黄荆子乙酰乙酯提取物对人宫颈癌细胞的抑制作用

目的研究黄荆子乙酰乙酯提取物（EVn-50）抗人宫颈癌作用。方法MTT比色法测定细胞增殖活性；裸鼠异种移植瘤模型治疗实验评价EVn-50治疗人宫颈癌的有效性，SP免疫组化观察移植瘤细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果6种黄荆子提取物对人宫颈癌细胞增殖均有抑制作用，以EVn-50效价强度最大，其IC50值为5．52μg／mL。EVn-50（5mg／kg、10mg／kg、20mg／kg）的移植瘤生长抑制率分别为26．7％、31．8％、52．5％；其瘤重抑制率分别是40．0％，49．6％，54．5％。EVn-50能有效下调移植瘤细胞PCNA表达。结论EVn-50具有显著抗人宫颈癌作用，其作用机制与下调人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞PCNA表达有关。     

黄荆子乙酸乙酯提取物对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)对人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:采用人肝癌Hep G2裸鼠模型评估EVn-50在体治疗肝癌的有效性;免疫组化染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、CD31蛋白表达。结果:EVn-50显著抑制人肝癌Hep G2裸鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性;5,10,20 mg/kg的EVn-50对移植瘤的瘤重抑制率分别为55%,62%,69%。免疫组化染色结果显示,EVn-50(5,10,20 mg/kg)与生理盐水组比较,PCNA、VEGF、CD31的表达下调,亦呈剂量依赖性。结论:EVn-50具有抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长作用,其作用机制可能与其下调PCNA、VEGF、CD31的表达有关。     

黄荆子提取物对人卵巢癌CoC1细胞生长的影响

目的观察4种黄荆子提取物（EVn-10、EVn-20、EVn-30、EVn-50）对人卵巢癌CoCl细胞生长的影响,筛选出抑制增殖活性最强的提取物。方法体外培养人卵巢癌CoCl细胞,分为4个实验组及3个对照组,以不同浓度的提取物及对照药物孵育48h,MTT比色法测定四种提取物对人卵巢癌CoCl细胞增殖活性的影响。结果4种黄荆子提取物对人卵巢癌CoCl细胞增殖活性均有抑制作用,以EVn-50效价最高,其IC50为1．02μg／mL,效价强度与DDP（IC50为0．82μg／mL）接近。结论黄荆子乙酸乙酯提取物EVn-50能有效抑制人卵巢癌CoCl细胞增殖和生长。     

黄荆子乙酸乙酯提取物对HL-60细胞生长和凋亡的影响

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制人急性髓性白血病HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。方法:体外培养HL-60细胞和人外周血单核细胞(PBMC),MTT法测定细胞增殖;软琼脂培养集落形成法检测细胞生长;PI染色流式细胞术分析细胞凋亡。结果:EVn-50对HL-60细胞增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性;而对PBMC的增殖活性影响小。EVn-50对HL-60细胞集落形成有抑制效应,呈浓度依赖性。EVn-50有效诱导HL-60细胞凋亡。结论:EVn-50具有抑制HL-60细胞生长和诱导凋亡作用。     

Genistein对乳腺癌异种移植瘤的抑制作用及其与uPA表达变化的关系

目的探讨三羟异黄酮(genistein)对原癌基因HER-2/neu高表达乳腺癌异种移植瘤的抑制作用及其与尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase type plasminogen activator, uPA)表达变化的关系.方法应用基因转染技术建立HER-2/neu高表达的乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/HER-2).BALB/c裸鼠皮下接种MCF-7和MCF-7/HER-2细胞,其中接种MCF-7/HER-2细胞的裸鼠随机分为3组:对照组、genistein处理组、HER-2/neu抗体处理组.应用免疫组化法观察移植瘤细胞生长能力,应用Western blot 法观察移植瘤uPA的表达变化.结果 MCF-7/HER-2移植瘤与MCF-7移植瘤相比细胞增殖能力较强且uPA表达增加,而MCF-7/HER-2移植瘤经genistein和HER-2/neu抗体处理后,移植瘤细胞增殖能力减弱,其uPA表达降低.结论 Genistein能有效抑制HER-2/neu高表达乳腺癌异种移植瘤细胞的增殖能力,且这种作用与uPA的表达有关.     

