩果酸联合使用可能通过雌激素受体产生促进RAW264.7巨噬细胞的迁移和M1极化的作用,并在雌激素受体受到抑制后产生相反的作用。     

黄芪甲苷促M2型巨噬细胞极化的作用研究

目的 探讨黄芪甲苷对M2型巨噬细胞极化的影响.方法 黄芪甲苷体外作用小鼠原代巨噬细胞,用流式细胞仪检测其表面分子(CD206、MHCⅡ和CD80/86)表达,Real time-PCR检测M1/M2型巨噬细胞特征基因(iNOS、YM1和Arg1)的表达,ELISA测定炎症相关细胞因子(TNF-α、IL-6、TGF-β)的表达.结果 黄芪甲苷单独处理未能诱导M2型巨噬细胞生成,但其与IL-13联合处理可明显上调M2型巨噬细胞标志CD206、YM1和Arg1的表达,下调抗原提呈相关分子MHCⅡ和CD80/86的表达,促进抑炎细胞因子TGF-β的分泌.结论 黄芪甲苷通过协同作用方式促进M2型巨噬细胞极化.     

中药喘可治对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用机理研究

目的研究中药喘可治(Chuankezhi,CKZ)对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用的机理。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,分别加入巴戟天(Bajitian,BJT)提取物(50μg·mL-1)、淫羊藿(Yinyanghuo,YYH)提取物(100μg·mL-1)和喘可治(50μg·mL-1BJT+100μg·mL-1YYH),预孵育4h后,加入刺激剂,12h后,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果与对照组相比,巴戟天提取物处理组中CD3+T淋巴细胞CD69的表达水平明显升高;与刺激组相比,巴戟天提取物可以协同刺激CD69的表达。淫羊藿提取物对静息状态下的CD+3T淋巴细胞CD69的表达作用不明显,但可以抑制刺激剂引起的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。与前两者相比,喘可治则呈现明显的双向免疫调节作用,即上调静息状态的CD+3T淋巴细胞CD69的表达,下调刺激状态的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。结论喘可治对T淋巴细胞活化的双向调节作用是巴戟天和淫羊藿共同作用的结果,其中巴戟天具有促进免疫应答的作用,而淫羊藿具有抑制免疫应答的作用。     

淫羊藿苷及其代谢产物脱水淫羊藿素促血管内皮细胞增殖的初步机制研究

目的研究淫羊藿苷及其代谢产物脱水淫羊藿素脐静脉血管内皮细胞的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞,用CCK-8法检测淫羊藿苷和脱水淫羊藿素(1μM)对血管内皮细胞的增殖能力影响。Real-time PCR法检测与血管形成相关基因的表达,探讨淫羊藿苷和脱水淫羊藿素对血管形成的分子机制。结果淫羊藿苷和脱水淫羊藿素均具有轻微的促血管内皮细胞增殖的作用。Real-time PCR结果显示,淫羊藿苷可以上调血管内皮生长因子(VEGFA)、乏氧因子(HIF-1α)和金属基质蛋白酶(MMP-2)表达,下调单核细胞趋化蛋白(MCP-1)和白细胞介素(IL-8)基因表达。脱水淫羊藿素则可以上调上述所有基因表达。结论淫羊藿苷可以单独或通过其代谢产物脱水淫羊藿素上调血管形成相关基因VEGFA、HIF-1α、MMP-2、MCP-1和IL-8基因表达,进而促进血管内皮细胞增生及血管形成。     

淫羊藿苷对骨髓问充质干细胞免疫调控能力的影响

目的研究淫羊藿苷对人骨髓问充质干细胞（MSCs）免疫调控能力的影响。方法从人骨髓中分离MSCs并进行传代培养,通过流式细胞术观察其表型。选取第5代MSCs进行研究,通过混合淋巴增殖反应和定量PCR方法检测淫羊藿苷对MSCs免疫抑制能力和免疫调控相关基因表达情况的影响。结果所获得的骨髓贴壁细胞CD34和CD45表达阴性,CD44、CD71、CD90和CDl05阳性表达,符合MSCs的特征。在体外混合淋巴细胞培养体系中,淫羊藿苷处理后的MSCs对淋巴细胞增殖的抑制作用增强,且淫羊藿苷处理后的MSCs中表达更多的HMOX-1、IL-10、iNOS和IL-2基因,而IL-1α、IL-1β和IFN-γ基因的表达水平下降。结论淫羊藿甘可提高骨髓MCSs的免疫抑制能力,淫羊藿苷处理后的MSCs免疫抑制相关基因表达增加,促炎相关基因表达减弱。     

