索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株作用的研究

目的：检测索拉非尼（Sorafenib）单药、三氧化二砷（Arsenic trioxide , As2O3）单药以及两药联合对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨两药联用的协同抗肿瘤机制。方法：以不同浓度的SorafenibL和不同浓度的As2O3分别组成单药组和Sorafenib + As2O3联合用药组, 另设不加药的对照组,作用于HepG2细胞。MTT法检测Sorafenib、As2O3单药及联用对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,罗丹明123染色观察细胞线粒体膜电位 (Mitochondrial transmembrane potential ,ΔΨm）。Western blot检测ERK、p-ERK、BCL-2、MCL-1蛋白表达。结果：Sorafenib 、As2O3单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,两药联用有交互效应（P < 0. 05）。Sorafenib 、As2O3单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,联合组更为明显（P < 0. 05）。两药联用能使线粒体膜电位明显下降,较两药单用和对照组有统计学意义。用药后ERK蛋白表达无明显改变,而pERK表达下降,联合用药组更明显。MCL-1蛋白表达在Sorafenib组和联合用药组均下降,BCL-2蛋白表达在As2O3组和联合用药组均下降,2种蛋白表达下降均以联合用药更明显。结论：Sorafenib 与As2O3联用作用于肝癌细胞具有协同增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能是协同抑制抗凋亡通路及抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路。     

索拉非尼联合三氧化二砷对肝癌细胞株HepG2的作用

目的检测索拉非尼(Sorafenib)单药、三氧化二砷(Arsenic trioxide,As2O3)单药以及两药联合对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨两药联用的协同抗肿瘤机制。方法以不同浓度的Sorafenib和不同浓度的As2O3分别组成单药组和Sorafenib As2O3联合用药组,另设不加药的对照组,作用于HepG2细胞。MTT法检测Sor-afenib、As2O3单药及联用对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。Western-blot检测ERK,p-ERK,Bcl-2,MCL-1蛋白表达。结果Sorafenib、As2O3单药与联用均能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,两药联用有交互效应(P<0.05)。Sorafenib、As2O3单药与联用均能诱导HepG2细胞凋亡,联合组更为明显(P<0.05)。用药后ERK蛋白表达无明显改变,而pERK表达下降,联合用药组更明显。MCL-1蛋白表达在Sorafenib组和联合用药组均下降,Bcl-2蛋白表达在As2O3组和联合用药组均下降,两种蛋白表达下降均以联合用药更明显。结论Sorafenib与As2O3联用作用于肝癌细胞具有协同增殖抑制及促凋亡作用,其机制可能是协同抑制抗凋亡通路及抑制Raf/MEK/ERK信号传导通路。     

索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的 探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2的抑制作用及其可能分子机制.方法 单独及联合给药后以MTT法测定HepG2细胞的增殖,用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,用Western blotting观察ERK及pERK蛋白的表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用(P＜0.05).索拉非尼及DDP分别主要使细胞阻滞于G1及G2期.两药联用后同时阻滞于G1及G2期.联合组凋亡率明显比单药组高(P＜0.05).单用及联合用药对HepG2细胞ERK表达无明显影响,索拉非尼及联合用药减少pERK的表达.结论 索拉非尼和DDP对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用,其机制可能与细胞周期的双重阻滞及细胞增殖通路Raf/MEK/ERK的抑制有关.     

索拉非尼对顺铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨索拉非尼对顺铂抑制肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制.方法 分别及联合应用两药后以MTT法检测HepG2细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR检测MDR-1的mRNA表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用.联合用药细胞凋亡率明显高于单药组(P＜0.05).单药顺铂组与联合组MDR-1的mRNA表达高于对照组及索拉非尼单药组,其中单药顺铂组表达最高(P＜0.05).结论 索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞有更强的抑制及促凋亡作用,其机制可能与增加HepG2细胞的凋亡,索拉非尼下调MDR-1,增强顺铂对HepG2细胞的诱导凋亡作用有关.     

