亚甲基四氢叶酸还原酶基因rs1801133位点多态性与肺癌发生风险的关联分析

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因rs1801133位点多态性与肺癌发生风险的相关性。方法 采用病例-对照研究设计,纳入上海市及江苏省泰州地区肺癌患者974例和健康对照1 005例作为研究对象,采集研究对象外周血液后提取全血基因组DNA进行MTHFR基因rs1801133位点基因分型,用非条件logistic回归分析评估该位点单核苷酸多态性与肺癌发生风险的相关性。结果 总人群中MTHFR基因rs1801133位点CT基因型与TT基因型个体肺癌的发生风险均低于CC基因型个体[比值比（OR）=0.801,95%置信区间（CI）：0.651~0.985,P=0.035;OR=0.754,95%CI：0.582~0.975,P=0.032],但经年龄、性别、吸烟状况和恶性肿瘤家族史校正后差异无统计学意义（校正后OR=0.841,95%CI：0.677~1.045,P=0.118;OR=0.799,95%CI：0.609~1.047,P=0.104）。校正后分层分析结果显示,在显性模型中CT+TT基因型男性和恶性肿瘤家族史阳性者肺癌发生风险均较CC基因型对应人群降低（OR=0.764,95%CI：0.597~0.977,P=0.032;OR=0.600,95%CI：0.385~0.925,P=0.022）,CT+TT基因型人群发生肺鳞状细胞癌的风险较CC基因型人群降低（OR=0.727,95%CI：0.542~0.976,P=0.033）。结论 MTHFR基因rs1801133位点C>T突变降低了男性和恶性肿瘤家族史阳性者肺癌的发生风险,尤其是鳞状细胞癌的患病风险。     

PGR基因多态性与复发性自然流产的关联性研究

目的 探讨孕酮受体基因（PGR）rs590688、rs1042838、rs11224592 3个单核苷酸位点与复发性自然流产（RSA）的关联性。方法 采用TaqMan探针基因分型方法检测并比较RSA患者（病例组212例）和正常女性（对照组197名）的PGR基因3个SNPs位点基因型及等位基因频率的分布情况。结果 PGR基因rs590688、rs1042838、rs11224592位点基因型及等位基因频率在病例组和对照组间比较,差异无统计学意义（P>0.05）;PGR基因rs590688、rs11224592;2个位点构建的GC单倍型（P<0.05）及PGR基因rs590688、rs11224592、rs1042838 3个位点构建的GCG单倍型（P<0.05）在病例组和对照组间比较,差异有统计学意义。结论 PGR基因rs590688、rs11042838、rs11224592位点的基因多态性与宁夏汉族女性RSA的易感性无关;PGR基因rs590688、rs11224592两个位点构建的GC单倍型及PGR基因rs590688、rs11224592、rs1042838 3个位点构建的GCG单倍型可能是RSA的保护性因素。     

亚甲基四氢叶酸还原酶C677T基因多态性与2型糖尿病关系的病例对照研究

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T多态性与2型糖尿病（T2DM）的关系。方法 选取226例T2DM患者（病例组）和194例健康对照个体（对照组）,检测两组同型半胱氨酸水平,采用PCR-芯片杂交技术检测亚甲基四氢叶酸还原酶C677T多态位点基因型,计算等位基因频率并统计分析。结果 2组MTHFR基因C677T位点基因型和等位基因频率比较,差异均无统计学意义（P > 0.05）,MTHFR基因TT型同型半胱氨酸水平显著高于CC型及CT型。结论 MTHFR基因C677T多态性影响同型半胱氨酸水平,但与T2DM的发病无明显的相关性。     

CETP基因Taq IB位点多态性对血脂水平及他汀疗效的影响

目的 评价胆固醇转运蛋白（CETP）基因Taq IB位点多态性与血脂水平的关系及对他汀药物疗效的影响。方法 在数据库中检索,获取CETP基因Taq IB位点与血脂水平及他汀药物疗效关系的文献,筛选文献后数据提取,用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。结果 B2等位基因携带者个体HDL-C水平明显高于B1B1基因型个体,差异有统计学意义（B1B2：Z=6.17,P<0.01;B2B2：Z=10.05,P<0.01）,3种基因型他汀药物治疗前后的LDL-C水平改变差异无统计学意义（B1B2：Z=1.86,P=0.06;B2B2：Z=0.12,P=0.91）。结论 CETP基因Taq IB位点多态性对HDL-C水平有显著影响,但对他汀疗效的影响仍需进一步研究证实。     