淫羊藿甙诱导MSCs向成骨细胞分化过程中对Wnt信号通路的影响

【目的】探讨淫羊藿甙诱导骨髓间充质干细胞(MSCS)向成骨细胞分化过程中对Wnt信号通路的影响。【方法】采用密度梯度离心法获得人骨髓间充质干细胞,采用含40滋g/L淫羊藿甙诱导液诱导其向成骨细胞分化,通过Western blot方法检测Wnt通道相关蛋白表达水平,荧光定量PCR方法检测Wnt通道相关基因表达水平。【结果】原代MSCs呈梭形,淫羊藿甙诱导12 d后淫羊藿甙组见明显结节形成,经细胞碱性磷酸酶染色,可见细胞内蓝色颗粒,细胞聚集区成紫黑色;21 d后茜素红染色可见红色结节堆积。MSCs经淫羊藿甙诱导21 d后,Wnt3a、茁-catenin蛋白表达较对照组显著增高,Wnt3a、茁-catenin mRNA表达较对照组显著上调(均P0.05)。【结论】淫羊藿甙可通过促进Wnt3a/茁-catenin信号通路促进MSCs向成骨细胞分化。     

穗花杉双黄酮激活PPAR-α/γ抑制THP-1源性巨噬细胞向M1型极化

目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制。方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组：不同浓度的（5、10 μmol/L）穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组：溶媒3‰DMSO;无药对照组：不加穗花杉双黄酮处理。显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达。结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达（P<0.05）,同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达（P<0.05）。随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强（P<0.05）,且高浓度具有杀伤作用。穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白。结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化。     

淫羊藿提取物抗抑郁作用研究

目的研究淫羊藿提取物的抗抑郁作用。方法采用行为绝望模型悬尾试验(TST)和强迫游泳试验(FST)研究淫羊藿提取物对小鼠行为、脑内单胺氧化酶A(M AO-A)、单胺氧化酶B(M AO-B)活性与肝脏中M AO-A和M AO-B活性及丙二醛(M DA)水平的影响;采用利血平拮抗模型探讨淫羊藿提取物可能存在的抗抑郁作用途径。结果淫羊藿提取物(25、50、100、200 m g/kg)能显著缩短TST和FST小鼠悬尾和游泳不动时间,显著抑制TST小鼠脑和肝组织M AO-A和M AO-B活性,逆转肝组织M DA水平的升高。淫羊藿提取物对利血平所致小鼠体温的下降无明显改善作用。结论淫羊藿提取物具有一定抗抑郁作用。     

铁离子通过ROS-乙酰化P53促进巨噬细胞M1型极化

目的 探讨铁离子在促进巨噬细胞向促炎型表型(经典激活型,M1)极化的具体机制.方法 Western blot、qRT-PCR、流式细胞术(FCM)、组织免疫荧光、ROS探针(DCFH-DA)分别检测巨噬细胞极化指标(IL-1β、TNF-α、IL-10、TGF-β、CD86及CD206等)、p53、乙酰化p53和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;通过还原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)和P300/CBP乙酰化转移酶抑制剂(C646)分别处理巨噬细胞后,观察巨噬细胞的极化状态;通过皮下注射H22肝癌细胞,建立BALB/c裸鼠皮下H22肝癌细胞模型,给予铁剂处理后,观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophage,TAM)极化状态.结果 铁剂处理促鼠源性巨噬细胞(RAW 264.7)向M1型极化并高表达乙酰化P53(P ＜0.05);抑制p300/CBP乙酰化转移酶,能够明显抑制p53乙酰化、减弱M1极化效应(P＜0.05);小鼠皮下瘤模型中,经铁剂处理后,小鼠皮下瘤组织中CD86高表达、CD206低表达,并有更多的ROS产生.结论 细胞内铁过载促巨噬细胞向M1型极化,其机制可能与ROS产生,提高p300/CBP乙酰化转移酶活性,促进p53乙酰化有关.     

