索拉非尼与顺铂的不同联合方案对肝癌HepG2细胞的作用研究

摘要：目的 探讨索拉非尼（Sorafenib，BAY 43-9006，Nexavar）联合顺铂（cisplatin，DDP）对肝癌细胞HepG2的杀伤作用。方法 单独、同时及序贯联合给药后以MTT法测定HepG2细胞的增殖，用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用，两药同时给药具有协同或相加作用（P<0. 05）。序贯用药DDP先用组与同时给药组相比疗效相似（P>0. 05），表现为协同或相加作用。而索拉非尼先用组疗效差于前两者(P<0. 05)，显示拮抗作用。联合用药组凋亡率均比单药组高（P<0. 05），同时给药组及DDP先用组凋亡率比索拉非尼先用组高（P<0. 05，P<0. 05）。结论　索拉非尼和顺铂对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用，同时给药表现为协同或相加作用，序贯联合用药产生单向协同或相加作用。     

索拉非尼对顺铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 探讨索拉非尼对顺铂抑制肝癌细胞HepG2增殖的影响及其可能机制.方法 分别及联合应用两药后以MTT法检测HepG2细胞的增殖抑制,用流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR检测MDR-1的mRNA表达.结果 索拉非尼及DDP单药对HepG2均有抑制作用,两药联合具有协同或相加作用.联合用药细胞凋亡率明显高于单药组(P＜0.05).单药顺铂组与联合组MDR-1的mRNA表达高于对照组及索拉非尼单药组,其中单药顺铂组表达最高(P＜0.05).结论 索拉非尼联合顺铂对肝癌HepG2细胞有更强的抑制及促凋亡作用,其机制可能与增加HepG2细胞的凋亡,索拉非尼下调MDR-1,增强顺铂对HepG2细胞的诱导凋亡作用有关.     

Heparanase表达下调对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨乙酰肝素酶（Heparanase）对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法 采用荧光定量PCR检测人结肠癌细胞株SW620、SW480、LoVo和CACO 2中Heparanase的表达水平;设计并合成3条Heparanase特异性的小分子干扰RNA（siRNA1、siRNA2、siRNA3）,用于转染4株结肠癌细胞中Heparanase表达水平最高者;荧光定量PCR和Western blotting检验3条siRNA的干扰效果;MTT法检测结肠癌细胞的增殖能力;Transwell小室法检测结肠癌细胞的侵袭能力。结果 SW480细胞中Heparanase的表达水平高于其他3株结肠癌细胞;3条特异性siRNA转染SW480细胞后,均能在蛋白和mRNA水平抑制Heparanase的表达,以siRNA3的效果最佳,且呈剂量依赖性。siRNA3介导的Heparanase基因沉默可呈剂量依赖地降低SW480细胞的增殖能力并减弱侵袭能力（P＜0.05）。结论 Heparanase表达下调可导致结肠癌细胞生物学恶性程度降低,提示Heparanase可作为结肠癌靶向治疗的一个重要靶点。     

CA125对Her-2阳性乳腺癌患者术后生物化疗疗效的评估价值

目的探讨血清糖类抗原125（CA125）在Her-2阳性乳腺癌患者术后生物化疗疗效监测的评估价值。方法回顾性分析以蒽环类及紫杉类为基础联合曲妥珠单抗﹙Herceptin﹚治疗44例Her-2阳性乳腺癌患者术后血清CA125的变化。根据2000年实体瘤疗效评价标准（RECIST）标准分有效组（OR组）及无效组（NR组）,通过分析两组治疗前后CA125的变化及下降比率绘制ROC曲线评估其对生物化疗疗效的价值。结果与治疗前相比,所有患者治疗后CA125血清水平显著下降（P〈0.05）。治疗前有效组及无效组间CA125无明显差异（P〉0.05）;治疗后有效组血清CA125水平显著下降（P〈0.05）,而无效组治疗前后无显著性差异（P〉0.05）。采用治疗前后CA125下降比率绘制ROC曲线,其曲线下面积为0.701。结论CA125在Her-2阳性乳腺癌患者术后生物化疗疗效有一定预测作用,且有较高的敏感性及特异性。     

索拉非尼联合顺铂对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨多靶点酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼联合顺铂（DDP）对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法构建人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、溶剂对照组、索拉非尼组、DDP组和联合用药组。观察用药前后肿瘤大小,测体质量,并计算瘤重,绘制肿瘤生长曲线;应用免疫组化检测肿瘤微血管密度（MVD）。结果索拉非尼和DDP单药均能抑制肿瘤生长,两药联合疗效明显增强（P〈0．05）。与对照组和顺铂组相比,索拉非尼组和联合用药组能明显抑制肿瘤血管生成,MVD值均明显降低,以联合用药组最为明显（P均〈0．05）。结论索拉非尼联合DDP能增强抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长及微血管生成。     