三氧化二砷通过抑制NF-κB增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用研究

【摘要】 目的 研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对核转录因子-kappaB(NF-κB)表达的影响。方法 采用As2O3、TRAIL单用和联合作用于体外培养的A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝比色法测细胞增殖抑制率和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)检测NF-κB的活性。结果 As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强(P<0.05);联合用药组诱导凋亡作用强于单药组(P<0.05);联合用药组明显抑制NF-κB表达,并抑制其活性(P<0.05)。NF-κB mRNA、蛋白及其活性与细胞凋亡率呈负相关（P均<0.05）。结论 As2O3可能通过NF-κB通路,增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷联合PDTC诱导胃癌细胞凋亡及其对VEGF表达的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)和吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)联合诱导胃癌细胞.SGC-7901凋亡及对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响. 方法 用不同浓度的As2O3和(或)PDTC处理SGC-7901细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测细胞生长抑制率,用流式细胞仪(ECM)检测细胞周期及细胞凋亡,并用免疫细胞化学方法 检测VEGF的表达. 结果 As2O3可抑制SGC-7901的生长,并随浓度的增加而增强.As2O3与PDTC联合比单用As2O3或PDTC抑制效果更明显(P<0.05).As2O3>作用后SGC-7901 Cn/M期细胞比例上升,联合用药组比单用药组G2/M期细胞比例上升更明显(P<0.05).As2O3可诱导SGC-7901细胞凋亡,联合用药组比单药组组凋亡率增加更明显(P<0.05);As2O3组VEGF表达下降(P<0.05),联合用药组比单药组表达下降更明显(P<0.05). 结论 As2O3与PDTC联合应用具有显著抗胃癌作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及抑制NF-кB、VEGF表达有关.     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡及对线粒体的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)诱导人卵巢癌细胞凋亡中是否发生线粒体系统和Bcl-2蛋白表达的改变,探讨As2O3诱导凋亡的可能引发机制.方法 采用光镜、电镜和流式细胞术等技术,观察细胞凋亡、线粒体超微结构改变及检测线粒体跨膜电位(Δψm).结果 As2O3可诱导卵巢癌细胞凋亡,具有剂量依赖性和细胞株类型差异性;不同浓度As2O3均可诱导SKOV3、3AO细胞Δψm的降低,且随浓度升高,下降愈明显;电镜观察到As2O3作用SKOV3、3AO 72 h后,线粒体明显肿胀,内嵴消失,基质电子密度降低.免疫荧光染色显示As2O3能抑制SKOV3、3AO细胞的Bcl-2蛋白表达.结论 线粒体Δψm的下降和Bcl-2蛋白表达的抑制,是As2O3诱导细胞凋亡的重要环节.     

三氧化二砷与顺铂联用对肝癌HepG2细胞的作用

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)与顺铂(CDDP)联合对肝癌细胞HepG2的作用.方法 应用MTT法和细胞免疫组化酶法检测人肝癌HepG2细胞Bax,Bcl-2,Fas蛋白的表达情况.结果 As2O3与CDDP联合应用在抑制肝癌细胞的生长繁殖、诱导肝癌细胞凋亡,增强Bax,Fas的表达,下调Bcl-2的表达方面均较各自单用的作用明显增强.结论 As2O3与CDDP联合应用具有明显的协同抗肝癌作用,其主要机制可能为As2O3联合化疗能诱导肝癌细胞凋亡,与增强Bax,Fas的表达,下调Bcl-2的表达有关.     