淫羊藿苷对慢性阻塞性肺疾病模型的抗炎和抗氧化作用

目的探讨淫羊藿苷对香烟烟雾和脂多糖(LPS)刺激的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)和大鼠模型炎症的影响。方法以LPS刺激NR8383细胞系建立细胞炎症模型,以香烟烟雾和LPS联合刺激SD大鼠建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型,采用淫羊藿苷干预。采用MTT检测细胞活力;采用微板酶标法和分光光度计检测细胞培养上清和血清中NO,i NOS和SOD含量;采用流式细胞技术检测外周血CD4+和CD8+T细胞含量;采用病理切片HE染色观察肺组织病理变化。结果体外研究表明:淫羊藿苷80μM时显示出最接近空白组的细胞活力,淫羊藿苷10、20、40、80和160μM均显示出抑制NO和i NOS的释放(P0.05),而淫羊藿苷5、10、20、40、80和160μM均提高了SOD的活力(P0.05)。体内研究表明:淫羊藿苷干预之后的大鼠血清NO和i NOS释放均明显降低,SOD活力显著升高(P0.05),CD8+T细胞比例比例下降(P0.05),CD4+/CD8+T细胞的比值升高(P0.05),减轻大鼠肺部炎症细胞浸润。结论淫羊藿苷是一种安全有效的天然抗炎抗氧化药物,可能通过改变NO、i NOS、SOD和T淋巴细胞的含量来实现疗效。     

IL-4和TGF-β通过调控TFEB表达和溶酶体定位调节Mφ杀菌功能

目的:探讨IL-4和TGF-β对Mφ溶酶体功能和定位的影响及可能机制。方法:骨髓细胞经M-CSF刺激培养成骨髓来源巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophages, BMDMs)。分别使用PBS、IL-4、TGF-β或TGF-β+IL-4刺激BMDMs,流式细胞仪检测BMDMs溶酶体降解DQ-OVA的功能;激光共聚焦检测溶酶体胞内分布;免疫印迹和免疫荧光检测溶酶体关键转录因子TFEB的表达和活化;庆大霉素保护实验检测BMDMs杀伤细菌的功能。结果:与对照组比较,IL-4增强溶酶体降解DQ-OVA的功能;促进溶酶体向核周分布;上调TFEB的表达和活化;并且增强巨噬细胞杀菌功能。而与对照组比较,TGF-β抑制溶酶体降解DQ-OVA的功能;阻止其核周分布;下调TFEB表达和活化;并且抑制其杀菌功能。结论:IL-4和TGF-β通过调控TFEB表达和溶酶体定位调节Mφ杀菌功能。     

淫羊藿在骨膜附加活性材料nHAC/PLA修复颌骨缺损中的影响

【目的】观察淫羊藿对纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)在骨缺损修复过程中的成骨作用。【方法】制备16只兔双侧下颌骨10 mm×8 mm贯穿性缺损模型,随机分为中药淫羊藿组与对照组,2组左侧缺损不添加材料,右侧缺损处添加活性材料nHAC/PLA。术后2、4、8、12周分别处死动物,从大体、影像学、组织学方面进行观察,并计量新骨面积。【结果】影像学观察结果显示淫羊藿右侧组、对照右侧组、淫羊藿左侧组2、4、8、12周缺损区密度均高于对照左侧组。组织学观察可见淫羊藿右侧组、对照右侧组各时间点骨缺损区新骨形成均优于左侧组,新生骨及新生血管的量多。随着时间延长,淫羊藿右侧组、对照右侧组有大量骨样组织长入活性材料,骨成熟度增高,淫羊藿右侧组可见残留材料逐渐被活跃生长的骨组织包围并替代。分别与同侧对照组比较,淫羊藿左、右侧组新骨面积均显著升高,差异有统计学意义(P0.05);同组左侧与右侧分别比较,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】淫羊藿在骨缺损修复期间有良好的促进骨愈合的作用,nHAC/PLA活性材料具有良好的生物相容性、骨传导性及骨诱导活性,有望应用于临床修复骨缺损。     

Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用研究

目的：探讨Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用。方法：培养人单核细胞株THP-1细胞,提取人外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）、小鼠骨髓来源巨噬细胞（bone marrow-derived macrophage,BMDM）。随机分为对照组和实验组,实验组用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,100 ng/mL）复合干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ,20 ng/mL）干预（THP-1 18 h,PBMC、BMDM 24 h）构建巨噬细胞M1型极化模型。qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测2组M1型极化相关标志物,同时利用qRT-PCR和Western blot检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平。结果：与对照组相比,实验组在LPS+IFN-γ刺激后,qRT-PCR检测THP-1细胞M1型极化标志物：肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）（t=-4.360,P=0.007）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）（t=-8.329,P=0.000）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）（t=-2.924,P=0.033）、CD14（t=-2.858,P=0.035）、CD80（t=-3.433,P=0.019）,PBMC细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-2.893,P=0.034）、IL-1β（t=-3.606,P=0.015）、IL-6（t=-2.895,P=0.034）、CD14（t=-2.645,P=0.046）、CD80（t=-3.648,P=0.015）,BMDM细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-6.123,P=0.002）、IL-1β（t=-2.697,P=0.043）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1,MCP-1）（t=-4.335,P=0.007）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）（t=-3.607,P=0.015）均明显增加,Western blot检测THP-1细胞M1型极化标志物：TNF-α（t=-3.827,P=0.031）、IL-1β（t=-4.189,P=0.025）、IL-6（t=-5.345,P=0.002）均明显增加,流式细胞术检测THP-1细胞M1型极化标志物HLA-DR（t=-3.270,P=0.017）、BMDM细胞M1型极化标志物F4/80+CD11c+（t=-3.833,P=0.009）均明显增加,提示M1型极化模型构建成功;在构建成功的M1型极化模型中,qRT-PCR检测THP-1细胞、PBMC细胞和BMDM细胞MEFV基因表达水平较对照组明显增加（t=-3.226,P=0.023;t=-2.989,P=0.030;t=-2.891,P=0.034）,Western blot检测THP-1细胞Pyrin蛋白表达水平较对照组明显增加（t=-8.591,P=0.000）。结论：巨噬细胞M1型极化中Pyrin表达增加,Pyrin可能与巨噬细胞M1型极化相关。     