多靶点抗原肽自体免疫细胞治疗原发性肝细胞癌的临床安全性

目的:评价多靶点抗原肽自体免疫细胞技术(multiple antigen stimulating cellular therapy,MASCTTM)治疗原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的临床安全性.方法:回顾性分析2012年1月至2014年12月南方医院肝病中心收治的接受MASCTTM治疗且治疗前的末次治疗结束最少1个月以上、未接受其他免疫治疗的45例HCC患者的临床资料.第0天分离患者外周血单个核细胞,其中贴壁细胞诱导培养为成熟树突状细胞(muture dendritic cell,mDC),负载14种抗原肽,小部分mDC于第8天经患者腹股沟淋巴结周围区皮下注射;未贴壁细胞第7天与大部分mDC共培养诱导为杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL),对mDC及CTL进行质量控制检测,第26天经静脉回输患者体内,分析输注细胞后患者的不良反应和血常规、肝肾功能变化.结果:mDC中CD80+细胞比例为(98.5 ±5)％、CD83+细胞为(88.0±10)％、CD86+细胞为(98.4±3)％、HLA-DR+细胞为(98.8±2)％,mDC分泌高水平IL-12[(985 ±312) pg/ml]、低水平IL-10[(53±10)pg/ml].CTL中CD3+ CD8+细胞为(83.0±10)％、CD3+ CD56+细胞为(24.0±5)％,CTL分泌高水平IFN-γ[(1 222±650)pg/ml]、低水平IL-10[(7±5) pg/ml].MASCTTM治疗后,绝大多数患者的精神、食欲、睡眠和体力较前好转,有2名(4.4％)患者在输注CTL细胞1h后出现轻中度发热,未观察到其他严重明显不良反应.患者的血常规、肝肾功能均无明显异常变化.结论:MASCTTM成功诱导培养典型mDC和CTL,行MASCTTM治疗的HCC患者不良反应较少,临床应用安全性良好.     

兔抗人Cyclin D1b多克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体，为后续Cyclin D1b的研究奠定基础。方法: 用生物信息学方法分析Cyclin D1b蛋白的同源性、亲水性和抗原性，设计并合成Cyclin D1b C端的氨基酸序列，将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(Keyhole-limpet hemocyanin，KLH) 偶联并免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。ELISA法检测多抗效价，Western blotting检测Cyclin D1b的表达，免疫组织化学法检测该抗体的特异性与适用范围。结果：成功制备兔抗人Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体，ELISA法效价为1∶18 000。纯化后的抗体用于Western blotting可特异识别MCF-7细胞中的Cyclin D1b，并可用于免疫组织化学检测。结论：制备成功Cyclin D1b蛋白C端多肽的多克隆抗体，此多抗可用于Western blotting和免疫组织化学等分析。     

肝癌2009年临床研究进展与展望

原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma,PLC）是世界上常见的恶性肿瘤之一,居于恶性肿瘤的第5位,全球发病率已超过100万／年。我国一直是世界范围内的PLC高发区,目前的发病人数约34．7万人,约占全球总发病人数的55％;死亡约32．3万人,约占全球总死亡人数的45％。在全球,PLC在恶性肿瘤死亡中仅次于胃癌和食管癌,而在我国仅次于肺癌,位居第二（ParMaDM,BrayF,Ferlay J,etal．2005）。     

TIP30在 HER-2阳性乳腺癌患者癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨TIP30在表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性乳腺癌患者癌组织中表达及临床意义。方法选择接受过生物化疗（曲妥珠单抗联合紫杉醇）的HER-2阳性晚期乳腺癌患者53例,采用免疫组化法检测患者癌组织中的TIP30表达,并分析其表达与患者临床病理特征及临床疗效的关系。结果 TIP30在HER-2阳性乳腺癌组织中阳性表达率为56．6％,TIP30表达与患者的年龄、病理类型、转移部位数量及雌激素受体、孕激素受体表达无关,而与功能状态评分及临床疗效相关（P均＜0．05）。53例患者化疗2个周期后,临床获益（CB）29例（CB率为54．7％）。30例TIP30阳性表达的患者中,CB 22例（73．3％）;23例TIP30阴性表达的患者中,CB 7例（30．4％）,两者CB率比较P＜0．05。 TIP30表达阳性、阴性患者的中位无进展生存期分别为11．47、4．87个月,两者比较P＜0．01。结论 TIP30在HER-2阳性晚期乳腺癌患者癌组织中表达下调可能与预后不良有关,其可能作为该类患者生物化疗的疗效预测指标之一。