肥大细胞缺陷大鼠经骨髓移植重建消化道肥大细胞

目的 探讨骨髓移植(BMT)是否能重建肥大细胞缺陷大鼠(Ws/Ws大鼠)的消化道肥大细胞,并了解新生肥大细胞的生长发育特性.方法 42只Ws/Ws大鼠分成对照组及6种毁髓照射剂量组(6.0、7.0、8.0、9.0、10.0和11.0 Gy),每组6只,以确定Co60放射源的适宜毁髓照射剂量.16只Ws/Ws大鼠进行7.5 Gy照射,于照射后第1、5、8、12天检测血象及骨髓象,每个时间点4只,另取4只无照射Ws/Ws大鼠的血象与骨髓象作为对照.将与Ws/Ws大鼠同基因背景的正常BrownNoway (BN)大鼠的骨髓细胞悬液,输注入经7.5 Gy剂量照射后的Ws/Ws大鼠体内,构建BMT-WMWs大鼠.4只雌性Ws/Ws大鼠接受雄性BN大鼠BMT后4周经Y染色体原位杂交(Y-FISH)鉴定BN大鼠骨髓在BMT-Ws/Ws大鼠体内的存活及分化迁移.另使用相同方法构建雄性BMT-Ws/Ws大鼠24只,于移植后5、8、13及23周(各6只)通过阿尔新蓝-番红O染色观察肥大细胞在全消化道的重建情况,对其进行计数,通过Western印迹法定量肥大细胞类胰蛋白酶和糜蛋白酶表达.结果 Y-FISH显示雄性供体的骨髓可在雌性Ws/Ws大鼠体内存活并迁移分化为成熟的消化道肥大细胞.8周时BMT-Ws/Ws大鼠食管、胃及回肠远端肥大细胞数目最多,均明显高于BN对照大鼠[(103±6)比(35±4),(271±23)比(124±13),(200±13)比(103±7)个/mm2,均P＜0.05,n=6);食管及回肠组织类胰蛋白酶含量也最高,明显高于BN对照大鼠(1.3±0.3比0.6±0.2,3.6±0.8比1.9±0.4,均P＜0.05,n=4).13周之后肥大细胞数量及蛋白酶含量逐渐回落.结论 骨髓移植可以重建WMWs大鼠消化道肥大细胞,移植后8周至13周消化道肥大细胞及类胰蛋白酶含量最丰富,此期可作为BMT-Ws/Ws大鼠用于肥大细胞功能实验研究的最佳时间窗.     

疾病小鼠模型的引进及其繁育保种实践

引进疾病小鼠模型是解决国内迅速增长的科研需求的有效途径之一。本文结合工作实际,介绍寻求目标疾病小鼠模型的途径、引进疾病小鼠模型的程序及注意事项、小鼠模型繁育保种的一些体会。     

无毛KM小鼠近交培育的阶段性成果

将本部发现的一只无毛ＫＭ小鼠进行回交和自交后,自１９９５年２月起采取全同胞兄妹交配的方法,培育至今已达Ｆ１８。代间隔平均为７１．５ｄ（５５～１１６ｄ）。以近交Ｆ１８与ＤＢＡ／２交配进行毛色基因测试,其杂交１代毛色一致,提示Ｆ１８无毛小鼠已达到较高的基因纯合度。该无毛小鼠自４周龄起全身开始脱毛,至５周龄全身基本无毛,６周龄后又长出稀短的毛。该鼠已经剖宫取胎净化为清洁级。     

视网膜变性模型大鼠的生物学特性

作者采用不结扎单侧输尿管、单纯膀胱内注射一定量(10^-6／ml、10^8／ml)大肠杆菌OlllB4的方法，成功制备了急性肾盂肾炎大鼠模型。研究结果发现，这种模型病理改变相对较轻，不会出现明显化脓灶，但急性肾盂炎症过程典型。同时，这两种浓度诱导的病变类似，两侧肾脏炎症程度也未发现有显著差异。     