淫羊藿苷促进家兔股骨牵拉成骨新骨形成的影像学研究

【目的】建立家兔股骨骨缺损行牵拉成骨的模型;观察淫羊藿苷对牵拉成骨后新骨形成的影响,寻找促进牵拉区快速成骨的方法。【方法】骨缺损造模成功后,安装外固定支架,将造模成功的24只家兔随机分为2组,实验组于骨牵拉间隙区局部注射淫羊藿提取物淫羊藿苷液,对照组局部注射重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2,剂量均为100μg/kg),于静息期后第0、1、4、6周拍X片,在牵拉期后第6周对标本进行micro-CT骨扫描检测,观察2组成骨质量,比较新骨区骨矿含量、骨密度等情况。【结果】实验组影像表现及骨矿含量、骨密度测量结果显示,成骨速度与质量皆优于对照组。【结论】初步探索出家兔股骨牵拉成骨实验造模的方法;淫羊藿苷能促进牵拉成骨新骨形成的成骨速度与质量。     

华蟾素通过调控M2型巨噬细胞极化抑制结直肠癌转移

目的 探讨华蟾素通过调控M2型巨噬细胞极化抑制结直肠癌转移的作用。方法 将THP-1诱导成M0型巨噬细胞,收集HCT116细胞的条件培养基,刺激M0型巨噬细胞,通过流式细胞术、RT-qPCR、ELISA实验观察M2型巨噬细胞极化状态;收集M0型巨噬细胞和HCT116-Mφ细胞的条件培养基,刺激HCT116细胞,通过划痕实验和Transwell实验观察迁移和侵袭能力;用CCK-8实验检测华蟾素对HCT116细胞活力的影响;收集HCT116和HCT116+华蟾素的条件培养基,刺激M0型巨噬细胞,通过流式细胞术、RT-qPCR、ELISA实验观察M2型巨噬细胞极化状态;收集HCT116-Mφ细胞和(HCT116+华蟾素)-Mφ细胞的条件培养基,刺激HCT116细胞,通过划痕实验和Transwell实验观察迁移和侵袭能力的改变。结果 M0型巨噬细胞在HCT116细胞的条件培养基刺激后,形态变成梭形的细胞,CD11b⁺CD206⁺细胞比例增高,M2型巨噬细胞标志物白细胞介素-10(IL-10)及转化生长因子-β(TGF-β)表达升高;HCT116细胞在...     

茵陈、赤芍、三棱、淫羊藿对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制

目的 观察茵陈、赤芍、三棱、淫羊藿对低密度脂蛋白氧化修饰的抑制作用。方法 选生长良好的兔胸主动脉传代培养平滑肌细胞(Smooth muscle cell,SMC)(4～5代),将不同浓度茵陈、赤芍、三棱、淫羊藿提取物加入SMC培养液中与低密度脂蛋白(Low density lipoprotein,LDL)、Cu~(2+)孵育,测定培养液丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平。结果 茵陈、赤芍、三棱、淫羊藿各组培养液MDA水平显著低于对照组(P<0.01)。结论 一定浓度的茵陈、赤芍、三棱、淫羊藿提取物抑制LDL氧化修饰。     

