补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E₂相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^-1顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)...     

基于AMPK-mTOR信号通路探讨通心络胶囊通过调节自噬改善高糖环境下H9c2心肌细胞损伤的机制

目的 采用高糖诱导H9c2心肌细胞损伤建立糖尿病心肌病(DCM)细胞模型，观察通心络胶囊对H9c2细胞的保护作用并探讨其可能机制。方法 以葡萄糖不同浓度(45、65、75、100 mmol·L^-1)及75 mmol·L^-1葡萄糖+通心络胶囊不同浓度(20、40、80、160、300μg·mL^-1)分别处理H9c2细胞24 h，采用CCK-8法测定细胞存活率。将H9c2细胞分为对照组、模型组(75 mmol·L^-1葡萄糖)、通心络胶囊组(75 mmol·L^-1葡萄糖+160μg·mL^-1通心络胶囊)，给药干预24 h。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平；JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位；ELⅠSA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平；Western Blot法检测细胞自噬蛋白(P62、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ)及AMPK-mTOR信号通路蛋白的表达。结果 75 mmol·L^-1葡萄糖浓度...     

虎杖苷对骨髓瘤细胞的生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路作用

目的：研究虎杖苷对骨髓瘤细胞生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路的作用。方法：体外培养人多发性骨髓瘤(MM)细胞系U266细胞,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0、20、40、80、160、200 mg·L^-1质量浓度虎杖苷对U266细胞生长的影响,计算其半抑制浓度(IC₅₀)。取处于对数生长期的U266细胞,随机分为空白组、虎杖苷低质量浓度(80 mg·L^-1)组、虎杖苷高质量浓度(160 mg·L^-1)组、硼替佐米(75 nmol·L^-1)组,经药物分组处理后,通过CCK-8法测定各组细胞活力;通过流式细胞实验测定各组细胞凋亡率;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及活性氧(ROS)水平;通过蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关因子胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸化(p)-p38...     

G15逆转六味地黄汤冻干粉对慢性应激海马细胞的保护作用

目的 探讨六味地黄汤(LW)冻干粉对皮质酮诱导损伤的HT22海马细胞的保护作用及G15的逆转作用。方法 利用皮质酮构建慢性应激损伤HT22神经元细胞体外模型，将神经元分为对照组，模型组，LW(320 mg·L^-1)组、LW+G15低剂量组(10μmol·L^-1)和LW+G15高剂量组(30μmol·L^-1),并进行相应干预。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HT22细胞的存活率。采用TUNNEL染色检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较，CORT诱导损伤的模型组细胞OD值显著下降和细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。与模型组比较，LW可明显增加海马细胞OD值和降低凋亡细胞(P<0.05)。与LW组比较，LW+G15高剂量组可降低海马细胞OD值和增加凋亡细胞(P<0.05)。结论 G15 30μmol·L^-1可逆转LW冻干粉对皮质酮损伤小鼠HT22海马细胞的保护作用。     

姜黄素对Nrf2基因干扰下PC12细胞抗Aβ氧化损伤的影响北大核心CSCD

目的探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)通路在姜黄素对阿尔茨海默病模型细胞氧化损伤保护中的作用。方法将Nrf2小干扰RNA(siRNA)转染入PC12细胞,并Aβ;处理干预,分为5组:正常对照组、模型组、模型+姜黄素组、siNrf2模型组和siNrf2模型+姜黄素组。透射电镜观察各组细胞线粒体形态结构,采用细胞增殖毒性检测法(CCK-8)检测细胞存活率,利用细胞凋亡试剂盒和活性氧试剂盒流式测定细胞凋亡率和活性氧(ROS)水平,Western Blot法检测细胞中Nrf2、血红素氧合酶1(HO1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)表达。结果透射电镜下正常对照组细胞线粒体丰富,结构完整,线粒体嵴排列整齐,双层膜完整。与正常对照组比较,模型组和siNrf2模型组线粒体肿胀和空泡化明显,线粒体结构破坏,变形、消失。模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组两组细胞较模型组两组细胞的线粒体稍丰富,部分线粒体空泡化,结构较完整。与正常对照组比较,模型组和siNrf2模型组细胞存活率降低,细胞凋亡率和ROS水平升高(P<0.05),模型组和siNrf2模型组Nrf2和HO1表达均降低(P<0.01);与模型组比较,模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组细胞存活率升高(P<0.05)以及细胞凋亡率和ROS水平降低(P<0.05),模型+姜黄素组Nrf2表达升高(P<0.01),模型+姜黄素组和siNrf2模型+姜黄素组HO1和NQO1表达升高(P<0.05);与siNrf2模型组比较,siNrf2模型+姜黄素组细胞存活率升高(P<0.05),细胞凋亡率和ROS水平均降低(P<0.05),siNrf2模型+姜黄素组Nrf2、HO1和NQO1表达升高(P<0.05)。结论 Nrf2基因干扰后的细胞对Aβ;氧化损伤的抗氧化能力显著降低,进一步加速细胞凋亡和坏死。姜黄素可能通过增加Nrf2表达,上调抗氧化蛋白HO1和NQO1的表达,维持细胞线粒体结构完整性,加强细胞线粒体抗氧化能力,从而抑制Aβ;对细胞的损伤。     