聚(对氧环己酮-co-l-苯丙氨酸氮芥)纳米颗粒用于乳腺癌移植瘤治疗

目的:探讨具有缓释功能的聚(对氧环己酮-co-l-苯丙氨酸氮芥)静电喷雾纳米颗粒(PDCM NP)对乳腺癌细胞及裸鼠移植瘤的增殖抑制作用.方法:不同l-苯丙氨酸氮芥含量的PDCM NP分别与人乳腺癌细胞MCF-7共同培养1、3、5、7 d后观察PDCM NP对细胞增殖的影响.荧光标记的PDCM NP与MCF-7细胞共同培养24 h后在荧光显微镜下观察MCF-7对PDCM NP的吞噬情况.0.1 mL 10 mg/mL的PDCM-2 NP混悬液用于治疗皮下种植MCF-7细胞的移植瘤裸鼠20 d,期间测量、记录肿瘤体积变化.20 d后处死,肿瘤组织进行苏木精-伊红染色(HE)、TUNEL染色以统计瘤内细胞坏死、凋亡状况.结果:PDCM NP可抑制MCF-7细胞增殖,其抑制能力与PDCM所含l-苯丙氨酸氮芥量成正比,另外PDCM NP可被MCF-7吞噬,单次瘤内注射PDCM NP可有效抑制MCF-7移植瘤的增殖.结论:PDCM NP可有效抑制MCF-7细胞及其裸鼠移植瘤的增殖.     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导HL-60细胞分化

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提出物(EVn-50)诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化作用。方法:体外培养HL-60细胞,MTT法测定细胞活性;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞分化形态学变化,间接免疫荧光显微镜观察细胞表面分化抗原CD11b表达。结果:EVn-50抑制HL-60细胞活性,其IC50值为6.29μg/mL,与全反式维甲酸(ATRA)10.35μg/mL相比较强;EVn-50具有诱导HL-60细胞向粒细胞系分化并表达分化抗原CD11b的作用,其阳性表达率呈剂量依赖性升高。结论:EVn-50具有诱导HL-60细胞分化的作用。     

As2O3联合DDP对裸鼠乳腺癌移植瘤作用的研究

目的 探讨三氧化二砷(As23)和顺铂(DDP)联合应用对人乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其机制.方法 建立MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤模型.随机分为4组:对照组、As2O3组、DDP组、As2O3 DDP组(联合组).分别测量裸鼠体质量、瘤质量及瘤体积,透射电镜观察各组移植瘤组织的超微结构,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中Survivin mRNA的表达.结果 在瘤质量及瘤体积方面,联合组与As:O,组、DDP组比较显著减小.电镜下联合组肿瘤细胞内可见典型的凋亡表现:核碎裂,染色质浓缩、边集.RT-PCR结果显示:联合组与As2O3,组、DDP组比较Survivin mRNA条带强度显著减小.结论 As2O3与DDP联合应用对MCF-7裸鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,其作用机制可能与下调Survivin有关.     

黄荆子乙酸乙酯提取物体内抗炎作用及机制

目的研究黄荆子乙酸乙酯提取物（EVn-50）体内抗炎的作用效果及其可能的机制。方法建立四种急性炎症模型,二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,鸡蛋清致大鼠足跖肿胀模型,腹腔注射0.7%醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高模型和腹腔注射去甲斑蝥素悬液致大鼠全身性炎症模型。观察不同浓度的EVn-50对急性炎症模型的抑制作用,用western blot检测全身性炎症大鼠模型血中白细胞p38MAPK蛋白表达情况,用ELLSA检测全身性炎症大鼠模型血清TNF-α、IL-1、IL-6、COX-2炎性细胞因子表达情况,探求EVn-50抗炎可能机制。结果EVn-50对四种急性炎症模型均有显著抑制作用,与NS组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,同时去甲斑蝥素诱导的全身性炎症大鼠血液白细胞p38MAPK蛋白表达降低,TNF-α、IL-1、IL-6、COX-2炎性细胞因子表达减少。结论 EVn-50可以显著抑制各种急性炎症反应,其机制可能是通过抑制p38MAPK细胞信号转导通路实现的。     