冠心平含药血清对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的影响

目的?探讨冠心平（GXP）含药血清对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用。方法?RAW264.7巨噬细胞分为对照组、模型组、GXP低、中、高剂量组,100?ng/mL LPS刺激12?h诱导M1型极化模型,不同浓度GXP含药血清进行干预。ELISA法检测巨噬细胞上清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）含量;流式细胞术检测M1、M2型巨噬细胞特征性表面标记分子CD86、CD206表达水平;qPCR法检测巨噬细胞CD86、CD206 mRNA表达情况。结果?冠心平高剂量显著减少巨噬细胞TNF-α分泌（P<0.01）,各剂量减少TGF-β1分泌（P<0.01）;冠心平低、高剂量显著降低M1型巨噬细胞特征性分子CD86表达（P<0.05）,显著升高M2型巨噬细胞特征性分子CD206表达（P<0.01）;同时冠心平CD206 mRNA表达显著增加（P<0.05）。结论?冠心平含药血清能够抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化而促进M2型极化,这或许是冠心平治疗动脉粥样硬化的潜在机制之一。      

补阳还五汤调控小胶质细胞/巨噬细胞极化抑制大鼠脑缺血后炎症反应研究

[目的]研究补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction, BYHWD)对大鼠脑缺血后小胶质细胞/巨噬细胞M1/M2极化及神经炎症的影响。[方法]采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,缺血90 min后再灌注。将大鼠随机分为假手术组、模型组和BYHWD组,BYHWD组缺血后24h开始予BYHWD(13g·kg-1)灌胃,连续给药14d。缺血后第14天处死大鼠,分别采用Iba1/CD16/32、Iba1/CD206免疫荧光双标染色检测缺血区M1型和M2型小胶质细胞/巨噬细胞表型,qRT-PCR检测M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD86、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的m RNA表达;M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD206、精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)及抗炎因子白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达。[结果]免疫荧光双标染色结果表明,与模型组比较,BYHWD显著减少缺血区M1型小胶质细胞/巨噬细胞(CD16/32+)数量(P0.01),增加M2型小胶质细胞(CD206+)数量(P0.05)。qRT-PCR结果表明,与模型组比较,BYHWD显著下调M1型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD86、iNOS和促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达(P0.01),上调M2型小胶质细胞/巨噬细胞表面标记物CD206、Arg-1和抗炎因子IL-10、TGF-βmRNA表达(P0.01)。[结论] BYHWD可能通过促进激活的小胶质细胞/巨噬细胞从M1型向M2型转换,从而抑制大鼠脑缺血后炎症反应。     

单味淫羊藿对再生障碍性贫血大鼠细胞因子的影响

目的:方法:建立白消安诱发造血功能障碍大鼠模型,胃饲单味淫羊藿,观察细胞因子IL-2、IL-6、IL-1β水平的变化.结果:白消安诱发造血功能障碍大鼠IL-2、IL-6显著高于正常对照组(P<0.05).IL-1β低于正常对照组(P<0.05).单味淫羊藿治疗组IL-2、IL-6显著低于模型组(P<0.05),IL-1β显著高于模型组(P<0.05).结论:单味淫羊藿可通过改善造血系统细胞因子分泌异常,减轻免疫因素对机体的损害,促进骨髓造血功能的恢复.     

IL-1β预处理脂肪间充质干细胞促进VEGF蛋白分泌和巨噬细胞M2型极化的研究

目的探讨白细胞介素（IL）-1β预处理脂肪间充质干细胞（ADMSCs）对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白分泌和巨噬细胞M₂型极化的影响及作用机制。方法IL-1β预处理ADMSCs 24 h,Western blot法检测ADMSCs中环氧合酶-2（COX-2）蛋白表达,ELISA法测定ADMSCs培养基中前列腺素E₂(PGE₂)和VEGF蛋白质量浓度; IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基培养丙二醇甲醚醋酸酯（PMA）-U937巨噬细胞（M0巨噬细胞）72 h后,实时荧光定量PCR法检测PMA-U937细胞CD163（巨噬细胞M₂型极化标志物）和IL-10 mRNA表达。慢病毒干扰ADMSCs细胞中COX-2表达后,观察ADMSCs培养基中VEGF蛋白质量浓度（ELISA法）和PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA的表达（实时荧光定量PCR法）。结果IL-1β预处理ADMSCs细胞后上调其COX-2蛋白表达,增加PGE₂和VEGF蛋白分泌（P<0.05）;IL-1β预处理的ADMSCs细胞培养基可上调PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达水平（P<0.01）。干扰ADMSCs细胞中COX-2蛋白表达后,可抑制IL-1β预处理的ADMSCs细胞中VEGF蛋白分泌（P<0.05）,亦可抑制其对PMA-U937巨噬细胞中CD163和IL-10 mRNA表达的影响（P<0.05）。结论IL-1β预处理ADMSCs细胞可通过COX-2-PGE₂信号轴,增加VEGF蛋白分泌,以及诱导PMA-U937巨噬细胞M₂型极化,提示IL-1β预处理能够增强ADMSCs细胞抗炎活性。