安脑平冲方调控BDNF-Nrf2信号通路对血红蛋白损伤神经元发挥保护作用

目的 研究安脑平冲方对血红蛋白(Hb)损伤神经元BDNF-Nrf2信号通路的影响及其保护作用。方法 培养SD大鼠皮质神经元，使用Hb(10μmol/L)诱导建立Hb损伤神经元模型。设正常组、模型组、空白血清组(10%)、安脑平冲方组(10%)和去铁胺组(10μmol/L)。采用CCK-8法检测各组细胞活力，特异性FeRhoNox^TM-1荧光探针检测各组神经元内亚铁离子的含量变化，活性氧(ROS)荧光染色检测神经元内ROS水平，Western blot检测脑源性神经营养因子(BDNF)、核相关因子2(Nrf2)、胱氨酸/谷氨酸转运蛋白(xCT)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组和空白血清组的细胞存活率显著降低(P<0.01),Fe²⁺、ROS荧光强度值和BDNF、Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.01,P<0.05),而xCT、GPX4蛋白的表达显著降低(P<0.01);予含药血清干预后，安脑平冲方组的细胞存活率较模型组和空白血清组明显增加(P<0.01),Fe^2+...     

石斛合剂含药血清对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的：探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法：体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、模型组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、石斛合剂含药血清组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%石斛合剂含药血清),铁死亡抑制剂(Fer-1)组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L^-1 Fer-1)。采用试剂盒检测细胞中Fe²⁺、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、过氧化脂质(LPO)含量;荧光探针检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1)、结蛋白(Desmin)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) m RNA表达水平...     

黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

目的：以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法：将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果：与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^-1组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px...     

鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用研究

目的:探讨鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射增敏作用及其机制。方法:利用CCK-8法检测BRU对H1299细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC_(50)),将H1299细胞分为对照组、BRU组(IC_(50))、X射线组(2 Gy)和BRU联合X射线组(BRU+2 Gy)。应用克隆形成实验检测细胞存活率,流式细胞仪检测照射后24 h细胞凋亡率和胞内活性氧含量(reactive oxygen species,ROS);Western blotting技术检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路和线粒体凋亡通路相关蛋白表达;免疫荧光技术实现Nrf2蛋白定位。结果:BRU的IC_(50)为100 nmol/L,用该浓度处理H1299细胞24 h后,Nrf2表达量最低;100 nmol/L BRU联合2 Gy的X射线照射后,与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组细胞存活率降低、细胞凋亡率和ROS升高;与对照组比较,BRU组、2 Gy组和BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、Nrf2蛋白表达量降低,细胞核中Nrf2蛋白含量减少,线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高;与2 Gy组比较,BRU+2 Gy组PI3K和Akt磷酸化水平降低、线粒体凋亡通路相关蛋白表达量升高。结论:BRU联合X射线通过抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路,增加H1299细胞凋亡,从而增强H1299细胞的辐射敏感性。     