三氧化二砷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对周期分布的影响.方法 采用MTF法、DNA ladder检测、流式细胞术等方法 检测As2O3对人肝癌HepG2细胞的生长抑制,诱导细胞凋亡以及对细胞周期分布的影响.结果 MTT法显示:As2O3对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,且具有剂量和时间依赖性.12μmol/L As2O3作用HepG2细胞24、48、72 h后,DNA ladder检测,48、72 h均出现凋亡典型的DNA ladder条带;流式细胞仪分析显示:As2O3处理HepG2细胞24、48、72 h后,凋亡率分别为(9.74±1.22)%、(21.89±2.14)%、(42.72±0.83)%,均显著高于对照组细胞的凋亡率(0.98±0.11)%(P<0.01).同时,流式细胞仪分析显示,As2O3对HepG2细胞有明显的S期和G2期阻滞作用.结论 As2O3对人肝癌HepG2细胞S期和G1期阻滞并诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一.     

姜黄素联合吉西他滨对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡的影响

目的:观察姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的姜黄素、吉西他滨以及两药联合分别作用肝癌细胞HepG2 24h、48h、72h。MTT法检测上述药物单用或联用对HepG2细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测其对HepG2细胞凋亡率的影响。结果:姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,存在时间剂量依赖关系,均可诱导HepG2细胞凋亡,联合用药有协同作用。结论:姜黄素、吉西他滨能够抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,两药联用有协同作用。     

姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的：探讨姜油酮联合索拉非尼对人肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其相关作用机制。方法：采用不同浓度姜油酮和索拉非尼单独或联合对人肝癌HepG2细胞进行干预,MTT法检测细胞增殖率,根据其结果选择姜油酮和索拉非尼的适合浓度。实验分为对照组（DMSO）、姜油酮组（30μmol·L^-1）、索拉非尼组（3 μmol·L^-1）和联合组（姜油酮30 μmol·L^-1+索拉非尼3μmol·L^-1）,采用细胞划痕实验检测各组HepG2细胞划痕愈合率,Transwell实验检测各组HepG2细胞穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HepG2细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平。结果：MTT实验,与对照组比较,姜油酮组和联合组细胞增殖率明显降低（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞划痕愈合率降低（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞划痕愈合率明显降低（P<0.01）。Transwell实验,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞穿膜细胞数减少（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组穿膜细胞数明显降低（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,姜油酮组和索拉非尼组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平降低（P<0.05）;与姜油酮组和索拉非尼组比较,联合组HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：姜油酮可通过降低HepG2细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达来抑制人肝癌细胞迁移和侵袭能力,且与索拉非尼联用效果更佳。     

三氧化二砷与全反式维甲酸联合应用对HepG2细胞的体外抑制作用

目的研究三氧化二砷(As2O3)和全反式维甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)联合应用对人肝母细胞瘤HepG2的抑制作用与单独应用的差异。方法采用MTT法测定药物对细胞生长的抑制作用；倒置显微镜观察药物对HepG2细胞形态学的影响。结果As2O3和ATRA联合应用对HepG2细胞生长的抑制作用优于单独应用，抑制率与药物浓度、时间呈正相关。结论As2O3和ATRA联合治疗肿瘤细胞具有协同作用，毒副反应降低，没有交叉耐药作用，且促进相互作用敏感性。     

姜黄素纳米粒(NanoCurcTM)联合索拉非尼对肝细胞癌(HCC)的协同抑制作

 目的 探讨姜黄素纳米粒(NanoCurcTM,NC) 单药或联合索拉非尼对人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的作用。方法 采用体外细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)、体外划痕试验和Transwell侵袭试验法检测NC和/或索拉非尼对肝癌细胞株MHCCLM3增殖、迁移、侵袭能力的影响;应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的作用。建立裸鼠MHCCLM3原位移植模型并观察NC和/或索拉非尼对肿瘤大小和肺转移率的影响。应用RT PCR、ELISA、Western blot法检测基质金属蛋白酶 9 (matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1 （tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2) mRNA或相应蛋白表达变化;并测定ERK1/2的磷酸化变化。结果 NC与索拉非尼联合应用可显著抑制HCC体外增殖和侵袭能力(P<0.01),抑制体内肿瘤生长和肺转移(P<0.01)。单独应用NC和索拉非尼时肺转移率分别为50.0%和66.7%,两者联合用药时则显著降低至16.7%。两药联合应用可协同抑制ERK磷酸化,从而下调MMP 9的表达。结论  NC联合索拉非尼可通过协同诱导细胞凋亡、抑制MMP-9的表达而抑制肝癌生长和转移。     