重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗研究

目的 探讨重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌移植模型的治疗作用.方法 裸鼠皮下接种MCF-7人乳腺癌细胞,建立人乳腺癌移植模型.用质粒PGL3-DF3-DTA,质粒PGL3-DF3和生理盐水分别给裸鼠移植瘤瘤内多点注射.观察肿瘤大小和组织形态学变化,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡改变.结果 重组质粒PGL3-DF3-DTA组裸鼠乳腺癌生长受到明显抑制,抑制率为50.08%,肿瘤细胞的凋亡率增加.结论 重组质粒PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的生长具有明显抑制作用,为乳腺癌基因治疗提供了新的方法.     

Evn-50对人乳腺癌MCF-7耐三苯氧胺细胞株生长和凋亡的影响

目的:通过研究黄荆子的乙酸乙酯提取物Evn-50在体外对人乳腺癌MCF-7和耐三苯氧胺细胞株(MCF-7/TAM-R)的生长和凋亡的影响,探索Evn-50在逆转乳腺癌耐药中的作用及其可能机制。方法:构建MCF-7/TAM-R细胞系,分别用DMSO、5μmol/L TAM、5μmol/L TAM+50μg/ml Evn-50和50μg/ml Evn-50处理细胞。然后,采用MTT法测定细胞存活率,PI单染流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布情况,免疫蛋白印记法观察Evn-50和TAM单独或联合作用时的机制。结果:Evn-50单药或与TAM联合均可以降低人乳腺癌MCF-7和三苯氧胺耐药细胞株MCF-7/TAM-R的存活率,两药联合作用更为明显,同单用TAM组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Evn-50单药或与TAM联合应用对两株细胞的凋亡均有明显影响,且随着作用时间的延长细胞凋亡逐渐增多,其中以72 h时细胞凋亡率和G2期细胞比例最为明显(P<0.01)。TAM和Evn-50联合处理无论是对MCF-7细胞还是对三苯氧胺耐药细胞MCF-7/TAM-R,均能明显下调p-AKT(Ser473)和p-MAPK44/42(Thr202/Tyr204)蛋白水平。结论:Evn-50能够抑制MCF-7和MCF-7/TAM-R细胞株的生长并诱导细胞凋亡,尤其在Evn-50与TAM联合处理时更为明显。其作用机制可能与AKT和MAPK信号通路的下调相关,但需要进一步研究证实。     

放射性碘化氟维司群对激素依赖性人乳腺癌治疗作用研究

目的 探明碘化氟维司群对人乳腺癌细胞的生长抑制作用及对裸鼠重要脏器的影响.方法 明确碘化氟维司群对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞杀伤作用的不同;建立MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,采用不同方式给药,观察肿瘤、肝肾等重要脏器的情况.结果 MTT实验表明碘化氟维司群对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞具有相似的细胞毒作用,但前者稍强于后者,一过性接触实验表明碘化氟维司群能够与MCF-7细胞结合继续发挥肿瘤抑制效应,而在MDA-MB-231细胞则不然(P＜0.05);经尾静脉注射碘化氟维司群后,肿瘤部位有放射性浓聚,占到注射总量的(4.33±0.28)％,瘤体先缩小后增大,血液中的放射性占到注射总量的(20.76±2.54)％,肝肾等脏器也有放射性分布,其分布符合雌激素受体分布状况;瘤体局部注射显示强大的肿瘤杀伤作用,放射性分布基本局限于瘤体区域.结论 碘化氟维司群对乳腺癌MCF-7细胞有良好的抑制作用,是放疗和内分泌治疗作用的叠加,且对裸鼠的一般状况及重要脏器的影响是可控的.     