转EB病毒BLLF1基因小鼠的SPF级净化

EB病毒是人群中普遍感染的病毒，初次感染后大多数人可转为终生潜伏感染。EB病毒在感染宿主细胞时，首先是病毒外膜上的膜抗原（membrane antigen，MA）与宿主细胞膜上的受体CR2（CD21）结合，然后经胞饮进入宿主细胞。EB病毒MA是相对分子质量约为22000～34000的糖蛋白（gp350）。CR2是主要表达于B细胞、T细胞和某些上皮细胞膜上的EB病毒受体和补体C3d受体，因此EB病毒主要感染B细胞、T细胞以及部分上皮细胞。大量研究表明，EB病毒感染与自身免疫病、淋巴瘤以及某些黏膜恶性变有关。EB病毒MA在复制型感染时表达，潜伏感染的EB病毒在体内外因子的刺激下可多次活化从而表达MA。另有研究表明灭活的EB病毒在体外亦可以活化淋巴细胞，显然MA与宿主细胞受体的结合在淋巴细胞的活化中具有重要意义。为了探讨EB病毒感染和人类免疫系统疾病的关系，特别是EB病毒膜抗原在这一过程中的作用，郭长占等用EB病毒膜抗原BLL F1基因制备了转基因小鼠。限于转基因小鼠制备时的条件，该转基因小鼠模型是用普通级昆明（KM）小鼠制备的。     

纳米二氧化钛与葡萄糖亚慢性联合经口暴露对幼年大鼠血清叶酸和维生素B12水平的影响

目的 探讨纳米二氧化钛与葡萄糖亚慢性联合暴露对幼年大鼠血清叶酸和维生素B₁₂的影响。方法 对实验所用纳米二氧化钛的粒径、形状、晶型和溶液体系中的团聚程度等物理化学性质进行详细表征。80只4周龄清洁级SD大鼠按体质量随机分为8组(每组10只,雌雄各半)。每天灌胃给予0、2、10、50 mg/kg纳米二氧化钛,分别加或不加1.8 g/kg葡萄糖。染毒90 d后进行血清叶酸和维生素B₁₂含量检测。结果 纳米二氧化钛晶型为锐钛矿,近球形,平均粒径为(24±5) nm。在雄性幼年大鼠中,与对照组相比,纳米二氧化钛(10 mg/kg)加葡萄糖染毒可导致血清叶酸浓度明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。在雌性和雄性幼年大鼠中,与单纯葡萄糖(1.8 g/kg)染毒组相比,高剂量纳米二氧化钛(50 mg/kg)加葡萄糖可导致血清叶酸浓度明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。经过联合作用分析,纳米二氧化钛与葡萄糖联合暴露对雌性幼年SD大鼠血清叶酸浓度的影响存在明显拮抗作用。纳米二氧化钛与葡萄糖联合暴露对幼年SD大鼠血清维生素B₁₂浓度的影响较小,未见明显交互作用。仅发现与单纯葡萄糖(1.8 g/kg)染毒组相比,雄性大鼠低剂量(2 mg/kg)纳米二氧化钛加葡萄糖染毒组血清维生素B₁₂浓度明显上升,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 纳米二氧化钛和葡萄糖亚慢性联合经口暴露可以对幼年SD大鼠血清叶酸浓度产生影响,两者存在拮抗作用。     

大、小鼠剖宫取胎的适宜条件

目的:探讨大、小鼠剖宫取胎的适应条件,促使大、小鼠剖宫产净化的顺利进行.方法:采用统计学方法分析大、小鼠剖宫取胎净化过程中的大量数据.结果:(1)按规律准确判断妊娠天数,可使娩出的仔鼠成活率达到72.5%;(2)按规律选择代乳母所养育的仔鼠断乳成活率是按随机选择代乳母所养育的仔鼠断乳成活率的1.51倍.结论:适宜的剖宫取胎条件是提高剖出仔鼠和离乳仔鼠成活率的关键.     