SFRP1、LINE1基因启动子区CpG岛甲基化状态在肝细胞癌预后评估的价值

目的 探讨分泌型卷曲相关蛋白（SFRP）1、长散在核元件（LINE）1基因启动子区CpG岛甲基化与人原发性肝癌( 简称肝癌)临床病理参数的关系,及其在肝癌预后评估的意义。方法 收集105例肝癌患者血浆和50例对照健康人血浆DNA,使用甲基化特异性PCR（MSP）检测了SFRP1基因启动子区CpG岛高甲基化和LINE1基因启动子区CpG岛低甲基化的情况;分析两种基因启动子甲基化和肝癌患者临床病理参数之间的关系;通过Kaplan-Meier曲线、对数秩检验及Cox多因素分析,分析SFRP1、LINE1基因甲基化状态与肝癌患者总生存率及无病生存率之间的关系。 结果 105例肝癌患者血浆中SFRP1基因启动子区CpG 岛高甲基化阳性率为59.05 % (62/105),LINE1基因启动子区CpG岛低甲基化率为66.67%（70/105）,基因SFRP1高甲基化和LINE1低甲基化表达均阳性为43.81% (46/105),正常对照组中未发现有这两种基因甲基化;SFRP1高甲基化、LINE1低甲基化均与HBsAg是否阳性及甲胎蛋白（AFP）值相关(P<0.05);SFRP1、LINE1基因启动子区域的甲基化状态与总生存率及无病生存率有关：SFRP1高甲基化阴性+LINE1低甲基化阴性组患者预后最好,而SFRP1高甲基化阳性+LINE1低甲基化阳性组患者预后最差。结论 SFRP1、LINE1基因启动子区CpG岛甲基化与肝癌的发生、发展有一定联系,SFRP1和LINE1基因甲基化状态可以作为潜在可靠的分子标记物对患者预后进行预测。     

肝癌组织hSulf-1基因表达与其甲基化状态的关系

目的研究肝细胞肝癌组织中人硫酸酯酶-1(hSulf-1)基因甲基化的状态,其mRNA以及蛋白表达情况及与甲基化状态的相关性,探讨hSulf-1基因甲基化在肝癌发生发展中的作用。方法应用RT-PCR、甲基化特异性PCR及免疫印迹法,测定42例肝癌组织及其癌旁正常组织hSulf-1的mRNA、甲基化及蛋白表达水平,并分析hsulf-1基因表达水平及甲基化与肝癌临床特征的关系。结果在肝癌组织中,hSulf-1 mRNA和蛋白表达水平明显低于癌旁正常组织,而正常肝组织几乎检测不到。肝癌组织hSulf-1甲基化率为66.7%(28/42),而在癌旁正常组织中hSulf-1甲基化率为7.1%(3/42),二者之间差异有统计学意义(P<0.05),在hSulf-1 mRNA表达缺失或下调的31例肝癌组织中,其中有25例发生甲基化(χ²=8.45, P<0.05)。在肝癌组织中,甲基化组hSulf-1 mRNA及蛋白表达明显低于非甲基化组(分别为0.687±0.092 vs 2.324±0.123,P<0.01; 0.825±0.119 vs 2.212±0.178, P<0.01)。hSulf-1基因甲基化与患者肝硬化密切相关。结论肝细胞肝癌hSulf-1基因mRNA及蛋白表达明显下降、其甲基化程度明显增高,且hSulf-1基因的甲基化状态与mRNA及蛋白的表达情况具有某种联系,提示hSulf-1基因的甲基化状态可能与肝癌的发生、发展有关。     

利用补丁甲基化技术构建特殊报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子的调控活性

目的:构建一种特殊的荧光素报告载体检测DNA甲基化对FCER1G基因启动子调控序列的调控活性。方法:用补丁甲基化技术构建特殊的含完全甲基化和模拟甲基化的FCER1G启动子调控序列的PGL-3荧光素报告载体;通过比较完全甲基化与模拟甲基化荧光素报告载体活性来检测DNA 甲基化对FCERG基因启动子调控序列的调控活性。结果:成功构建特殊的完全甲基化与模拟甲基化FCER1G启动子调控序列荧光素报告载体;并检测出完全甲基化与模拟甲基化荧光素报告载体活性比为(0.36±0.07):1(P<0.001)。结论:FCER1G启动子调控序列是甲基化敏感位点,FCER1G启动子受DNA甲基化调控。     