西红花酸调控Nrf2/HO-1通路抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞铁死亡

目的 探讨西红花酸抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞(HGMCs)铁死亡的作用机制。方法 (1)体外培养HGMCs，将细胞分为空白对照组、阴性对照组(60 mmol·L^-1甘露醇)和葡萄糖实验组(30、60、90 mmol·L^-1)，干预培养48 h后，采用CCK-8法检测细胞存活率，采用RT-qPCR法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达，以确定高糖诱导HGMCs的造模条件。(2)体外培养HGMCs，分为空白对照组和西红花酸给药组(5、25、125μmol·L^-1)，干预培养24 h后，采用CCK-8法检测细胞存活率。(3)体外培养HGMCs，将细胞分为空白对照组、模型组(60 mmol·L^-1葡萄糖)、西红花酸组(60 mmol·L^-1葡萄糖+5、25、125μmol·L^-1西红花酸)及阳性对照组[60 mmol·L^-1葡萄糖+1μmol·L^-1铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)...     

草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响

目的：研究草酸铵对僵蚕抗凝作用的影响。方法：以凝血酶时间(TT)为指标，用添加法比较不同浓度草酸铵对僵蚕提取液和凝胶分离液抗凝作用的影响。结果：添加草酸铵浓度在1．8～21．3mg／ml范围内，对固形物含量15．8～31．6mg／ml的提取液和14．6～29．1mg／ml的凝胶分离液的TT值增加成正相关。结论：草酸铵对僵蚕提取液、凝胶分离样品的抗凝作用均有增强作用，随提取液浓度降低影响增大，而随凝胶分离液浓度增大影响增大。     

蛇床子素抗凝血作用

目的：研究蛇床子素的抗凝血作用。方法：通过测定小鼠凝血时间（CT）、大鼠的凝血酶原时间（PT）和优球蛋白溶解时间（ELT），观测蛇床子素的抗凝作用。结果：蛇床子素能显著处长CT、PT，缩短ELT。结论：蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

苯唑青霉素对丁胺卡那毒素药动学的影响

 采用微量微生物法对丁胺卡那霉素（AMK）单用及AMK与苯唑青霉素（OXA）合用后，兔体内AMK血药浓度进行测定；药时数据用MCPKP软件经IBM计算机处理，并对两组药动学参数进行了统计学处理，结果表明OXA对AMK的药动学有显著的影响。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值。方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组造模给予生理盐水灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃。切取出生后21 d仔鼠的背部皮肤,苏木素-伊红(HE)染色观察仔鼠皮肤显微结构形态,测量真皮层和表皮层厚度,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测仔鼠皮肤分泌型糖蛋白3a(Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白表达量,免疫双荧光检测皮肤内自噬指标微管相关蛋白轻链3(LC3)和人死骨片1-泛素结合蛋白p62(SQSTM1-p62)的表达。结果:正常组仔鼠皮肤层次清楚,结构正常,肾虚组真皮层胶原排列疏松,左归丸低、高剂量组皮肤组成基本正常;与正常组比较,肾虚组仔鼠在皮肤的表皮层增厚,真皮层变薄(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组皮肤的表皮层和真皮层厚度的改变明显恢复(P<0.05)。与正常组比较,肾虚组仔鼠Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达明显下降(P<0.05);与肾虚组比较,左归丸低、高剂量组Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05)。同时免疫荧光法检测发现与正常组比较,肾虚组的LC3的表达上调,SQSTM1-p62表达下调;与肾虚组比较,左归丸可以逆转SQSTM1-p62和LC3的异常表达(P<0.05)。结论:左归丸可以通过增加仔鼠皮肤内Wnt3a和β-catenin蛋白和mRNA的表达,下调皮肤细胞自噬水平,改善先天肾虚仔鼠皮肤异常发育。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

《诸病源候论》对皮肤病学的贡献

对《诸病源候论》在皮肤病方面的成就进行了较为系统的整理总结 ,该书着重讨论了皮肤病的命名、分类、病因病机 ,并阐发了《内经》“邪之所凑 ,其气必虚”理论和预防为主的思想。     

腧穴热敏化艾灸疗法治疗压疮的疗效观察

目的:观察腧穴热敏化艾灸对压疮患者的治疗护理效果。方法:对Ⅰ、Ⅱ期压疮患者治疗组采用腧穴热敏化艾灸治疗,每次灸至感传现象消失,每日1次。对照组不避热敏化穴,在患者压疮部位附近穴区采用红外线照射40min后,将百多邦软膏敷于压疮疮面,以无菌纱布覆盖,每日1次。两组同时加强专科护理措施,并在疗程(包括不足7d痊愈者)结束后统计疗效。结果:治疗组和对照组有效率分别为100%、72.4%。二者有显著差异(P<0.05)。结论:腧穴热敏化艾灸疗法对压疮患者疗效明显,值得推广应用。     