Arsenic trioxide induces multiple myeloma cell apoptosis viadisruption of mitochondrial transmembrane potentials and activation of caspase-3

Objective　To investigate the response of multiple myeloma (MM) cells to arsenic trioxide (As2O3 ) and their possible mechanisms. Methods　Two MM-derived cell lines RPMI8226 and U266 cells were used as in vitro models. Cell apoptosis was assessed by morphology, flow cytometry, and DNA gel electrophoresis. Mitochondrial transmembrane potentials (△Ψm) were evaluated by measuring cellular Rhodamine 123 staining intensity. Protein expression was analyzed using Western blot. Results　Zero point one to 0.5μmol/L As2O3 inhibited cell proliferation and 2.0?μmol/L As2O3 induced cell apoptosis, while 1.0μmol/L As2O3 inhibited proliferation with a weak degree of apoptosis induction in RPMI8226 and U266 cell lines. As2O3-induced apoptosis was accompanied by mitochondrial transmembrane potentials (△Ψm) collapse and caspase-3 activation in the presence of intact membrane. Glutathione depleter buthionine sulfoximine enhanced, while disulfide bond-reducing agent dithiothreitol partially antagonized As2O3 -induced △Ψm collapse and apoptosis in MM cells. All-trans retinoic acid (ATRA) could also induce apoptosis in RPMI8226 cells, but it did not show any cooperative effects with As2O3. Conclusion　As2O3 exerts apoptosis-inducing and growth-inhibiting effects on MM cells, and mitochondrium is a pivotal and common target of As2O3 for apoptosis induction.     

一氧化氮对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C含量的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对肝癌细胞线粒体膜通透性和胞浆中细胞色素C(cytC)含量的影响.方法用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡,流式细胞术检测SMMC-7721和HepG2细胞凋亡率,MTT法观察肝癌细胞生长增殖情况,流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位变化,Western blot检测胞浆中cyt C含量的变化,同时应用线粒体膜通透性转变孔开放抑制剂CsA和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂BSO预处理细胞,并观察以上各指标的变化.结果 SNP能诱导人肝癌细胞SMMC-7721和HepG2凋亡,并可导致两株细胞线粒体跨膜电位下降,胞浆中cyt C含量增加,与SNP的作用时间成正比.CsA能够抑制SNP所致的肝癌细胞线粒体跨膜电位的下降及胞浆中cyt C含量的增加;而BSO则可促进线粒体跨膜电位下降,cyt C从线粒体释放到胞浆.结论 NO可能通过下调线粒体跨膜电位、开放线粒体膜通透性转变孔并释放线粒体cyt C,来诱导SMMC-7721和HepG2细胞凋亡.     