足月子痫前期孕妇胎盘组织中DLX3基因启动子甲基化状态及其差异表达

目的 探讨足月子痫前期孕妇胎盘组织中远端缺失同源盒3(DLX3)基因启动子区甲基化状态及表达情况,评估DLX3基因在足月子痫前期发病中的潜在作用。方法 选取2020年1月至2021年1月在亳州市人民医院足月分娩的子痫前期孕妇50例作为观察组,同期正常足月分娩孕妇36例为对照组。分娩后获取两组产妇的胎盘组织,采用甲基化特异性PCR (MSP)技术检测两组胎盘组织中DLX3基因启动子的甲基化状态。同时通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测DLX3 mRNA表达水平。结果 足月子痫前期孕妇胎盘组织中DLX3基因启动子区甲基化率为76.00％,对照组为22.22％,且随着子痫前期严重程度的增加,DLX3启动子区甲基化率增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组胎盘中DLX3基因mRNA表达(0.98±0.17)相比,观察组胎盘中DLX3基因mRNA表达水平(0.41±0.08)降低,且重度子痫前期较轻度子痫前期胎盘组织DLX3基因mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 足月子痫前期孕妇的胎盘组织中DLX3启动子甲基化率升高可能抑制DLX3表达,影响子痫前期严重程度。     

三磷酸腺苷结合盒转运体a3基因外显子10多态性与新生儿呼吸窘迫综合征易感性的关系

目的 探究新生儿三磷酸腺苷结合盒转运体a3基因(ABCA3)外显子10多态性与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)易感性的关系。方法 选取73例2020年1月至2022年2月开封市儿童医院住院/门诊诊疗的NRDS患儿为NRDS组,选取同期58例健康新生儿为对照组。分析患儿ABCA3基因外显子10位点表达水平与病情严重程度、肺表面活性物质表达的关系。结果 ABCA3基因外显子10rs13332514位点TT型为NRDS发生的危险因素,GG型为保护因素(P<0.05);不同基因型患儿肺表面活性物质表达存在显著性差异(P＜0.05)。结论 ABCA3基因外显子10基因多态性可影响SP表达,增加NRDS发生的危险性。     

对氧磷酶1基因位点多态性与川崎病的关系研究

目的 探讨对氧磷酶1（PON1）基因rs662、rs3917541、rs3917539位点多态性与儿童川崎病（KD）的发病风险及其并发冠状动脉损害之间的相关性。方法 利用聚合酶链反应-直接测序法（PCR-SBT）分析93例KD患儿（KD组）和94例健康儿童（对照组）PON1基因的rs662、rs3917541、rs3917539位点多态性。结果 KD组PON1基因rs662、rs3917541、rs3917539位点基因型频率分布和等位基因频率分布与对照组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。KD组中的合并冠状动脉损害组与未合并冠状动脉损害组PON1基因rs662、rs3917541、rs3917539位点基因型频率分布和等位基因频率分布比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 尚未发现PON1基因rs662、rs3917541、rs3917539位点多态性与KD及其冠状动脉损害的发生有关。     

齐齐哈尔地区汉族人群钠离子通道1A基因DNA甲基化与家族性原发性高血压的关系研究

目的 探究齐齐哈尔地区汉族人群钠离子通道1A(SCNN1A)基因DNA甲基化与家族性原发性高血压的关系。方法 选取2020年10月—2022年1月在齐齐哈尔市居住≥3代且年龄> 18岁的汉族原发性高血压患者180例作为研究对象。根据高血压确诊时间将其分为初诊组（入组时新发高血压）和既往组（入组前已确诊高血压），每组90例。另选取该地区90例无高血压家族史的健康体检者作为对照组。收集并整理各组患者的临床基础资料，采用焦磷酸测序法检测SCNN1A基因DNA甲基化，比较各组患者的SCNN1A基因编码区CpG1～CpG6位点DNA甲基化，以多因素Logistic回归分析家族性原发性高血压的影响因素。结果 各组性别、年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、LDL、TC及FBG比较，差异无统计学意义（P>0.05）。初诊组和既往组TG、UA高于对照组，HDL低于对照组（P <0.05）。各组SCNN1A基因编码区CpG3、CpG4、CpG5、CpG6位点甲基化比较，差异无统计学意义（P>0.05）。初诊组和既往组SCNN1A基因编码区CpG2位点甲基化低于对照组，既往组CpG1位点甲...     

抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移、侵袭的影响

目的研究抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移侵袭的影响。方法采用siRNA干扰IGFBP2、IGFBP3在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达,CCK-8试剂盒检测SKOV3的增殖情况,流式细胞术检测SKOV3的凋亡情况,transwell实验、细胞划痕愈合实验检测SKOV3的迁移与侵袭;CCK-8法检测不同浓度顺铂(5、10、20μg/m L)对SKOV3细胞生长的影响。结果采用siRAN干扰IGFBP2、IGFBP3在卵巢癌SKOV3中表达后,与对照组相比SKOV3细胞增殖能力下降,凋亡增加,迁移与侵袭功能下降。结论抑制IGFBP2、IGFBP3在卵巢肿瘤中的表达对卵巢癌的迁移与侵袭起一定的抑制作用。     

p16基因CpG位点甲基化在维吾尔族宫颈鳞癌及HPV16感染中的意义

目的:探讨p16 基因启动子区CpG 位点甲基化及HPV16 感染与新疆维吾尔族宫颈鳞癌的关系及其意义。方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法(MALDI-TOF MS) 对20 例维吾尔族宫颈鳞癌及20 例对照组维吾尔族宫颈组织中的p16 基因启动子CpG 位点甲基化进行定量检测;采用聚合酶链反应(PCR) 的方法检测两组HPV16 的感染状况。结果:宫颈鳞癌及对照组中p16 基因启动子区16 个CpG 位点中CpG1-2, CpG6 为甲基化差异位点, 宫颈鳞癌组中CpG1-2, CpG6 位点甲基化水平明显高于对照组;宫颈鳞癌组的HPV16 感染率明显高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05);所检测的维吾尔族宫颈鳞癌组织中p16 基因启动子区CpG 位点甲基化与HPV16 感染无明显相关。结论:p16 基因启动子区CpG1-2, CpG6 位点高甲基化及HPV16 感染均与维吾尔族宫颈鳞癌的发生有关系, 但为两个独立事件。     

LncRNA MALAT-1靶向microRNA-370-3p调节Akt通路对肺癌细胞生物学行为影响的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子-1(LncRNA MALAT-1)是否能靶向调节microRNA-370-3p(miR-370-3p)的表达,以及对Akt通路和肺癌细胞生物学行为的影响。方法 选用非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞体外培养,分别抑制LncRNA MALAT-1(转染si-MALAT-1)或过表达miR-370-3p(转染miR-370-3p mimic),抑制LncRNA MALAT-1和干扰miR-370-3p(同时转染si-MALAT-1和antimiR-370-3p),观察A549细胞的生物学行为和Akt通路蛋白的表达。qRT-PCR检测LncRNA MALAT-1、miR-370-3p mRNA的表达;MMT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移与侵袭;Western blotting检测Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白相对表达量。构建MALAT-1野生型(MALAT-1^WT＿1uc)与突变型(MALAT-1MUT＿1uc)荧光素酶报告基因质粒并分别与miR-370-3...     

上海市438例体检者同型半胱氨酸水平与代谢关键酶基因多态性的关联分析

目的 研究上海市438例体检者的同型半胱氨酸(Hcy)水平与代谢相关酶基因多态性的关联.方法 酶循环法检测上海市仁爱医院438例健康体检者的血浆总Hcy(tHcy)、电化学发光法检测叶酸,连接酶检测反应(LDR)进行基因分型.比较不同基因型的Hcy水平,并分析代谢相关酶的基因多态性与tHcy水平的关联.结果 高同型半胱氨酸血症(HHcy)检出率为28.54％(125/438).MTHFR C677T不同基因型的tHcy水平间差异有统计学意义(P＜0.001).MTHFRA1298C杂合型CA降低HHcy的患病风险[OR=0.49,95％CI:(0.26,0.92),P=0.027].MTHFR C677T杂合型CT和突变纯合型TT均增加HHcy的患病风险[OR=2.15,95％ CI:(1.06,4.36),P=0.035;OR=7.58,95％ CI:(3.15,18.22),P＜0.001].MTR G905A、MTRRA66G、MTRR Ac.56+781C、MTR A2756G、CBS C551G并未发现与HHcy的患病风险有关联.结论 MTHFR C677T杂合型CT和突变纯合型TT是HHcy患病的风险基因型;MTHFR A1298C杂合型CA可能有助于降低HHcy风险.     