国内外针灸治疗便秘的认知度调查

背景:由中国中医科学院研究生院组织硕、博士生共16人,于2015年7月12日至8月9日,远赴欧洲奥地利维也纳、萨尔茨堡、法国巴黎、德国柏林、海德堡、卢森堡、比利时布鲁塞尔、意大利威尼斯、捷克布拉格、荷兰阿姆斯特丹等地进行了中医药交流并做实地调研。目的:通过中奥-欧盟暑期交流平台,调查欧洲各国家各地区、以及交流团队中其他学校成员(国内外)对针灸治疗便秘的认知度,并将结果进行梳理分析。方法:采用电子版本的自填式问卷调查法对普通人群进行调查。结果:我们获得游学期间80份调查问卷和同期国内的72份调查问卷。1)对针灸了解与否:欧洲组有11.9%的人了解针灸,而中国组有78.9%(与同期国内组79%相当),2组之间差异有统计学意义(P0.05);2)知道针灸治疗便秘与否:欧洲组有7.1%的人知道,而中国组有73.7%(与同期国内组56%相比有很大的差异),2组之间差异有统计学意义(P0.05);3)如果便秘,您接受针灸治疗吗?欧洲组有4.8%的人接受,而中国组有52.6%(与同期国内组65%相比有些许的差异),2组之间差异有统计学意义(P0.05);4)如果便秘更倾向于选择哪种方式A选择西药欧洲组有76.2%,而中国组有28.9%(与同期国内组10%相比有明显差异),2组之间差异有统计学意义(P0.05);B选择中草药欧洲组有4.8%,而中国组有23.7%(与同期国内组60%相比有明显差异),2组之间差异有统计学意义(P0.05);C选择针灸欧洲组有4.8%,而中国组有28.9%(与同期国内组12%相比有明显差异),2组之间差异有统计学意义(P0.05);D选择其他方式欧洲组有14.3%,而中国组有18.4%(与同期国内组18%相当),2组之间差异有统计学意义(P0.05)。结论:整理分析数据后我们初步得出,在欧洲一些国家和地区普通人群对于针灸治疗便秘的认知度较低,中医针灸知识在欧洲的推广还需我们做进一步的努力。     

姜黄素对血管生成影响的实验研究

目的：探讨姜黄素对血管生成的影响。方法：采用MTT法检测姜黄素对牛血清促进的牛内皮细胞、人肝癌细胞SGC-7901增殖的影响；观察姜黄素对肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞增殖的影响；采用琼脂糖刮除法检测姜黄素对牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移的影响。结果：姜黄素能明显抑制牛内皮细胞增殖，同肿瘤细胞相比，具有显著差异；姜黄素能抑制牛血清及肿瘤细胞条件培养液促进的牛内皮细胞迁移。结论：姜黄素具有抗血管生成作用；抑制内皮细胞增殖和迁移是姜黄素抗血管生成的机理之一；同时也说明姜黄素是一种特异性血管生成抑制剂。     

缓冲盐对大孔吸附树脂分离阿魏酸脂质体及游离药物的影响

目的：研究缓冲盐对不同型号大孔吸附树脂分离脂质体及其游离药物能力的影响,并对阿魏酸脂质体进行质量评价。方法：采用缓冲盐（Na₂HPO₃-NaH₂PO₃）平衡的大孔吸附树脂分离脂质体与游离药物,用高效液相色谱检测药物含量,计算包封率。结果：该法在0.56~2.8 μg· mL^-1线性关系良好（r=0.999 6）,精密度小于1.1%。缓冲盐平衡后的大孔吸附树脂对脂质体的吸附作用均有所降低,且不影响大孔吸附树脂对阿魏酸的吸附能力。其中HPD450对空白脂质体的回收率在97.2%~100.8%,平均回收率为98.1%。结论：缓冲盐可提高大孔吸附树脂分离脂质体及游离药物的能力。