沉默RRM1可逆转乳腺癌细胞MCF-7/R对紫杉醇的耐药性

目的阐明沉默核苷酸还原酶M1亚基（RRM1）对乳腺癌耐药细胞MCF-7/R逆转耐药的作用。方法通过高浓度紫杉醇诱 导耐药株MCF-7/R;运用Kaplan-Meier Plotter绘制RRM1基因的生存曲线;通过siRNA沉默MCF-7/R细胞中RRM1基因表达, 并用Western blot 和qRT-PCR方法检测蛋白和基因水平的表达,筛选出高效特异的si-RRM1 序列;将该si-RRM1 序列转染 MCF-7/R细胞,筛选得到能稳定抑制RRM1基因表达的细胞株MCF-7/R/siRNA;四甲基偶氮唑盐（MTT）法和5-乙炔基-2’脱氧 尿嘧啶核苷（EdU）染色法检测RRM1沉默后MCF-7/R细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡,并观察周期、凋 亡相关蛋白的变化;构建裸鼠皮下移植瘤模型,观察沉默RRM1后给予紫杉醇治疗对裸鼠体内抑瘤效果的影响。结果生存曲 线分析显示RRM1基因表达与乳腺癌患者的生存率呈负相关（P=0.000）;MCF-7/R细胞中证实RRM1蛋白和mRNA表达水平 较MCF-7细胞均显著升高（P<0.01）;si-RRM1序列筛选中,转染si-RRM1-04组细胞的RRM1蛋白和mRNA表达量降低最为显 著（P<0.001）;沉默RRM1后,MCF-7/R细胞对紫杉醇的敏感性显著增加,细胞晚期凋亡比例明显升高（P<0.001）,同时降低Akt 蛋白的磷酸化并抑制凋亡蛋白Bcl-2 的表达,促进p53 蛋白表达水平的增加（P<0.001）;裸鼠实验显示,与si-NC组相比,沉默 RRM1后给予紫杉醇治疗可显著抑制裸鼠体内肿瘤的生长（P<0.001）。结论沉默RRM1可通过诱导细胞凋亡增加提高MCF- 7/R细胞化疗敏感性,逆转乳腺癌紫杉醇化疗耐药。     

VEGF介导的双自杀基因系统对乳腺癌细胞的靶向杀伤作用

目的 探讨腺病毒介导VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CD/TK)对乳腺癌细胞MCF-7的体内外靶向杀伤作用。方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CD/TK体外感染表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药GCV和5-FC,用MTT法观察该体系对细胞生长增殖的影响及其旁观者效应;用流式细胞术观察细胞周期及细胞内DNA含量的变化。建立MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤内注射Ad-VEGFP-CD/TK,腹腔注射前药GCV(50mg/kg•d)和5-FC(500mg/kg•d)14天,观察肿瘤生长抑制效应。结果 腺病毒对两种细胞的感染率相似,其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。MTT法检测显示表达VEGF的MCF-7细胞对前药具有较高的敏感性,而不表达VEGF的乳腺上皮细胞对前药不敏感,且观察到该体系对MCF-7细胞明显的旁观者效应。在感染复数为100时,用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰;细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1期比率增多,G2-M及S期细胞减少。在MCF-7裸鼠移植瘤模型中,该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长。结论 VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤人乳腺癌细胞MCF-7并诱导细胞凋亡,并可显著抑制人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长。     

Lentivirus-mediated RNA interference targeting the ObR gene in human breast cancer MCF-7 cells in a nude mouse xenograft model

Background  There is a significant association between obesity and breast cancer, which is possibly due to the expression of leptin. Therefore, it is important to clarify the role of leptin/ObR (leptin receptor) signaling during the progression of human breast cancer.

Methods  Nude mice with xenografts of MCF-7 human breast cancer cells were administered recombinant human leptin subcutaneous via injection around the tumor site. Mice in the experimental group were intratumorally injected with ObR-RNAi-lentivirus, while negative control group mice were injected with the same dose of negative-lentivirus. Tumor size was blindly measured every other day, and mRNA and protein expression levels of ObR, estrogen receptor a (ERa), and vascular endothelial growth factor (VEGF) for each group were determined.

Results  Knockdown of ObR-treated xenografted nude mice with a high leptin microenvironment was successfully established. Local injection of ObR-RNAi-lentivirus significantly suppressed the established tumor growth in nude mice. ObR level was significantly lower in the experimental group than in the negative control group, while the amounts of ERα and VEGF expression were significantly lower in the leptin group than in the control group (P <0.01 for all).

Conclusions  Inhibition of leptin/ObR signaling is essential to breast cancer proliferation and possible crosstalk between ObR and ERa, and VEGF, and may lead to novel therapeutic treatments aiming at targeting ObR in breast cancers.