快速鉴定苯丙酮尿症模型小鼠基因型的新方法应用

目的：建立融解曲线法和变性高效液相色谱（DHPLC）法准确、快速地鉴定苯丙酮尿症（PKU）模型小鼠的基因型。方法：融解曲线法采用聚合酶链反应（PCR）扩增包含模型小鼠pah基因点突变位点序列的132bD片段．将该产物予Alw26Ⅰ酶切后，加入微量SYBRGreenI，在实时PCR仪上行融解曲线分析，同时，酶切产物行12％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。DHPLC法是直接将132bp片段扩增产物采用在部分变性条件下（60．9℃）行DHPLC分析，根据不同图谱作出基因型诊断。结果：融解曲线分析表明，野生型小鼠的DNA片段在84℃和81℃出现2个融解峰．突变纯合型小鼠DNA片段在76．5～77．5℃和81℃出现2个融解峰，杂合型小鼠DNA片段则在84℃、81℃和76．5～77．5℃均出现融解峰，3种峰型明显可被区分：DHPLC优化了最佳分离效果的柱温，在优化的最佳条件下．DHPLC图谱显示杂合型小鼠DNA具有显著特色的峰型，即除同源双链峰外，出现一个异源双链峰。上述2种新方法共检测了PKU模型小鼠突变纯合型20只、杂合型22只，野生型11只，2种方法检测结果一致，并且与经典的聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）法结果一致（动物毛色等表型也完全一致）。结论：融解曲线法和DHPLC法均能准确、快速地鉴定模型小鼠的基因型，具有自动化、高通量等优点。     

12月龄Apoe~(-/-)动脉粥样硬化小鼠心脏、肝脏和肾脏病变的特点

目的 探讨12月龄Apoe~(-/-)动脉粥样硬化小鼠心脏、肝脏和肾脏病变特点.方法 选取12月龄雌雄各半动脉粥样硬化小鼠20只及同龄同数量的雌雄各半C57BL/ 6J小鼠作为对照,用全自动生化分析仪测定与心脏功能、肝脏功能和肾脏功能相关的血清酶;以Softron~(TM)智能无创血压计测定小鼠心率和血压;常规病理制片,HE染色,光学显微镜观察心脏、肝脏和肾脏病理变化.结果 雌性Apoe~(-/-)小鼠肾脏功能相关血清尿素氮(BUN)与正常对照小鼠相比极显著升高(P＜0.01),雄性Apoe~(-/-)小鼠肾脏功能相关血清肌酐(Cr)和尿酸(UA)均极显著升高(P＜0.01).其他各项指标与对照组相比无显著差异.雌性Apoe~(-/-)小鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和平均动脉压(MBP)与对照组相比均有显著差异(P＜0.05),雄性Apoe~(-/-)小鼠DBP和MBP与对照组相比均有显著差异(P＜0.05),心率(HR)未见显著变化.4例Apoe~(-/-)小鼠可见肾动脉管壁中膜增厚,有大量的泡沫样细胞增生.结论 12月龄Apoe~(-/-)动脉粥样硬化小鼠肾脏功能病变显著.     

人类疾病模型动物的管理要点

近年来,国内、国外人类疾病模型动物品种、品系繁多,遗传背景各异.国内基因修饰动物模型发展也很快,这些模型动物既有我们自己研发的,也有从国外引进的.建立动物模型的上游科研工作成绩突出,但宝贵的动物模型建立或引进后,由于种种原因导致动物断种、失去原有生物学特性的案例却屡见不鲜.从人类疾病模型动物的引种、保种、检疫隔离、饲养管理的特殊性等方面加强管理,可有效地控制和避免突变系出现自身修复,转基因动物的基因丢失,敲除基因动物基因复位等问题,从而达到保持其固有生物学特性的目的.