白花丹素对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨白花丹素（PLB）对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响,阐明其可能机制。方法：体外培养肝癌HepG2细胞,建立索拉菲尼耐药细胞模型HepG2R,MTT法鉴定耐药倍数和筛选药物作用浓度及时间,依据其结果选择索拉菲尼和PLB作用浓度分别为5μmol·L^-1和2μmol·L ^-1,各组药物作用时间为48 h。将HepG2R细胞随机分为对照组、索拉菲尼（5μmol·L^-1）组、PLB （2μmol·L ^-1）组和索拉菲尼（5μmol·L^-1）联合PLB （2μmol·L ^-1）组（联合组）。MTT法检测各组细胞活力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成率,Hoechst33342实验和细胞流式术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中cleaved Caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白表达水平,计算Bax/Bcl-2比值。采用活性氧（ROS）检测试剂盒检测细胞中ROS水平。结果：随着索拉菲尼浓度的升高,HepG2和HepG2R细胞活力逐渐降低,耐药细胞HepG2R对索拉菲尼的半数抑制浓度（IC₅₀）值是HepG2的4.5倍（P<0.05）。随着PLB浓度升高和作用时间延长,耐药细胞对索拉菲尼敏感性升高。与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组耐药细胞克隆形成率降低（P<0.05或P<0.01）。Hoechst33342实验,对照组细胞核淡染,索拉菲尼组和PLB组细胞核少部分浓染、明亮;联合组细胞核大部分浓染,细胞核染色质固缩、明亮。流式细胞术和Western blotting法检测,与对照组、索拉菲尼组和PLB组比较,联合组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）,细胞中cleaved Caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05或P<0.01）。联合组细胞中ROS水平明显高于其他各组（P<0.05或P<0.01）。结论：PLB能改善肝癌对索拉菲尼的耐药情况,其机制可能与升高耐药细胞中ROS水平有关。     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的体外研究

目的 为评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用抑制NB4细胞增殖、诱导其凋亡的效应,观察二药的相互作用和相互影响,期望对两药的临床应用提供理论依据。方法 以不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用作用于急性早幼粒细胞白血病细胞（NB4）作为实验组,通过观察细胞形态学改变,MTT法测定细胞存活率,并采用流式细胞术（FCM）检测细胞周期分布,分析不同浓度的As2O3、TanⅡA单独及联合应用对NB4细胞的增殖、凋亡的影响。结果 TanⅡA、As2O3均能抑制NB4细胞生长,以1.0 μmol/L As2O3作用更显著,二者联合应用后的增殖抑制作用表现为协同效应;经TanⅡA组处理后的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征,As2O3组则更多表现为细胞凋亡的形态学改变,并经电镜检查证实,两药联合应用可加强NB4细胞的凋亡形态改变;处理后的NB4细胞G0/G1期比例增高,S期细胞比例降低,细胞增殖指数（PI）下降,两药联合应用后具有协同效应。结论 1. TanⅡA、As2O3对NB4细胞均有增殖抑制作用,二者的增殖抑制作用具有协同效应,并与剂量相关;2. TanⅡA与As2O3联合作用于NB4细胞具有诱导凋亡作用,两药的诱导凋亡作用具有协同效应;3. 小剂量的As2O3联合TanⅡA即可对NB4细胞产生促进凋亡的效应,故临床可以选择小剂量的As2O3,以减轻砷剂的毒副作用。     

三氧化二砷诱导血液肿瘤细胞凋亡的机制研究

目的 了解三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）改变有关及其可能机制。方法 以急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４、慢性淋巴细胞性白血病细胞系ＳＫＷ３、Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞系Ｎａｍａｌｗａ及其它２个急性髓性白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｕ９３７为体外模型,应用碘化丙啶（ＰＩ）／Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ１２３）双重染色检测ΔΨｍ,通过测定细胞活力、亚Ｇ１     

IGF-ⅠR抑制剂联合西妥昔单抗对人肝癌细胞的体外抑制作用

目的探讨西妥昔单抗与胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)抑制剂aIR3对人肝癌细胞株HepG2细胞的作用。方法选用浓度递增的西妥昔单抗(5~500)mg/mL和aIR3(2.5～250.0)μmol/L,单独或联合作用于HepG2细胞,观察不同时间对细胞增殖的抑制作用以及联用时的两药协同系数。结果单药西妥昔单抗与aIR3对HepG2细胞增殖的抑制作用均呈浓度依赖性与时间依赖性,二药单独作用于HepG2细胞72 h最大抑制率分别为42.2%、82.3%,二药联合作用于HepG2细胞72 h最大抑制率达91.8%。西妥昔单抗与аIR3不同浓度在各时间点的协同系数均小于1。结论西妥昔单抗和aIR3在体外对HepG2细胞的增殖均具有一定的抑制作用,联合应用时具有明显的协同效应。