DKK3基因甲基化与乳腺癌的相关性研究

目的：检测乳腺浸润性导管癌（Invasiv ductal carcinom a,IDC）和普通型导管增生（Usual ductal hyperp lasi-a,UDH）病变中DKK3基因甲基化状况,探讨其与乳腺癌发生发展的相关性。方法：运用MALD I-TOF MS检测50例IDC和20例UDH样本中DKK3基因甲基化状态。结果：DKK3基因各CpG位点平均甲基化率范围在IDC和UDH组中分别为8%~26%和10%~24%;各CpG位点甲基化率在IDC和UDH病变中两两比较,差异无统计学意义。结论：DKK3基因甲基化可能与乳腺癌的发生发展有一定的相关性。     

高效液相色谱法测定接骨片中阿魏酸和芍药苷

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式。方法 采用甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP）方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析。结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1 733条清晰的条带。二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05%,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70%。检测到83个（4.86%）CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个（2.13%）位点发生了超甲基化,36个（2.08%）位点发生了去甲基化。结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变。     

四倍体菘蓝基因组DNA甲基化的甲基化敏感扩增多态性分析

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式。方法 采用甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP）方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析。结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1 733条清晰的条带。二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05%,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70%。检测到83个（4.86%）CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个（2.13%）位点发生了超甲基化,36个（2.08%）位点发生了去甲基化。结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变。     

中青年脑梗死患者预后影响因素分析及预后模型的建立

目的 探讨影响中青年脑梗死患者预后的危险因素,并建立临床预后预测模型,为预后判断和制订个体化治疗方案提供参考.方法 纳入2018年1月1日至2020年1月1日在复旦大学附属中山医院吴淞医院住院治疗、年龄为18～60岁的中青年脑梗死患者294例.收集患者年龄、性别、既往史、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、血液学指标等基线资料,检测环指蛋白213(RNF213)基因(rs112735431位点)、组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)基因(rs2107595、rs2240419、rs2389995位点)和亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因(C677T位点)的基因多态性.根据随访1年时的临床结局,294例患者被分为病情未发展组(177例,60.20％)、病情发展组(117例,39.80％),比较两组患者上述指标的差异.将数据样本按7:3的比例划分为训练集和测试集,以上述指标为自变量,随访1年时的临床结局为因变量,利用训练集数据进行logistic回归分析获得影响预后的危险因素并建立预后预测模型,利用训练集和测试集的数据进行ROC曲线分析以评估模型的价值.结果 病情发展组患者的NIHSS评分及血肌酐、总胆红素、同型半胱氨酸水平均高于病情未发展组,差异均有统计学意义(P均<0.05);病情发展组与病情未发展组的MTHFR(C677T)基因多态性分布不同,差异有统计学意义(P<0.01).logistic回归分析结果显示,NIHSS评分每增加1分,病情发展的风险增加76.8％(OR=1.768,95％CI 1.479～2.112);MTHFR(C677T)基因TT型患者病情发展的风险是CC型的4.128倍(OR=4.128,95％CI 1.497～11.383);患有高血压的患者病情发展的风险是未患有高血压患者的3.421倍(OR=3.421,95％CI 1.353～8.645).训练集ROC曲线的AUC值为0.856(95％CI 0.806～0.906),测试集ROC曲线的AUC值为0.847(95％CI 0.756～0.937),表明模型的预测能力良好.结论 NIHSS评分、MTHFR(C677T)基因多态性、高血压是中青年脑梗死患者病情发展的危险因素,基于NIHSS评分、MTHFR(C677T)基因多态性、高血压3个自变量建立的预后预测模型有助于判断中青年脑梗死患者的预后.